以醋酸作为指标的培养方法及其装置的制作方法

专利名称：以醋酸作为指标的培养方法及其装置的制作方法
技术领域：
本发明是关于用微生物或动物及植物细胞、特别是用基因重组的微生物生产酶和生物活性物质时，为了提高目的物的生产效率，以醋酸作为指标的培养微生物和动植物细胞的方法及其装置。
以前一直是通过培养微生物和动植物细胞，特别是通过培养基因重组的微生物，来生产作为其代谢物的抗菌素、氨基酸、酶以及激素等生物活性物质。这种培养方法多半是只将培养基和种子细胞放入培养槽内的分批培养(Batchculture)，所以生产效率较低。为了提高生产效率，于是采用了在培养过程中添加基质或诱导剂的培养方法。但是应该在什么时机添加上述物质却是个很大的问题，因为不知道该时机的明确标志。在别的方面我们虽然知道培养面包酵母(Backer′sYeast)时，根据呼吸商来检测乙醇的生成，然后添加基质的方法[特开昭57-36983号，同58-87584号)，但这是为了获得菌体所进行的培养，与代谢物的生产完全不同。
另外，虽然添加了基质，在培养过程中仍然存在细胞繁殖速度降低的现象。对此，人们认为这是由于培养液中积存繁殖阻碍物质所造成。可是人们又很缺乏有关这种阻碍物质方面的实际知识，所以从这一点上来看，要想达到高效率的培养也是相当困难的。由于这种繁殖阻碍物不能特定，因此，为了将其除去则要间断或连续的将培养液抽出，通过离心分离回收菌体，然后再装入培养槽中进行培养。对于这种方法人们虽然已经掌握，但这是以酵母作为对象所采用的工序，是为了大量生产细胞本身的方法，不是为了使细胞生产目的物的方法。
以上所列举的以前的技术，由于没能照顾到基质等的添加和繁殖阻碍物的检测，因此存在着难以高效率的进行细胞繁殖和生产其代谢物质的问题。
本发明之目的，是提供在培养微生物或动植物细胞、特别是培养基因重组微生物以生产其代谢物时，用培养液中的醋酸作为指标的培养方法及其装置。
概括言之，本发明的第1发明是培养方法上的有关发明，其特点是为了生产代谢物，在培养微生物或动植物细胞的方法上，包括检测培养液中的醋酸浓度和通过针对该微生物或动植物细胞的该培养液中醋酸的同化(Assimilate)的调节，把该醋酸的浓度调整在设定值以下这样两个工序。本发明的第2发明是关于培养装置的发明，其特点是包括施行培养的培养槽，分析培养液中醋酸浓度的分析装置，贮存基质的基质槽，添加基质的流量可变式的基质添加装置，以及根据该分析装置的信号、调节该基质添加装置的基质流量输出信号的控制装置。
附图的简要说明

图1为本发明之培养装置的一实施例的概图。
图2表示用基因重组的大肠杆菌进行添加分批培养(Fed-batchculture)结果的线形图。
图3为表示培养液中醋酸浓度和比繁殖率之间关系的一例线形图。
图4为表示培养液中醋酸浓度与β-gal(β-半乳糖苷酶)生产量之间关系的一例线形图。
图5为表示基因重组大肠杆菌的醋酸同化的一例线形图。
图6为在图5的各种条件下，以培养时间和菌体浓度之间的关系表示菌体繁殖的线形图。
图7～9为按照本发明以醋酸作为指标的基因重组大肠杆菌的添加分批培养结果之一例线形图。
图10为表示对照例之培养结果的一例线形图。
以下对本发明有关的问题作具体说明。
示出用色氨酸启动子作为本发明之启动子，並具有连结β半乳糖苷酶基因于该剂的复合质粒PTREZI的大肠杆菌HB101[PTREZI]株(依照布达佩斯条约委托予微工研，授与委托号为BP-815)的培养方法及装置。但是本发明不只限定于此。
复合质粒PTREZI的色氨酸启动子部分，是含有大肠杆菌的色氨酸操纵子启动子和色氨酸主肽(Leaderpeptide)以及色氨酸E(邻氨基苯甲酸合成酶)尖端一部分的、约500bp(basepais)的脱氧核糖核酸(DNA)片断，它插入在PBR322质粒EcoRⅠ的部位。另一方的β半乳糖苷酶基因，是由PMC1403[(J.Bacteriol)第143卷、第971～980页(1980)]切制的6.2kb大小的物质，插入在色氨酸启动子的EcoRⅠ部和PBR322的SalⅠ部之间。这样，复合质粒PTREZI的β-半乳糖苷酶基因，是在色氨酸启动子的控制之下。
