专利名称：异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及异鼠李素及其衍生物在医药上的应用。
背景技术：
异鼠李素是一种已知的黄酮类化合物。异鼠李素及其甙存在于多种植物中，如存在于沙棘、旱柳、荭草、喙果绞股蓝、骆驼刺和枸杞等中。它在沙棘中的含量十分丰富。异鼠李素有一定的心血管活性，如抗心肌缺氧缺血、抗心率失常的作用。它还有降低血清胆固醇等作用。异鼠李素通常作为标准品用于测定黄酮含量，在医药上未见使用。
肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病，它在很多国家引起的死亡率居第二位，仅次于心血管疾病。通常用于治疗肿瘤的手段有手术、化疗和放疗。现有的治疗手段往往存在副作用大的缺点，在治疗肿瘤的过程中也对人体造成一定程度的损害。现有的化疗药物大多有毒性大，对人体健康细胞损伤大的缺点。同时由于肿瘤细胞耐药性等原因，已有的治疗药物或手段又对某些肿瘤不太有效。
发明内容
鉴于上述，本发明的目的在于提供一种异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用。
本发明的异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用，是异鼠李素或异鼠李素衍生物用于制备治疗肿瘤的药物。
上述的异鼠李素衍生物为异鼠李素甙元、异鼠李素甙等。本发明优选的是异鼠李素。
上述的异鼠李素甙为异鼠李素-3-O-鼠李半乳糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-鼠李葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-阿拉伯葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-半乳糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖基-(1→6)葡萄糖甙、异鼠李素-7-O-鼠李糖甙中的一种。
上述的肿瘤是宫颈癌、肝癌、舌鳞癌、肺腺癌或脑胶质瘤等肿瘤。
上述的药物制成静脉输注剂或口服剂。
异鼠李素及其衍生物治疗肿瘤的机理如下1、诱导肿瘤细胞凋亡和分化施以异鼠李素或异鼠李素衍生物后的肿瘤细胞的形态和生长曲线测定，以及流式细胞仪检测的结果来看。异鼠李素或异鼠李素衍生物可以诱导肿瘤细胞的凋亡和分化，从而产生治疗肿瘤的作用。
2、抑制肿瘤细胞的增殖通过3H-TdR掺入实验及流式细胞仪检测的结果，异鼠李素或异鼠李素衍生物可以抑制DNA的合成并且可以抑制肿瘤细胞的增殖。经药物处理的肿瘤细胞被阻止于细胞周期中的S期，进入分裂期的肿瘤细胞比例下降。
3、影响肿瘤细胞基因的表达肿瘤细胞的基因表达在被施用异鼠李素或异鼠李素衍生物前后有明显的变化。通过流式细胞仪的检测，施用异鼠李素或异鼠李素衍生物后，肿瘤细胞的bcl-2、c-myc和c-ha-ras的表达明显降低，同时p53、bax和c-fos的表达上升。c-myc和c-ha-ras的表达过量与肿瘤形成有密切关系，而bcl-2是抑制肿瘤细胞凋亡的基因。c-fos的表达多少是肿瘤细胞分化的标志，它的表达上升说明异鼠李素或异鼠李素衍生物使肿瘤细胞的分化程度上升。p53基因可促进肿瘤细胞凋亡；bax基因的表达上升也可以促进肿瘤细胞的凋亡。bcl-2、c-myc和c-ha-ras三个基因在异鼠李素或异鼠李素衍生物处理过的肿瘤细胞中表达降低，同时p53、bax和c-fos的表达上升说明了异鼠李素或异鼠李素衍生物可使肿瘤细胞产生分化凋亡。
4、降低肿瘤细胞端粒酶的活性端粒酶活性降低可以抑制肿瘤细胞增殖。PCR ELISA法检测发现，经过异鼠李素或异鼠李素衍生物处理的人宫颈癌细胞的端粒酶活性降低。所以异鼠李素或异鼠李素衍生物可以通过降低肿瘤细胞的端粒酶活性，进而抑制肿瘤细胞的增殖来达到治疗肿瘤的目的。
为了方便治疗使用，可以使用本领域技术人员已知的方法，将异鼠李素或异鼠李素衍生物制成适合使用的剂型。比如将异鼠李素或异鼠李素衍生物溶于适当溶剂如生理盐水制备成静脉输注液；或将异鼠李素制成粉末添加适当赋形剂制备成口服剂型，如胶囊、片剂或通常的其他剂型。其中包含治疗有效剂量的异鼠李素或异鼠李素衍生物。
为了更好地理解本发明，下面用异鼠李素或异鼠李素衍生物对肿瘤细胞的药效实验来说明其制药用途。
一、异鼠李素及其衍生物制备的药物对人宫颈癌细胞(Hela细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml异鼠李素的细胞培养液来处理Hela细胞，阴性对照组为采用不含异鼠李素的培养液处理Hela细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法测定Hela细胞(人宫颈癌细胞)对照组与治疗组的生长情况。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计数集落总数及集落形成率。