多用途高功能性碱性溶液组合物及其制造方法和作为非特异性免疫增强剂的用途的制作方法

专利名称：多用途高功能性碱性溶液组合物及其制造方法和作为非特异性免疫增强剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及多用途高功能性碱性溶液组合物及其制造方法和作为非特异性免疫增强剂的用途，更详细地说就是涉及以偏硅酸钠(5水盐)为主要成分的碱性溶液组合物及其制造方法和用途。
如此的碱性溶液组合物在本发明者发明的韩国专利第128,110号公开后，应用于各种产业。上述专利的组合物是在水溶液中含有硅酸钠、过氧化钠、碳酸钾、碳酸钠、精制蔗糖和硫代硫酸，其重量比以碳酸钠为标准作为1，硅酸钠为10～18，过氧化钠为0.1～0.5、碳酸钾为5～10、精制蔗糖为10～18、硫代硫酸为0.1～3.0。上述组合物远红外辐射效率高，抗菌性和脱溴性优良，目前多用于纤维制品的后处理、饲料的发酵和农业用途。但是，此技术的制造工艺复杂，有不便长期保存等问题，还有不能作为抗病毒剂和通用非特异性免疫增强剂使用的问题。
另一方面，目前已知抗生素的误用、滥用导致多种副作用，为了减少抗生素的用量，总体地增强机体免疫，增进疫苗接种的效果，世界各国集中开发诱导促进对于外部入侵病原体的机体防御功能的非特异性免疫增强剂(下面称为NIS)，在日本，发表了从食用菌(香菇)中提取的成分具有抗癌作用的研究结果。
此外，细菌来源的NIS已经研究一个世纪以上。最近，关于抗体生成和细胞因子诱导作用等与促进免疫机能有关的研究蓬勃发展。例如，已经发表了灰暗诺卡氏菌(Norcardia opaca)来源的细胞壁成分诱导小鼠来源的腹腔巨噬细胞活化(Barot-Ciobaru等，1987)，肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)来源的RU411740、贪婪丙酸杆菌Propionibacterium avidum来源的KP-40、Quillaja saponaria来源的QH-B等和细胞因子的诱导和免疫细胞的刺激性相关的研究(Bessler等，1997；Nimier等，1999；Ronnberg等，1997；Siwiki等，1998；Tewari等，1996)。最近，有报道表明被称为免疫刺激序列的细菌DNA来源的CPG序列能够有效诱导免疫细胞中IL-6、IL-12、IL-18和IFN-γ的表达(Bohle等，1999；Klinman等，1999；Krieg，1999)。
但是，至今仍然未开发出对人，以及动植物适用的、生产工艺简单、容易长期保存、廉价的NIS。
本发明的其它目的在于提供此组合物的制造方法和用途。
本发明还有的其它目的在于使家畜的增重率升高、农作物的收获量增大。
本发明还有的其它目的在于长期维持农产品、鱼类或家畜的肉质的新鲜度。
本发明还有的其它目的在于提供具有抗癌作用的无毒非特异性免疫增强剂。
本发明的组合物，对应于偏硅酸钠(Na2SiO3·5H2O)的100重量份，含有硼砂(Na2B4O7·10H2O)1～15重量份，硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)10-5～10-4重量份，碳酸钾30～150重量份，精制蔗糖(C12H22O11)30～200重量份，水100～200重量份，可根据需要选择添加氯化钠、硫代硫代银、钼酸钠中的一种或以上。上述组合物使用时优选用水稀释10～10000倍。
本发明的制造方法是将偏硅酸钠、硼砂、硫代硫酸钠、氯化钠等钠化合物和无水碳酸钾依次投入60～80℃的水，搅拌2～3小时溶解后，投入精制蔗糖，搅拌2～4小时。
本发明中使用的偏硅酸钠含有5分子的结晶水，二氧化硅(SiO2)的含量为27.5～29.0％，氧化钠(Na2O)的含量为28.5～30.0％，误差范围小于2％，和市售的液状硅酸钠相比非常稳定。性状为白色粉末或粒状，容易精密称量，便于长期保存和运输。溶于水时呈强碱性，构成元素中的硅元素为动植物生长所必需的元素。
