发酵培养基组成（g/L):豆柏粉，25. 0 ;玉 米浆干粉，18.5 ;氯化钠，4.0 ;磷酸二氢钠，2.8 ;磷酸氢二钾，1.2 ;氯化镁，0.55 ;硫酸锰， 〇. 15 ;中性蛋白酶，2.0 ;糖化酶，1.5 ;消泡剂，1.3 ;用50%氢氧化钠流加，调节起始pH至 7. 4 ;种子罐体积为30000L，培养基定容至21000L，实消条件：恒温116°C保持30min ;培养 条件：恒温 37°C 土 1°C，罐压 0· 05Mpa，转速 O-IOh 140rpm、10-18h 180rpm、18-24h 160rpm ; 通风量〇-1〇}11651113/11、1〇-18112151113/11、18-241118〇111 3/11。所述解淀粉芽孢杆菌册1-7发酵 液在放罐时的菌量一般达到450X IO8 CFU/g~500X IO8 CFU/g。
[0028] (3)将发酵液与载体混合进行后处理，获得解淀粉芽孢杆菌菌菌粉。所述解淀粉芽 孢杆菌HFJ-7后处理过程：喷雾干燥塔，LPG-6000型，进风145°C _150°C，出风65°C -70°C， 载体为轻质碳酸钙，添加载体占发酵液的质量比例为：1〇%-15%。所述解淀粉芽孢杆菌 HFJ-7筛分与质检过程：超过90%菌粉均过80目筛，并参考国标GBT 26428-2010饲用微生 物制剂中枯草芽孢杆菌的检测，测定解淀粉芽孢杆菌菌量，质检合格，制备为解淀粉芽孢杆 菌菌粉。所述解淀粉芽孢杆菌HJF-7菌粉中含菌量范围2000X IO8 ~2200X IO8 CFU/g。
[0029] 实施例2 取玉米40kg和豆柏10kg，两者粉碎后混合均匀。按照原料质量添加布拉酵母不低于 2 X IO9个/g，解淀粉芽杆菌HFJ-7不低于4 X IO9个/g，植物乳杆菌不低于5 X 10 9个/g， α -淀粉酶不低于20U/g，纤维素酶不低于10U/g，NSP复合酶不低于10U/g，蛋白酶不低于 100U/g，将IOkg鱼溶浆添加到35kg水中得到混合液，将混合液直接加入到混合好的所述饲 料中搅拌均匀，40°C密封发酵2天。
[0030] 产品发酵结束后60°C低温烘干，PH4. 5,乳酸含量10. 5%，小肽含量20. 1%，活菌数 高达 9X 10lclcfu/g。
[0031] 本发明所用的鱼溶浆主要指标(购买于山东荣成）：pH 5. 71 ;水分45. 67% ;粗蛋 白36. 78%;酸溶蛋白65. 99%;灰分12. 58%;挥发性盐基氮（VBN) 332. 64mg/100g;氨基 酸总和：32. 5%。
[0032] 由以上指标可以看出鱼溶浆蛋白含量很高，并且大部分是小分子蛋白。由于鱼溶 浆为鱼粉加工的副产物，因此具有强烈的鱼腥味，能提高畜禽的诱食性，因此开发鱼溶浆的 回收和利用具有客观的经济效益和社会效益。
[0033] 实施例3 取玉米30kg和豆柏20kg，两者粉碎后混合均匀。按照原料质量添加布拉酵母2 X IO9个/克，解淀粉芽杆菌（HFJ-7) 4X IO9个/克，植物乳杆菌5 X 10 9个/克，α -淀粉酶20U/ 克，纤维素酶IOU/克，NSP复合酶10U/g，蛋白酶100U/g，将25kg鱼溶浆添加到45kg水中 得到混合液，将混合好的混合液直接加入到混合好的所述饲料中搅拌均匀，40°C密封发酵2 天。
[0034] 产品发酵结束后60°C低温烘干，pH3. 8,乳酸含量18. 5%，小肽含量25. 3%，活菌数 高达 3.8X1012cfu/g。