含有色氨酸启动子的复合质粒，在培养过程中通过添加3-β吲哚丙烯酸(以下简称ⅠA)耒判明基因的出现[(Nature)第291卷、第503～506页(1981)]。这是因为控制基因复制的阻遏物通过3-β吲哚丙烯酸的作用而失活、通过核糖核酸(RNA)合成酶而开始合成mRNA的缘故。
本发明者们所用生产β-半乳糖苷酶的基因重组大肠杆菌作为模式，就高效率的生产β-半乳糖苷酶的培养方法进行了许多研究，结果以成功地获得菌体高效率的繁殖和高效率地生产目的物而完成了本发明。
图2表示用基因重组大肠杆菌进行添加分批培养的结果。就是将该添加分批培养结果之一例，以座标图表示其间的关系，即培养时间(h、横轴)与菌体浓度(g/l)、β-半乳糖苷酶量(U/ml)以及葡萄糖浓度(g/l)[纵轴]之间的关系。
培养是以溶解氧浓度的上升作为指标、添加作为基质的葡萄糖和含有酪蛋白氨基酸(Casaminoacids)的培养基进行的。在第18小时，菌体浓度达到13g/l，此后菌体停止繁殖。为了诱导β-半乳糖苷酶的生产，虽然在第32小时添加了诱导剂3-β-吲哚丙烯酸和营养物酪蛋白氨基酸，但未能诱导出β-半乳糖苷酶的生产。于是，菌体停止繁殖。可以推断，β-半乳糖苷酶的生产之所以未能诱导产生，可能是由于在培养液上清中存在抑制菌体繁殖和β-半乳糖苷酶生产的物质。
于是，取菌体停止繁殖后、培养第19小时的培养液上清，用超滤膜和离子交换树脂分离阻碍菌体繁殖的物质。对此分离液、用细管式等速电泳分析装置进行有机酸的分析，结果发现醋酸呈高浓度的蓄积，为33g/l。于是将一定量的醋酸盐[醋酸用于酸碱度(PH)的调节，在培养液中一般以醋酸盐的形态存在]添加在新鲜培养基中进行培养，结果菌体的繁殖受到阻碍(参照图3)。据此可以判明，参与阻碍菌体繁殖的物质是醋酸。另外，关于基因出现(β-半乳糖苷酶的生产)的问题，也获得与阻碍菌体繁殖大致相同的结果(参照图4)。图3是表示基因重组大肠杆菌培养液中的醋酸浓度(g/l横轴)与比繁殖速度(l/h，纵轴)之间关系的一例座标图;图4是表示培养液中的醋酸浓度(g/l，横轴)与β-半乳糖苷酶生产量U/ml，纵轴)之间关系的一例座标图。
进而，经过用气相色谱法分析培养液上清，也确认为醋酸。
根据以上结果，从培养液中蓄积的醋酸抑制了菌体繁殖这一事实出发，本发明者们考虑到以醋酸作为指标，通过添加基质可能会提高菌体的繁殖效率。为此则须要除去在培养液中所蓄积的醋酸，发明者们决定通过使菌体同化醋酸来除掉醋酸。于是在培养液中以醋酸盐作为醋酸浓度添加0～10g/l，然后研究基因重组菌同化醋酸的可能性。如图5所示，由于在培养液中添加了葡萄糖1g/l，所以在培养初期培养液中的醋酸浓度升高，但是以后，醋酸的浓度便缓缓下降。通过这一变化可以知道，培养液中的醋酸由于菌体的作用而被同化。该时菌体浓度随着时间所发生的变化如图6所示。即图5是基因重组大肠杆菌的醋酸同化的一例，该图表示培养时间(h、横轴)和醋酸浓度(g/l、纵轴)之间的关系。在第5图中，开始的醋酸浓度以g/l为单位，白圈为0g/l，黑圈为1g/l，白三角为5g/l，黑三角为10g/l。图6是在图5的各种条件下，以培养时间(h、横轴)与菌体浓度(OD550nm、纵轴)之间的关系表示菌体繁殖的座标图。如图6所表明的那样，菌体的浓度通过菌体的醋酸同化，比不添加醋酸时有所增加。
根据以上可以判明，通过调节基质的添加量进行醋酸的同化，而使醋酸的浓度得缘髡庵址椒ㄊ羌虮恪⒂行А⒑侠淼摹 按照上述结果，本发明者们对培养液中的醋酸浓度进行检测，当醋酸浓度高于设定值时，通过减少基质添加量或停止添加基质使菌体同化醋酸而降低醋酸浓度;当醋酸浓度比设定值低时，则通过增加基质添加量或恢复添加基质加以调节之，发明者们发现这种培养方法颇为理想。