本发明的组合物中，硼砂为含有10分子结晶水、比重为1.715的物质，构成元素中的硼元素(B)为动植物容易缺乏的微量元素。土壤中硼元素成分不足时不能良好结果、多产生障碍果实。硼砂主要作为抗菌剂、防虫剂、止血或收敛剂、釉原料等使用。特别地，硼砂和金属氧化物一起溶解时，有增溶其的特性。溶于水时的pH为9.5左右，相对于硅酸钠的100重量份在1～15重量份的范围内根据用途调节适当的使用量。在上述范围之外时可能会出现毒性。
本发明使用的硫代硫酸钠具有5分子的结晶水，是不溶于醇而溶于水的、具有特异咸味的物质。溶于水时，pH6.5～8.0左右，为中性，具有溶解卤化银或其它银盐的性质。有用作除氯剂、除重金属剂或从矿石中提取银等用途。硫代硫酸钠的适当用量对应于硅酸钠的100重量份为10-5～10-4重量份，在此范围外时，用于动物时，沉淀组织中的钙，使动物兴奋，诱发腹泻。
本发明的组合物中，碳酸钾易溶于水，水溶液为pH11.6的强碱性。钾和钠一样是机体必需的元素，是促进新陈代谢和血液循环必需的元素。此外，如果机体内钾和钠成分调和就能够有效预防高血压和糖尿病。其适当的用量相对于偏硅酸钠的100重量份为30～150重量份。在上述范围之外时，应用于动植物，可能会破坏钠/钾平衡。
本发明的组合物中，精制蔗糖防止溶解的离子化无机物质再结合，使组合物稳定化，起着将使用的无机物的性质转化为有机物或类似的有机型物质的作用，从而的作用是提高最终组合物的吸附或附着性能。发挥此功能的适当用量相对于偏硅酸钠的100重量份为30～200重量份。
本发明组合物可选择添加的物质中，氯化钠的作用是作为调节钠/钾比例的钠供给源。硫代硫酸银是作为植物生成的乙烯剂的抑制剂或植物分化促进剂来使用的，在含有硫代硫酸离子的水溶液中，具有在S2O32-的浓度低时形成[Ag(S2O32-)2]，S2O32-的浓度高时形成[Ag(S2O32-)6]10-的多价阴离子的特性。本发明中，所使用的硫代硫酸钠和形成的多价阴离子一起都起着促进细胞分化的作用。钼酸钠的作用是供给动植物易缺乏的微量元素钼。其用量为微量，相对于偏硅酸钠的100重量份都是10-1重量份以内。
如上述的本发明组合物完全溶解后，是呈无臭、无毒的浅黄色的液体，比重为1.43～1.50，粘度为61.0～239.0，pH为13的非常稳定的组合物，特异点是用盐酸(HCl)中和也不起凝固或pH变化等的点。
本发明者们长期进行的实验结果表明，如上述构成的本发明组合物用于家畜时，使增重率升高，用于农作物时，使收获量增加，特别是应用于动植物时，作为NIS的功能很优秀。
将上述组合物直接加入饲料或水中给予时，添加入饲料并发酵，然后给予家畜，可以得到优良的免疫增强作用。作为其例子，能够有效预防对养猪产业造成很大损失的猪流行性腹泻(PED)或猪霍乱，也能够有效预防和治疗高死亡率的、对养鸡产业造成很大损失的禽伤寒，用于乳牛时能够减少牛乳中决定品质等级之一指标的体细胞。此外，能够促进家畜的生长，不仅能使肉质提高，也能有效地除去畜舍内的恶臭。
往肥料或水中添加应用于植物时，能够起到促进发芽和生长、提高抗病性、增加产量、提高收获物的品质等的优良效果。
本发明的实施例如下。
(制造实施例1)将300千克偏硅酸钠(5水盐)、35千克硼砂(10水盐)、0.01千克硫代硫酸钠、1千克氯化钠、150千克碳酸钾依次投入599千克60～80℃的精制水中，搅拌3小时，溶解后，投入450千克精制蔗糖，连续搅拌4小时，得到pH13的碱性溶液(下面此溶液称为“BARODONR-1”)。
(制造实施例2)往1436千克制造实施例1所得的溶液“BARODONR-1”中滴加0.02千克硫代硫酸银溶于1升水所得的溶液，搅拌后，在约50℃的反应容器中维持4小时，得到添加了硫代硫酸银的碱性溶液(下面称为“BARODONR-2”)。
