专利名称：山蜡梅油包和物作为制备消化系统疾病药原料的提取方法
技术领域：
本发明涉及中成药制备领域，尤其涉及到以山蜡梅油包和物作为制备消化系统疾病药原料的提取方法。
早在70年代，已有人对山蜡梅叶主要挥发油成份具有体外抑制金葡菌、绿脓杆菌作用的研究。77年版《中国药典》一部收载的“山蜡梅叶”及其制剂“山蜡梅茶”有祛风解表、清热解毒之功效，用于防治感冒，流行性感冒。中国中医药科技1996年第3卷第1期曾刊登了李萍等人的研究，表明通过体内抗菌试验，发现山蜡梅叶对抗金葡菌感染，体外抗菌试验，发现对多种细菌均有抑制作用，同时还证明有抗炎、解热、免疫增强作用，民间亦有一些偏方认为山蜡梅叶在消食化积方面有一定作用，但至今该药剂的使用方式仍停留于中药煎剂的水平上，尚未见形成中成药制剂形式的应用。
具体的方法如下取处方量山蜡梅干燥叶，加6倍量水，水蒸气蒸馏提取4h.，收集挥发油，将β-CD加入60℃蒸馏水中，制成饱和溶液，在600r/min条件下，按β-CD与挥发油6-10∶1(g∶ml)比例，缓慢滴加预先以适量乙醇溶解的山蜡梅挥发油，搅拌2h，静置过夜，过滤，得山蜡梅挥发油包合物，置于冷冻干燥机内，冷冻干燥24h.，取出，粉碎，过80目筛即得成品，其有效成份为含山蜡梅挥发油0.049-0.066ml/g。
山蜡梅油包和物是一种单味药制剂，在制药时只需一种中药材，采购、备料工艺简单，省时省力，易于生产，通过包合后可制成胶囊颗粒，易于服用，且有效地克服了山蜡梅油的刺激性。此外该药虽为单味药，但其不仅对消化系统疾病具有较好的治疗功能，同时对呼吸道疾病也有良好的疗效。
为了确认本发明所述的山蜡梅油制剂在治疗消化系统疾病方面的疗效，进行了以下的动物实验和临床试验，目的是了解山蜡梅油在治疗消化系统疾病方面的药理作用和效果，具体的方法与结果如下受试物山蜡梅油溶剂山蜡梅油胶囊水溶配成12.5％乳液，用底比稀释法稀释后分为三组处理，浓度分别为1.6％、0.8％、0.04％对照试剂蒸馏水、保济丸、元和正胃片；一、山蜡梅油包和物对蓖麻油所致小鼠泄泻的影响将小鼠50只禁食16小时后，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，即空白对照组、阳性药组、山蜡梅油三个剂量组(下各试验用药分组药剂量相同)。按组别分别灌胃0.5ml/20g不同受试物受试药，空白组灌等量溶剂，给药30分钟后每只小鼠灌胃蓖麻油0.2ml。单只入已铺滤纸铁丝笼中，记录各鼠在灌胃蓖麻油后1、2、3、4、5小时的湿粪数，检验各组湿粪数的差异，结果表明山蜡梅油制剂在大、中剂量不同的腹泻时段均有显著抑制作用，小剂量则在2小时有显著性差异。二、山蜡梅油包和物对正常小鼠肠推进作用的影响炭末法将禁食16小时小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。即空白对照组、阳性药保济丸组、山蜡梅油包和物制成胶囊，分大、中、小剂量，分别灌胃不同浓度受试物0.5ml/20g。空白对照组灌等量溶剂，灌胃给药30分钟后，每组小鼠灌胃10％活性炭0.5ml，20分钟后脱颈处死，打开腹腔，将幽门至回盲部肠管完整取出，不加牵引地将小肠平铺于玻璃板上，量取肠道全长及炭末前沿至幽门的长度，按下公式计算每只小鼠小肠推进率炭末推进距离/小肠总长度×100％并做t检验结果结果表明山蜡梅油对小鼠正常肠推进率无明显影响。三、山蜡梅油对新斯的明小鼠肠亢进的影响分组及给药同前，灌胃给药30分钟后每只小鼠下注射新斯的明0.1ml/kg，15分钟后灌胃10％活性炭，20分钟处死小鼠取小肠按前实验计算小肠推进率，并t检验比较各组差异性。结果表明山蜡梅油大剂量对新斯的明引起的小鼠肠蠕动亢进有显著抑制作用。四、山蜡梅油对大鼠胃分泌功能的影响实验用大鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，禁食24小时后，以大、中、小三种剂量的山蜡梅油包和物12.5％乳液灌胃给药，用乙醚轻度麻醉，剖腹，结扎幽门。立即经十二指肠分别按组别注入相应受试物和溶剂，缝合伤口后5小时处死动物。拆线打开腹腔，结扎贲门，摘取全胃。收集胃液于刻度离心管，以3000r/min×15min离心，记录胃液量，并进行胃液分析。
