专利名称：2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇在制备预防或治疗免疫性肝损伤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇及其药学上可接受的盐或含有它们的组合物的新用途，更具体地说是在制备预防或治疗免疫性肝损伤的药物中的应用。
背景技术：
免疫性肝损伤是由病毒侵入肝部后引起机体免疫病理损害，导致肝细胞损伤，例如巨细胞病毒、EB病毒、黄热病毒、肝炎病毒等病毒引起肝部损伤。目前常用的保肝药大多仅对化学性肝损伤如四氯化碳等引起的肝损伤有效，而对免疫性肝损伤效果不佳，故国内外均重视抗免疫性肝损伤的药物研究。
世界专利WO9408943(1994年4月28日公开)已经公开了化合物2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇及药学上可接受的盐。其盐酸盐的国际研发产品代号为FTY720，结构式为 2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇可用于各种脏器移植(如皮肤移植、心脏移植、肝移植、小肠移植、肢体移植等)及骨骼移植的抗排斥反应。它还可延长异种移植的存活时间。此外还公开了2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇可用于牛皮癣、贝切特综合症等各种自身免疫性疾病及风湿病的治疗。另外欧洲专利EP10201236(2002年5月2日公开)公开了2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇可以预防和治疗病毒性心肌炎及由此而引起的病毒性疾病。但2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇可预防和治疗免疫性肝损伤以前一直没有报导过。
出乎意料的是，现已发现，所公开的2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇在预防或治疗免疫性肝损伤方面有显著的疗效。
发明内容
本发明公开了一种2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇的新用途，即在制备预防或治疗免疫性肝损伤的药物中的应用。
本发明还公开了2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇药学上可接受的盐或含有它们的组合物在制备预防或治疗免疫性肝损伤的药物中的应用。
本发明还公开了2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇盐酸盐(以下简称FTY720)及其组合物在制备预防或治疗免疫性肝损伤的药物中的应用。
2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇是已知的化合物，可通过世界专利WO9408943或中国专利CN1266844(2000年9月20日公开)所述的制备方法制得。
2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇及其药学上可接受的盐毒性低、副作用小、安全性评价高。据文章《(FTY720A New ImmunosuppressiveAgent With Novel Mechanism(s)of Action)》(发表于TransplantationProceedings，30，2210-2213，1998)报道，FTY720在大鼠中的LD50值为300-600mg/kg，以小于200mg/kg的剂量给狗，没有死亡报告。
以下实验显示了2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇可预防或治疗免疫性肝损伤的作用机理为2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇可以抑制腹腔巨噬细胞中NO释放，从而起到保肝作用。
实验的材料和方法C57BL/6G小鼠，雄性，体重18-22g。由北京大学医学部动物部提供。LPS从Sigma公司购买。实验中常规分离腹腔巨噬细胞，使细胞浓度为2*106，铺于96孔板中。细胞分为正常对照组、LPS刺激组(LPS终浓度为10ug/ml)、LPS+FTY720 6.25ug/ml组、ConA+FTY720 12.5ug/ml组、ConA+FTY72025ug/ml组及ConA+FTY720 50ug/ml组)。24小时后取血清检测血清中NO的含量。检测方法为Criess方法。
实验结果本实验结果显示FTY720可显著抑制由于LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放。结果见表1。
表1.FTY720对小鼠腹腔巨噬细胞NO生成的影响组别 样本数NO(umol/l)正常组 6 0.72±0.072*LPS刺激组6 1.23±0.245LPS+FTY720 6.2 5ug/ml组 6 0.82±0.095*ConA+FTY720 12.5ug/ml组 6 0.54±0.045*ConA+FTY720 25ug/ml组6 0.42±0.097*