(制造实施例3)一边搅拌一边往5升100℃的精制水中加入0.3千克钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)，得到无色、无臭的水溶液，往“BARODONR-1”中滴加此水溶液，搅拌后，在约50℃的反应容器中维持4小时，得到添加了钼酸钠的碱性溶液(下面称为“BARODONR-3”)。
(制造实施例4)进行制造实施例1一样的操作，但硼砂的用量为6千克，碳酸钾变为300千克，往所得的1557千克进行溶液中滴加0.02千克硫代硫酸银溶于1升的溶液，搅拌后，在约50℃的反应容器中维持4小时，得到添加了硫代硫酸银的碱性溶液(下面称为“BARODONR-4”)。
(制造实施例5)进行制造实施例4一样的操作，但精制蔗糖的用量变为150千克，得到粘度相对低的碱性溶液(下面称为“BARODONR-5”)。
(实施例1)水稻栽培实验以位于韩国京畿道宝盖面泥田里和韩国京畿道安城市大德面明党里的水田的水稻为对象，实验制造实施例所得的溶液“BARODONR-1”～“BARODONR-5”的免疫增强作用和生育促进作用。
实验方法，将“BARODONR-1”～“BARODONR-5”用10倍水稀释后，将其再用500倍水稀释的液浸渍稻种24小时，播于苗床，在插秧的2天前，用上述稀释液按通常喷洒农药的方法对秧苗进行喷洒。然后在水稻出穗前2周再一次喷洒稀释液。
实验结果表明，和没有用本发明组合物处理的对照组相比，实验组在苗床上的幼苗均匀并强壮地生长，不发生冻害，插秧3天后就存活了。此外，几乎没有发生立枯病、稻瘟病和纹枯病，抗倒伏性提高，在台风后也完全没有倒伏。对照组则在台风后有25％的倒伏。
测定每块田(300坪)的水稻生产量，结果如表1所示。

(实施例2)梨树栽培实验梨园施于畜粪和有机肥后，“BARODONR-3”用水稀释10倍后、再稀释500倍的稀释液进行喷雾，然后设置边界。在梨花开花约2周前的四月上旬散布一次“BARODONR-2”。其结果是，和没有用此溶液处理的对照组相比早4～5天于4月18日开花，其收获日为9月15日，比对照组约早15天。收获的梨是シン ゴ梨，外观、大小、糖度等可判定为优良的最高等级。即，在外观中，作为シンゴ梨问题的黑斑消失60％以上，凹凸的梨子外形变圆了，完全没有中空梨，台风所致的落花率约减少20％，大小和对照组相比增加约15％，糖度为13.0～15.0BX，和对照组相比增加约12％。贮存性和对照组相比也显著增加。
(实施例3)生长状态实验“BARODONR-3”用水稀释16倍的液体如下述表2的稀释倍率再进行稀释，散布于实验作物的叶面，结果显示，叶的长度(cm)增加15.6％，宽度(cm)增加8.7％，叶鲜重(g/pot)增加7～47％。


(制造实施例6)将制造实施例2所得的“BARODONR-2”用水稀释10倍后，将此溶液按每吨混合饲料500克的比例进行喷雾，制造高功能性饲料(下面称为“BARODONR-6”)。
(制造实施例7)往1吨混合饲料中加入10升制造实施例2所得的“BARODONR-2”用水稀释10倍的溶液、3千克精制蔗糖、1千克氯化钠、75升水，置于发酵容器中一般混合搅拌一边发酵24小时，制造高功能性饲料(下面称为“BARODONR-7”)。
(实施例4)为了确认“BARODONR”对动物的增重作用和免疫增强作用，实施如下的实验。(1)增重作用实验(猪)挑选30头健康的15周龄(104±4天)3元杂交(Yorkshire×Landrace×Durroc)去势肥肉猪作为实验动物。将实验动物分为3组，在三个长4米×宽4.2米的猪圈中每圈10头适应饲养1周后，开始实验。
