专利名称：柚皮苷在制备支持性治疗非典型性肺炎药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及柚皮苷用于制备支持性治疗非典型性肺炎(SARS)药物的用途。
前一段时间在我国内流行了非典是由冠状病毒引起的。对于非典型性肺炎，如不及时治疗，将会发展到呼吸衰竭的程度。常用抗病毒药物、类固醇药物治疗和一般支持治疗，疗程20天以上，96-97％预后良好。预后差者最短在5天之内病情恶化，出现严重的肺炎症状，死亡率在5-10％。
目前治疗非典型性肺炎暂时没有特效药，采取的主要是“支持疗法”和“对症治疗”。首先是让病人休息，补充液体，增加营养，密切观察病情发展，提高病人自身的免疫力和抵抗力。如果病人出现了进行性呼吸困难、低血氧症、X光片照出肺部有阴影等情况的话，医生还会对其进行三个方面的治疗。首先，给病人戴上可以支持通气的面罩或鼻罩，提供一定压力的氧气，以防止肺泡的进一步萎陷。如果病人肺部感染持续增大，除了消炎外，可能还会加用皮质激素。最后，病人一旦出现继发性的细菌感染，还要采用积极的抗生素治疗。就目前治疗来讲，医生在采取上述方法后，可以支持病人增强自身免疫力，渡过发病高峰期，之后病毒就会自然回落，病人也就会逐渐痊愈了。已经痊愈出院的病人大多数属于这种情况，因此目前的治疗方法可以说还是有效的。”“支持疗法”在非典型性肺炎的治疗中有着重要的作用，寻找新的对非典型性肺炎有效的支持性治疗药物，对有效控制和治疗非典型性肺炎将具有重要的意义。柚皮苷的结构式
本发明经实验证实，柚皮苷对急、慢性支气管炎，咳嗽痰多等病症具有明显的疗效。
我们通过药理药效实验，对柚皮苷进行实验动物小白鼠的止咳实验。结果表明柚皮苷对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间，与空白对照组比较，均有显著的延长，在统计学上有显著差异；与阳性对照药物氢溴酸右美沙芬片比较，耐受时间延长，疗效较阳性对照药物氢溴酸右美沙芬片显著。
本发明的实验证明，柚皮苷不仅具有很好的治疗急、慢性支气管炎，咳嗽痰多的疗效，而且在小鼠动物实验中几乎没有表现出毒性。动物实验表明，当900mg/kg剂量的柚皮苷口服给药动物时，动物未见毒性反应，该剂量相当于人服用剂量为3-8g柚皮苷/kg体重。
综上所述，说明柚皮苷具有很好的止咳、化痰效果，未见毒副作用，能减轻非典病人的症状，因此，可用于制备支持性治疗非典型性肺炎的药物(柚皮苷药物)。
本发明上述所说的以柚皮苷为有效成分制备的用于支持性治疗非典型性肺炎的柚皮苷药物，其成分中可以含有0.1-100％wt.柚皮苷。所说的柚皮苷药物可以单纯由柚皮苷单体组成，或者由作为有效成分的柚皮苷与其他有效成分或/和常规的制药辅料组成。
上述所说的柚皮苷药物可通过选择适合相应剂型的常规辅料或者不加辅料，用常规方法制备成所需的不同剂型的药物制剂。加入的辅料可以为固体、半固体或者液体物质，作为柚皮苷的载体、赋型剂或者介质。因此，所说的柚皮苷药物制剂可以为片剂、粉剂、小药囊剂、甘香酒剂、混悬剂、乳剂、溶液、糖浆、气雾剂、软或硬胶囊、无菌注射液等各种剂型。
上述所说的柚皮苷药物的胶囊剂，其内含物含有0.5-100％wt.的柚皮苷；通常可由不少于0.5％wt.的柚皮苷与其他有效成分或/和各种常规辅料组成。所说的柚皮苷药物的片剂，其成分中含有不少于0.1％wt.的柚皮苷；可以由不少于0.1％wt.的柚皮苷与其他有效成分或/和各种常规辅料组成。