2、胃液总酸度及总酸排出量测定取离心上清胃液1ml置小烧杯中，加入托佛氏及酚酞指示剂各1滴，用定量0.02ml/L氢氧化钠溶液滴定管慢慢滴定，同时不断摇动直至微红色不退为止，即为总酸度溶定终点，记录滴定所消耗的氢氧化钠总毫升数。按下式计算总酸度和总酸排出量。
总酸度(mol/L)＝滴定消耗的氢氧化钠毫升数×10总酸排出量＝总酸度×每小时的胃液量。
1、蛋白酶活性测定采用Mett法，将内径1-2mm粗细均匀的毛细管截成10cm长洗净烘干。取鸡蛋清打匀后纱布过滤，将毛细血管内灌满蛋清在85℃热水中使蛋白凝固备用。实验时取胃液1ml加入50ml三角烧瓶中。加0.05mol/L盐酸15ml混匀后，放入蛋白管二根封好瓶口，在37℃恒温箱中孵育24小时。取出蛋白管，用尺量取蛋白管两端透明部分的长度，以四端之值求平均值，计算胃蛋白酶活性单位及胃蛋白酶排出量，并做组间t检验，结果表明用山蜡梅油进行十二指肠给药，对胃液分泌量、总酸排出量，有明显降低作用，而对胃蛋白酶无明显影响。五、山蜡梅油对大鼠应激性胃溃疡的影响将禁食24小时大鼠50只随即分成5组，每组10只，雌雄各半。按组别分别灌胃给于相应受试物，药后30分钟，用乙醚麻醉，将其仰卧固定在木板上，直立浸在恒温23℃水浴箱中，至水面齐剑突部应激20小时后处死动物，剖腹、结扎幽门和贲门后取出整个胃，由胃腺部注入1％甲醛溶液5ml。并将其在1％甲醛液固定10分钟，沿胃大弯剪开，用生理盐水洗去内容物，擦去凝血，可见深色点状和条索状溃疡，以游标尺测定溃疡指数，计算抑制率并做组间t检验，结果表明山蜡梅油对大鼠应激性溃疡具有显著抑制作用。六、安全性试验山蜡梅挥发油对小鼠灌胃，观察动物给药后即时反应，并连续观察14天，结果表明，小鼠灌胃给药的LD50为0.224ml/kg(0.192-0.250)95％的可信区间。
以下结合实施例对本发明的具体实施方法作出进一步详细的描述1、取处方量山蜡梅干燥叶，加6倍量水，水蒸气蒸馏提取4h.，收集挥发油和芳香水，将β-CD加入60℃蒸馏水和芳香水中，制成饱和溶液，在600r/min条件下，按β-CD与挥发油6∶1(g∶ml)比例，缓慢滴加预先以适量乙醇溶解的山蜡梅挥发油，搅拌2h，静置过夜，滤过，得山蜡梅挥发油包合物，置于冷冻干燥机内，冷冻干燥24h.，取出，粉碎，过80目筛，压片即得成品。
2、在按实施例1所得的饱和溶液中，在600r/min条件下，按β-CD与挥发油8∶1(g∶ml)比例，缓慢滴加预先以适量乙醇溶解的山蜡梅挥发油，搅拌2h，静置过夜，滤过，得山蜡梅挥发油包合物，置于冷冻干燥机内，冷冻干燥24h.，取出，粉碎，过80目筛，套胶囊壳即得成品。
3、在按实施例1所得的饱和溶液中，在600r/min条件下，按β-CD与挥发油10∶1(g∶ml)比例，缓慢滴加预先以适量乙醇溶解的山蜡梅挥发油，搅拌2h，静置过夜，滤过，得山蜡梅挥发油包合物，置于冷冻干燥机内，冷冻干燥24h，取出，粉碎，过80目筛即得成品。
权利要求
1.一种以山蜡梅油包和物作为制备消化系统疾病药原料的提取方法，它是由下述方法制取的以山蜡梅干燥叶，加6倍量水，水蒸气蒸馏提取3-5小时，收集挥发油，将β-CD加入60℃蒸馏水中，制成饱和溶液，其特征在于在所制得的饱和溶液中，按β-CD与山蜡梅挥发油6-10∶1(g∶ml)比例混合，搅拌2h，静置12小时，过滤，得山蜡梅挥发油包合物，以少量乙醇洗涤，以洗去未包合的挥发油，冷冻干燥24h.后，粉碎，过80目筛，即得疏松状白色包合物粉末。
2.根据权利要求1所述的以山蜡梅作为制备消化系统疾病药原料的提取方法，其特征在于上述提取工艺中，水蒸气蒸馏提取控制的最佳时间为4小时。
3.根据权利要求1或2所述的以山蜡梅作为制备消化系统疾病药原料的提取方法，其特征还在于上述提取工艺中，β-CD与山蜡梅挥发油混合最佳比例为8∶1(g∶ml)。
全文摘要
本发明涉及到一种以山蜡梅油包和物作为制备消化系统疾病药原料的提取方法，以山蜡梅干燥叶，用水蒸气蒸馏提取收集挥发油，将β－CD加入60℃蒸馏水，制成饱和溶液，在600r/min条件下，按β－CD与山蜡梅挥发油8∶1(g∶ml)比例搅拌、过滤，得山蜡梅油包合物，经冷冻干燥粉碎，即得成品。该药虽为单味药，但其不仅对消化系统疾病具有较好的治疗功能，同时对呼吸道疾病也有良好的疗效。
文档编号A61P1/04GK1476880SQ03129560
公开日2004年2月25日 申请日期2003年6月23日 优先权日2003年6月23日
发明者刘忠达, 袁宙新, 李 权 申请人:刘忠达