对照组、Tx-1组和Tx-2组分别划分10头猪。Tx-1组用添加了3％制造实施例6所得“BARODONR-6”的饲料，Tx-2组用添加了3％制造实施例7所得“BARODONR-7”的饲料，对照组用没有添加“BARODONR”的相同饲料，分别饲养9周后，3个实验组都给予一边饲料。实验期间水和饲料自由摄取，测定各组6周时间的增重量、饲料摄取量和饲料效率，结果表明，关于1天增重量，相对于对照组的842.86克，Tx-1组为890.48克，比对照组增加5.65％，Tx-2组为880.95克，比对照组增加4.52％。
饲料摄取量，对照组为2.71千克、Tx-1组为2.77千克，Tx-2组为2.65千克，饲料效率(饲料摄取量/增重量)则相对于对照组的3.22，Tx-1组为3.11，改善3.54％，Tx-2为3.01，改善6.98％。(2)肉质官能检查上述各组的猪肉让健康成年男女试食用后，进行官能评价，结果如表3。
表3)

*数字为试食用后对问题的回答人数。(3)猪外周血的免疫细胞分布检查使用对照组、Tx-1组和Tx-2组的猪白细胞表面特异单克隆抗体和(荧光)流式细胞计(flow cytometer，FACSCalibur，BectonDickinson Immunocytometry System，San Jose，CA，U.S.A.)，检测作为猪外周血液内免疫细胞的主要组织相容性复合物(HMC)表达细胞和淋巴细胞亚群的比率各个时期的变化。
(3-1)外周血液中白细胞的分离将从猪上腔静脉采取的血液在添加了ACD(柠檬酸-右旋糖)-EDTA(乙二胺四乙酸)的试管中混合，良好混匀后，用Hypaque Ficoll(Histopaque，Sigma，St.Louis，Mo.，U.S.A.)分层，以1500rpm离心分离30分钟后，采集白细胞。将其用磷酸缓冲生理盐水(PBS，pH7.2)洗净3次后，悬浮于RPMI-1640培养基(GibcobRL，GrandIsland，NY，U.S.A.)后，台盼蓝排除法测定存活细胞数，使最终浓度为1×107个/毫升用于检测。
(3-2)白细胞亚群检测用单克隆抗体为检测猪各个时期的免疫学特性，使用对作为白细胞表面抗原的MHC类I、MHC类II、Po(猪)CD2、PoCD4、PoCD8、表面IgM(sIgM)、非T/非B(γδTCR)、粒细胞和单核细胞(G+M)特异的白细胞表面抗原单克隆抗体等，共九种(表4)。
表4)

*与分化白细胞特异反应的单克隆抗体**猪白细胞分化分子***表达分子的细胞(3-3)荧光流式细胞计分析白细胞亚群比率的分析按Davis等(1990)的方法，用流式细胞计Cell Quest程序进行。为了用使用激光束的荧光流式细胞计进行检测，细胞用1种或2种的荧光色素(异硫氰酸荧光素；FITC，藻红蛋白；PE)以间接法进行标记。V-bottom96孔微板，每孔添加50微升(15微克/毫升)单克隆抗体、100微升从血液分离的1×107/毫升的白细胞后，在4℃下敏化30分钟后，用4℃的第1清洗缓冲液(firstwashing buffer[PBS450毫升、ACD50毫升、20％NaN35毫升、无γ球蛋白的马血清(GibcoBRL)10毫升、250mM EDTA20毫升、0.5％酚红1毫升])3次离心(1700rpm，3分钟)清洗后，弃上清，聚集于底部的白细胞用平板混合器或旋涡混合器(Scientific Industries，Bohemia，NY.，U.S.A.)进行悬浮。
在单一染色实验中，作为2次抗体的FITC-标记的羊抗鼠IgG+IgM抗体(Caltag Lab，U.S.A.)稀释200倍后，加入悬浮了白细胞的各孔，每孔100微升。将其在4℃下再敏化30分钟后，用4℃的第1清洗缓冲液成分中只除去马血清的第2清洗缓冲液离心清洗3次，接着用2％PBS-福尔马林(38％福尔马林20毫升，PBS980毫升)溶液以每孔200微升的量进行固定。
