专利名称：银杏内酯配伍药物组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物化学等领域，具体而言，本发明涉及银杏内酯配伍药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术：
全世界十大疾病中精神抑郁症列第五位，预计到2020年将跃升到第二位，WHO的数字显示当前全球的抑郁症患者有8500万之众，预计到2005年，抑郁症的发病率将达到总人口的10％；并且每年还有1000万-2000万人的自杀念头，尽管抑郁症严重性如此大，但这类病人中并未获得充分的治疗，仅有53％的病人曾经用药物治疗，现抑郁症的病人得到适量药物治疗者不足10％。氟西丁、舍曲林、帕罗西汀等为SSRI类药物，是许多国家作为治疗抑郁症的首选有效药物，但性功能异常的发病率高达43％，主要不良反应为性功能障碍及性快感缺失，部分病人对其反应不佳，有多种副作用和禁忌症，使病人不能耐受，难以达到满意疗效，复发率高，而且各种抗抑郁药都有可能诱发躁狂。据最近对普通开业者病人的调查SSRI退出率约为11％。近10年来，新抗抑郁药的发明目的在于增加治疗效果、提高耐受性、减少药物相互作用、减少不良反应。
银杏(Ginkgo biloba L.)主要有效成份为黄酮和银杏内酯类化合物，用于治疗脑血管循环和末梢循环障碍，如心绞痛、冠心病、脑梗塞、脑中风等。吴春富等(吴春富，游松，刘雯等，“.银杏内酯和银杏提取物对纹状体和边缘系统多巴胺及其代谢产物含量的影响”，《中草药》，1995，16(5)253～254，262)进行了银杏内酯和银杏叶提取物对纹状体和边缘系统多巴胺及其代谢产物含量的的研究，提示银杏内酯和银杏叶提取物对大鼠纹状体和边缘系统DA代谢有一定抑制作用，并推测在银杏叶提取物对中枢多巴胺代谢的影响中，银杏内酯可能起重要作用。但银杏内酯至今尚未见抗动物实验性抑郁症的研究。我们对银杏叶抑郁有效部位进行了筛选和深入研究，我们比较了白果内酯、总内酯组合物、高活性提取物、银杏内酯A、B的混合物等四种银杏叶提取物抗抑郁作用强度，研究发现，总内酯组合物、GA与GB的混合物、高活性银杏叶提取物及BB对大鼠和小鼠均有抗抑郁作用，并且证实了总内酯组合物为抗抑郁药理作用最强，是银杏叶提取物治疗抑郁症的有效物质群；并进一步证实总内酯组合物比单体内酯效果好，是单体内酯非常合理的配伍，而且单体内酯之间存在一定的比例关系，有一个更佳比例。由此完成了本发明。
发明内容
本发明的目的是提供一种新型高效、安全、无明显副作用的抗抑郁药物一银杏内酯配伍药物组合物； 本发明的另一目的是提供银杏内酯配伍药物组合物的制备方法； 本发明的另一目的是提供银杏内酯配伍药物组合物用于制备治疗抑郁症的药物的用途； 本发明的另一目的是提供一种抗抑郁的银杏内酯配伍药物组合物。
本发明的银杏叶总内酯系从银杏叶(Ginkgo biloba L.)或该植物其他部位(如白果、根皮、茎枝等)中提取的萜内酯，其中主要含5种萜内酯化合物，银杏内酯A(Ginkgolide A；〔15291-75-5〕BN-52020；C20H24O9)、银杏内酯B(Ginkgolide B；〔15291-77-7〕BN-52021；C20H24O10)、银杏内酯C(GinkgolideC；〔15291-76-6〕BN-52022；C20H24O11)、银杏内酯J(Ginkgolide J；〔107438-79-9〕BN-52024；C20H24O10)及白果内酯(Bilobalide，C15H18O8)(以下分别简称GA、GB、GC、GJ及BB)。各内酯在总内酯中的含量，其中GJ占总内酯3％-15％，GC占总内酯8％-30％，BB占总内酯20％-65％，GA占总内酯15％-50％，GB占总内酯3％-40％。本发明人将提取得到的银杏叶总内酯进一步提纯得到GA、GB、GC、GJ及BB单体，再根据一定的比例将它们配伍，制成具有良好的抗抑郁症的药物组合物。