从图3的结果可以了解，本发明之培养液中的醋酸浓度应控制在15g/l以下，最好是在5g/l以下。再者，作为控制基质添加的设定值，醋酸的浓度不仅限于设定在5g/l，例如设在1～3g/l的设定范围也是可行的。
此外，在通过添加诱导剂使基因出现时，培养液中的醋酸浓度也和菌体繁殖时的情况一样，起到阻碍作用(图4)。因此在使基因出现的场合下，醋酸的浓度也应在15g/l以下，最好在5g/l以下。
在本发明中，通过将培养液上清导入细管式等速电泳装置、气相色谱仪、液相色谱仪以及质谱仪等，便可迅速而准确地检测出醋酸。
在本发明中，作为细胞的、除前述之基因重组大肠杆菌之外，其它如酵母、枯草菌、放线菌等微生物、动物细胞及植物细胞、或者这些微生物及动植物细胞的基因重组体等，这些细胞的繁殖也受到醋酸的阻碍，但是，在它们具有同化该醋酸的能力的情况下，亦能适用于本发明。
通过微生物或动植物细胞调节醋酸的同化时，所添加的基质一般为营养物质，例如作为氨基酸混合物的酪蛋白氨基酸、氨基酸、葡萄糖及酵母浸出物等。
另外，为了诱导酶或生物活性物质等目的物质的生产，采取以下措施是很有效果的。即在细胞是基因重组大肠杆菌时，色氨酸启动子不应包括上述添加之3-吲哚丙烯酸或抑制基因出现的色氨酸;或者，在低浓度的色氨酸培养基中进行培养;还有，对于Lac启动子和tac启动子，应添加IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)，对于PL启动子应使培养液的温度升高等等。这些诱导剂或诱导条件，也能适用于除大肠杆菌以外的其它基因重组微生物。作为诱导目的物生产时所添加的营养物质，以氨基酸的混合物酪蛋白氨基酸、氨基酸、葡萄糖及酵母浸出物等的效果良好。
在已概略说明过的本发明的培养装置中，于醋酸浓度分析装置的前面还可增设一个装置，即配制所采取的培养液试料使之适合于分析装置的试料配制装置，但并非绝对必要。
另外，合适的基质添加装置是带泵的。
其它尚备有连结各装置的导管及原料供给设备等。
以下通过实施例对本发明作进一步具体说明，但本发明并不限定于这些实施例。
实施例1图1示出本发明培养装置的一个实施例的概要图。
图1中，符号1表示培养槽，2表示搅拌装置，3表示基质槽，4表示基质添加用泵，5表示试料调制装置，6表示醋酸浓度分析装置，7表示控制用电子计算机，8-16表示导管。
装有由培养基和微生物组成的培养液的培养槽1中，容纳有制备启动将约3μg的PTRE.1[Gene，29，pp.41-49(1984)]和pMC1403[J.Bacteriol，Vol 143，pp.971-980(1980)]用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ各25单位切断后，进行琼脂糖凝胶电泳并回收DNA片断。把回收的DNA的2片断在TEN缓冲液(0.02M Tris-HCl，1mMEDTA，0.02M NaCl，pH8.0)中溶解后，用T4DNA连接酶(ligase)2.5单位(全量50μl)连结起来。
上述之构筑请参考JournalofFermentationtechnologyVol，65，No.1，pp7-10(1987)。
(2)向pTREZI的大肠杆菌HB101株的导入(a)感受态细胞(Competentcell)的制备用大肠杆菌HB101[Moleculal Cloning，A Laboratory Manual，p.504，Cold Spring Harbor Laboratory，1982]的保存菌株，将一白金耳的该菌株接种于10ml的L培养基(10g胰蛋白胨，5g酵母浸出物，10g氯化钠，0.8g葡萄糖，自来水11，pH7.2)上，在37℃下振荡培养一夜。取此培养液0.1ml接种于10ml的L培养基上，经过在37℃下振荡2小时，之后通过5，000rpm 10分钟的离心分离并收集菌体。将菌体放在0.1M NaCl，5mM MgCl2，5M Tris-HCl缓冲液(pH7.6，0℃)中悬浮，之后在4℃下再经过5，000rpm 5分钟的离心收集细菌。将菌体再次放在上述缓冲液中悬浮并集菌。接之将菌体放在0.1M CaCl2，0.25M KCl，5mM MgCl2，5mM Tris-HCl缓冲液(pH7.6，0℃)4ml中悬浮，然后放在冰中静置25分钟。经过5，000rpm 5分钟的离心分离并集菌之后，在上述CaCl2缓冲液0.4ml中悬浮，则成为感受态细胞(Competent Cell)。
