专利名称：叶绿素铬及其制备方法与用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及有机化学、医学药品领域。
铬是葡萄糖耐量因子的组成成分，是维持正常葡萄糖耐量不可缺少的微量元素，可促进机体糖代谢、脂肪代谢、蛋白质代谢的正常进行，是核酸类物质的稳定剂和胰蛋白酶等某些酶类的激活剂，是与人体胰岛素配合的因子之一，具有激活胰岛素的功能，有降血糖降血脂的作用。高价铬，如Cr(VI)，对人体有害，低价铬Cr(III)却是人体所必需。
糖尿病患者，有时需要补充三价铬，它能降低机体对外源性胰岛素的需要。糖尿病人，眼部糖类聚集较多，可引发眼底的微循环障碍、出血和白内障，严重时甚至失明，补充铬能减缓这些症状。但是，无机铬对胃有刺激性，不能有效地被人体吸收，需要转化为有机形式。
近数十年来的研究证明，叶绿素的衍生物对人体十分有益，可以治疗贫血，促进创伤和溃疡愈合，抗菌，抗病毒，抗诱变，抗肿瘤，保肝，防治白细胞减少症、尿石症、口腔疾病，等等，而且人们也已经研究出了很多种叶绿素衍生物，如叶绿素铜钠盐、叶绿酸锌等，并对其制备方法进行了实验、研究、探索，如《(叶绿酸锌的制备法》(申请号99125781.2，公开号CN 1263891A)、《(从竹叶中提取叶绿素铜钠盐的方法》(申请号91111939.6，公开号CN 1063704A)。
但是，到目前为止，尚未见到叶绿素铬的任何专利和文献报导。
本发明的目的就是通过将天然叶绿素中的镁元素置换为铬元素，创造出具有生物活性的叶绿素铬，并将其应用于制药领域。
本发明的技术方案如下叶绿素铬，其分子结构式为 即叶绿素结构式中的镁离子被铬离子置换，其中，与叶绿素a络合的，R是CH3，分子式为C34H30CrN4O5Na2；与叶绿素b络合的，R是CHO，分子式为C34H28CrN4O6Na2。
如前所述的叶绿素铬，其物理性状为墨绿色固体，100℃以下稳定，碱性，溶于酸，溶于人工胃液，微溶于水、苯、乙酸乙酯、乙醇、乙醚、石油醚，在酸性溶液中、在365nm紫外光下呈现玫瑰红色的荧光；其紫外吸收光谱的最大吸收峰在400nm～415nm和590nm～620nm两个范围内；其红外吸收光谱在1378cm-1～1638cm-1范围、520cm-1～525cm-1范围和2852cm-1～3453cm-1范围内的某些位置分别有强吸收峰；其所含铬离子为三价铬。
如前所述的叶绿素铬，由使用乙醇从含有叶绿素的天然原料中提取的叶绿素或工业品糊状叶绿素经皂化、除杂、脱镁、铬代、碱化等步骤制成。铬含量的理论值为7.7％，但实际制出的叶绿素铬的铬含量根据杂质的多少而有所不同，有时因为杂质中含有铬离子，使铬含量还高于理论值，一般在3.5％～9.0％之间。
现将叶绿素铬的若干种制备方法分述如下叶绿素铬的第一种制备方法，具体而言，依次包括以下步骤第一步前处理选取含有叶绿素的天然原料，包括蚕砂或者竹叶、浮萍、桑叶、菠菜、甜菜、白菜、苜蓿等绿色植物，水洗去除泥沙、灰尘、枯叶等杂质。
为避免在下一步乙醇(尤其是90％以上的乙醇)浸提过程中，蛋白质凝固包裹叶绿素不利于提取，可以在水洗去除杂质后，在所选原料中加入0.2～0.5倍原料质量的水，拌匀，放置4～12小时。
第二步浸提用70％～95％的乙醇从原料中浸提叶绿素，浸提温度为50℃～70℃，在浸提过程中不断搅拌，每浸提2～3小时后抽滤；反复上述过程2～3次，合并提取液。
