专利名称：包含羽扇醇的来自羽扇豆种子豆荚的提取物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含羽扇醇的来自羽扇豆种子豆荚的提取物，特别是富含羽扇醇的提取物。本发明也涉及获得这样提取物的方法。
羽扇豆是相当广泛的植物，它发现于欧洲、亚洲和发现于北美洲和南美洲。此植物是碗豆、蚕豆、大豆和法国豆的近亲。几种羽扇豆可以提及为最公知的白羽扇豆(白羽扇豆)、狭叶羽扇豆(蓝羽扇豆)、黄羽扇豆(黄羽扇豆)、南美羽扇豆(珠羽扇豆)、graecus羽扇豆、羽扇豆、hispanicus羽扇豆、皮洛苏羽扇豆、cosentinii羽扇豆、atlanticus羽扇豆、princei羽扇豆和somaliensis羽扇豆。在欧洲最通常的一种是甜白羽扇豆(白羽扇豆)，特别是显示pauper基因的Ares种类。
尽管种子通常用作肥料和由于它们的高蛋白质含量也用于人类和动物食品中，在工业上仅仅非常少地使用羽扇豆种子的豆荚或表皮。然而它们构成富含羽扇醇的天然来源。
羽扇醇(1)属于三萜烯族，和更特别地属于三萜烯醇族。
羽扇醇依靠它的许多生物活性而具有明确的价值。特别已知它的抗炎(Singh S.等人，Filoterapia，1997，68，No.1，9)和止痛(DeMiranda A.L.等人，Planta Med，2000，66(3)，284)性能，它关于重金属的肾保护作用(Nagaraj M.等人，J.Appl.Toxicol，2000，20(5)，413)，它的抗组胺作用(De Medrano Villar M.J.等人，Methods FindExp.Clin.Pharmacol.1997，19，No.8,515)，和它的抗有丝分裂(Zachariah R.等人，Indian J.Pharm.Sci.，1994，56，No.4,129)和抗病毒(Kahlos K.，Filoterapia，1996，67，No.4,344)活性。
羽扇醇也可用作合成中间体，特别是用于制备植物激素和类固醇类似物。
羽扇醇在许多植物，如库拉索芦荟或努尔瓦拉Crataeva的树皮中存在。在几种情况下，它已经从各种植物如“Bresk”分离。然而，它从没有从羽扇豆豆荚提取。在专利FR2 762 512中从羽扇豆种子提取包含羽扇醇的羽扇豆油，但油当时来自已经预先剥皮和因此除去它们豆荚的种子，和包含在油中的羽扇醇显示0.5wt％的最大含量，相对于油的总组合物。
现在，由于羽扇豆豆荚构成富含羽扇醇的潜在来源，它比大多数它的同系数便宜和更容易获得，因此需要从羽扇豆种子的豆荚分离提取物，特别是富含羽扇醇的提取物，和开发获得这样提取物的方法。采用现代农业技术，一般的羽扇豆，特别是白羽扇豆(白羽扇豆)事实上是大规模生长的产油和蛋白质的植物，不象包含羽扇醇的较不广泛植物，如库拉索芦荟或努尔瓦拉Crataeva。
本发明的目的因此是一种包含羽扇醇的来自羽扇豆种子豆荚的提取物。有利地，根据本发明的提取物的羽扇醇含量大于30wt％，优选大于50wt％。甚至更有利地，根据本发明来自羽扇豆种子豆荚的提取物的羽扇醇含量为70-100wt％。
对于本发明的目的，术语“羽扇豆种子豆荚”用于表示围绕种子的表皮。豆荚平均占干燥种子的15wt％。
从来自种子机械剥皮的羽扇豆种子豆荚制备根据本发明的提取物。