(b)向大肠杆菌的导入在0.2ml的感受态细胞(CompetentCell)中添加上述为构筑pTREZI所调制的反应液25μl，在0℃下静置60分钟。将此溶液添加在1.8ml的L培养基中，在37℃下经过1小时振荡之后，加入氨苄青霉素50μg/ml并在琼脂平皿上涂抹0.1ml。在37℃下经过一夜的培养之后，采取平皿上出现的菌落，即得到大肠杆菌HB101[pTREZI]株。
实施例2用气相色谱分析装置检测菌体培养液中的醋酸，并控制基质添加量使培养液中的醋酸浓度在2g/l以下。还要在培养基中添加色氨酸以便抑制菌体繁殖时的色氨酸启动子的作用。
菌体保持复合质粒PTREZI的大肠杆菌HB101[PTREZI)株。
初始培养基M9-酪蛋白氨基酸培养基;其组成是NH4Cl 1g，Na2HPO46g、KH2PO43g，NaCl5g，MgSO4·7H2O 0.1g，CaCl2·2H2O 15mg，盐酸硫胺素0.1g，脯氨酸0.1g，色氨酸0.01g，葡萄糖5g，酪蛋白氨基酸2.5g，酵母浸出物1.5g、蒸馏水1l，pH为7.0。在本培养基中，为了仅使保持复合质粒的大肠杆菌繁殖，还要添加50mg/l的氨苄青霉素(AP)。基质添加用培养基葡萄糖200g，膊氨酸4g，酪蛋白氨基酸100g，酵母浸出物60g，色氨酸0.4g，AP1g，蒸馏水1l，pH为7.0。
培养条件将保持复合质粒的大肠杆菌接种在4个装有50mlM9-酪蛋白氨基酸培养基的500ml振动烧瓶中，用振动培养机，以振幅为7cm，振动次数115次/分钟，37℃下培养一夜。将该种菌液200ml接种于装有M9-酪蛋白氨基酸培养基的5l发酵罐中，以初始液量2l，在37℃，pH为7.0，通气量为2l/分钟的条件下开始培养。培养液中的醋酸浓子M的搅拌装置2的搅拌部分。空气导入用管子与培养槽1的底部相接，废气排出用导管9接在培养槽1的上端。在培养槽1的测面连接有与培养液相接的培养液抽出用管11，通过导管11将试料调制装置5和醋酸浓度分析装置6相连接。在培养槽1的上部，通过基质添加用管10，将流量可变式的基质添加用泵4和基质槽3相连接。控制用电子计算机7接在醋酸浓度分析装置6和基质添加用泵4上。
在试料调制装置5中装有菌体分离装置和试料溶液的酸性化装置。在醋酸浓度分析装置6中装有质谱分析计或气相色谱法分析装置。
以下说明本实施例的操作。在培养槽1内，微生物和由基质槽3供给的基质以及来自导管8的空气通过搅拌装置2进行搅拌，繁殖微生物。培养液由导管11抽出，在试料调制装置5中除去菌体并通过酸的作用进行试料酸性化，然后导入醋酸浓度分析装置。在醋酸浓度分析装置6中装有气相色谱法分析装置时，试料可以酸性溶液状态使用，而装有质谱分析计时，则通过空气起泡而气化的醋酸供于分析。将醋酸浓度分析装置6分析出来的培养液中的醋酸浓度值输入控制用电子计算机7，与设定值进行比较。醋酸浓度值比设定值高时，可停止基质添加或将放慢基质添加速度的信号送入基质添加用泵。以添加基质添加量。
另一方面，当醋酸浓度比设定值低时，则开始添加或将加快基质添加速度的信号送入基质添加用泵，以调节基质添加量。
若按以上方法调节基质添加量，就能将培养液中的醋酸浓度控制在设定值以下，并可将菌体的繁殖速度维持在高水平。
参考例大肠杆菌HB101[PTREZI]株的制备(1)PTREZI的构筑度是通过将培养上清液导入充填了PEG600+Flusinp(ガヌクロ工业制)的气相色谱分析装置中进行测定，当醋酸浓度达2g/l时停止添加基质。
