专利名称：一种治疗心脑血管疾病的药物注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药物制剂及其制备方法，特别是涉及治疗心脑血管疾病的药物制剂及其制备方法。
背景技术：
心血管疾病是导致人类死亡的第一病种，随着社会生活水平的提高以及人口的老龄化，心血管药物的研究日益重视，应用也日益广泛。缺血性脑中风(脑梗塞)在急性发作期内的急救治疗是其治疗的关键时机，因此在发扬中医药传统优势，开发速效、高效、急诊用药的中药注射剂具有重要意义。
发明内容
本发明目的在于提供一种治疗心脑血管疾病的药物制剂及其制备方法；本发明的目的还在于提供一种注射制剂的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的桃仁 1-4重量份 赤芍 1-4重量份 川芎 1-4重量份，优选配比为桃仁 1重量份 赤芍 1重量份 川芎 1重量份，还可以是桃仁 2重量份 赤芍 3重量份 川芎 2重量份按药剂学方法，可以将本发明药物组合物制备成多种临床药物剂型，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。
本发明药物还可加入常规的药物赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂等。
本发明制成注射液的制备方法以上3味，取川芎1味，粉碎成粗粉，置超临界提取釜中，CO2超临界提取2-3次，每次提取釜压力20-40Mpar，温度40-60在℃；分离釜I压力10-14Mpar，温度30-40℃；分离釜II压力4-8Mpar，温度30-40℃；提取1-2小时，从分离釜收集，得挥发油提取物。末次超临界提取后，分离釜II中连续式泵入药材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小时，从分离釜收集提取物，得乙醇提取液。川芎挥发油提取物加药材4-10倍量的重蒸馏水，水蒸气蒸馏，收集药材2-5倍量的蒸馏液，蒸馏液加入药材0.1-0.3％量的NaOH，静置，滤过，得药液，备用。取桃仁、赤芍2味，加6-12倍量水，煎煮1-2小时，滤过，药渣再加6-10倍量水，煎煮1-2小时，滤过，合并滤液，药液减压浓缩至相对密度40℃下1.19，加入清膏2-6倍量85-95％乙醇，使药液含醇量70-80％，醇沉，静置8-18小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度40℃下1.24，加入清膏7-10倍量85-95％乙醇，使药液含醇量80-85％，醇沉，醇液用15-25％NaOH液调至pH值6-8，静置8-18小时，滤过，药液加入1-2％量的活性炭，搅拌，滤过，药液与上述川芎醇提液合并，回收乙醇至无醇味，得清膏，清膏加入上述川芎备用液，搅拌，滤过，药液用注射用水调节至含生药0.6g/ml，加入0.1-0.3％量的亚硫酸氢钠和0.2-0.4％量的活性炭，100℃保温8-12分钟，滤过或离心，药液超滤灭菌，即得。
本发明注射液的质量控制方法为质量控制方法中的鉴别方法选自下述方法中的一种或几种a.取本品1ml，作为供试品溶液。另取苦杏仁苷对照品，加甲醇6ml使溶解的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-18∶30-50∶15-25∶3-6二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，喷以磷钼酸硫酸溶液，在100-105℃加热至斑点清晰。在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。其中磷钼酸硫酸溶液是由磷钼酸2g加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀制得。
b.取本品1ml，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30-50∶3-6∶8-12∶0.1-0.3二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-2％香草醛硫酸溶液，在100-105℃下加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
c.取本品1ml，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以25-35∶1-3∶1-2甲苯-甲醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁-2％铁氰化钾的50％乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
质量控制方法中的含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000版一部附录VI D)测定，色谱条件与系统适应性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25-29∶71-76的甲醇-水为流动相；检测波长为218nm，理论板数按苦杏仁苷峰与芍药苷峰计算均应不低于3000；对照品溶液的制备，取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷、芍药苷对照品适量，精密称定，分别加流动相制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供试品溶液的制备，取本品5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每支含桃仁以苦杏仁苷(C20H27NO11)计，不得少于22mg，含赤芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于36mg。