在本发明的特别实施方案中，羽扇豆选自窄叶羽扇豆、白羽扇豆、黄羽扇豆、南美羽扇豆、graecus羽扇豆、羽扇豆、hispanicus羽扇豆、皮洛苏羽扇豆、cosentinii羽扇豆、atlanticus羽扇豆、princei羽扇豆和somaliensis羽扇豆。根据本发明，羽扇豆有利地是欧洲类型的白羽扇豆(甜白羽扇豆)，优选带有pauper基因的Ares种类。
本发明的目的也是根据本发明从羽扇豆种子豆荚获得提取物的方法。
有利地，根据本发明的方法至少包括一系列如下步骤-研磨羽扇豆豆荚，-使用选自脂族烷烃、芳族烷烃、脂族醇、及其卤代衍生物的有机溶剂，提取包含在研磨的羽扇豆豆荚中的总脂质，-精制获得的脂质以获得富含羽扇醇的提取物。
使用圆筒碾磨机或锤磨机研磨从种子分离的豆荚。根据本发明获得富含羽扇醇的提取物的方法是基于使用有机溶剂提取包含在羽扇豆荚中的脂质。有利地，有机溶剂是己烷。精制的豆荚的总脂质含量一般为0.5-5wt％，相对于豆荚的总重量。
对于本发明的目的，术语“富含羽扇醇的”提取物用于表示羽扇含量大于30wt％，有利地大于50wt％，和甚至更有利地70-100wt％的提取物。
或者由下述方法A、B和C进行用于获得根据本发明富含羽扇醇的提取物的获得脂质精制。
在本发明的特别实施方案(方法A)中，从羽扇豆豆荚提取的总脂质的精制至少包括一系列如下步骤-在真空下通过有机溶剂的蒸发，包含脂质的反应介质的浓缩以获得0.1-90wt％，有利地10-30wt％，甚至更有利地20wt％的脂质含量，和-结晶。
根据本发明，因此可以通过从有机溶液的直接结晶，直接获得富含羽扇醇的提取物，在提取羽扇豆豆荚中存在的总脂质的提取步骤期间获得该有机溶液。在已经浓缩包含脂质的反应介质之后，然后冷却溶液以引发羽扇醇的结晶。然后可以由一个或多个再结晶步骤，特别是从己烷精制获得的富含羽扇醇的提取物。
在本发明的另一个实施方案(方法B)中，从羽扇豆豆荚提取的总脂质的精制至少包括一系列如下步骤-在真空下溶剂的蒸发，然后在脂族醇中的溶解，-皂化，
-通过冷却的结晶，和-过滤和/或洗涤和/或旋转过滤干燥。
根据本发明，脂族醇有利地是乙醇，用于皂化步骤的溶剂有利地是醇氢氧化钾。在皂化之后，通过冷却将获得的含水醇溶液进行分级结晶。在过滤和/或洗涤和/或旋转过滤干燥之后，获得的固体提取物的羽扇醇含量至少为30wt％，有利地至少50wt％，和甚至更有利地至少60wt％。然后可以由一个或多个再结晶步骤，特别是从己烷精制获得的富含羽扇醇的提取物。
在本发明的另一个实施方案(方法C)中，从羽扇豆豆荚提取的总脂质的精制至少包括一系列如下步骤-在真空下溶剂的蒸发，然后在脂族醇中的溶解，-皂化，-使用选自脂族烷烃及其卤代衍生物的有机溶剂在羽扇豆豆荚脂质中不皂化材料的液-液萃取，和-通过优选采用水的洗涤，和然后在真空下溶剂的蒸发和干燥，精制不皂化材料。
根据本发明，因此可以通过皂化包含从羽扇豆豆荚提取的总脂质的反应介质，然后提取羽扇豆豆荚脂质的不皂化级分，获得富含羽扇醇的提取物。
对于本发明的目的，术语“不皂化”用于表示脂肪物质的级分，该级分在碱性碱的延长作用之后，不溶于水和可以采用有机溶剂萃取。
根据本发明，在与不皂化材料有极大亲合力的溶剂，如脂族烷烃及其卤化衍生物存在下，在脉冲逆流塔中进行液-液萃取。有利地，根据本发明，用于液-液萃取步骤的有机溶剂是二氯乙烷。然后将在塔出口的有机相采用水洗涤和然后在真空下蒸发，和干燥残余物。然后可以由一个或多个再结晶步骤，特别是从己烷精制获得的富含羽扇醇的提取物。