在二重染色实验中，PoCD4(FITC)和PoCD8(PE)，PoCD4(FITC)和MHC类II(PE)，PoCD8(FITC)和MHC类II(PE)分别作为一对进行染色。即，将白细胞和两种单克隆抗体混合后，根据单一染色的结果敏化1次，用4℃的第1清洗缓冲液清洗3次。然后，分别对于对单克隆抗体的同型有特异性的山羊抗体，FITC标记时以每孔1.0微克、PE标记时以每孔0.1微克的浓度进行稀释，在4℃下反应30分钟。随后的清洗和固定过程按单一染色的相同方法进行。
染色完成的细胞至检测时保存于4℃的黑暗冰冷之处。染色完成的材料用流式细胞计，检测总数2000个以上的细胞，测定阳性细胞数，测定和资料分析用FACScalibur和CellQuest程序(BectonDickinson)进行。
检测结果显示，Tx-1组和Tx-2组的CD4+T淋巴细胞的比率从投与后3周开始增加，投与后8周开始和对照组相比显著增高(p＜0.05)。特别地，Tx-1组如

图1所示，投与后8周至13周维持很高水平(p＜0.05)。
对于CD8+T淋巴细胞，投与后3周时Tx～2组显示出高比率(P＜0.01)，但投与后8周开始没有显示显著差异。巨噬细胞大部分为MHC类II表达细胞时，Tx-1组投与后11周显示显著高水平的结果(p＜0.05)，Tx-2组投与后8周显示显著的高比率(图2)。
此外，非T/非B(N淋巴细胞)的比率和对照组相比，Tx-2组给药3周开始显示高的比率(p＜0.01)，提示可能非特异性免疫的防御反应和特异性免疫防御反应都被促进，给药后11周开始至13周维持一定的高水平(p＜0.1)(图3)。
“BARODONR”给药组，Tx-2组的MHC类II表达细胞的增加比率在3周至8周显著超过Tx-1组(p＜0.05)(图2)，CD4、CD8表达细胞的比率也在给药3周时Tx-2组有一定增高(p＜0.1)(图1、图4)，Tx-1组和Tx-2组之间的非T/非B淋巴细胞比率在给药13周时显示有显著差异(p＜0.1)(图3)。(4)血液和淋巴结淋巴细胞活力实验为了测定血液和淋巴结淋巴细胞的活力，用Con A、PHA、PWM和LPS刺激后，添加放射性同位素[3H]-胸苷后，确认增殖性。以从血液分离的淋巴细胞为对象，用PWN刺激时，添加“BARODONR”的饲料给予后8周时，Tx-2组和对照组相比显示显著高水平的刺激指数(stimulation index；SI)(p＜0.05)，11周后Tx-1组和Tx-2组都对以Con A开始、PHA、PWM、LPS刺激所致的淋巴细胞增殖性和对照组相比显示显著高水平的SI(p＜0.01)。
在使用肠系膜淋巴结淋巴细胞进行淋巴细胞的增殖性分析中，给药8周开始时对于PHA(p＜0.05)和PWM(p＜0.01)的刺激，和对照组相比显示显著高水平的SI，11周后Tx-1组对Con A和PHA所致淋巴细胞增殖和对照组相比有显著差异(p＜0.01)，Tx-2组在Con A、PHA和PWM刺激时，和对照组相比显示显著高水平的SI值(p＜0.05)(图5和图6)。
(4)免疫组化法研究淋巴结和脾脏CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的分布以ABC法免疫染色，用图像分析仪(Oympus，U.S.A.)确认肠系膜淋巴结和脾脏的CD4+、CD8+、和CD4+CD8+dppT淋巴细胞的数目，结果显示，对于脾脏，CD4+只有Tx-2，CD8+和CD4+CD8+dppT淋巴细胞有Tx-1、Tx-2组显著增加(p＜0.01)(表5)；对于肠系膜淋巴结，Tx-1组、Tx-2组都是CD4+、CD8+、和CD4+CD8+dppT淋巴细胞的数目显著增加(p＜0.01)(表6)特别是Tx-2和Tx-1组相比显示显著高水平的分布(p＜0.01)。
表5)

表6)

(6)对猪霍乱疫苗接种后抗体形成能力的作用猪霍乱疫苗接种后，对给予含“BARODONR”的饲料的组(Tx-1、Tx-2)和对照组的猪霍乱抗体形成能力进行IFA实验，结果显示，“BARODONR”给予3周后，实验组开始显示比对照组高的抗体价，此倾向持续至11周，特别是Tx-1组显示显著高水平的抗体价(p＜0.01)(图7)。