本发明银杏叶总内酯提取物的制备方法是 银杏叶粗粉，70％～80％(v/v)乙醇提取，回收溶剂，上大孔吸附树脂柱，水洗去杂质，10％～15％(v/v)乙醇洗脱去杂质后，改用60％～70％(v/v)乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收乙醇，上聚酰胺柱，水洗脱，收集水洗脱液，浓缩，醋酸乙酯提取。回收溶剂，或重结晶，真空干燥，得银杏叶总内酯提取物。
本发明银杏内酯单体化合物制备方法是 取银杏叶总内酯提取物采用硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮溶剂系统梯度洗脱，分部收集，TLC检测，相同成分的部份合并，浓缩，放置析出结晶，反复重结晶，可分别得到BB、GA、GB、GC、GJ五个，纯度在98％以上的内酯单体化合物。
本发明银杏内酯配伍组合物制备方法是 取银杏内酯单体化合物按一定的比例将它们配伍，混合均匀制成银杏内酯配伍组合物。
本发明与其他从银杏叶中提取萜内酯的方法及其得到的产品不同，其显著特点是本发明采用了大孔吸附树脂与聚酰胺柱串联方法提取处理。如果单用大孔吸附树脂，除了无法达到高含量(＞75％)的总内酯外，更无法除去银杏叶提取物中的黄酮部分，而该黄酮部分非但无抗抑郁活性，相反，还呈现出拮抗作用和明显的抑制食欲作用。本发明采用大孔吸附树脂与聚酰胺柱串联方法提取处理，聚酰胺柱将大孔吸附树脂柱洗脱下来的黄酮化合物牢固吸附在柱上，而萜内酯却很容易被水洗脱下来，从而达到完全分离的目的，制备得到本发明的银杏叶总内酯提取物。尽管李新岗等(李新岗，韦玮，陈薇.富含银杏内酯的银杏叶干浸膏制备工艺.中国医药工艺杂志，1998，29(1)8)也采用了大孔吸附树脂与聚酰胺柱串联方法，但与本发明人聚酰胺柱串联目的根本不同，他们旨在去除鞣质，所以大孔吸附树脂95％乙醇洗脱流出液，不经回收乙醇直接上聚酰胺柱，这是与本发明采用大孔吸附树脂与聚酰胺柱串联方法不同的关键所在，结果流出液中萜内酯与黄酮成分同时被洗脱，得到的产品黄酮含量27.4％，银杏内酯含量10.6％；不同之二本发明人聚酰胺柱采用水洗脱，而李新岗等采用95％乙醇洗脱；不同之三本发明人采用聚酰胺柱水洗脱液浓缩，醋酸乙酯提取的纯化与精制工艺，只有通过这一步骤方能达到总内酯含量＞75％目标；而李新岗等没有设计这一步骤。因此李新岗等采用大孔吸附树脂与聚酰胺柱串联方法得到的产品，更不用说具有银杏叶总内酯提取物抗抑郁症的活性强度了。采用上述方法得到的银杏叶总内酯提取物经重结晶后，总内酯的纯度在90％以上，由此而保证了硅胶柱色谱分离单体内酯的效果，使化合物的含量在98％以上。
根据本发明的制备方法制备得到的银杏内酯单体化合物，GJ，GC，BB，GA和GB按一定比例进行配伍，得到的银杏内酯配伍药物组合物对本发明的抗抑郁作用很有益。