本发明注射液质量控制方法还可采用指纹图谱的方法照高效液相色谱法(《中国药典》2000版一部附录VID)测定，色谱条件与系统适应性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；24-28∶74甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液为流动相；检测波长为218nm。理论塔板数按参照物苦杏仁苷峰计算，应不低于3000；参照物溶液的制备，取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷参照物适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供试溶液的制备，取本品2ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；测定法，精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录1小时色谱图，供试品指纹图谱中与参照物峰相应的峰为S峰，计算相对保留时间和峰面积比值，应符合下列要求本品指纹图谱应与标准指纹图谱相似；指纹图谱应有8个共有峰；相对保留时间(峰号)0.350±30％(1)、0.554±30％(2)、1(S)、1.413±30％(3)、1.552±30％(4)、2.022±30％(5)、3.600±30％(6)、3.985±30％(7)；峰面积比值(峰号)1.218±30％(5)、0.451±40％(7)；非共有峰面积不得过总峰面积的5％。
仪器Agilent 1100液相色谱仪；色谱柱Agillent HypersilODS C18(4.6×250mm 5μm)；积分方式谷谷积分。
苦杏仁苷参照物色谱图
活血通络注射液标准指纹图谱 本发明粉针制剂(活血通络注射液)主要药效学试验结果表明活血通络注射液能明显降低结扎双侧颈总动脉致急性实验性不完全性脑缺血大鼠的脑指数及脑含水量；明显降低大脑中动脉阻断(MCAO)大鼠的行为学评分及脑梗塞率；明显降低大脑中动脉缺血再灌注大鼠的行为学评分、脑梗塞率及脑含水量；能降低麻醉犬的收缩压、舒张压、平均动脉压，增加心输出量、冠脉流量，降低左室内压及左室舒张末期压，降低总耗氧指数和总外周阻力，增加脑血流量，降低脑血管阻力；能明显降低大鼠动静脉旁路血栓湿重及血栓干重，升高血栓湿重抑制率和血栓干重抑制率；明显降低大鼠血小板最大聚集率，升高聚集抑制率；明显降低ADP、AA、Coll所诱导的家兔血小板聚集率，升高ADP所诱导的家兔血小板的解聚率；显著延长大鼠及小鼠的凝血时间；能有效的抑制大鼠的血浆粘度；能显著降低大鼠的红细胞滤过指数；对大鼠的血小板总数、活化部分凝血酶原时间、凝血酶原时间和血浆纤维蛋白原无显著改变。活血通络注射液能改善脑梗塞后的神经行为障碍、缩小梗塞面积；降低缺血大脑的肿胀程度；对心血管系统具有扩张血管，减少外周阻力，降低血压，减轻心脏负荷，增加冠脉流量和心输出量，降低心肌耗氧量；对脑循环系统具有扩张脑血管，降低脑血管阻力，增加脑血流量，改善脑循环等作用。能明显抑制血栓形成及抑制血小板聚集；延长凝血时间、降低血液粘度、改善红细胞变形能力。这些作用对于其临床治疗缺血性脑中风是十分有效的。
下面实验例用于进一步说明本发明。
实验例1对急性实验性不完全性脑缺血大鼠的保护作用试验目的观察受试药物对结扎双侧颈总动脉大鼠脑指数及脑含水量的影响，确定药物对急性实验性不完全性脑缺血大鼠是否有保护作用。
1 组别与剂量(1)假手术组0.9％氯化钠注射液。(2)模型组0.9％氯化钠注射液。(3)阳性药物组0.02％尼莫地平溶液(2mg/kg)。(4)阳性药物组80％复方丹参注射溶液(8g/kg)。(5)低剂量组2.5％活血通络注射液(0.25g/kg)。(6)中剂量组5％活血通络注射液(0.5g/kg)。(7)高剂量组10％活血通络注射液(1g/kg)(8)口服中剂量组5％活血通络注射液(0.5g/kg)。(9)口服高剂量组10％活血通络注射液(1g/kg)。给药容积为10ml/kg。
2 实验操作取SD雄性大鼠90只，体重200～250g，随机分为9组，即假手术组、模型组、西药阳性药物组、中药阳性药物组、活血通络注射液低、中、高3个剂量组及活血通络注射液口服中剂量组、高剂量组。1～7组动物每天静脉注射给药1次，连续3天；8～9组动物每天口服灌胃给药1次，连续3天。末次给药30分钟后，各鼠以10％水合氯醛麻醉(400mg/kg，ip)，仰位固定，颈正中部切开皮肤，分离出两侧颈总动脉，分别用0号手术缝线两端结扎颈总动脉后中间剪断(其中假手术组穿线后不结扎)，缝合皮肤。3小时后脱颈椎处死，取脑，置已称重并已烘干至恒重的称量瓶中称其湿重；106℃连称量瓶烘干至恒重，称其总恒重，将其总恒重减去称量瓶重即为干重，按下列公式计算脑指数和脑含水量，并采用组间t检验法与模型组进行显著性测定比较。脑指数＝脑湿重(g)×100/体重(g)，脑含水量(％)＝(脑湿重(g)-脑干重(g))/脑湿重(g)×100％3 实验结果对脑指数的影响iv活血通络注射液0.5g/kg组、1g/kg组动物的脑指数明显低于模型组，经统计学处理，呈显著性差异(P＜0.05、P＜0.05)；ig活血通络注射液0.5g/kg组、1g/kg组动物的脑指数与模型组比较无显著统计学意义。
