增加动物有机体的蛋白质浓度的制作方法

专利名称：：增加动物有机体的蛋白质浓度的制作方法增加动物有机体的蛋白质浓度描述本发明涉及羟基丙二酸及其衍生物用于制备适于增加动物有机体蛋白质比例的制品的用途。本发明还涉及羟基丙二酸或包含其衍生物的制品在动物饲料或人类食品中的用途。本发明的其他实施方案可自权利要求、说明书及实施例推导出。当然，本发明主题的上述特性^发明主题待下文解释的特性不仅可用于每种情况下已阐述的组合，而且可用于其他组合中，而不偏离本发明的范畴.早在20世纪50年代在大鼠脂肪新生的研究范围中已首次阐明羟基丙二酸(2-羟基丙二酸)对于动物代谢的生理活性(WessonLGLEndocrinology.1950年10月；47(4):302-4)。从该研究的结果中推断若实验动物接受低脂肪但高糖类的饮食，则羟基丙二酸抑制糖类向脂肪酸转化。由于脂肪新生作用实际上对人类不起作用(因高糖原储存能力)，因而由Wesson在大鼠中观察到的生理效应对于人体的适用性是不可靠的，这得到20世纪80年代研究的证实(Archeson等人，AmJClinNutr.1988年8月；48(2):240隱7)。但较近的研究证实羟基丙二酸可作用为L-苹果酸类似物，并且因此抑制苹果酸转化酶。例如，已检测到羟基丙二酸对于人体细胞溶J!^线粒体苹果酸酶的直接抑制活性(Chang等人，ArchBiochemBi叩hys.1992年8月1日；296(2):468-73)，并且还已经检测到其对于来自巻枝毛霉(Mucorcircinelloides)的苹果酸酶、苹果酸脱氢酶;SjVTP:柠檬酸裂合酶的直接抑制*活'性(Savitha，WorldJournalofMicrobiology&Biotechnology16:513-518,2000)。由于已知ATP:柠檬酸裂合酶是微生物脂肪酸生物合成的重要酶，并且还猜测苹果酸酶参与提供月旨肪酸生物合成的还原等价物，因此通过体内抑制作用来研究羟基丙二酸在真菌巻枝毛霉的脂肪酸生物合成中的作用.但这些研究表明羟基丙二酸的体内抑制活性不足以对此有机体的脂质代谢起到可以检测的作用。无论如何，酰基酯化的羟基丙二酸衍生物对人体代谢具有生理效应的事实公开于申请DE2806804中。该申请中描述了因为羟基丙二酸酰基酯作为底物类似物，其抑制人体脂肪酶的活性。此文献推测由于羟基丙二酸酯对脂肪酶的抑制作用，因而摄入的食物脂肪将不再裂解且因此未消化即排出体外。此外从现有技术中可得出如下结论即含有羟基丙二酸的制品可用于治疗人类皮肤角质化病症(US3，988，470)及骨代谢紊乱(Casdli等人，JBoneMineralRes.1977年6月；12(6):972誦81;WO94/10127).WO00/48596描述了用于治疗动物的抗生素阿莫西林(amoxycillin)的溶液或固体混合物。在这些制品中亦可添加羟基丙二酸来(例如)改善口感及可消化性。在名为"SlimBeautyCapsule"的产品的市场销售中，提到此产品中存在羟基丙二酸，该产品包含极不相同植物属的提取物混合物。此外，应注意羟基丙二酸以及其他不饱和脂肪酸对人体代谢具有导致脂肪聚集减少的作用.根据此公开内容，额外存在于"SlimBeautyCapsule"中的组分Chromax具有增加肌肉量的活性.尽管营养意识日益增强，但我们的社会中患营养病症的数量仍持续上升。营养不良最常见的后果为超重(肥胖症)，其通常是增多的摄食及因此产生的脂肪储存的后果.营养病症对年轻人的影响也愈来愈大.2001年用于营养病症的花费大约为1450亿德国马克。大体上有两种策略可有助于克服此问题。