[0035] 实施例4、发酵和未发酵玉米一豆柏型日粮相关比较 1)大分子蛋白 ① 分别取经发酵和未发酵的饲料0. 2g，加30ml 0. 6%K0H，常温下磁力搅拌lh， 4000rpm，离心10min，取上清； ② IOOul 上清 +IOOul loading buffer，混勾后煮沸 8min ; ③ 取10ul，在12% SDS-pAGE胶上点样，在5%浓缩胶内保持恒流15mA，约40-50min ;进 入分离胶，调节电流至20mA，直至前沿接近地面Icm处； ④ 剥胶后染色2h，脱色过夜； 实验结果见图2,从图2中可以看出：抗原蛋白是豆柏中引起仔猪腹泻的主要因素，发 酵组抗原蛋白比未发酵组有明显降低。
[0036] 2)不良寡糖 ① 分别取发酵组和为发酵组IOg样品，加50ml 80%乙醇，70°C提取lh，过滤后收集清 液； ② 于90°C水浴内蒸发浓缩，用80%乙醇定容至150ml ; ③ lOOOOrpm，离心10min，取上清，用于寡糖测定； ④ TLC平板于105 °C活化30min，冷却后取5ul点样，用展开剂（乙腈：冰乙酸：水 =6:3:1)展开，待展开剂没顶后，取出TLC平板，用吹风机吹干表面展开剂； ⑤ 于105°C烘箱内烘干30min，以散尽有机溶剂，显色液（20%硫酸+0. 5% 3, 5-二羟基 甲苯）中浸泡15s，吹风机冷风吹干表面，然后于105°C中显色3-5min，直至显出清晰糖点。
[0037] 试验结果见图3所示，从图3中可以看出：不良寡糖是引起仔猪胀气的主要因素， 发酵组棉籽糖和水苏糖明显减少。
[0038] 3)大肠杆菌抑菌试验 ① 取IOOul大肠杆菌菌液均匀的涂布在营养琼脂培养基上面； ② 取发酵组和未发酵组样品20g，加入20ml无菌水搅拌均匀，静置15min ; ③ 分别取静置好的上清液l〇〇ul，加到放置在大肠杆菌平板的牛津杯中； ④ 37°C培养24h。
[0039] 试验结果见图4所示，从图4中可以看出：发酵组在经过布拉酵母、解淀粉芽孢杆 菌和植物乳杆菌发酵后能产生大量有益产物，对大肠杆菌产生明显的抑菌圈，能有效抑制 大肠杆菌的生长，对治疗仔猪腹泻有一定的疗效。
[0040] 实施例5、养殖试验 1)腹泻率实验 将仔猪按照体重随即分成两组，每组30头。实验组为发酵玉米一豆柏型日粮，对照组 为未发酵玉米一豆柏型日粮，将两组仔猪饲喂30天，记录相关数据 实验结果如表1和表2所不： 表1腹泻率实验结果
【主权项】
1. 一种在玉米-豆柏型日粮中添加鱼溶浆的发酵方法，其特征在于它包括以下步骤： (1) 在玉米-豆柏型基础日粮中添加以下组分：布拉酵母含量不低于2 X IO9个/g ;解 淀粉芽孢杆菌HFJ-7含量不低于4 X IO9个/g ;植物乳杆菌含量不低于5 X 10 9个/g ; a -淀 粉酶不低于20U/g ;纤维素酶酶不低于10U/g ;NSP复合酶不低于10U/g ;蛋白酶添加量不低 于100U/g ;按照占所述基础日粮总质量的质量比为20%-50%添加鱼溶浆； (2) 加水调节料水质量比为1:0. 7-1:1，控制温度在30°C -50°C密封发酵； (3) 发酵完成采用低温60°C烘干。
2. 根据权利要求1所述的在玉米-豆柏型日粮中添加鱼溶浆的发酵方法，其特征在于： 所述解淀粉芽孢杆菌HFJ-7为解淀粉芽孢杆菌?，其保藏编号 为 CGMCC No. 10011。