本发明的柚皮苷药物在0.1-500mg柚皮苷/kg体重/天对治疗气管炎，咳嗽痰多具有很好的疗效，优选的日剂量约为1-100mg柚皮苷/kg体重。
本发明的柚皮苷药物，具有良好的止咳效果，能有效对非典型性肺炎患者进行支持治疗。并且具有质量稳定、服用量小、疗效迅速等特点。
本发明所说的柚皮苷可以是从含柚皮苷的各种药材，例如枳壳，化橘红，枳实，柑橘，柠檬，葡萄柚，橘红，橙等各种药材中提取获得的柚皮苷粗品或柚皮苷单体(纯品)。提取的方法可以依照以下步骤进行药材粉碎，经过水提取一至多次，滤过，合并滤液；滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；洗脱液挥干溶剂，得柚皮苷粗品，多次重结晶，得柚皮苷单体(纯品)。
本发明所说的柚皮苷也可以根据Rosenmund(Rosenmund，Ber.，61，2608(1958))和Zemlen，Bognar(Ber.，75，648(1942))描述的方法以及其它化学方法进行合成得到。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
各实施例中所涉及的固体混合物中之固体，液体中之液体，以及液体中之固体的百分比分别是以wt/wt，vol/vol，wt/vol计算，除非另有说明。实施例1. 柚皮苷药物的止咳药理学实验1.实验动物NIH小鼠，雄性，体重18.2-21.7g，普通级标准，共60只。先将动物称重，编号，选择健康，体重在18.5-21.0g克的小鼠共45只。按体重大小排序，用随机分组法分成三组，每组15只。设阴性对照组，阳性对照组和柚皮苷药物样品组。
2.样品来源与处理1)空白对照组生理盐水，NaCl含量0.9％。
2)阳性对照组取氢溴酸右美沙芬两片溶解于20毫升生理盐水中，即得阳性对照氢溴酸右美沙芬溶液，氢溴酸右美沙芬浓度为1.5mg/ml。
3)柚皮苷样品组取柚皮苷适量，用生理盐水定容于容量瓶中，柚皮苷浓度为1.6mg/ml。所用柚皮苷样品为按照前面所述方法从中药材提取的柚皮苷单体，纯度为95％以上。
3.实验方法(浓氨水喷雾法)小鼠灌胃1小时后，开始接受喷雾。按一定时间喷入浓氨水气雾，喷雾结束，立即取出小鼠，观察有无咳嗽反应。观察一分钟内咳嗽次数，若1分钟内出现3次以上典型咳嗽动作(腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴，有时可有咳声)者，算作“有咳嗽”。否则算作“无咳嗽”。
4.实验过程用序贯法(上下法)求出引起半数小鼠咳嗽的喷雾时间(EDT50)。计算R值，若R值大于130％，说明药物有止咳作用。若R值大于150％，则表明有显著的止咳作用。计算公式如下
EDT50＝log-1c/n，式中n为动物数，c为rx值的总和，r为每剂量组的动物数，x为剂量(即喷雾时间)的对数。
5.实验结果经统计，各样品组半数咳嗽时间及止咳效果见表1。
表1.各样品的止咳效果
从柚皮苷样品和阳性对照药物氢溴酸右美沙芬，经口给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间比较，柚皮苷对小鼠耐受时间有显著的延长，比阳性对照药品氢溴酸右美沙芬的耐受时间长，在统计学上有显著差异。说明柚皮苷对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与氢溴酸右美沙芬比较，耐受时间延长，疗效显著。实施例2. 柚皮苷药物的化痰药理学实验1.动物NIH小鼠，雄性，体重17.9-22.1g，清洁级标准，合格证号粤检证字第2000A037号，2003年1月8日由第一军医大学实验动物中心提供。共60只。先将动物称重，编号，选择健康，体重在17.9-22.1克的小鼠共50只。按体重大小排序，用随机区组分组法分成五组，每组10只。设阴性对照，阳性对照和柚皮苷药物高、中、低三个剂量组。均按10ml/kg体重的灌胃量一次经口给药。