首先为采取预防性措施来避免营养病症的发生，其次为通过特别饮食(包括与合适的辅助制品组合)来治疗已经存在的病症。消费者对于食物的日益增长的敏感性已经引起其购买行为的变化。对于低脂肪肉类需求的变化改变了畜牧业的饲养目标；举例而言，已从高脂肪比例变至高瘦肉比例。因此，(例如)畜体质量、畜体中肌肉类肉的比例及瘦肉的比例对于销售来说至关重要。此外，对于用来减轻体重或防止由于多余的脂肪积累而体重增加的制品存在极大需求.就此而论，对于"功能性食物"产品的需求亦已增加。"功能性食物，，涵盖以添加某些营养素/成分的方式对其加以改变，使之具有特定的健康用途或益处(例如有助于维持合适体重)的食物。因此"功性能食物"是不但特定有利地作用于已存在的健康危险，而且积极介入有^L体并且因此具有类似药物的作用的食物。本发明的目标是鉴定并且提供影响动物有机体蛋白质含量的物质，并且还提供基于此物质的用于动物U类营养的制品。在这种情况下尤为感兴趣的是提供一种系统，其使增加动物有机体的蛋白质比例及因此提高农畜动物的瘦肉比例成为可能。同样还可实现人体"瘦体重"的增加，瘦体重意指减去动物有机体的脂肪部分后其所有质量组成的和。令人惊奇的为已经发现本发明的目的已通过所要求保护的用途达成.因此本发明涉及羟基丙二酸、其衍生物或其混合物(下文中亦总结为"化合物T，，)用于制备适于增加动物有机体的蛋白质比例的制品的用途.本发明特别优选的化合物T是羟基丙二酸。本发明所用的制品还可包含羟基丙二酸的盐或羟基丙二酸衍生物的盐。优选的羟基丙二酸的盐或羟基丙二酸衍生物的盐为铵盐、钾盐、钠盐、钓盐或镁盐。该制品不仅可只包含化合物T，还可以包含不同(例如两种或更多种不同)化合物T的混合物.本发明所指的羟基丙二酸衍生物包含通式l的所有物质R1—f—OR3COOR4式i其中取代基及变量彼此独立地具有如下含义R1氢、C广C2o國烷基；R2氢、Ci-C2o酰基、C!-Ci烷基、d-Cr烷IU^乙基、烯丙基或对曱氧千基、碱金属或碱土金属、铵或d-do烷基铵阳离子；R3氢、d-C2o絲、d-Ci烷基、C广Cr烷IL&乙基、烯丙基或对曱氧节基、碱金属或碱土金属、铵或d-do烷基铵阳离子；R4氢、d-C2o絲、CrCi烷基、d-Cr烷緣乙基、烯丙基或对甲氧节基、碱金属或碱土金属、铵或d-do烷基铵阳离子。合成化合物T的方法是本领域技术人员已知的且在现有领域中充分描述(参见例如B.Bak，JustusLiebigsAnnalenderChemie，537，286(1939);P.Chang和S丄.Wu，Chem.Abstr.52，14567(1958);WO94/10127;TetrahedronLetters,巻39(18)，1998)。但化合物T原则上还可使用专业人员通常已知的方法合成。在一个实施方案中，除化合物T以外，制品可包含其他组分。在此其他组分的选择是由所选定的制品的应用领域决定的。在本发明范围内加以考虑的其他组分为(例如)以下其他物质有机酸、类胡萝卜素、痕量元素、抗氧化剂、.维生素、酶、氨基酸、矿物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、防结块剂和/或增味剂。所述物质种类加以考虑的代表性实例可来自根据欧洲规章的各个有效食物添加剂目录，例如当前有效的ECDirective95/2EC.下文中列出适合用来制备本发明制品的其他组分。这些组分根据其不同的性质以不同的量添加至制品中且随所选定的应用领域而变化。随所选定的应用领域而变化的量化混合物比率以及物质种类的有利组合是本领域技术人员已知的。优选使用的有机酸为甲酸、丙酸、乳酸、乙酸及柠檬酸，特别优选是曱酸、丙酸或乳酸。