第三步皂化在乙醇提取液中加入氢氧化钠溶液，调pH9～11，搅拌，皂化时间为1～2小时，温度为40℃～70℃，过滤，去除滤渣。(滤渣可用作饲料或肥料。)第四步减压浓缩将皂化液减压浓缩至原体积的1/4～1/2，温度50℃～80℃，压力0.06Mpa～0.08Mpa。(减压浓缩这一步骤对于最后制出叶绿素铬并不是必需的，但是，从实际生产应用来讲，有这一步骤可以减少后面步骤所用物质材料的数量，降低成本，提高效率，因而在实际应用中是必需的。)第五步除杂在浓缩液中加入浓缩液1～2倍体积的溶媒，溶媒可选择石油醚、乙醚、汽油等，振荡拌匀，静置分层，取水相溶液。(可从油相溶液中回收溶媒，提取植醇。)第六步酸化脱镁在水相溶液中加酸，边加边搅拌，调pH2～3，反应温度30℃～40℃，在30～60分钟后，离心，去除离心液，取沉淀。(在本步骤，温度控制得较低，是为避免破坏脱镁叶绿素的稳定。)
第七步碱化置铬在沉淀中加入氢氧化钠溶液，调pH9～11，在此碱性环境中加入20％～30％三氯化铬溶液进行铬代，以铬离子置换出叶绿素中的镁离子，边加边搅拌，温度30℃～50℃，时间30～60分钟，之后，离心，去除离心液，保留沉淀，得叶绿素铬粗品。(在置铬环节，也可以加入三氯化铬固体，但因为生成物是固体，不便于判断反应进程，所以采用三氯化铬溶液。)在以上步骤的基础上，为使叶绿素铬的纯度更高，可增加以下步骤第八步精制在叶绿素铬粗品中加酸，调pH2～3，过滤，去除滤渣；再在滤液中加碱，调pH9～11，搅拌至不再有沉淀生成或溶液澄清，离心，去除离心液，保留沉淀；本精制过程反复进行2～4次。
第九步洗涤对固体沉淀用pH8～9弱碱乙醇液洗涤，离心，去除离心液；第十步干燥对固体生成物采取减压真空干燥、喷雾干燥、溶媒结晶法真空干燥或真空冷冻干燥的方法进行干燥处理，得板块状叶绿素铬精品，粉碎，得叶绿素铬干燥粉末。
在干燥步骤，根据实际需要和对成本控制的考虑，优选的干燥方法是减压真空干燥，压力为0.06Mpa～0.08Mpa，温度为50℃～80℃，时间为4～7小时。
如果在制备叶绿素铬时，选取的原料是工业品糊状叶绿素，则上述制备方法中的第一步骤和第二步骤就不再需要，可以直接去掉，同时须将第三步骤皂化改作将糊状叶绿素浸入氢氧化钠溶液，调pH9～11，搅拌，皂化时间为1～2小时，温度为40℃～80℃，过滤，去除沉淀。这是第二种制备方法。
第一种制备方法中的第二步骤浸提与第三步骤皂化可以同时进行，即用pH9～11的碱性乙醇从原料中浸提叶绿素，浸提温度为50℃～70℃，在浸提皂化过程中不断搅拌，每浸提2～3小时后抽滤；反复上述过程2～3次，合并提取液，去除沉淀。这是第三种制备方法。
前三种制备方法中的碱化置铬步骤中的加入20％～30％三氯化铬溶液这一置铬环节，可以提前。它可以与酸化脱镁步骤同时进行，温度为30℃～40℃，这是第四种制备方法(实际上，分别将第一、二、三种制备方法中的置铬环节提前，就产生了三种新的制备方法)。它也可以与皂化步骤同时进行，温度为40℃～50℃，这是第五种制备方法(与第四种制备方法同理，这实际上也产生了三种新的制备方法)。
叶绿素铬，尤其是通过以上诸种方法制备的叶绿素铬，可应用于制药。
叶绿素的衍生物对人体十分有益，可以治疗贫血，促进创伤和溃疡愈合，抗菌，抗病毒，抗诱变，抗肿瘤，保肝，防治白细胞减少症、尿石症、口腔疾病，等等。叶绿素铬作为一种叶绿素衍生物，也具有很多叶绿素衍生物的共性，对上述叶绿素衍生物的作用有不同程度的体现，可以在进一步研究并经过动物试验和临床试验后，广泛用于分别治疗多种疾病的多种药物的制备中。
铬是葡萄糖耐量因子的组成成分，是维持正常葡萄糖耐量不可缺少的微量元素，可促进机体糖代谢、脂肪代谢、蛋白质代谢的正常进行，是核酸类物质的稳定剂和胰蛋白酶等某些酶类的激活剂，是与人体胰岛素配合的因子之一，具有激活胰岛素的功能，有降血糖、降血脂的作用。