(7)对感染家禽伤寒鸡群的无抗生素给予的作用感染了家禽伤寒的鸡10000只，以制造实施例7所得的“BARODONR-7”按5％重量混合的饲料给予10周，其结果如表7所示。此期间完全没有给予抗生素。实验组至实验开始15周维持平均0.3％的死亡率，对照组10000只在实验开始4周后几乎完全死亡。
表7)

@各鸡群都为10000只的规模(8)乳腺炎乳牛的体细胞减少作用实验为了确认对亚临床型乳腺炎乳牛的体细胞减少作用，制造实施例7所得的“BARODONR-7”以5％重量混合的饲料喂养2个月，结果如下表8所示。下述表的“液剂”是指用消毒的毛巾以“BARODONR-2”的100倍稀释液对乳牛的乳房进行清洗处理，“用水稀释”是指让乳牛饮用“BARODONR-2”稀释10000倍的溶液，“q”表示乳房的数目。
表8)

此外，对乳房炎主要病原菌的减少作用如下表9所示。
表9)

(实施例5)为了确认制造实施例5制造的“BARODONR-5”对人体的免疫增强作用，将“BARODONR-5”原液用水稀释100倍的溶液喷洒于纸上，干燥后，用于印刷儿童用教科书，在位于日本大坂市的日本远红外线应用研究所进行QRS波的测定，结果如下表10所示。QRS波动数值为1000～2000时，对人体最有好处。
表10)

(实施例6)*毒性实验为了实验“BARODONR”的毒性，将“BARODONR-4”10倍稀释的溶液在韩国化学研究所稳定性研究中心用大鼠进行急性毒性实验(实验序号S-700)。实验方法按国立保健安全研究院第94-3号的“医药品等的毒性实验规范(1994年4月14日)”和保健社会部公告第87-80号的“医药品安全性实验管理规范(KGLP，1987年10月29日)”进行。
实验结果显示，对于雌雄动物，没有观察到实验物质给予所致的死亡、一般症状、体重变化和解剖学变化，实验物质的LD50值对雌雄动物都大于5000毫克/千克。
此结果说明本发明的组合物用于人体时没有毒性。
(实施例7)*突变诱发实验为了实验“BARODONR”的突变诱发性，将“BARODONR-4”10倍稀释的溶液在韩国化学研究所稳定性研究中心，用鼠伤寒沙门菌的组氨酸依赖性TA100和TA1535(碱基对取代型)、TA98和TA1537(移码型)，进行回归突变实验(实验序号S-694)。实验方法按国立保健安全研究院第94-3号的“医药品等的毒性实验规范(1994年4月14日)”和保健社会部公告第87-80号的“医药品安全性实验管理规范(KGLP，1987年10月29日)”进行。
实验结果显示，4个实验菌株都得到阴性结果，即实验物质对实验菌株不诱发His-→His+的回归突变。此结果说明本发明的组合物用于人体时是安全的。
(实施例8)*受精卵的细胞增殖诱发作用实验从牛卵巢回收的未成熟卵巢在体外24小时，使之成熟，进行20小时的体外受精后，加入制造实施例4制造的“BARODONR-4”10倍稀释的溶液再进一步稀释500倍、200倍、100倍、50倍的培养液中，和对照区一起培养9天。此外，从屠宰场回收的牛输卵管和卵巢采取的输卵管上皮细胞(BOEC)、卵泡细胞(GC)，用上述培养液在体外培养至3世代。细胞数用血细胞计数器测定。
培养结果显示，体外受精卵的卵裂率分别是60.0％(对照液)、62.4％(500倍稀释液)、66.3％(200倍稀释液)、73.7％(100倍稀释液)和74.0％(50倍稀释液)，胚泡胚胎的发育率分别为13.3％(对照液)、20.0％(500倍稀释)、21.3％(200倍稀释液)、18.4％(100倍稀释液)和11.0％(50倍稀释液)。卵状上皮细胞数分别为2.0×105(对照液)、2.4×105(500倍稀释液)、2.5×105(200倍稀释液)、2.6×105(100倍稀释液)、2.5×105(50倍稀释液)，卵泡细胞数分别为3.2×105(对照液)、3.9×105(500倍稀释液)、3.7×105(200倍稀释液)、2.7×105(100倍稀释液)、2.8×105(50倍稀释液)。