本发明制备得到的银杏内酯配伍药物组合物中，各内酯在总内酯中的重量含量其中GJ的含量是3％-15％，GC的含量是8％-30％，BB的含量是20％-65％，GA的含量是15％-50％，GB的含量是3％-40％； 本发明优选的银杏内酯配伍药物组合物是，各内酯在总内酯中的重量含量其中GJ的含量是3％-10％，GC的含量是10％-20％，BB的含量是38％-55％，GA的含量是18％-30％，GB的含量是4％-15％； 本发明更优选的银杏内酯药物组合物是，各内酯在总内酯中的重量含量其中GJ的含量是3％-5％，GC的含量是12％-20％，BB的含量是40％-52％，GA的含量是20％-30％，GB的含量是5％-15％。
本发明的银杏内酯配伍药物组合物具有良好的抗抑郁效果，可以用于制备治疗抑郁症的药物。
本发明研究发现，银杏内酯配伍药物组合物(以下简称总内酯组合物)、GA与GB的混合物(纯度≥98％，GA含量略高于GB)、BB(纯度≥98％)及高活性银杏叶提取物(其中总内酯12％，总黄酮48％)对大鼠和小鼠均有抗抑郁作用，并且总内酯(灌胃给药剂量小鼠7.2mg/kg、大鼠3.6mg/kg)的药理作用与其它3种比较均有显著性差异P＜0.01，而与丙咪嗪(灌胃给药剂量小鼠50mg/kg、大鼠25mg/kg)比较则没有显著性差异(P＞0.05)。它们的药理作用强度总内酯组合物＞GA与GB的混合物＝高活性银杏叶提取物＞BB。本发明银杏内酯配伍药物组合物对多种抑郁症动物模型均十分有效，能减少悬尾小鼠的不动时间、减少强迫游泳小鼠的不动时间、能增加电击所致抑郁大鼠的成功逃跑次数，作用与丙咪嗪相似。GA与GB的混合物能加重大鼠的焦虑，BB则有抗焦虑作用。本发明制备得到的总内酯组合物相当于银杏叶萜内酯的复方制剂，其中BB有抗焦虑作用，有助于焦虑抑郁患者的治疗，同时又拮抗GA与GB混合物加重焦虑的副作用，由此可见，本发明制备得到的银杏内酯配伍药物组合物中，各内酯配比对抗抑郁作用有显著意义，萜内酯配伍非常合理。高活性银杏叶提取物中含总内酯12％，虽其中的总内酯量与本发明制备得到的银杏内酯配伍药物组合物给药量相等，但前者抗抑郁作用明显不如本发明银杏内酯配伍药物组合物，从主成分分析，高活性银杏叶提取物比总内酯组合物主要多黄酮部分，由此推测高活性银杏叶提取物中的黄酮部分非但无抗抑郁活性，相反，似乎还呈现出拮抗作用，此外，高活性银杏叶提取物中的黄酮部分尚有明显的抑制食欲作用。所以银杏叶提取物中萜内酯是最佳有效部位，而且进一步证明BB、GA与GB等单体化合物虽有抗抑郁的活性，但强度均不如总内酯组合物，同时还会出现不同副作用，它们按生源比例结合起来却呈现出药效的协同作用，而副作用则呈现出拮抗作用，副作用明显降低，即增效减毒。总内酯组合物的优点是有效剂量低(为丙咪嗪的1/7)，安全性大，副作用小，没有明显的如GA与GB混合物致焦虑和致木僵作用，没有明显的如高活性银杏叶提取物抑制食欲作用，更没有丙咪嗪严重抑制食欲作用和引起平衡障碍作用，尤其是受到反复电击的情况下，总内酯组合物组动物的一般状况好于其它各组。
此外，总内酯组合物、GA与GB混合物及高活性银杏叶提取物3种提取物对大鼠空间位置的记忆获得、记忆保持和再现有促进作用，而BB则作用不显著。银杏叶4种提取物均有镇静作用，但并不影响动物的运动、进食等活动。
本发明的银杏内酯配伍药物组合物可以与可药用辅料组合，被制成药物组合物，用于治疗抑郁症。这种药物组合物可以是片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸、注射剂、口腔速释制剂、缓控释制剂等形式。