糖尿病患者补充三价铬，能降血糖，降血脂，降低机体对外源性胰岛素的需要，并能减缓因眼部糖类聚集较多而引发的眼底微循环障碍、出血、白内障，甚至失明的症状。但是，无机铬对胃有刺激性，不能有效地被人体吸收，需要转化为有机形式，以减少甚至消除对胃的刺激性，便于人体吸收。
叶绿素铬正是三价铬与叶绿素络合的有机物，其中所含铬卟啉的结构接近于广泛存在于生物体内的细胞色素P450的血红素辅基，是P450模拟体系的主要组分，具有催化氮化碳氢化合物的能力，能参与生理物质的生物合成，能代谢外源性化合物及内源性化合物，而且，通过本发明提供的制备方法制出的叶绿素铬具有生物活性，适于制造治疗糖尿病的降血糖、降血脂类药物。
同时，叶绿素铬中的铬卟啉能抑制原血红素氧化酶，适用于制造治疗新生儿黄疸的药品。
当然，叶绿素铬应用于制药，还需要作更进一步的研究，还需要经过多次的动物试验和临床试验。
本发明的有益效果是通过操作简便、原料丰富、成本低廉、毒性极低的方法制成、创造了叶绿素铬这种叶绿素与铬的新络合物、一种具有生物活性的新的叶绿素衍生物，同时发掘出它的用途应用于分别治疗糖尿病、新生儿黄疸等疾病的多种药品的制造。
下面结合附图，通过实施例作进一步说明。
图1是叶绿素铬第一种制备方法的流程图。
图2是用贝克曼(BECKMAN)UV-600型紫外可见分光光度仪检测通过本发明提供的制备方法制得的叶绿素铬的紫外吸收光谱图。
图3是用尼泊尔公司(NICOLET)200SXV FT-IR型傅里叶变换红外光谱仪检测通过本发明提供的制备方法制得的叶绿素铬的红外吸收光谱图。
图4是用贝克曼(BECKMAN)UV-600型紫外可见分光光度仪对通过本发明提供的制备方法制得的叶绿素铬与高锰酸钾反应后生成的物质和重铬酸钾标准品分别与二苯卡巴肼生成的两个有色溶液的波长扫描图。
实施例1本例按照附图1所示的流程实施。
选取蚕砂10kg，水洗除尘，加入5kg水，拌匀，放置8小时，避免下一步乙醇浸提时蛋白质凝固包裹叶绿素。8小时后，加入80％的乙醇，开始浸提叶绿素。在浸提过程中不断搅拌，保持温度在60℃左右，浸提3小时，抽滤，将滤渣再加入80％乙醇，继续浸提3小时后抽滤，合并两次的提取液。然后在合并的提取液中加入氢氧化钠溶液，调pH10左右，搅拌1小时，保持温度在60℃左右。1小时后，过滤，去除沉淀。将滤液置于真空浓缩器中，温度70℃，压力0.07Mpa，减压浓缩至原体积的1/3。在浓缩液中加入1.5倍体积的石油醚，振荡拌匀，静置分层，待上层油相澄清后，取下层水相溶液。(上层油相溶液含植醇，可从中回收石油醚，并提取植醇。)在水相溶液中加入盐酸，边加边搅拌，调pH2，反应温度30℃，在40分钟后，离心，去除离心液。在沉淀中加入氢氧化钠溶液，调pH10，在此碱性环境中加入30％三氯化铬溶液进行铬代，以铬离子置换出叶绿素中的镁离子，边加边搅拌，保持温度在35℃左右，40分钟后，离心，去除离心液，得叶绿素铬粗品。
为使叶绿素铬纯度更高，将粗品溶于硫酸，调pH2，过滤，去除沉淀；然后在滤液中加氢氧化钠，调pH10，搅拌至不再有沉淀生成，离心，去除离心液，保留沉淀；如此反复加酸加碱3次。之后对生成的固体沉淀用pH8弱碱乙醇液淋洗，然后离心，去除离心液。将固体生成物置于真空干燥器中，加热至60℃，压力0.07Mpa，减压真空干燥6小时，制得板块状叶绿素铬精品，粉碎，得叶绿素铬干燥粉末136g，收率1.36％。
本实施例所制得产品的物理性质为墨绿色固体，加热到100℃仍然稳定，碱性，溶于酸，溶于人工胃液，微溶于水、苯、乙酸乙酯、乙醇、乙醚、石油醚，在酸性溶液中、在365nm紫外光下呈现玫瑰红色的荧光。
用贝克曼UV-600型紫外可见分光光度仪对制得的产品作紫外吸收光谱图检测，检测结果如附图2所示，表明该产品的紫外吸收光谱的最大吸收峰在411nm和590nm两处，证明该产品具有卟啉环结构。