对脑含水量的影响iv活血通络注射液0.5g/kg组、1g/kg组动物的脑含水量明显低于模型组，经统计学处理，呈显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)，且药物作用随剂量增加而增强；ig活血通络注射液0.5g/kg组、1g/kg组动物的脑含水量与模型组比较无显著统计学意义。结果见表1。
1对结扎双侧颈总动脉大鼠脑指数及脑含水量的影响(X±S)剂量 给药 动物数 脑含水量组别脑指数(g/kg) 途径(只) (％)假手术-- iv 10 0.744±0.02877.91±0.58模型 -- iv 10 0.786±0.021△△79.83±1.23△△△尼莫地平 0.002 iv 10 0.722±0.066** 78.41±0.62**香丹注射液8 iv 10 0.754±0.07978.83±0.69*活血通络液0.25iv 10 0.771±0.07479.12±0.93活血通络液0.5 iv 10 0.748±0.053* 78.71±0.88*活血通络液1 iv 10 0.742±0.046* 78.41±0.79**活血通络液0.5 ig 10 0.781±0.03479.24±0.70活血通络液1 ig 10 0.768±0.02079.05±1.63与假手术组比较△△P＜0.01，△△△P＜0.001。
与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
实验例2对大脑中动脉阻断(MCAO)大鼠的保护作用试验目的观察受试药物对大脑中动脉阻断(MCAO)大鼠行为学评分及脑梗塞率的影响，确定药物对脑缺血大鼠是否有保护作用。
1 组别与剂量(1)假手术组0.9％氯化钠注射液。(2)模型组0.9％氯化钠注射液。(3)阳性药物组0.02％尼莫地平溶液(2mg/kg)。(4)阳性药物组80％复方丹参注射溶液(8g/kg)。(5)低剂量组2.5％活血通络注射液(0.25g/kg)。(6)中剂量组5％活血通络注射液(0.5g/kg)。(7)高剂量组10％活血通络注射液(1g/kg)给药容积为10ml/kg 。
2 实验操作取SD雄性大鼠70只，体重250～350g，随机分为7组，即假手术组、模型组、西药阳性药物组、中药阳性药物组、活血通络注射液低、中、高3个剂量组，各组动物每天静脉注射给药1次，连续3天，末次给药30分钟后，各鼠以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，以侧卧位沿右外耳道与右眼外眦连线的中点，垂直于连线切开皮肤约2cm，剪开筋膜，钝性分离肌肉，暴露出颧弓。用止血钳咬断颧弓，将颧弓和下颌骨撑开，用小拉钩拉住固定于鼠板上，暴露鳞状骨的大部分，然后在颧骨和鳞状骨前联合的前下方约2～4mm处用台式电车钻孔，开一直径约2mm的小颅窗，此时透过硬脑膜就可见一条较直且少分支的小血管，即为大脑中动脉(MCA)。它几乎垂直路过嗅束向上而行，用细针灸针刺破硬脑膜，暴露中动脉，确认后将电刀置双极电凝位置，选择最大档电凝开关，除假手术组不做电凝术外，其余各组动物电凝嗅束内1mm至大脑下静脉之间的一段大脑中动脉，电凝4～6秒，电凝时避免出血及伤害脑组织，可用湿棉球保护。阻断大脑中动脉后用小块肌肉组织轻敷于颅窗上，然后逐层缝合伤口。术后回笼饲养。以上过程均在室温恒定(24～25℃)情况下进行，以利于评价脑缺血情况。观察对大鼠局灶性脑缺血行为评分和脑梗塞面积的影响。
①大鼠局灶性脑缺血行为评分法待MCAO大鼠麻醉清醒后，进行行为学检测。方法为在MCAO后4小时及24小时，按以下标准进行评分(1)提鼠尾离地面约1尺，观察前肢情况。正常大鼠两前肢对称地伸向地面。有左肩内旋，左前肢内收者，评为4分。否则0分；(2)将动物置平滑地板上，分别推左(或右)肩向对侧移动，检查抵抗推动的阻力。正常大鼠双侧阻力明显对称。右肩向左侧移动时，发现阻力下降者，根据下降程度的不同，评为1～3分；(3)将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力，正常大鼠两前肢肌张力明显对称。发生左前肢肌张力明显下降者，根据下降的轻重，评为1～3分。根据以上标准评分，满分10分，分数越高，说明动物的行为障碍越严重。评分采用单盲法，并采用组间t检验法与模型组进行显著性测定比较。
②TTC染色测量脑梗塞面积MCAO后24小时断头取脑，肉眼进一步确证右侧大脑中动脉已在嗅束与大脑下静脉之间烧断，且脑实质无损害者，将脑置冰冷的生理盐水中(2～3)10min，去除嗅球、小脑和低位脑干后，冠状切四刀，切成五片。第一刀在脑前极与视交叉连线中间；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。然后迅速将脑片置5ml含有1％TTC的磷酸缓冲溶液中，避光温孵30分钟，其中每隔7～8分钟翻动一次，经染色后，正常脑组织呈玫瑰红色，而梗塞组织呈白色，且界限分明。温孵完毕后将脑片照相，剪下红白颜色区称重计算之。然后根据重量求面积法，分别计算出五个脑片共10个平面的总面积和梗塞去区域的面积，求出梗塞区面积占半球总面积的百分比，即梗塞率，并采用组间t检验法与模型组进行显著性测定比较。
3 实验结果结果显示，模型组与假手术组相比，梗塞面积为21.81％，表明大鼠MCAO模型造模成功。
行为学评分4小时后，活血通络注射液各组动物的行为学评分与模型组比较有所降低，但在统计学上无差异；24小时后，活血通络注射液各组动物的行为学评分相比4小时呈下降趋势，模型组则有所上升；活血通络注射液各组动物的行为学评分均明显低于模型组，经统计学处理，均呈显著性差异(P＜0.05、P＜0.05、P＜0.01)。