以上结果可见，对于卵状上皮细胞、卵泡细胞培养和受精卵的培养，本发明的组合物对细胞增殖和受精卵胚泡胚胎的增殖和发育有促进作用，其中稀释500倍和200倍时，使受精卵的胚泡胚胎增殖率增加50.4～60.2％。
(实施例9)*抗癌作用实验将“BARODONR-4”稀释600～900倍，实验其对4种肿瘤(癌)细胞的抗癌作用。
从位于美国马里兰州Rockvile的美国典型培养物中心AmericanType Culture Collection获得人白血病白细胞(Jurkat)、人肺癌细胞(NCI-H69)、人甲状腺癌细胞(SW579)和人骨源性肉瘤细胞(U-2OS)。将“BARODONR-4”分别以1/600、1/700、1/800、1/900的比率稀释，培养这些肿瘤细胞，这些细胞在次培养时检查细胞，计算其增加率。各过程的活细胞计算应用台盼蓝染色方法。
在进行本实验前，正常细胞用上述稀释液进行培养的结果如下表11所示。结果显示，上述稀释液不抑制成纤维细胞的生长率，对其生长没有影响，也不抑制仓鼠肾脏细胞的增殖。
表11)

*用0.4％台盼蓝染色，以显微镜测定。
上述4种癌细胞用上述稀释液培养的结果如下表12所示。结果显示，本发明的组合物在除去人体肿瘤细胞的同时而不伤害正常细胞。所以，本发明的组合物能够用于各种人体肿瘤的治疗，其效果因肿瘤种类不同而异。
表12)

*用0.4％台盼蓝染色，以显微镜测定。
**P3’后完全治疗。
(实施例10)*新鲜度维持作用实验新鲜度良好的生鱼(鳕)用干冰快速冷冻后，搬运到实验室。浸渍于“BARODONR-2”0.05、0.1、0.2、0.5％浓度的溶液10分钟，在0℃下贮存7天，检测各样品鱼的新鲜度。
作为鱼的新鲜度指标，应用测定显示蛋白质变性的肌肉Ca-ATPase活性的方法。结果显示，0.5％溶液浸渍组的新鲜度维持作用最好，5天后还基本维持最初的新鲜度(图8)。
(实施例11)*“BARODONR”的水活化作用实验对制造实施例5所得的“BARODONR-5”用水以1∶2800和1∶5600的比率稀释的稀释液进行H2O的17O-NMR测定实验。使用装置为日本水科学研究会拥有的JNM-EX270，测定温度为20℃。对照组的自来水的17O吸收区带为149.6Hz(半峰宽)(图9)，1/2800稀释液为53.6Hz(图10)，1/5600稀释液为54.7Hz(图11)。
上述结果显示，自来水中水分子间的结合单位为各种大小的集合体，为非晶态，添加了本发明组合物的稀释液中水分子的结合单位是以一定的最小结合数结合的，近似于晶态。水分子的结合数小则流动性和机体渗透性优良，意味着被活化。活化的水对人和动植物的生长有用，本发明的组合物可用于饮用水添加剂、废水处理剂。
(实施例12)*pH测定和中和滴定时的行为实验制造实施例4所得的“BARODONR-4”的原液的pH测定结果为13.20的强碱性。这是用0.1N盐酸进行中和滴定的结果，接触部分发生凝固，再添加相当量的盐酸溶液的pH也没有变化。这说明本发明的组合物充分离子化，反应性很高。
上述原液稀释1000倍，一边用0.1N HCl进行中和滴定，一边用显微镜观察，结果没有观察到凝固物和气泡的发生。但是，此时pH发生了变化。
上述结果说明，适量使用时，人或家畜摄取后，在胃内和盐酸反应，不生成沉淀，和盐酸反应也不产生气泡，过量摄取时也没有气体产生所致的问题。
从以上的实施例可见，本发明的组合物应用于动植物时，能够得到抗病力提高、增重率或收获量增加、收获物的品质提高、提早收获的效果，用于恶性、难治性和病毒性疾病时能极大化疫苗的作用，即使不用别的抗生素也能够获得促进抗体生成和免疫增强作用的优良效果。