用尼泊尔公司200SXV FT-IR型傅里叶变换红外光谱仪对制得的产品作红外吸收光谱图检测，检测结果如附图3所示，表明该产品的红外吸收光谱在524.187cm-1、1378.848cm-1、1498.800cm-1、1632.460cm-1、2853.937cm-1、2928.800cm-1、3370.152cm-1、3393.031cm-1、3427.660cm-1、3452.656cm-1等处有强吸收峰，在845.085cm-1、1020.562cm-1、1072.734cm-1等处有弱吸收峰。
因为，除了光学异构体和长链烷烃同系物外，几乎没有两种化合物具有相同的红外吸收光谱，这即是红外吸收光谱的“指纹性”，而本红外吸收光谱图在现有资料中没有相同的，所以，本红外吸收光谱图证明了，通过本实施例制得的产品是新物质，同时也证实了前文公开的叶绿素铬的分子结构的部分组成。
取本实施例制得的产品适量，用醋酸溶解，分别加入三支试管中，作如下检测管1溶液+醋酸铅——＞无黄色沉淀管2溶液+硝酸钡——＞无黄色沉淀管3溶液+硝酸银——＞无砖红色沉淀上述检测表明产品中不含高价铬。
取产品425mg(样品量)溶于硫酸，溶完后加水20ml，滴加高锰酸钾至溶液现微红色，加热煮沸约90秒，取下冷至室温，滴加亚硝酸钠至红色恰好消失，将溶液转入250ml量瓶中，以水稀释至250ml刻度，摇匀。从中取5ml，加二苯卡巴肼3ml，溶液呈紫红色，以水稀释至10ml(以下对此溶液简称样品溶液)。同时，配制标准品重铬酸钾与二苯卡巴肼的溶液10ml，控制铬浓度1mg/ml(以下简称标准品溶液)。用贝克曼UV-600型紫外可见分光光度仪对样品溶液和标准品溶液作波长扫描，如附图4所示，其中①为样品溶液的波长扫描，②为标准品溶液的波长扫描，两者的吸收峰皆在544nm处。在544nm将样品溶液与标准品溶液作比色测定，证明产品中所含铬离子为三价铬。
将样品溶液和标准品溶液分别置于三个试管中。用贝克曼UV-600型紫外可见分光光度仪在波长544nm处测定此六个试管中溶液的吸收值，得下表数据
其中，序号为1、2、3的，是样品溶液的吸收值；序号为4、5、6的，是标准品溶液的吸收值。
根据上表数据，计算产品中的铬含量已知配制的标准品溶液的铬浓度C标＝1mg/ml三个样品溶液吸收值的平均值A样＝0.2774三个标准品溶液吸收值的平均值A标＝1.3639计算出样品溶液的铬浓度C样＝C标×A样÷A标＝0.2034mg/ml计算出样品中铬的含量0.2034÷2×250＝25.425mg已知样品量W样品量＝425mg计算出本实施例所得产品叶绿素铬中铬的百分含量为5.98％。
实施例2选取竹叶10kg，水洗除尘，捡除枯叶，加入3kg水，拌匀，放置12小时。然后，加入95％的乙醇，加入氢氧化钠溶液，调pH11，搅拌，温度70℃，浸提2小时，抽滤，反复上述过程2次，合并提取液，去除沉淀。将提取液置于真空浓缩器中，温度80℃，压力0.08Mpa，减压浓缩至原体积的1/4。在浓缩液中加入2倍体积的乙醚，振荡拌匀，静置分层，待上层油相澄清后，取下层水相溶液。在水相溶液中加入硫酸，边加边搅拌，调pH2，反应温度40℃，在30分钟后，离心，去除离心液，取沉淀。在沉淀中加入氢氧化钠溶液，调pH11，加入30％三氯化铬溶液进行铬代，搅拌，温度50℃，半小时后，离心，去除离心液，得叶绿素铬粗品。
将叶绿素铬粗品溶于盐酸，调pH2，过滤，去除沉淀；然后在滤液中加氢氧化钠，调pH11，搅拌至溶液澄清，离心，去除离心液，保留沉淀；如此反复进行2次。之后对生成的固体沉淀用pH9弱碱乙醇液洗涤，然后离心，去除离心液。随后将固体生成物用喷雾干燥法进行干燥处理，制得叶绿素铬精品79g，收率0.79％。