2.样品来源与处理(1)柚皮苷样品高剂量组取柚皮苷适量，用生理盐水定容于容量瓶中，柚皮苷浓度为14.4mg/ml。所用柚皮苷样品为按照前面所述方法从中药材提取的柚皮苷单体，纯度为95％以上。经口给药。
(2)柚皮苷样品中剂量组取柚皮苷适量，用生理盐水定容于容量瓶中，柚皮苷浓度为4.8mg/ml。所用柚皮苷样品为按照前面所述方法从中药材提取的柚皮苷单体，纯度为95％以上。经口给药。
(3)柚皮苷样品低剂量组取柚皮苷适量，用生理盐水定容于容量瓶中，柚皮苷浓度为1.6mg/ml。所用柚皮苷样品为按照前面所述方法从中药材提取的柚皮苷单体，纯度为95％以上。
(4)阳性药物采用痰咳净散剂，取0.2克溶解于10毫升生理盐水中，即得阳性对照痰咳净溶液，浓度为20mg/ml。给药剂量为200mg/kg。
(5)阴性对照组生理盐水，NaCL含量为0.9％。
3.实验方法(酚红法)(1)小鼠禁食不禁水12h。
(2)灌胃给药。按动物号顺序，每只小鼠灌胃后停3分钟，再灌另外一只，时间间隔为3分钟，每组10只总共灌胃时间为30分钟。
(3)各鼠灌胃后半小时，经腹腔注射5％酚红生理盐水溶液0.2ml。按顺序，即每一只小鼠腹腔注射酚红后3分钟，再注射另外一只，10只小鼠共30分钟。
(4)各鼠腹腔注射后半小时，按顺序脱颈椎处死小鼠，处死时间间隔3分钟。动物处死后，仰位固定于手术板上，剪开颈正中皮肤，分离气管，用小镊子支起气管。
(5)用大注射器吸取生理盐水冲洗气管外壁，洗去血液和气管外壁中的酚红，滤纸吸干洗液。
(6)先于气管分支处剪下气管，再于另一端甲状软骨上端剪下气管(环状甲状软骨包括在内)。
(7)将各气管段放入预先盛有1.5ml的5％ NaHCO3溶液试管中。
(8)在3分钟内完成上述气管分离剪切工作。再用同样方法处理第二只小鼠。方法如上。
(9)将各试管置涡流混合器上震荡2分钟，使气管段中的酚红释放出来。
(10)将各试管中溶液于721型分光光度计546nm处测OD值。
(11)将各试管含气管段放置过夜，24h后重测OD值。
(12)根据回归方程计算出酚红的含量。计算公式Y＝-0.135302794+14.19137583X。X为OD值，Y为酚红含量。
(13)根据酚红含量和动物体重计算出校正酚红含量，用SPSS8.0统计软件进行方差分析。
校正酚红含量＝酚红含量(ng)/小鼠体重(kg)4.结果判断将各组结果进行方差分析，当总体有差异时，如果阳性药物与对照组比较，酚红含量升高，且有显著性差异(P＜0.05)，确定实验可靠。再将各剂量组与对照组比较，酚红含量明显升高，且有显著性差异(P＜0.05)时，认为该剂量组有效。
5.实验结果经统计，各剂量组酚红排出量见表2。
表2.柚皮苷药物的化痰效果(X±S)
a校正酚红含量＝酚红含量/动物体重b化痰率＝给药组/空白对照组×100％酚红含量计算方法(ng)OD值×14.19137583-0.135302794本发明的柚皮苷药物对实验动物小鼠的化痰实验表明，本发明的柚皮苷药物高，中，低剂量组灌胃给药对小鼠支气管分泌液增加与空白对照比较，均显著增加，在统计学上有显著差异。与阳性药物痰咳净组比较，柚皮苷药物高，中剂量组对小鼠支气管分泌液有显著增加，在统计学上有显著差异。表明本发明的柚皮苷药物化痰效果优于阳性药物痰咳净。实施例3. 柚皮苷药物的毒理学实验在24±1℃的温度，65±5％的湿度条件下，选取7-8周龄，健康的清洁级NIH小鼠20只，雌雄各半，体重在20-22g。将饲料和水消毒，试验前和试验的观察期内，均按正常饲料条件饲养。