ConA+FTY720 50ug/ml组 60.43±0.015**和LPS组比较P＜0.052-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇可制成药学上可接受的盐，如用以下的酸盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、乙酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸等类似酸加成盐；需要时可加合适的溶剂，如水、甲醇、乙醇、乙醚、四氢呋喃等类似物。
2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇及药学上可接受的盐可以口服、注射、植入或直肠给药，如粉剂、颗粒剂、片剂、小丸、胶囊、乳剂、糖浆剂、注射剂、栓剂等。所述及的制剂可用常规方法来制备。
2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇在用于预防或治疗免疫性肝损伤时，根据病人(成年人)的体重、给药途径的不同情况，剂量不同。当口服给药时，剂量范围为每天0.1至100mg；静脉给药时，剂量范围为每天0.01至20mg，分一至二次给药。
为了更好地理解本发明的实质，下面将2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇及药学上可接受的盐的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。
按中国专利CN1266844所公开的方法合成2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇，并制成盐酸盐。按活性成份0.5g，乳糖33g，预胶化淀粉32g，微晶纤维素33g，硬脂酸镁1.5g，以常规制剂方法制成1000粒胶囊，每粒含活性成份0.5mg。在用于预防或治疗免疫性肝损伤时，每次服用1-20粒。
按世界专利WO9408943所述方法合成2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇，并制成氢溴酸盐。按活性成份2g，乳糖66g，预胶化淀粉64g，微晶纤维素66g，硬脂酸镁2g，以常规制剂方法制成1000片片剂，每片含活性成份2mg。在用于预防或治疗免疫性肝损伤时，每次服用1-5片。
按世界专利WO9408943所述方法合成2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇，并制成富马酸盐。按活性成份0.5g，甘露醇499.5g，以常规制剂方法制成1000支冻干粉针，每支含活性成份0.5mg。在用于预防或治疗免疫性肝损伤时，每次注射1-6支。
免疫性肝损伤模型是由卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)或刀豆蛋白(ConA)诱导的肝脏免疫性炎症，是用于筛选防治肝炎药物的一种实验性肝炎模型。
1.FTY720对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)诱导肝损伤的保护作用材料和方法昆明小鼠，雄性，体重18-22g。由北京大学医学部动物部提供。卡介苗冻干粉(BCG)购自中国药物生物制品检定所。LPS从Sigma公司购买。ALT和AST检测试剂盒购自北京化康泰临床试剂有限公司。实验中将动物分为6组正常对照组、模型组、FTY720 1mg/kg组、FTY720 3mg/kg组、FTY7206mg/kg组及马洛替酯阳性对照组。方法为口服FTY720 1周后，小鼠静脉注射BCG 3mg/只，2周后再静脉给与LPS，24小时后取血清检测血清中ALT、AST及TG的水平。
实验结果本实验结果显示FTY720可显著降低由于BCG+LPS诱导的血清中ALT和AST水平的升高。见表2，表3。实验中还发现FTY720对于BCG+LPS刺激引起血清中甘油三酯的增高具有一定程度的降低作用，结果未显示。提示FTY720对BCG+LPS引起的肝损伤有明显的保护作用。
表2.FTY720对BCG+LPS诱导的肝损伤血清ALT的作用组别动物数 平均值±标准差正常组 10 19.64±11.87*BCG+LPS组 10 234.23±143.17BCG+LPS+FTY720 1mg/kg组 10 168.04±87.19BCG+LPS+FTY720 3mg/kg组 10 162.41±77.43BCG+LPS+FTY720 6mg/kg组 10 119.41±77.45*阳性药组8 140.20±87.27*表3.