本实施例所制得产品的物理性质与实施例1制得产品的物理性质一致。
用贝克曼UV-600型紫外可见分光光度仪对本实施例制得产品作紫外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的紫外吸收光谱的最大吸收峰在408nm和612nm两处。
用尼泊尔公司200SXV FT-IR型傅里叶变换红外光谱仪对制得的产品作红外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的红外吸收光谱在520.261cm-1、1379.617cm-1、1510.183cm-1、1637.218cm-1、2852.984cm-1、2923.671cm-1、3425.058cm-1、3481.265cm-1等处有强吸收峰，在838.211cm-1、1023.170cm-1、1078.529cm-1等处有弱吸收峰。
通过与实施例1同样的方法，检测证明本实施例所制得的产品中不含高价铬，含三价铬，铬的百分含量为4.73％。
实施例3选取干燥浮萍10kg，水洗除尘，加入2kg水，拌匀，放置4小时。加入pH9的碱性乙醇，搅拌，温度50℃，浸提3小时，抽滤，反复上述过程3次，合并提取液，去除沉淀。将提取液置于真空浓缩器中，温度50℃，压力0.06Mpa，减压浓缩至原体积的1/2。在浓缩液中加入等体积的汽油，振荡拌匀，静置分层，待上层油相澄清后，取下层水相溶液。在水相溶液中加入盐酸，搅拌，调pH3，加入20％三氯化铬溶液，反应温度30℃，在60分钟后，离心，去除离心液，取沉淀。在沉淀中加入氢氧化钠溶液，调pH9，搅拌，温度30℃，半小时后，离心，去除离心液，得叶绿素铬粗品。
将叶绿素铬粗品溶于硫酸，调pH3，过滤，去除沉淀；然后在滤液中加氢氧化钠，调pH9，搅拌至溶液澄清，离心，去除离心液，保留沉淀；如此反复进行4次。之后对生成的固体沉淀用pH8弱碱乙醇液洗涤，然后离心，去除离心液。随后采取溶媒结晶法真空干燥的方法对固体生成物进行干燥处理，制得叶绿素铬精品64g，收率0.64％。
本实施例所制得产品的物理性质与实施例1制得产品的物理性质一致。
用贝克曼UV-600型紫外可见分光光度仪对本实施例制得产品作紫外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的紫外吸收光谱的最大吸收峰在404nm和617nm两处。
用尼泊尔公司200SXV FT-IR型傅里叶变换红外光谱仪对制得的产品作红外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的红外吸收光谱在524.332cm-1、1379.714cm-1、1509.961cm-1、1636.873cm-1、2853.136cm-1、2923.674cm-1、3369.975cm-1、3392.676cm-1、3472.283cm-1等处有强吸收峰，在839.033cm-1、1021.427cm-1、1077.189cm-1等处有弱吸收峰。
通过与实施例1同样的方法，检测证明本实施例所制得的产品中不含高价铬，含三价铬，铬的百分含量为3.82％。
实施例4选取工业品糊状叶绿素10kg，将其浸入氢氧化钠溶液，调pH11，温度80℃，搅拌1小时后，过滤，去除沉淀。将滤液置于真空浓缩器中，温度80℃，压力0.08Mpa，减压浓缩至原体积的1/4。在浓缩液中加入1.5倍浓缩液体积的石油醚，振荡拌匀，静置分层，待上层油相澄清后，取下层水相溶液。在水相溶液中加入盐酸，边加边搅拌，调pH2，反应温度40℃，在30分钟后，离心，去除离心液。在沉淀中加入氢氧化钠溶液，调pH11，在此碱性环境中加入30％三氯化铬溶液进行铬代，边加边搅拌，保持温度在50℃，30分钟后，离心，去除离心液，得叶绿素铬粗品。