具体实施例方式 下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。另外，在本发明中，(v/v)表示体积比浓度或者体积比；(w/w)表示重量比浓度或者重量比；(w/v)表示重量/体积比浓度或者重量/体积比，其对应的单位是(克/毫升)；(rpm)表示每分钟的转数(转/分钟)；(d)表示天，(h)表示小时，(min)表示分钟，(s)表示秒。除非另有说明，本发明的百分数是重量百分数。
实施例1本发明银杏叶总内酯提取物的制备 取银杏叶粗粉2kg，加60％乙醇20升，加热回流、提取2次，每次3小时，回收乙醇，上DM-130大孔吸附树脂(山东鲁抗医药股份有限公司树脂分厂生产)柱，60％乙醇冼脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，上聚酰胺柱(柱层析，上海化学试剂公司出品)，水洗脱，收集水洗脱液，减压浓缩至适量，用醋酸乙酯提取，回收溶剂，80℃真空干燥，得银杏叶总内酯3.8g，总内酯含量83.38％。各内酯在总内酯中的含量，其中GJ的含量是3.62％，GC的含量是12.70％，BB的含量是49.59％，GA的含量是27.27％，GB的含量是6.83％。
实施例2本发明银杏叶总内酯提取物的制备 取银杏叶粗粉2kg，加70％乙醇24升，加热回流、提取2次，每次3小时，回收乙醇，上DM-130大孔吸附树脂(山东鲁抗医药股份有限公司树脂分厂生产)柱，10％乙醇洗去杂质后，改70％乙醇冼脱，收集70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上聚酰胺柱(柱层析，上海化学试剂公司出品)，水洗脱，收集水洗脱液，减压浓缩至适量，用醋酸乙酯提取，水洗醋酸乙酯提取液，无水硫酸钠脱水，回收溶剂，重结晶，80℃真空干燥，得银杏叶总内酯3.10g，总内酯含量93.13％。各内酯在总内酯中的含量，其中GJ的含量是4.11％，GC的含量是15.08％，BB的含量是45.64％，GA的含量是25.14％，GB的含量是10.03％。
实施例3本发明高活性银杏叶提取物的制备 取银杏叶粗粉2kg，加70％乙醇24升，加热回流、提取2次，每次3小时，回收乙醇，上DM-130大孔吸附树脂(山东鲁抗医药股份有限公司树脂分厂生产)柱，70％乙醇冼脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，上聚酰胺柱(柱层析，上海化学试剂公司出品)，水洗脱，收集水洗脱液，减压浓缩至适量，用醋酸乙酯提取，回收溶剂，80℃真空干燥，得银杏叶总内酯提取物4.5g，总内酯含量87.13％，备用。水洗脱后的聚酰胺柱，用10％乙醇洗去杂质后，用稀醇洗脱，真空浓缩，喷雾干燥，得银杏叶总黄酮提取物13.7g，，总黄酮含量55.87％，加前面所得的银杏叶总内酯提取物2.2g，混合均匀，得高活性银杏叶提取物15.9g，其中总内酯含量12.05％，各内酯在总内酯中的含量，其中GJ的含量是3.62％，GC的含量是14.67％，BB的含量是45.68％，GA的含量是26.04％，GB的含量是9.99％；总黄酮含量48.04％。
实施例4本发明银杏内酯单体化合物的制备 取实施例2制备的银杏叶总内酯提取物采用硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮溶剂系统梯度洗脱，分部收集，TLC检测，相同成分的部份合并，浓缩，放置析出结晶，反复重结晶，真空干燥，研细，分别得到BB、GA、GB、GC、GJ五个单体。经熔点、红外、质谱、核磁共振等波谱数据分析，并与标准品对照，一一鉴定了化合物结构；采用HPLC法测得内酯单体化合物纯度在98％以上。