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在异鼠李素作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为1.5×104Bq/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经异鼠李素作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的S期的比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示异鼠李素降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被异鼠李素作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、端粒酶活性检测药物处理48小时后，消化细胞收集处理后用PCR ELISA法检测细胞端粒酶活性。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，端粒酶活性明显降低。说明异鼠李素可明显降低肿瘤细胞的持续分裂能力。
7、结论人宫颈癌细胞在经异鼠李素处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、细胞周期分布改变、基因表达率改变、凋亡率增加和端粒酶活性下降。说明异鼠李素使人宫颈癌细胞分化凋亡，并且降低人宫颈癌细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗宫颈癌的作用。
二、异鼠李素及其衍生物制备的药物对人舌鳞癌细胞(Tca-8113细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml异鼠李素的细胞培养液来处理Tca-8113细胞，阴性对照组为采用不含异鼠李素的培养液处理Tca-8113细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定采用MTT法测定Tca-8113细胞对照组与治疗组的生长情况。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计集落总数及集落形成率。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在异鼠李素作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为1.5×104Bq/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经异鼠李素作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的S期比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示异鼠李素降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被异鼠李素作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、结论人舌鳞癌细胞在经异鼠李素处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、细胞周期分布改变、基因表达率改变、凋亡率增加。说明异鼠李素使人舌鳞癌细胞分化凋亡，并且降低人舌鳞癌细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗舌鳞癌的作用。
三、异鼠李素及其衍生物制备的药物对人肝癌细胞(SMMC-7721细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml异鼠李素的细胞培养液来处理SMMC-7721细胞，阴性对照组为采用不含异鼠李素的培养液处理SMMC-7721细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定加药后每天将细胞用胰酶消化后采用台盼蓝染色法，然后在血球计数板下计数测定SMMC-7721细胞(人肝癌细胞)对照组与治疗组的生长情况。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为1.5×104Bq/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经异鼠李素作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
4、流式细胞仪检测结果
异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，被异鼠李素作用后的肿瘤细胞基因表达改变，分化程度升高。
5、结论人肝癌细胞在经异鼠李素处理后，细胞形态改变、增殖变慢、3H-TdR掺入减少、基因表达率改变。说明异鼠李素使人肝癌细胞分化程度上升，并且降低人肝癌细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗肝癌的作用。