在粗品中加硫酸，调pH2，过滤，去除沉淀；然后在滤液中加氢氧化钠，调pH11，搅拌至不再有沉淀生成，离心，去除离心液，保留沉淀；如此反复加酸加碱2次。之后对生成的固体沉淀用pH9弱碱乙醇液淋洗，然后离心，去除离心液。将固体生成物用真空冷冻干燥法进行干燥处理，得叶绿素铬精品957g，收率9.57％。
本实施例所制得产品的物理性质与实施例1制得产品的物理性质一致。
用贝克曼UV-600型紫外可见分光光度仪对本实施例制得产品作紫外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的紫外吸收光谱的最大吸收峰在415nm和598nm两处。
用尼泊尔公司200SXV FT-IR型傅里叶变换红外光谱仪对制得的产品作红外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的红外吸收光谱在521.511cm-1、1382.585cm-1、1465.757cm-1、1550.968cm-1、1632.101cm-1、2853.878cm-1、2924.953cm-1、3390.160cm-1、3427.753cm-1、3431.859cm-1等处有强吸收峰，在840.300cm-1、1022.199cm-1等处有弱吸收峰。
通过与实施例1同样的方法，检测证明本实施例所制得的产品中不含高价铬，含三价铬，铬的百分含量为6.88％。
实施例5选取糊状叶绿素10kg，将其浸入氢氧化钠溶液，调pH9，在此碱性环境中加入20％三氯化铬溶液，温度40℃，搅拌2小时后，过滤，去除沉淀。将滤液置于真空浓缩器中，温度50℃，压力0.06Mpa，减压浓缩至原体积的1/2。在浓缩液中加入等体积的乙醚，振荡拌匀，静置分层，待上层油相澄清后，取下层水相溶液。在水相溶液中加入盐酸，边加边搅拌，调pH3，反应温度30℃，在60分钟后，离心，去除离心液。在沉淀中加入氢氧化钠溶液，调pH9，搅拌，保持温度在30℃，60分钟后，离心，去除离心液，得叶绿素铬粗品。
用硫酸溶解叶绿素铬粗品，调pH3，过滤，去除沉淀；然后在滤液中加氢氧化钠，调pH9，搅拌至溶液澄清，离心，去除离心液，保留沉淀；如此反复4次。之后对生成的固体沉淀用pH8弱碱乙醇液洗涤，离心，去除离心液。将固体生成物用减压真空干燥法进行干燥处理，得叶绿素铬精品877g，收率8.77％。
本实施例所制得产品的物理性质与实施例1制得产品的物理性质一致。
用贝克曼UV-600型紫外可见分光光度仪对本实施例制得产品作紫外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的紫外吸收光谱的最大吸收峰在411nm和620nm两处。
用尼泊尔公司200SXV FT-IR型傅里叶变换红外光谱仪对制得的产品作红外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的红外吸收光谱在520.365cm-1、1380.195cm-1、1477.581cm-1、1551.073cm-1、1636.784cm-1、2854.362cm-1、3392.886cm-1、3427.608cm-1、3478.789cm-1等处有强吸收峰，在839.347cm-1、1023.118cm-1、1077.682cm-1等处有弱吸收峰。
通过与实施例1同样的方法，检测证明本实施例所制得的产品中不含高价铬，含三价铬，铬的百分含量为6.37％。