实施例5本发明银杏内酯配伍药物组合物的制备 分别取实施例4制备的各银杏内酯单体化合物，按实施例3中高活性银杏叶提取物中各内酯在总内酯中的含量(其中GJ的含量是3.62％，GC的含量是14.67％，BB的含量是45.68％，GA的含量是26.04％-，GB的含量是9.99％)配方，配制成银杏内酯配伍药物组合物，混匀，即得。
实施例6本发明银杏内酯配伍药物组合物的制备 分别取实施例4制备的各银杏内酯单体化合物，按各内酯在总内酯中的含量，其中GJ的含量是4.66％，GC的含量是18.21％，BB的含量是38.32％，GA的含量是27.57％，GB的含量是11.24％配方成银杏内酯配伍药物组合物，混匀，即得。
实施例7本发明银杏内酯GA∶GB混合物的制备 分别取实施例4制备的银杏内酯单体化合物GA，GB，按(GA∶GB＝57∶43)混合均匀，即得。
实施例8本发明银杏内酯配伍药物组合物抗抑郁作用研究 材料 白果内酯(BB)纯度为≥99％(系由实施例4制备) 银杏内酯配伍药物组合物由实施例5制备；以下简称总内酯组合物 内酯GA∶GB(57∶43)混合物纯度为≥98％(GA的比例略高GB的混合物，系由实施例7制备)；以下简称GA∶GB 高活性银杏叶提取物由实施例3制备；以下简称高活性。
用蒸馏水分别按顺序将上述银杏叶提取物溶成0.675mg.ml-1，1.15mg.ml-1，0.675mg.ml-1，8.2mg.ml-1的药液灌胃用； 盐酸丙咪嗪25mg/片由上海九福药业公司生产，批号990409，同样溶成12.5mg.ml-1和5mg.ml-1的药液灌胃用； SD大鼠、昆明种小鼠。
方法和结果 1.小鼠悬尾试验 选取体重20～24g的雄性小鼠60只，按体重随机分为6组，即生理盐水对照组(NS)、盐酸丙咪嗪组、BB组、总内酯组合物组、GA∶GB组和高活性组，每组10只。按体重分别灌胃给药，剂量见表1，生理盐水组灌服等容量生理盐水，每天一次，共5天。于第5次给药后30分钟开始实验。实验时将小鼠尾端2cm的部位贴在一木棍上，使动物成倒挂状态，其头部离地面约5cm。两侧用板隔开动物视线，记录动物6min内后3min的不动时间。给药前试验1次，给药5天后试验一次。计算动物自身两次不动时间的差值经1g(X+86)转换后进行统计学分析，结果见表1。
4种银杏叶提取物用药后小鼠悬尾不动时间与NS组比较有所延长，经F检验分析发现，4个用药组动物的用药前后不动时间的差值与NS组比较有显著性差异，P＜0.01，即这4种银杏叶提取物在此模型上有抗抑郁作用。
表1四种银杏叶提取物对小鼠悬尾试验的影响(n＝10，
ANOV统计分析法 2.小鼠强迫游泳试验 选取体重20～24g的雄性小鼠60只，分组及给药同试验1。剂量见表2。于第5次给药后30分钟开始实验。将小鼠放入水深10cm的量筒中(高20cm，直径14cm)，水温30℃。记录动物6min内后4min的不动时间。给药前试验一次，给药5天后试验一次。计算动物自身两次不动时间的差值经1g(X+45)转换后进行统计学分析，结果见表2。
结果证实，受试的4种银杏叶提取物及丙咪嗪均能延长小鼠强迫游泳时的不动时间，与生理盐水组比较，可延长18.09～34.14％。经方差分析，6个实验组小鼠不动时间差值显著不同，有非常显著性统计学意义(P＜0.01)。由经Newman-Keuls统计分析，丙咪嗪及4种银杏叶提取物减少小鼠强迫游泳中的不动时间分别与生理盐水比较有显著统计学意义(P均＜0.01)。又丙咪嗪、总内酯组合物组药效比GA∶GB组强(P均＜0.01)， 见表2。