对脑梗塞率的影响活血通络注射液各组动物的脑梗塞率均明显低于模型组，经统计学处理，均呈显著性差异(P＜0.01、P＜0.001、P＜0.001)，且药物作用随剂量增加而增强。结果见表2。
2对MCAO大鼠行为学评分及脑梗塞率的影响(X±S)剂量 动物数 行为学评分 脑梗塞率组别(g/kg) (只)4h 24h (％)假手术 --10 2.0±0.0 2.0±0.0 0.00±0.00模型 --10 6.6±2.7△△△7.1±2.3△△△21.81±7.30△△△尼莫地平 0.002 10 4.7±2.3 3.2±1.8***5.07±3.93***香丹注射液 8 10 5.7±2.3 5.2±1.8 11.10±11.70*活血通络液 0.25 10 5.6±2.0 4.9±2.0* 12.47±5.51**活血通络液 0.5 10 5.4±2.3 4.6±2.1* 8.54±7.64***活血通络液 1 10 4.9±2.3 4.2±1.8** 2.91±2.35***与假手术组比较△△△P＜0.001。
与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
实施例1桃仁2000g赤芍2000g川芎2000g以上3味，取川芎1味，粉碎成粗粉，置超临界提取釜中，CO2超临界提取两次，第一次提取釜压力35Mpar，温度50℃；分离釜I压力12Mpar，温度35℃；分离釜II压力6Mpar，温度35℃；提取1小时，从分离釜收集，得挥发油提取物。第二次继续进行CO2超临界提取，提取釜压力35Mpar，温度50℃；分离釜I压力12Mpar，温度35℃；分离釜II压力6Mpar，温度35℃；连续式泵入药材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小时，从分离釜收集提取物，得乙醇提取液。川芎挥发油提取物加药材6倍量的重蒸馏水，水蒸气蒸馏，收集药材3倍量的蒸馏液，蒸馏液加入药材0.1％量的NaOH，静置，滤过，得药液，备用。
取桃仁(沸下)、赤芍2味，加10倍量水，煎煮2小时，滤过，药渣再加8倍量水，煎煮2小时，滤过，合并滤液，药液减压浓缩至相对密度1.19，(40℃)，加入清膏4倍量95％乙醇，使药液含醇量75％，醇沉，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.24(40℃)，加入清膏9倍量95％乙醇，使药液含醇量85％，醇沉，醇液用20％NaOH液调至pH值7.5，静置12小时，滤过，药液加入1％量的活性炭，搅拌，滤过，药液与上述川芎醇提液合并，回收乙醇至无醇味，得清膏，清膏加入上述川芎备用液，搅拌，滤过，药液用注射用水调节至含生药0.6g/ml，加入0.2％量的亚硫酸氢钠和0.3％量的活性炭，100℃保温10分钟，滤过或离心，药液超滤(膜分子量1万)，分装(每支10ml)，含生药6g，灭菌，即得注射液，静脉滴注，每次1支，一日一次，或遵医嘱。临用前，以氯化钠注射液100或250ml稀释。
实施例2桃仁 1714g赤芍 2000g川芎 2572g以上3味，取川芎1味，粉碎成粗粉，置超临界提取釜中，CO2超临界提取两次，第一次提取釜压力35Mpar，温度50℃；分离釜I压力12Mpar，温度35℃；分离釜II压力6Mpar，温度35℃；提取1小时，从分离釜收集，得挥发油提取物。第二次继续进行CO2超临界提取，提取釜压力35Mpar，温度50℃；分离釜I压力12Mpar，温度35℃；分离釜II压力6Mpar，温度35℃；连续式泵入药材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小时，从分离釜收集提取物，得乙醇提取液。川芎挥发油提取物加药材6倍量的重蒸馏水，水蒸气蒸馏，收集药材3倍量的蒸馏液，蒸馏液加入药材0.1％量的NaOH，静置，滤过，得药液，备用。
取桃仁(沸下)、赤芍2味，加10倍量水，煎煮2小时，滤过，药渣再加8倍量水，煎煮2小时，滤过，合并滤液，药液减压浓缩至相对密度1.19，(40℃)，加入清膏4倍量95％乙醇，使药液含醇量75％，醇沉，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.24(40℃)，加入清膏9倍量95％乙醇，使药液含醇量85％，醇沉，醇液用20％NaOH液调至pH值7.5，静置12小时，滤过，药液加入1％量的活性炭，搅拌，滤过，药液与上述川芎醇提液合并，回收乙醇至无醇味，得清膏。清膏加入上述川芎备用液，搅拌，滤过，用加蔗糖50g，甜叶菊甙1g矫味，调总量至10000ml，过滤、灌装，灭菌即得口服液；每瓶10ml，每瓶含生药6g，每次1-2瓶，一日1-3次，或遵医嘱。
实施例3本发明注射液的质量控制方法鉴别取本品1ml，作为供试品溶液。另取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶40∶20∶5二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，喷以磷钼酸硫酸溶液即磷钼酸2g，加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀制得，在105℃加热至斑点清晰。在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