结果结果示于图7中。即图7个用培养时间(h，横坐标)和醋酸浓度(g/l)、菌体浓度(g/l)、β-gal量(U/ml)以及添加速度(ml/分钟)(纵坐标)之间的关系表示本实施例所得培养结果的一例。
如图7所示，由于基质的添加而生成醋酸，而一旦停止添加基质，醋酸就会被菌体同化，培养液中的醋酸浓度即降低。由于像这样将培养液中的醋酸浓度控制在低水平进行培养，培养到第30小时其菌体浓度即可达29g/l的高密度。为了抑制色氨酸启动子的作用，在添加用培养基中添加色氨酸，因此培养到第22小时时就能抑制β-gal生产。但是，培养到第22小时以后由于色氨酸浓度降低而失去抑制作用，并开始生成β-gal，最终时β-gal的产量达104U/ml。本实施例中是通过色氨酸浓度降低而失去抑制作用以致生成β-gal的，而添加作为诱导剂的IA也能开始生产β-gal。如上所述，通过抑制培养液中的醋酸浓度，菌体浓度达到29g/l的高密度，并可将菌体的收率维持在0.57g·细胞/g·葡萄糖的高水平。
实施例3由气相色谱分析装置检测菌体培养液中的醋酸，并控制基质的添加量使培养液中的醋酸浓度在2g/l以下。不向培养基中添加色氨酸，与菌体繁殖同步进行β-gal的生产。除了采用不添加色氨酸的培养基外，进行添加培养时使用的菌株，培养条件等均与实施例2相同。
结果以和图7同样的关系将培养结果之一例示于图8中。
如图8所示，与菌体繁殖同步生产β-gal。培养到第30小时菌体浓度即达到36g/l的高密度，菌体收率为0.54g、细胞/g·葡萄糖。但是，此时β＝gal的产量是59U/ml，比实施例1低。
实施例4用气相色谱分析装置检测菌体培养液中的醋酸，并控制基质添加量使培养液中的醋酸浓度在2g/l以下。培养前期将色氨酸加到添加用培养基里，抑制β-gal的生产，培养后期采用不含色氨酸的添加用培养基，进行β-gal生产。
初始培养基和培养前期采用的添加用培养基使用与实施例1相同的培养基，而培养后期使用的培养基是从实施例1的添加用培养基中除去酵母浸出物和色氨酸的培养基。除上述的培养基外，进行添加培养中使用的菌株、培养条件均与实施例2相同。
结果以与图7的同样关系将培养结果之一例示于图9。
如图9所示，培养到第12小时时要用不含色氨酸的添加用培养基开始添加，β-gal生产急剧开始并生产出70U/ml的β-gal。菌体浓度为18.6g/l，菌体收率为0.52g·细胞/g·葡萄糖。
对照例1添加基质使培养液中的葡萄糖浓度与实施例2及3相同，为1g/l以下的低浓度，此外，不采取抑制醋酸生成的措施。
使用的菌株，培养条件均与实施例2相同，进行添加培养。
结果以与图7同样关系将培养结果之一例示于图10中。
如图10所示，与菌体繁殖同步生成醋酸，当醋酸浓度达21g/l，在培养到第20小时时菌体停止繁殖，此时的菌体浓度为21g/l，而菌体收率很低，为0.36g·细胞/g·葡萄糖，生产效率极差。而且β-gal的产量也极低，为8U/ml。
如上所述，按照本发明，由于可抑制培养液中的醋酸浓度，因而能容易地进行高密度培养，从而在达到高菌体回收率和目的物的高产量方面收到显著效果。例如，在生产β-gal时，可以进行25g/l以上的高密度培养，能达到0.5g·细胞/g·葡萄糖以上的高菌体回收率和高达50U/ml以上的β-gal产量。
权利要求
1.为生产代谢物而对微生物或动植物细胞进行培养的方法，该方法之特征在于包括检测培养液中醋酸浓度，并通过调节由于该微生物或动植物细胞引起该培养液中醋酸的同化，使该醋酸浓度在设定值以下的工序。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于通过调节基质的添加来调节上述醋酸的同化，从而调节该醋酸的浓度。
3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于该醋酸浓度的设定值在15g/l以下。