表2四种银杏叶提取物对小鼠强迫游泳试验的影响(n＝10，
※※P＜0.01与NS组比较 ANOV及Newman-Keuls统计学分析法 3.大鼠抗抑郁试验 用获得性无助电击模型观察药物的抗抑郁作用。选取雄性大鼠70只，体重180～200g，按体重随机分为7组，即正常对照组、生理盐水对照组(模型组，NS)、BB组、总内酯组合物组、GA∶GB组、高活性组和丙咪嗪组，每组10只。按体重分别灌胃给药，剂量见表3，生理盐水组灌服等容量生理盐水，每天一次，共35天。于第30次给药30分钟后开始实验。实验第一天进行“无助诱发”，用一20×10×10cm3的底部为铜栅的笼子，给动物施以60次随机的无法逃避的足部电击(0.8mA，15s，每1min±15s给一次)，正常对照组大鼠放入笼中相同时间但不给电击。48h后开始进行回避训练。用60×20×30cm3的穿梭箱，底部铜栅间隔为1.0cm。将动物单个地放入穿梭箱一端，让其适应5min后进行20次的回避训练，每次间隔30s。训练时先给予一个灯光信号，允许动物在此期间达另一端以逃避电击，若无反应发生，则光信号再持续出现3s，同时还出现一个0.8mA，3s的足部电击，若仍无反应发生，电击和光信号立即停止并记作一次逃避失败。训练共进行5天。记录每只大鼠每天训练次数和逃避成功次数，对第5次训练结果进行统计分析。
根据试验结果分析，NS组与正常组比较，大鼠成功逃避次数明显减少(t＝3.99，P＜0.01)，说明大鼠抑郁模型是成功的。试验用4种银杏叶提取物及丙咪嗪对无可逃避电击造成的抑郁状态大鼠均有改善作用，以总内酯组合物组尤其显著，经方差分析，7个实验组大鼠逃避成功次数显著不同，有非常显著统计学意义(P＜0.01)。又经Newman-Keuls统计法进一步分析，4种银杏叶提取物及丙咪嗪对抑郁大鼠的作用与生理盐水比较有显著统计学意义(P均＜0.01)，并且总内酯组合物的药理作用与其它3种提取物比较均有显著差异，P均＜0.01，而与丙咪嗪比较则没有显著差别(P＞0.05)。另3种提取物间药效以BB为弱，GA∶GB及高活性提取物间药效则未见显著差别。这3种提取物药效均较丙咪嗪为弱(P均＜0.01)。见表3。
表3四种银杏叶提取物对大鼠抑郁状态的影响(n＝10，
※※P＜0.01，与NS组比较，△△p＜0.01，与总内酯组合物组比较。ANOV及Newman-Keuls统计分析法 实施例9本发明银杏内酯配伍药物组合物抗焦虑作用研究 材料 同实施例6。
方法和结果 用开场饮水试验观察药物对大鼠焦虑状态的影响。选取雄性大鼠50只，体重180-200g，按体重随机分为5组，即生理盐水对照组(NS)、BB组、总内酯组合物组、GA∶GB组和高活性组，每组10只。按体重分别灌胃给药，剂量见表4，生理盐水组灌服等容量生理盐水，每天一次，共21天。于第21次给药30分钟后开始实验。用一36×36×36cm3的透明有机玻璃箱，底部为黑色，顶部敞开，箱中央倒挂一水瓶，离地10cmm，箱上方离地50cm处设一25W白炽灯照明用，除一面外，开场其它三面都用黑色隔板遮拦以排除额外的可见刺激。实验前3天，大鼠每天1hr(3:00pm-4:00pm)，并被抚摸至少1分钟。实验时将大鼠置于实验箱中央10分钟，观察并记录大鼠饮水潜伏期和饮水时间。为便于统计，未喝水的大鼠喝水潜伏期按600s计算，结果经1g转换。喝水时间亦经1g(X+1)转换。