根据本发明方法的所有步骤对本领域技术人员是公知的。
非限制性地给出以下实施例和以下实施例说明本发明。
实施发明的实施例使用的原材料由带有pauper基因的Ares种类甜白羽扇豆种子的豆荚组成。羽扇豆豆荚的总脂质含量等于1.8wt％。
1.总脂质的提取使用锤磨机预研磨75kg羽扇豆豆荚。然后将获得的研磨材料装入GUEDU搅拌过滤器以进行采用己烷的8次连续洗涤(每次洗涤使用90升己烷)。提取温度固定在45℃。每次洗涤包括将新鲜溶剂引入过滤器，搅拌悬浮液15分钟和，最后过滤15分钟以回收溶剂油。在工艺结束时，在真空下，在50℃的温度下，用蒸汽喷脱脂的羽扇豆豆荚，以从饼状物提取残余溶剂油。最后将溶剂油相汇合，然后在真空下，通过在真空下蒸汽的注入，在120℃下蒸发。控制此操作以获得总脂质含量为15-30wt％，优选20wt％的己烷基溶液A。
2.羽扇醇提取2.1方法A将在总脂质提取期间获得的己烷基溶液A冷却到20℃和缓慢搅拌12小时。然后将它通过布氏漏斗过滤以回收富含羽扇醇的结晶提取物。将此提取物最后采用冷己烷(15℃)洗涤和然后在60℃下在真空烘箱中干燥48小时。
获得的提取物A的形式为羽扇醇含量为76％的淡黄色粉末。总的羽扇醇提取收率是72％。
2.2随后为再结晶步骤的方法A通过从己烷的再结晶精制实施例1中获得的500g提取物A。事实上将固体提取物溶于己烷(10wt％的溶液)。将混合物在回流下达到70℃下15分钟，直到提取物完全溶解。然后将温度返回到20℃和采用缓慢搅拌保持直到羽扇醇的完全沉淀。然后将后者滤出，采用冷己烷洗涤，和然后最后在60℃下在真空烘箱中干燥48小时。
获得的提取物B的形式为羽扇醇含量为95％的白色粉末。总的羽扇醇提取收率是65％。
2.3方法B在200毫巴真空下和通过在120℃下注入活蒸汽，完全蒸发在总脂质提取期间获得的2kg己烷基溶液A。然后在搅拌的，带夹套反应器中，在240g的50％醇氢氧化钾存在下，皂化此新乙醇溶液。在回流下和在70℃温度下进行皂化反应4小时。然后将肥皂溶液返回到20℃的温度和采用缓慢搅拌保持24小时，直到羽扇醇的完全沉淀。然后将后者滤出，采用冷己烷洗涤，和然后最后在60℃下在真空烘箱中干燥48小时。
获得的固体提取物B的形式为羽扇醇含量为84％的白色粉末。总的羽扇醇提取收率是91％。
2.4方法C在200毫巴真空下和通过在120℃下注入活蒸汽，完全蒸发在总脂质提取期间获得的2kg己烷基溶液A。然后采用900ml乙醇吸收获得的固体。然后在搅拌的，带夹套反应器中，在240g的50％醇氢氧化钾存在下，皂化此新乙醇溶液。在回流下和在70℃温度下进行皂化反应4小时。然后采用软化水(按体积50/50稀释)稀释获得的肥皂溶液。然后将此新的含水醇溶液送到脉冲逆流塔的底部。关于塔的项部，加入用作羽扇醇提取溶剂的1，2-二氯乙烷。获得的有机相然后进行如下常规简单精制操作1)在逆流塔中采用水洗涤2)在真空下在旋转蒸发器中的蒸发3)在真空烘箱中残余物的干燥(70℃，48小时)获得的提取物C的形式为羽扇醇含量为85％的淡黄色粉末。总的羽扇醇提取收率是87％。
2.5随后为再结晶步骤的方法C通过从己烷的再结晶精制实施例3中获得的200g提取物C。事实上将固体提取物溶于己烷(10wt％的溶液)。将混合物在回流下达到70℃下15分钟，直到提取物完全溶解。然后将温度返回到20℃和采用缓慢搅拌保持直到羽扇醇的完全沉淀。然后将后者滤出，采用冷己烷洗涤，和然后最后在60℃下在真空烘箱中干燥48小时。