取本品1ml，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以40∶5∶10∶0.2二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
取本品1ml，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30∶2.5∶1甲苯-甲醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁-2％铁氰化钾的50％乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定色谱条件与系统适应性试验，用十八烷基硅烷键合硅为填充剂，27∶73的甲醇-水为流动相；检测波长为218nm；理论板数按苦杏仁苷峰与芍药苷峰计算均应不低于3000；对照品溶液的制备，取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷、芍药苷对照品适量，精密称定，分别加流动相制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每支含桃仁以苦杏仁苷(C20H27NO11)计，不得少于22mg，含赤芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于36mg。
实施例4本发明注射液采用指纹图谱质量控制方法照高效液相色谱法(《中国药典》2000版一部附录VID)测定，色谱条件与系统适应性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；26∶74甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液为流动相；检测波长为218nm。理论塔板数按参照物苦杏仁苷峰计算，应不低于3000；参照物溶液的制备，取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷参照物适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供试溶液的制备，取本品2ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；测定法，精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录1小时色谱图，供试品指纹图谱中与参照物峰相应的峰为S峰，计算相对保留时间和峰面积比值，应符合下列要求本品指纹图谱应与标准指纹图谱相似；指纹图谱应有8个共有峰；相对保留时间(峰号)0.350±30％(1)、0.554±30％(2)、1(S)、1.413±30％(3)、1.552±30％(4)、2.022±30％(5)、3.600±30％(6)、3.985±30％(7)；峰面积比值(峰号)1.218±30％(5)、0.451±40％(7)；非共有峰面积不得过总峰面积的5％。
仪器Agilent 1100液相色谱仪；色谱柱Agillent HypersilODS C18(4.6×250mm 5μm)；积分方式谷谷积分。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的中药注射液，其特征在于该注射液是由如下方法制成的桃仁1-4重量份赤芍1-4重量份川芎1-4重量份，取川芎1味，粉碎成粗粉，置超临界提取釜中，CO2超临界提取2-3次，每次提取釜压力20-40Mpar，温度40-60在℃；分离釜I压力10-14Mpar，温度30-40℃；分离釜II压力4-8Mpar，温度30-40℃；提取1-2小时，从分离釜收集，得挥发油提取物；末次超临界提取后，分离釜II中连续式泵入药材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小时，从分离釜收集提取物，得乙醇提取液；川芎挥发油提取物加药材4-10倍量的重蒸馏水，水蒸气蒸馏，收集药材2-5倍量的蒸馏液，蒸馏液加入药材0.1-0.3％量的NaOH，静置，滤过，得药液，备用；取桃仁、赤芍2味，加6-12倍量水，煎煮1-2小时，滤过，药渣再加6-10倍量水，煎煮1-2小时，滤过，合并滤液，药液减压浓缩至相对密度40℃下1.19，加入清膏2-6倍量85-95％乙醇，使药液含醇量70-80％，醇沉，静置8-18小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度40℃下1.24，加入清膏7-10倍量85-95％乙醇，使药液含醇量80-85％，醇沉，醇液用15-25％NaOH液调至pH值6-8，静置8-18小时，滤过，药液加入1-2％量的活性炭，搅拌，滤过，药液与上述川芎醇提液合并，回收乙醇至无醇味，得清膏；清膏加入上述川芎备用液，搅拌，滤过，药液用注射用水调节至含生药0.6g/ml，加入0.1-0.3％量的亚硫酸氢钠和0.2-0.4％量的活性炭，100℃保温8-12分钟，滤过或离心，药液超滤灭菌，即得。