将柚皮苷溶解在0.5％Tween80中，浓度为900mg/ml，将该液体经口给药小鼠，给药剂量为0.2ml/20g小鼠体重。给药后观察1，4，8，12小时，以后每12小时观察一次。观察死亡情况，每天记录小鼠体重变化以及其它的症状。第10天，断颈处死小鼠，取各器官进行病理检查。
在第10天，全部小鼠存活，900mg/kg剂量的柚皮苷未见毒性反应。小鼠各器官病理检查正常，没有发现病变，10天内小鼠体重未见减轻。因此，说明本发明的柚皮苷药物在口服给药动物时未见毒性。实施例4.柚皮苷胶囊制剂按以下成分配比制备成明胶胶囊柚皮苷 100g干燥淀粉 40g微粉硅胶 10g将辅料与柚皮苷混合均匀，装入透明胶囊中，即得。装量150mg/胶囊。实施例5.柚皮苷片剂按以下成分配比制备成片剂柚皮苷750g淀粉722.5g淀粉浆(14％) 25.0g硬脂酸镁 2.5g总计 1500g将柚皮苷与淀粉均匀混合，加淀粉浆继续搅拌使成软材，用10目尼龙筛制粒，80-90℃通风干燥，干粒加入硬脂酸镁，经过12目筛整粒，混匀，压成片剂。共得5000片，每片片重约为0.3g。
权利要求
1.柚皮苷在制备用于支持性治疗非典型性肺炎药物中的应用。
2.按照权利要求1所述的应用，其特征是所说的柚皮苷是从含柚皮苷的药材中提取获得的柚皮苷粗品或柚皮苷单体。
3.按照权利要求1所述的应用，其特征是所说的柚皮苷的提取方法为将药材粉碎，经过水提取一至多次，滤过，合并滤液；滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；洗脱液挥干溶剂，得柚皮苷粗品；再经多次重结晶，得柚皮苷单体。
4.按照权利要求1所述的应用，其特征是所说的柚皮苷是通过化学方法合成得到的。
5.按照权利要求1，2，3或4所述的应用，其特征是所说的柚皮苷药物是成分中含有0.1-100％wt.柚皮苷的药物。
6.按照权利要求1，2，3或4所述的应用，其特征是所说的柚皮苷药物由单纯的柚皮苷组成，或者由作为有效成分的柚皮苷与其他有效成分或/和常规的制药辅料组成。
7.按照权利要求1，2，3或4所述的应用，其特征是所说的柚皮苷药物为胶囊剂，其内含物含有0.5-100％wt.的柚皮苷。
8.按照权利要求7所述的应用，其特征是所说的柚皮苷药物胶囊剂的内含物由不少于0.5％wt.的柚皮苷与其他有效成分或/和常规辅料组成。
9.按照权利要求1，2，3或4所述的应用，其特征是所说的柚皮苷药物为片剂，其成分中含有不少于0.1％wt.的柚皮苷。
10.按照权利要求9所述的应用，其特征是所说的柚皮苷药物片剂的成分由不少于0.1％wt.的柚皮苷与其他有效成分或/和常规辅料组成。
全文摘要
本发明涉及柚皮苷在制备用于支持性治疗非典型性肺炎的药物中的应用。以柚皮苷作为有效成分的柚皮苷药物具有良好的止咳化痰作用，对急、慢性支气管炎，急、慢性阻塞性肺气肿，重症呼吸衰竭综合症等，疗效显著，并且未见毒副作用；因此可用于制备支持性治疗非典型性肺炎的药物。
文档编号A61K9/48GK1468602SQ03126908
公开日2004年1月21日 申请日期2003年6月18日 优先权日2003年6月18日
发明者苏薇薇, 王永刚, 方铁铮, 彭维, 吴忠 申请人:中山大学