3. 根据权利要求1所述的在玉米-豆柏型日粮中添加鱼溶浆的发酵方法，其特征在于： 含有所述解淀粉芽孢杆菌HFJ-7的解淀粉芽孢杆菌HFJ-7菌粉的制备过程如下： (1) 将解淀粉芽孢杆菌HFJ-7接种到装有种子培养基的灭菌种子罐中，37°C培养10h， 形成种子培养液，所述种子培养基组分包括：糖蜜，24. 5~25. 0 g/L ;蛋白胨，13. 5~13. 7 g/ L;磷酸二氢钾，1.7~1.8 g/L;朽1檬酸钠，L5~L6 g/L;硝酸按，L5~L6 g/L;硫酸镁， 0? 5~0. 52 g/L ;调节起始 pH 至 7. 2 ; (2) 将所述种子培养液转接至装有发酵培养基的生产罐进行发酵培养，37°C培养24h， 当孢子率超过95%时，停罐，获得发酵液，所述发酵培养基组成包括：豆柏粉，25. 0~25. 5 g/ L ;玉米浆干粉，18. 5~19. 4 g/L ;氯化钠，4. 0~4. 2 g/L ;磷酸二氢钠，2. 8~2. 9 g/L ;磷酸氢 二钾，I. 2~1. 3 g/L ;氯化镁，0? 55~0. 58 g/L ;硫酸锰，0? 15~0. 16 g/L ;中性蛋白酶，2. 0~2. 1 g/L;糖化酶，1.5~1. 6 g/L;消泡剂，1.3~1. 4 g/L;调节起始pH至7. 4,所述解淀粉芽孢杆 菌 HFJ-7 发酵液的菌量达到 450X IO8 CFU/g~500X IO8 CFU/g ; (3) 将所述发酵液添加载体后进行喷雾干燥，获得含菌量2000X 108 ~2200X 108 CFU/ g的解淀粉芽孢杆菌HFJ-7菌粉，所述载体为轻质碳酸钙，添加载体的量占发酵液的质量比 例为：10%-15%。
4. 根据权利要求1所述的在玉米-豆柏型日粮中添加鱼溶浆的生物发酵方法，其特征 在于：所述玉米-豆柏型基础日粮中玉米和豆柏的质量比为4:1-3:2。
5. 根据权利要求1所述的在玉米-豆柏型日粮中添加鱼溶浆的生物发酵方法，其特 征在于：所述步骤（1)中添加的蛋白酶是按酶添加量碱性蛋白酶：中性蛋白酶：酸性蛋白酶 =2:5:3的三种组分的混合物。
6. 根据权利要求1所述的在玉米-豆柏型日粮中添加鱼溶浆的生物发酵方法，其特征 在于：所述步骤（2)中密封发酵48h，密封发酵中好氧发酵12h，厌氧发酵36h。
7. 根据权利要求3所述的在玉米-豆柏型日粮中添加鱼溶浆的生物发酵方法，其特征 在于：所述步骤（3)中喷雾干燥的进风温度为145°C _150°C，出风温度为65°C -70°C。
8. 权利要求1-7任一项所述的发酵方法制得的发酵物。
9. 根据权利要求8所述的发酵物，其特征在于：所述发酵物的pH3-5,乳酸含量 10-20%，小肽含量 20-30%，活菌数高达 9 X 101Qcfu/g~3. 8 X 1012cfu/g。
【专利摘要】本发明提供了一种在玉米-豆粕型日粮中添加鱼溶浆的发酵物及其发酵方法，各组分添加量按每克玉米-豆粕型日粮分别为：布拉酵母2×109 个/g；解淀粉芽杆菌HFJ-7 4×109个/g；植物乳杆菌5×109个/g；α-淀粉酶20U/g；纤维素酶10U/克；NSP复合酶10U/g；蛋白酶100U/g；添加鱼溶浆，调节料水比，密封发酵。本发明工艺简单，成本低廉，最终产品低温烘干，经发酵后呕吐毒素和霉菌毒素均未检测到，抗原蛋白明显减少，同时富含大量益生菌及其代谢产物，可以有效抑制致病性大肠杆菌、沙门氏菌等有害菌的生长繁殖，提高动物免疫力，并且在添加鱼溶浆后饲料有浓郁的鱼腥味，对动物有良好的诱食性。CGMCC No. 1001120141119
【IPC分类】A23K1-10, A23K1-00
【公开号】CN104872379
【申请号】CN201510250140
【发明人】马成, 李慧芬, 王娇, 张明俊, 赵志强, 王晓伟
【申请人】青岛尚德生物技术有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年5月18日