2.如权利要求1所述的注射液，其特征在于该注射液的制备方法为取川芎1味，粉碎成粗粉，置超临界提取釜中，CO2超临界提取两次，第一次提取釜压力35Mpar，温度50℃；分离釜I压力12Mpar，温度35℃；分离釜II压力6Mpar，温度35℃；提取1小时，从分离釜收集，得挥发油提取物；第二次继续进行CO2超临界提取，提取釜压力35Mpar，温度50℃；分离釜I压力12Mpar，温度35℃；分离釜II压力6Mpar，温度35℃；连续式泵入药材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小时，从分离釜收集提取物，得乙醇提取液；川芎挥发油提取物加药材6倍量的重蒸馏水，水蒸气蒸馏，收集药材3倍量的蒸馏液，蒸馏液加入药材0.1％量的NaOH，静置，滤过，得药液，备用；取沸下桃仁、赤芍2味，加10倍量水，煎煮2小时，滤过，药渣再加8倍量水，煎煮2小时，滤过，合并滤液，药液减压浓缩至40℃下相对密度1.19，加入清膏4倍量95％乙醇，使药液含醇量75％，醇沉，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至40℃下相对密度1.24，加入清膏9倍量95％乙醇，使药液含醇量85％，醇沉，醇液用20％NaOH液调至pH值7.5，静置12小时，滤过，药液加入1％量的活性炭，搅拌，滤过，药液与上述川芎醇提液合并，回收乙醇至无醇味，得清膏；清膏加入上述川芎备用液，搅拌，滤过，药液用注射用水调节至含生药0.6g/ml，加入0.2％量的亚硫酸氢钠和0.3％量的活性炭，100℃保温10分钟，滤过或离心，药液超滤，膜分子量1万，即得注射液。
3.如利要求1或2所述的注射液的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种a.取本品1ml，作为供试品溶液；另取苦杏仁苷对照品，加甲醇6ml使溶解的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-18∶30-50∶15-25∶3-6二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，喷以磷钼酸硫酸溶液，在100-105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；其中磷钼酸硫酸溶液是由磷钼酸2g加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀制得；b.取本品1ml，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30-50∶3-6∶8-12∶0.1-0.3二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-2％香草醛硫酸溶液，在100-105℃下加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；c.取本品1ml，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以25-35∶1-3∶1-2甲苯-甲醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁-2％铁氰化钾的50％乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.如利要求3所述的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种a.取本品1ml，作为供试品溶液；另取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶40∶20∶5二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，喷以磷钼酸硫酸溶液即磷钼酸2g，加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀制得，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；b.取本品1ml，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以40∶5∶10∶0.2二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；c.取本品1ml，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30∶2.5∶1甲苯-甲醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁-2％铁氰化钾的50％乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.如利要求1或2所述的注射液的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适应性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25-29∶71-76的甲醇-水为流动相；检测波长为218nm，理论板数按苦杏仁苷峰与芍药苷峰计算均应不低于3000；对照品溶液的制备，取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷、芍药苷对照品适量，精密称定，分别加流动相制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供试品溶液的制备，取本品5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每支含桃仁以苦杏仁苷计，不得少于22mg，含赤芍以芍药苷计，不得少于36mg。