此外，对动物或人体内增殖的特定种类的肿瘤的除去或生长抑制有显著作用，可以作为其有效的治疗剂或预防剂。另外，本发明的组合物添加于饲料给予家畜时，使畜舍的恶臭没有了，防止害虫的发生。此外，本发明的组合物用于食品的保存时，能够使新鲜度长时间维持，可作为有效的鲜度维持剂使用。
权利要求
1.一种多用途高功能性碱性溶液组合物，其特征在于相对于偏硅酸钠(Na2SiO3·5H2O)的100重量份，含有硼砂(Na2B4O7·10H2O)1～15重量份、硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)10-5～10-4重量份、碳酸钾30～150重量份、精制蔗糖(C12H22O11)30～200重量份、水100～200重量份。
2.根据权利要求1记载的多用途高功能性碱性溶液组合物，其特征在于相对于硅酸钠的100重量份，添加10-1重量份以内从氯化钠、硫代硫酸银或钼酸钠中选出的1种或2种以上。
3.一种多用途高功能性碱性溶液组合物的制造方法，其特征在于往60～80℃的100～200重量份的水中依次加入100重量份无水偏硅酸钠、1～15重量份硼砂、10-5～10-4重量份硫代硫酸钠、30～150重量份无水碳酸钾，搅拌2～3小时溶解后，加入30～200重量份精制蔗糖(C12H22O11)，搅拌2～4小时使之溶解。
4.根据权利要求3记载的多用途高功能性碱性溶液组合物的制造方法，其特征在于包括添加相对于硅酸钠的100重量份，10-1重量份以内的从氯化钠、硫代硫酸银或钼酸钠中选出的1种或2种以上的步骤。
5.一种多用途高功能性饲料，其特征在于以喷雾方式往家畜用饲料中添加权利要求1或2记载的组合物或其稀释液。
6.一种饲料添加剂，其特征在于往家畜用饲料中添加权利要求1或2记载的组合物或其稀释液后，进行发酵。
7.一种高功能性肥料，其特征在于以喷雾方式往农作物用肥料中添加权利要求1或2记载的组合物或其稀释液。
8.一种高功能性肥料和肥料添加剂，其特征在于往农作物用肥料中添加权利要求1或2记载的组合物或其稀释液后，进行发酵。
9.一种非特异性免疫增强方法，其特征在于往饮食品、肥料、饲料、药品或水中添加权利要求1或2记载的组合物或其稀释液后，以给予或施肥的方式增强免疫力。
10.一种维持食品鲜度的方法，其特征在于将食品用权利要求1或2记载的组合物或其稀释液进行处理。
11.一种人或动物的肿瘤治疗方法，其特征在于对人或动物给予权利要求1或2记载的组合物或其稀释液，以除去人或动物的肿瘤细胞或使病原性病毒失活。
12.一种人或动物的受精细胞的分化促进方法，其特征在于对人或动物给予权利要求1或2记载的组合物或其稀释液，以促进人或动物的受精细胞的分化。
13.一种增强机体的抗菌性和抗病毒性的方法，其特征在于对人、动物或植物给予权利要求1或2记载的组合物或其稀释液，以增强抗菌性和抗病毒性。
14.一种植物的发芽和生长促进方法，其特征在于将植物的种子用权利要求1或2记载的组合物或其稀释液进行处理。
15.一种提高家畜增重率的方法，其特征在于对家畜给予权利要求5或6记载的饲料。
16.一种增加农作物收获量的方法，其特征在于对农作物施于权利要求7或8记载的肥料。
17.一种提高家畜增重率的方法，其特征在于对家畜给予用水稀释的权利要求1或2记载的组合物。
18.一种增加农作物收获量的方法，其特征在于对农作物喷雾用水稀释的权利要求1或2记载的组合物。
19.一种水的活化方法，其特征在于往水中添加权利要求1或2记载的组合物，使水分子的结合单位最小化。
全文摘要
作为非特异性免疫增强剂的碱性组合物及其制造方法和用途与非特异性免疫增强剂。相对于100重量份偏硅酸钠,含有硼砂1～15重量份、硫代硫酸钠10
文档编号A61P31/04GK1356061SQ01125849
公开日2002年7月3日 申请日期2001年8月29日 优先权日2000年11月23日
发明者崔秀溢, 崔玹硕, 田庆秀, 朴龙浩, 俞炳宇 申请人:巴罗顿S.F.株式会社