实施例6选取新鲜桑叶10kg，水洗除尘，加入2kg水，拌匀，放置6小时后，加入90％的乙醇，浸提叶绿素，其间不断搅拌，温度50℃，浸提2小时，抽滤，将滤渣再加入90％乙醇，继续浸提2小时后抽滤，如此重复三次，合并三次的提取液。然后在合并的提取液中加入氢氧化钠溶液，调pH10左右，加入30％三氯化铬溶液，温度50℃，搅拌1小时后，过滤，去除沉淀。将滤液置于真空浓缩器中，温度70℃，压力0.07Mpa，减压浓缩至原体积的1/3。在浓缩液中加入1.5倍体积的石油醚，振荡拌匀，静置分层，待上层油相澄清后，取下层水相溶液。在水相溶液中加入盐酸，边加边搅拌，调pH2，温度30℃，在50分钟后，离心，去除离心液。在沉淀中加入氢氧化钠溶液，调pH10，搅拌，温度50℃，30分钟后，离心，去除离心液，得叶绿素铬粗品。
在叶绿素铬粗品中加入硫酸，调pH2，过滤，去除沉淀；然后在滤液中加氢氧化钠，调pH10，搅拌至不再有沉淀生成，离心，去除离心液，保留沉淀；如此反复加酸加碱3次。之后对生成的固体沉淀用pH8弱碱乙醇液洗涤，然后离心，去除离心液。对固体生成物进行减压真空干燥，得叶绿素铬精品72g，收率0.72％。
本实施例所制得产品的物理性质与实施例1制得产品的物理性质一致。
用贝克曼UV-600型紫外可见分光光度仪对本实施例制得产品作紫外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的紫外吸收光谱的最大吸收峰在400nm和609nm两处。
用尼泊尔公司200SXV FT-IR型傅里叶变换红外光谱仪对制得的产品作红外吸收光谱图检测，检测结果表明该产品的红外吸收光谱在521.177cm-1、1379.279cm-1、1497.465cm-1、1551.124cm-1、1632.387cm-1、2853.712cm-1、2924.330cm-1、3391.541cm-1、3427.656cm-1、3453.108cm-1等处有强吸收峰，在841.928cm-1、1022.240cm-1、1073.818cm-1等处有弱吸收峰。
用与实施例1同样的方法，检测证明本实施例所制得的产品中不含高价铬，含三价铬，铬的百分含量为5.02％。
权利要求
1.叶绿素铬，其分子结构式为 即叶绿素结构式中的镁离子被铬离子置换，其中，与叶绿素a络合的，R是CH3，分子式为C34H30CrN4O5Na2；与叶绿素b络合的，R是CHO，分子式为C34H28CrN4O6Na2。
2.如权利要求1所述的叶绿素铬，特征在于其物理性状为墨绿色固体，100℃以下稳定，碱性，溶于酸，溶于人工胃液，微溶于水、苯、乙酸乙酯、乙醇、乙醚、石油醚，在酸性溶液中、在365nm紫外光下呈现玫瑰红色的荧光；其紫外吸收光谱的最大吸收峰在400nm～415nm和590nm～620nm两个范围内；其红外吸收光谱在1378cm-1～1638cm-1范围、520cm-1～525cm-1范围和2852cm-1～3453cm-1范围内的某些位置分别有强吸收峰；其所含铬离子为三价铬。
3.如权利要求1所述的叶绿素铬，其特征在于该叶绿素铬由使用乙醇从含有叶绿素的天然原料中提取的叶绿素或糊状叶绿素经皂化、除杂、脱镁、铬代、碱化等步骤制成。