6.如利要求5所述的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为色谱条件与系统适应性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，27∶73的甲醇-水为流动相；检测波长为218nm；理论板数按苦杏仁苷峰与芍药苷峰计算均应不低于3000；对照品溶液的制备，取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷、芍药苷对照品适量，精密称定，分别加流动相制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每支含桃仁以苦杏仁苷计，不得少于22mg，含赤芍以芍药苷计，不得少于36mg。
7.如权利要求1或2所述的注射液的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下步骤鉴别a.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作为供试品溶液；另取苦杏仁苷对照品，加甲醇6ml使溶解的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-18∶30-50∶15-25∶3-6二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，喷以磷钼酸硫酸溶液，在100-105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；其中磷钼酸硫酸溶液是由磷钼酸2g加水20ml使溶解，再缓缓加入硫酸30ml，混匀制得；b.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30-50∶3-6∶8-12∶0.1-0.3二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-2％香草醛硫酸溶液，在100-105℃下加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；c.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以25-35∶1-3∶1-2甲苯-甲醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁-2％铁氰化钾的50％乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适应性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25-29∶71-76的甲醇-水为流动相；检测波长为218nm，理论板数按苦杏仁苷峰与芍药苷峰计算均应不低于3000；对照品溶液的制备，取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷、芍药苷对照品适量，精密称定，分别加流动相制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供试品溶液的制备，取本品5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每支含桃仁以苦杏仁苷计，不得少于22mg，含赤芍以芍药苷计，不得少于36mg。
8.如利要求1或2所述的注射液的质量控制方法，其特征在于该方法采用了指纹图谱的方法照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适应性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；24-28∶74甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液为流动相；检测波长为218nm。理论塔板数按参照物苦杏仁苷峰计算，应不低于3000；参照物溶液的制备，取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷参照物适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供试溶液的制备，取本品2ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；测定法，精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录1小时色谱图，供试品指纹图谱中与参照物峰相应的峰为S峰，计算相对保留时间和峰面积比值，应符合下列要求本品指纹图谱应与标准指纹图谱相似；指纹图谱应有8个共有峰，相对保留时间，即峰号0.350±30％(1)、0.554±30％(2)、1(S)、1.413±30％(3)、1.552±30％(4)、2.022±30％(5)、3.600±30％(6)、3.985±30％(7)；峰面积比值(峰号)1.218±30％(5)、0.451±40％(7)；非共有峰面积不得过总峰面积的5％。
全文摘要
本发明公开了一种治疗心脑血管疾病的药物制剂的制备方法和质量控制方法。本发明对桃仁、赤芍、川芎采用了不同提取方法，最终制成注射液。本发明同时提供了该注射液的鉴别、含量测定的质量控制方法，也提供了该冻干粉针制剂的指纹图谱质量控制方法。
文档编号A61P9/00GK1507907SQ0215677
公开日2004年6月30日 申请日期2002年12月18日 优先权日2002年12月18日
发明者彭国平, 肖伟, 戴翔翎, 凌娅, 王振中, 徐涟明, 毕宇安 申请人:江苏康缘药业股份有限公司