结果表明，大鼠在本实验中均呈现不同程度的焦虑状态。4种银杏叶提取物对大鼠的焦虑状态影响不同。F检验分析表明，有喝水行为的4组动物喝水潜伏期有显著差别(P＜0.05)。4种银杏叶提取物中，BB、总内酯组合物及高活性组动物喝水时间较生理盐水组动物喝水时间长，用T检验方法将BB组与NS比较，有显著意义，P＜0.05，即BB可显著改善大鼠焦虑状态。而GA∶GB则加重了大鼠的焦虑，10只动物中没有一只有喝水行为。见表4。
表4四种银杏叶提取物对大鼠焦虑状态的影响(n＝10，
※P＜0.05 T-test及ANOV统计分析法 实施例10本发明银杏内酯配伍药物组合物促智作用研究 材料 同实施例6。
方法和结果 用Morris水迷津观察药物的促智作用。选取雄性大鼠50只，体重170～190g，按体重随机分为5组，生理盐水对照组(NS)、BB组、总内酯组合物组、GA∶GB组和高活性组，每组10只。按体重分别灌胃给药，剂量见5，生理盐水组灌服等容量生理盐水，每天一次，共30天。于第25次给药30分钟后开始实验。Morris水迷津直径150cm，高60cm，水深50cmm，平台为10×10cm大小，水温30℃。实验时水面放置适度大小的塑料泡沫小块。试验第一天，将平台置于第I象限并露出水面，于第III象限放大鼠入水，让其寻找平台并登上平台共2次，每次停留5s以上。试验第二天，将平台隐于水中，仍于第III象限放大鼠入水，让其寻找平台，记录寻找平台时间一次，180s后未能找到则记为180s。试验第三天，于第IV象限放大鼠入水，让其寻找平台并记录寻找平台时间一次。试验第四天，移去平台，于第III象限放大鼠入水，让其寻找平台，记录动物经过平台所在位置的次数。结果经1g转换后进行方差分析。
4种银杏叶提取物能增加大鼠经过平台所在位置的次数。依试验结果作方差分析，试验用5组动物第一天、第二天寻找平台时间有显著性差异，(P＜0.05和P＜0.01)。第四天测试经过平台次数也有显著性差异，P＜0.01。用T检验法进一步分析，总内酯组合物组、GA∶GB组和高活性组与生理盐水比较均有一次测试结果有显著统计学意义(P＜0.01)，而BB第一天测试成绩较好，与生理盐水组比较有显著差异(t＝2.89，P＜0.01)，而后两天渐差，第四天测试成绩差于生理盐水组，但统计学比较无显著差异(P＞0.05)，见表5。
表5四种银杏叶提取物对大鼠在Morris水迷津行为的影响(n＝10，
※※P＜0.01与NS组比较ANOV及T-test统计分析法 实施例11本发明银杏内酯配伍药物组合物镇静作用研究 材料 同实施例6。
方法和结果 光电管法测定药物的中枢镇静作用。选取雄性小鼠50只，体重19-21g，按体重随机分为5组，即生理盐水对照组(NS)、BB组、总内酯组合物组、GA∶GB组和高活性组，每组10只。按体重分别灌胃给药，剂量见6，生理盐水组灌服等容量生理盐水，每天一次，共4天。于第二次给药后30分钟，用小鼠自发活动记录仪(直径17cm，高10cm)记录小鼠在5分钟内自发活动次数，每天一次，共测3次。
试验结果证实，3次测试中，4种银杏叶提取物对小鼠均有镇静作用，GA∶GB组第一次测定结果与生理盐水组比较，抑制率达54.30％。第一次测试结果经方差分析，5个实验组小鼠活动次数显著不同，有显著统计学意义(P＜0.01)。又经Newman-Keuls统计分析，4种银杏叶提取物对小鼠的镇静作用与生理盐水比较有显著统计学意义(P＜0.01)，但这种镇静作用在4种提取物间差别没有统计学意义(P＜0.05)，见表6。