四、异鼠李素及其衍生物制备的药物对人肺腺癌细胞(YTMLC-90细胞)的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml异鼠李素的细胞培养液来处理YTMLC-90细胞，阴性对照组为采用不含异鼠李素的培养液处理YTMLC-90细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、细胞生长测定
加药后每天将细胞用胰酶消化后采用台盼蓝染色法，然后在血球计数板下计数测定YTMLC-90细胞(人肺腺癌细胞)对照组与治疗组的生长情况。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞生长受到明显抑制。
3、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计集落总数及集落形成率。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在异鼠李素作用后增殖能力下降。
4、3H-TdR掺入实验药物处理24小时后加入3H-TdR(终浓度为1.5×104Bq/ml)，4小时后消化，离心后蒸馏水溶解细胞，采用纸片法在液体闪烁计数器上测定细胞的cpm值
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，3H-TdR掺入明显较少。说明肿瘤细胞经异鼠李素作用后DNA合成下降，肿瘤细胞的生长受到抑制。
5、流式细胞仪检测结果
异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，肿瘤细胞处于细胞周期中的S期比例上升，处于G2+M期的肿瘤细胞比例下降。分裂期的肿瘤细胞比例下降，表示异鼠李素降低了肿瘤的分裂增生速度。同时被异鼠李素作用后的肿瘤细胞凋亡率明显上升，基因表达改变，分化程度升高。
6、结论人肺腺癌细胞在经异鼠李素处理后，细胞形态改变、增殖变慢、集落形成率降低、3H-TdR掺入减少、细胞周期分布改变、基因表达率改变、凋亡率增加。说明异鼠李素使人肺腺癌细胞分化凋亡，并且降低人肺腺癌细胞的DNA合成速率和增殖能力，达到治疗肺腺癌的作用。
五、异鼠李素及其衍生物制备的药物对脑胶质瘤细胞的药效实验。
接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，治疗组采用含浓度为20μg/ml异鼠李素的细胞培养液来处理小鼠胶质瘤细胞(C6细胞)，阴性对照组为采用不含异鼠李素的培养液处理C6细胞。
1、细胞形态接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后在倒置显微镜下观察。
对照组肿瘤细胞排列密集，细胞呈圆形，核大核仁多。
治疗组肿瘤细胞排列稀疏，细胞呈长形或多边形，部分细胞内出现大小不等的空泡。
2、平板集落形成实验接种细胞以2×105个/ml于25ml培养瓶中，第二天随机分组加药，药物处理两天后以每一平皿500个细胞换普通培养液继续培养7天后，经甲醇固定、Giemsa染色(姬姆萨染色)。计集落总数及集落形成率。
经异鼠李素处理后的肿瘤细胞与对照组细胞相比，细胞集落形成率明显降低，说明肿瘤细胞在异鼠李素作用后增殖能力下降。
3、结论小鼠胶质瘤细胞在经异鼠李素处理后，细胞形态改变、集落形成率降低。说明异鼠李素使小鼠胶质瘤细胞分化程度上升，并且小鼠胶质瘤细胞增殖能力，达到治疗胶质瘤的作用。
为进一步理解本发明，下面再用异鼠李素的动物体内抗肿瘤实验来说明其制药用途。
体重18～22克小鼠，雌雄各半。每组动物20只，各组只数与性别比例相同。小鼠肝癌H22细胞稀释成1×107/ml，每只鼠皮下注射瘤细胞液0.2ml。次日将小鼠分为两组。空白对照组皮下注射等体积的生理盐水，实验组皮下注射20mg/kg的异鼠李素。给药5天后，处死小鼠，称量小鼠体重及瘤重。结果见下表。
实验证明，异鼠李素具有抑制动物体内肿瘤生长的作用。
综上所述从以上实验结果，说明异鼠李素可以使肿瘤细胞的形态改变、基因表达率改变分化程度上升，还可以使肿瘤细胞的凋亡率增加，并且降低肿瘤细胞的生长增殖速度。因此，可以得出本发明具有如下的优点。
一、本发明对已知的异鼠李素及其衍生物开拓了新的应用领域，用作制备治疗肿瘤的药物。
二、本发明的药物治疗肿瘤效果好，对多种肿瘤细胞都有效。在治疗肿瘤时的副作用很小，治疗剂量的异鼠李素或异鼠李素衍生物对正常细胞形态功能没有影响。
三、异鼠李素或异鼠李素衍生物来源广泛，价格低廉，可制成静脉输注剂、口服剂等多种剂型，口服剂型可以是片剂、胶囊等。
下面，再用实施例对本发明作进一步说明。
具体实施例方式
实施例1本发明的一种异鼠李素药物，称取异鼠李素200mg加入1000ml生理盐水，30℃水浴加热，加0.01M/L的稀NaOH溶液调节pH至7.4使异鼠李素完全溶解于生理盐水中。溶液消毒过滤后灌装，制成异鼠李素静脉输注液。使用输注装置按5mg/kg/天的剂量静脉输注于肿瘤患者。
实施例2本发明的一种异鼠李素衍生物药物，称取异鼠李素甙50g，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个异鼠李素甙胶囊，每个胶囊含异鼠李素甙50mg。
实施例3本发明的一种异鼠李素药物，称取异鼠李素50g，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个异鼠李素胶囊，每个胶囊含异鼠李素50mg。