4.如权利要求1～3中任一权利要求所述的叶绿素铬的制备方法，其特征在于本制备方法依次包括以下步骤第一步前处理选取含有叶绿素的天然原料，包括蚕砂或者竹叶、浮萍、桑叶、菠菜、甜菜、白菜、苜蓿等绿色植物，水洗去除泥沙、灰尘、枯叶等杂质；第二步浸提用70％～95％的乙醇从原料中浸提叶绿素，浸提温度为50℃～70℃，在浸提过程中不断搅拌，每浸提2～3小时后抽滤；反复上述过程2～3次，合并提取液；第三步皂化在乙醇提取液中加入氢氧化钠溶液，调pH9～11，搅拌，皂化时间为1～2小时，温度为40℃～70℃，过滤，去除沉淀；第四步减压浓缩将皂化液减压浓缩至原体积的1/4～1/2，温度50℃～80℃，压力0.06Mpa～0.08Mpa；第五步除杂在浓缩液中加入浓缩液1～2倍体积的溶媒，溶媒可选择石油醚、乙醚、汽油等，振荡拌匀，静置分层，取水相溶液；第六步酸化脱镁在水相溶液中加酸，边加边搅拌，调pH2～3，反应温度30℃～40℃，在30～60分钟后，离心，去除离心液，取沉淀；第七步碱化置铬在沉淀中加入氢氧化钠溶液，调pH9～11，再加入20％～30％三氯化铬溶液进行铬代，边加边搅拌，温度30℃～50℃，在30～60分钟后，离心，去除离心液，保留沉淀，得叶绿素铬粗品。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于在第七步骤之后，增加以下步骤第八步精制在叶绿素铬粗品中加酸，调pH2～3，过滤，去除沉淀；再在滤液中加碱，调pH9～11，搅拌至不再有沉淀生成或溶液澄清，离心，去除离心液，保留沉淀；本精制过程反复进行2～4次；第九步洗涤对固体沉淀用pH8～9弱碱乙醇液洗涤，离心，去除离心液；第十步干燥对固体生成物采取减压真空干燥、喷雾干燥、溶媒结晶法真空干燥或真空冷冻干燥的方法进行干燥处理，得板块状叶绿素铬精品，粉碎，得叶绿素铬干燥粉末。
6.如权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于在第一步骤后，在所选原料中加入0.2～0.5倍原料质量的水，拌匀，放置4～12小时。
7.如权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于选取工业品糊状叶绿素作为原料，去掉第一、二步骤，将第三步骤皂化改作将糊状叶绿素浸入氢氧化钠溶液，调pH9～11，搅拌，皂化时间为1～2小时，温度为40℃～80℃，过滤，去除沉淀。
8.如权利要求4～6中任一权利要求所述的制备方法，其特征在于第二步骤浸提与第三步骤皂化同时进行，即用pH9～11的碱性乙醇从原料中浸提叶绿素，浸提温度为50℃～70℃，在浸提皂化过程中不断搅拌，每浸提2～3小时后抽滤；反复上述过程2～3次，合并提取液，去除沉淀。
9.如权利要求4～8中任一权利要求所述的制备方法，其特征在于第七步骤碱化置铬中的加入20％～30％三氯化铬溶液这一置铬环节提前，与酸化脱镁步骤同时进行，温度30℃～40℃。
10.如权利要求4～8中任一权利要求所述的制备方法，其特征在于第七步骤碱化置铬中的加入20％～30％三氯化铬溶液这一置铬环节提前，与皂化步骤同时进行，温度40℃～50℃。
11.如权利要求1～3中任一权利要求所述的叶绿素铬的用途，在于制造药品。
12.如权利要求11所述的叶绿素铬的用途，其特征在于本叶绿素铬用于制造治疗糖尿病的降血糖、降血脂类药品。
13.如权利要求11所述的叶绿素铬的用途，其特征在于本叶绿素铬用于制造治疗新生儿黄疸的药品。
全文摘要
本发明为叶绿素铬及其制备方法与用途，涉及有机化学和医药领域，从含有叶绿素的天然原料中提取叶绿素或直接使用糊状叶绿素，通过皂化、除杂、脱镁、铬代、碱化等步骤，以三价铬离子取代叶绿素中的镁离子，制得叶绿素铬，可用于分别治疗糖尿病、新生儿黄疸等疾病的多种药品的制造，本发明创造了一种颇具药用价值的新化合物，公开的制备方法操作简便、原料丰富、成本低廉、毒性极低。
文档编号A61P3/10GK1406940SQ01108738
公开日2003年4月2日 申请日期2001年8月15日 优先权日2001年8月15日
发明者薛永新, 赵因, 代勇, 苏学操, 彭旭辉 申请人:四川恩威中医药研究所