氢溴酸盐对BCG+LPS诱导的肝损伤血清AST的作用组别动物数 平均值±标准差正常组 10 108.00±22.37*BCG+LPS组 10 254.71±101.45BCG+LPS+FTY720 1mg/kg组 10 220.30±54.96BCG+LPS+FTY720 3mg/kg组 10 214.21±32.34BCG+LPS+FTY720 6mg/kg组 10 183.00±46.29*阳性药组8 197.55±49.74**和模型组比较P＜0.052.2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇富马酸盐对刀豆蛋白(ConA)诱导肝损伤的保护作用材料和方法昆明小鼠，雄性，体重18-22g。由北京大学医学部动物部提供。刀豆蛋白(ConA)从Sigma公司购买。ALT和AST检测试剂盒购自北京化康泰临床试剂有限公司。实验中将动物分为6组正常对照组、模型组、2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇富马酸盐(以下简称富马酸盐)1mg/kg组、富马酸盐3mg/kg组、富马酸盐6mg/kg组及马洛替酯阳性对照组。方法为口服富马酸盐10天后，小鼠静脉注射ConA 15mg/kg，12小时后取血清及肝脏，检测血清中ALT、AST的水平并做肝脏病理。
实验结果本实验结果显示富马酸盐可显著降低由于ConA诱导的血清中ALT和AST水平的升高。见表4，表5。实验中还发现富马酸盐对于ConA刺激引起血清中甘油三酯的增高具有一定程度的降低作用，结果未显示。提示富马酸盐对ConA引起的肝损伤有明显的保护作用。
表4.富马酸盐对ConA诱导的肝损伤血清ALT的作用组别 动物数 平均值±标准差正常组 10 22.87±7.67*BCG+LPS组10 186.10±123.67BCG+LPS+富马酸盐1mg/kg组 10 134.90±84.59BCG+LPS+富马酸盐3mg/kg组 10 45.68±29.05*BCG+LPS+富马酸盐6mg/kg组 10 71.83±58.40*阳性药组 8 90.39±39.96*表5.富马酸盐对ConA诱导的肝损伤血清AST的作用组别 动物数 平均值±标准差正常组 10 103.87±20.88*BCG+LPS组10 189.09±59.32BCG+LPS+富马酸盐1mg/kg组 10 173.33±36.39BCG+LPS+富马酸盐3mg/kg组 10 134.79±33.00*BCG+LPS+富马酸盐6mg/kg组 10 140.83±30.36*阳性药组 8 179.37±30.36*和模型组比较P＜0.05从以上的结果，可以得出本发明的优点在于本发明对已知化合物2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域；本发明的2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景。
具体实施例方式
实施例1按中国专利CN1266844所公开的方法合成2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇，并制成盐酸盐。按以下处方以常规制剂方法制成胶囊剂，每粒含活性成份0.5mg。在用于预防或治疗免疫性肝损伤时，每次服用4粒。
活性成份 0.5g乳糖 33g预胶化淀粉 32g微晶纤维素 33g硬脂酸镁 1.5g制成1000粒实施例2按世界专利WO9408943所述方法合成2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇，并制成氢溴酸盐。按以下处方以常规制剂方法制成片剂，每片含活性成份2mg。在用于预防或治疗免疫性肝损伤时，每次服用3片。
活性成份 2g乳糖 66g预胶化淀粉 64g微晶纤维素 66g硬脂酸镁 2g制成1000片实施例3按世界专利WO9408943所述方法合成2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇，并制成富马酸盐。按以下处方以常规制剂方法制成冻干粉针，每支含活性成份0.5mg。在用于预防或治疗免疫性肝损伤时，每次注射1支。
活性成份 0.5g甘露醇 499.5g制成1000支
权利要求
1. 2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇在制备预防或治疗免疫性肝损伤的药物中的应用。
2. 2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇药学上可接受的盐或含有它们的组合物在制备预防或治疗免疫性肝损伤的药物中的应用。
3. 2-氨基-2(2-(4-辛基苯基)乙基)-1，3-丙二醇盐酸盐及其组合物在制备预防或治疗免疫性肝损伤的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及2－氨基－2(2－(4－辛基苯基)乙基)－1，3－丙二醇及其药学上可接受的盐或含有它们的组合物在制药领域中的新用途，即在制备预防或治疗免疫性肝损伤的药物中的应用。
文档编号A61P1/16GK1524518SQ0310650
公开日2004年9月1日 申请日期2003年2月25日 优先权日2003年2月25日
发明者林志彬, 何景华, 张泳华 申请人:杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司, 杭州华东医药集团生物工程研究所有限