实施例4本发明的一种异鼠李素衍生物药物，称取异鼠李素-3-O-鼠李半乳糖甙50g，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个异鼠李素-3-O-鼠李半乳糖甙胶囊，每个胶囊含异鼠李素-3-0-鼠李半乳糖甙50mg。
实施例5本发明的一种异鼠李素衍生物药物，称取异鼠李素-3-O-葡萄糖甙50g，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个异鼠李素-3-O-葡萄糖甙胶囊，每个胶囊含异鼠李素-3-O-葡萄糖甙50mg。
实施例6本发明的一种异鼠李素衍生物药物，称取异鼠李素-3-O-阿拉伯葡萄糖甙50g，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个异鼠李素-3-O-阿拉伯葡萄糖甙胶囊，每个胶囊含异鼠李素-3-O-阿拉伯葡萄糖甙50mg。
实施例7本发明的一种异鼠李素衍生物药物，称取异鼠李素-3-O-鼠李葡萄糖甙和异鼠李素-3-O-葡萄糖葡萄糖甙各25g，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个异鼠李素衍生物胶囊，每个胶囊含异鼠李素-3-O-鼠李葡萄糖甙和异鼠李素-3-O-葡萄糖葡萄糖甙各25mg。
实施例8本发明的一种异鼠李素衍生物药物，称取异鼠李素-3-O-半乳糖甙、异鼠李素-3-0-葡萄糖基-(1→6)葡萄糖甙、异鼠李素-7-O-鼠李糖甙各16g，与250g干燥淀粉混合均匀。粉末过120目筛两次，充分混合均匀。然后分别填充于空胶囊中。制成1000个异鼠李素衍生物胶囊，每个胶囊含异鼠李素-3-O-半乳糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖基-(1→6)葡萄糖甙、异鼠李素-7-O-鼠李糖甙各16mg。
实施例9本发明的一种异鼠李素药物，称取异鼠李素50g，与干燥淀粉按等量递加法混合，过筛混合均匀。然后与糊精混合均匀。加入适量乙醇，通过16目筛制粒，50℃干燥。干粒过16目筛，加入硬脂酸镁，混匀后压片。压制成1000片，每片含异鼠李素50mg。
权利要求
1.一种异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于异鼠李素或异鼠李素衍生物用于制备治疗肿瘤的药物。
2.根据权利要求1所述的异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所说的异鼠李素衍生物为异鼠李素甙元。
3.根据权利要求1所述的异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所说的异鼠李素衍生物为异鼠李素甙。
4.根据权利要求3所述的异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所说的异鼠李素甙为异鼠李素-3-O-鼠李半乳糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-鼠李葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-阿拉伯葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖葡萄糖甙、异鼠李素-3-O-半乳糖甙、异鼠李素-3-O-葡萄糖基-(1→6)葡萄糖甙和异鼠李素-7-O-鼠李糖甙中的至少一种。
5.根据权利要求1、2、3或4所述的异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所说的肿瘤是宫颈癌、肝癌、舌鳞癌、肺腺癌或脑胶质瘤。
6.根据权利要求1、2、3或4所述的异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所说的药物制成静脉输注剂或口服剂。
7.根据权利要求5所述的异鼠李素及其衍生物在治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所说的药物制成静脉输注剂或口服剂。
全文摘要
本发明涉及异鼠李素及其衍生物制备治疗肿瘤药物的应用。旨在提供一种治疗肿瘤的药物。本发明是用异鼠李素、异鼠李素衍生物，特别是用异鼠李素甙元、异鼠李素甙，尤其是用异鼠李素甙中的异鼠李素－3－O－鼠李半乳糖甙、异鼠李素－3－O－葡萄糖甙、异鼠李素－3－O－鼠李葡萄糖甙、异鼠李素－3－O－阿拉伯葡萄糖甙、异鼠李素－3－O－葡萄糖葡萄糖甙、异鼠李素－3－O－半乳糖甙、异鼠李素－3－O－葡萄糖基－(1→6)葡萄糖甙、异鼠李素－7－O－鼠李糖甙制备治疗肿瘤的药物，特别是制备治疗宫颈癌、肝癌、舌鳞癌、肺腺癌或脑胶质瘤的药物。可以是静脉输注剂、或口服剂等剂型。药物副作用小，治疗效果好。异鼠李素及其衍生物价格便宜，来源广泛。
文档编号A61K31/7048GK1518986SQ03117220
公开日2004年8月11日 申请日期2003年1月23日 优先权日2003年1月23日
发明者王正荣, 杨春蕾, 王跃锜, 屈艺 申请人:王正荣, 四川大学