获得的提取物D的形式为羽扇醇含量为96.5％的白色粉末。总的羽扇醇提取收率是70％。
权利要求
1.一种包含羽扇醇的来自羽扇豆种子豆荚的提取物。
2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于它的羽扇醇含量大于30wt％，优选大于50wt％。
3.根据权利要求1和2任一项所述的提取物，其特征在于它的羽扇醇含量为70-100wt％。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的提取物，其特征在于羽扇豆选自窄叶羽扇豆、白羽扇豆、黄羽扇豆、南美羽扇豆、graecus羽扇豆、羽扇豆、hispanicus羽扇豆、皮洛苏羽扇豆、cosentinii羽扇豆、atlanticus羽扇豆、princei羽扇豆和somaliensis羽扇豆。
5.根据权利要求4所述的提取物，其特征在于羽扇豆是白羽扇豆，优选带有pauper基因的Ares种类。
6.获得前述根据权利要求任意一项所述的提取物的方法。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于它包括至少一系列如下步骤-研磨羽扇豆豆荚，-使用选自脂族烷烃、芳族烷烃、脂族醇、及其卤代衍生物的有机溶剂，提取包含在研磨的羽扇豆豆荚中的总脂质，以及-精制获得的脂质以获得富含羽扇醇的提取物。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于有机溶剂是己烷。
9.根据权利要求7和8任一项所述的方法，其特征在于获得的脂质的精制至少包括一系列如下步骤-在真空下通过有机溶剂的蒸发包含脂质的反应介质的浓缩以获得0.1-90wt％，有利地10-30wt％，甚至更有利地20wt％的脂质含量，和-结晶。
10.根据权利要求7和8任一项所述的方法，其特征在于获得的脂质的精制至少包括一系列如下步骤-在真空下溶剂的蒸发，和然后在脂族醇中的溶解，-皂化，-通过冷却的结晶，和-过滤和/或洗涤和/或旋转过滤干燥。
11.根据权利要求7和8任一项所述的方法，其特征在于获得的脂质的精制至少包括一系列如下步骤-在真空下溶剂的蒸发，和然后在脂族醇中的溶解，-皂化，-使用选自脂族烷烃及其卤代衍生物的有机溶剂，羽扇豆豆荚中不皂化材料的液-液萃取，和-通过洗涤，然后在真空下溶剂的蒸发和干燥，不皂化材料的精制。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于用于液-液萃取步骤的有机溶剂是二氯乙烷。
13.根据权利要求9-12任意一项所述的方法，其特征在于它也包括一个或多个最终的再结晶步骤。
全文摘要
本发明涉及一种包含羽扇醇的来自羽扇豆种子豆荚所述的提取物，更特别地一种提取物，其中它的羽扇醇含量大于30wt％，优选大于50wt％，甚至更有利地70－100wt％。本发明也涉及获得该提取物所述的方法。
文档编号A61P29/00GK1507429SQ02809529
公开日2004年6月23日 申请日期2002年4月2日 优先权日2001年4月3日
发明者A·皮奇里利, J·列格兰, N·布鲁坦, A 皮奇里利, 程, 窭 申请人:科学发展实验室