4.根据权利要求1～3中任何一项所述的培养方法，其特征在于，当醋酸浓度高于设定值时，通过减少基质添加量或停止基质添加使醋酸在微生物或动植物细胞中同化以使醋酸浓度降低。
5.根据权利要求1～3中任何一项所述的培养方法，其特征在于，当醋酸浓度低于设定值时则增加基质添加量或重新开始添加基质。
6.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，微生物或动植物细胞是具有同化醋酸能力的微生物或动植物细胞。
7.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，微生物或动植物细胞是基因重组微生物或基因重组动植物细胞。
8.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于基质是营养物质。
9.根据权利要求8所述的培养方法，其特征在于营养物质是从酪蛋白氨基酸、氨基酸、葡萄糖及酵母浸出物组成的群中选出的至少一种物质。
10.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于代谢物是酶或生物活性物质。
11.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于为了生产代谢物，要添加诱导剂。
12.根据权利要求11所述的培养方法，其特征在于诱导剂是对保持基因重组微生物或基因重组动植物细胞的出现媒介物中的启动子起作用的物质。
13.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于该微生物是基因重组大肠杆菌。
14.根据权利要求13所述的培养方法，其特征在于保持该基因重组微生物的出现媒介物含有色氨酸启动子，tac启动子或PL启动子。
15.根据权利要求13或14所述的培养方法，其特征在于，在启动子为色氨酸启动子时，将3-β-吲哚丙烯酸用作诱导剂;在启动子为lac或Tac启动子时，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷作为诱导剂。
16.根据权利要求13或14所述的培养方法，其特征在于，含有色氨酸启动子的基因重组大肠杆菌的情况下，采用不含色氨酸或色氨酸浓度低的培养基来诱导代谢生产;在含有PL启动子的基因重组大肠杆菌的情况下，采用提高培养液温度的方式来诱导代谢物生产。
17.为生产代谢物而培养微生物或动植物细胞的培养装置中，其特征在于该装冒 进行培养的培养槽，培养液中的醋酸浓度分析装置，用于贮存基质的基质槽，用来添加基质的流量可变式基质添加装置，以及根据来自该分析装置的信号控制来自该基质添加装置的调节基质流量输出信号的控制装置 ?
18.根据权利要求17所述的培养装置，其特征在于醋酸浓度分析装置是细管式等速电泳装置、气相色谱分析装置，液相色谱装置或质谱分析计。
19.根据权利要求17所述的培养装置，其特征在于基质添加装置是基质添加用泵。
20.根据权利要求17所述的培养装置，其特征在于控制装置是控制用电子计算机。
全文摘要
在为生产代谢物而培养微生物或动植物细胞的方法中，由于能检测培养液中的醋酸浓度，并通过该微生物或动植物细胞使该培养液中的醋酸同化而使该醋酸浓度调节在设定值以下，因而能进行高密度培养、达到高菌体回收率并使目的物质提高产量。本发明还涉及适于进行上述培养的培养装置，该装置包括进行培养的培养槽、培养液中醋酸浓度分析装置、贮留基质的基质槽、用于添加基质的基质添加槽，以及控制装置。该装置能根据该分析装置的信号控制来自该基质添加装置的调节基质流量的输出信号。
文档编号C12P1/0GKN1036034SQ8810148
公开日1989年10月4日 申请日期1988年3月22日 优先权日1987年3月23日
发明者清水夫, 福园真一, 藤森清, 西村信子, 绪田原??申请人:酥晔交嵘缛樟⒅?br>