表6四种银杏叶提取物对小鼠的镇静作用(n＝10，
※※P＜0.01与NS组比较 ANOV及Newman-Keuls统计分析法 实施例12片剂 片剂处方 银杏内酯配伍组合物(由实施例6制备)0.3kg 玉米淀粉 0.6kg 羟丙基淀粉 0.06kg 微晶纤维素 0.02kg 硅酸铝 0.02kg 低取代羟丙基纤维素 0.03kg 硬脂酸镁 0.0003kg 制法 将银杏叶总内酯提取物(过80目筛)，加淀粉(80℃烘)、羟丙基淀粉、微晶纤维素、硅酸铝、低取代羟丙基纤维素置流化床制粒机中喷雾2％HPMC酒精制粒，过14目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压10000片，即得。
实施例13胶囊 胶囊处方 银杏内酯配伍组合物(由实施例6制备)0.3kg 淀粉 0.45kg 微晶纤维素 0.025kg 硬脂酸镁 0.004kg 制法 将银杏叶总内酯提取物(过80目筛)，加淀粉(80℃烘)、微晶纤维素、硬脂酸镁，混匀，分装于10000粒胶囊中，即得。
权利要求
1.一种银杏内酯配伍药物组合物，其特征在于其中银杏内酯J的重量含量是3％-15％，银杏内酯C的重量含量是8％-30％，白果内酯的重量含量是20％-65％，银杏内酯A的重量含量是15％-50％，银杏内酯B的重量含量是3％-40％。
2.根据权利要求1的银杏内酯配伍药物组合物，其中银杏内酯J的重量含量是3％-10％，银杏内酯C的重量含量是10％-20％，白果内酯的重量含量是38％-55％，银杏内酯A的重量含量是18％-30％，银杏内酯B的重量含量是4％-15％。
3.根据权利要求2的银杏内酯配伍药物组合物，其中银杏内酯J的重量含量是3％-5％，银杏内酯C的重量含量是12％-20％，白果内酯的重量含量是40％-52％，银杏内酯A的重量含量是20％-30％，银杏内酯B的重量含量是5％-15％。
4.根据权利要求1-3之一的银杏内酯配伍药物组合物的制备方法，该方法包括取萜内酯银杏内酯J、银杏内酯C、白果内酯、银杏内酯A和银杏内酯B单体化合物按比例配伍混合制备而成。
5.根据权利要求1-3之一的银杏内酯配伍药物组合物用于制备治疗抑郁症的药物的用途。
6.一种治疗抑郁症的药物组合物，其含有根据权利要求1-3之一的银杏内酯配伍药物组合物和可药用辅料。
7.根据权利要求6的药物组合物，其是片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸、注射剂、口腔速释制剂或缓控释制剂。
全文摘要
本发明一种新型高效、安全、无明显副作用的抗抑郁药物－银杏内酯配伍药物组合物，系从银杏叶(Ginkgo biloba L.)或该植物其他部位如白果、根皮、茎枝等中提取、分离、纯化的5种萜内酯化合物，按一定比例配伍混合制备而成。其中GJ占总内酯3％－15％，GC占总内酯8％－30％，BB占总内酯20％－65％，GA占总内酯15％－50％，GB占总内酯3％－40％，各内酯配比对抗抑郁作用有显著意义。银杏内酯配伍药物组合物对多种抑郁症动物模型均十分有效，其优点是有效剂量低，安全性大，副作用小。此外，银杏内酯配伍药物组合物对空间位置的记忆获得、记忆保持和再现有促进作用。本发明还涉及银杏内酯的制备方法、用途和药物组合物。
文档编号A61K9/00GK1977840SQ20051012579
公开日2007年6月13日 申请日期2005年12月5日 优先权日2005年12月5日
发明者杨义芳 申请人:浙江海正药业股份有限公司, 上海医药工业研究院