在本发明的范围中，类胡萝卜素意指四萜，其中一或两个紫罗酮环结合具有9个双键的碳链且可为植物来源或动物来源。类胡萝卜素还意指氧化的叶黄素。以实例叙述的那些类胡萝卜素为of-胡萝卜素、p-胡萝卜素、Y-胡萝卜素、胭脂树素(ixin)、降月因脂树素(norbixin)、辣椒红素、辣椒玉红素、番茄红素、^浙(apo)-8-胡萝卜素醛、胡萝卜素酸乙酯以及叶黄素类的黄莨黄质、黄体素、隐黄素(cryptoaxanthin)、玉红黄质、堇菜黄质、紫杉紫素和角黄素。本发明的制品可包含(例如)以下的痕量元素铬、铁、氟、碘、钴、铜、锰、钼、镍、硒、钒、锌或锡。下文中列出的E数字是指在食物添加剂的Directive95/2/EEC中使用的标号。可用的抗氧化剂为(例如)抗坏血酸(维生素C，E300)、L-抗坏血酸钠(E301)、L-抗坏血酸钧(E302)、棕榈酸抗坏血酸酯(E304)、丁基化羟基苯甲醚(E320)、丁化羟基甲苯(E321)、EDTA二钠钙(E385)、没食子酸酯类，如没食子酸丙酯(E310)、没食子酸辛酯(E311)、没食子酸十二烷基酯(没食子酸月桂酯)(E312)、异抗坏血酸(E315)、异抗坏血酸钠(E316)、卵磷脂(E322)、乳酸(E270)、多磷酸盐类，如二磷酸盐(E450)、三磷酸盐(E451)、聚磷酸盐(E452)、二氧化硫(E220)、亚硫酸钠(E221)、亚硫酸氬钠(E222)、二硫化二钠(E223)、亚硫酸钾(E224)、亚硫酸鈣(E226)、亚硫酸氢鈣(E227)、亚疏酸氩钾(E228)、硒、生育酚(维生素E，E306)，如a-生育酚(E307)、y生育酚(E308)、5-生育酚(E309)及所有的生育三烯酚、氯化锡(H)(E512)、柠檬酸(E330)、柠檬酸钠(E331)、类胡萝卜素、维生素A以及杵檬酸钠(E332)。加以考虑的维生素不但有脂溶性维生素而且有水溶性维生素。脂溶性维生素的实例为维生素A(视黄醇)、维生素D(麦角钙化醇)、维生素E(生育酚及生育三烯酚)、维生素K(叶绿醍及甲基萘醌类)，优选是维生素A及维生素E。水溶性维生素的实例为维生素B1(石危胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆素)、维生素B12(钴胺素)、维生素C(抗坏血酸)、维生素H(生物素)、叶酸及烟酸，优选是维生素B2及维生素C。制品还可包含酶。以实例提及的酶为淀粉酶、蛋白酶及转化酶。本发明的范围中加以考虑的M酸为(例如)谷氨酸、L-肉碱、L-谷氨酰胺、L-牛磺酸、L-天冬氨酸、L-甘氨酸、L-赖氨酸、DL-苯丙氨酸、L-色氨酸、酪氨酸、L-精氨酸、L-半胱氨酸、L-亮氨酸、L-甲硫氨酸、L-丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-瓜氨酸、L-缬氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-鸟氨酸或L-脯氨酸。特别优选为必需氨基酸，例如L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-曱硫氨酸、DL-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸及L-缬氨酸，进一步优选为动物营养方面重要的氨基酸，例如L-赖氨酸、DL-甲硫氨酸或L-苏氨酸。本发明范围中的矿物质为(例如)钠、钾、镁、钙、磷、铁及锌。作为乳化剂，可使用以下物质(例如)E420山梨糖醇、E420ii山梨糖醇糖浆、E421甘^t醇、E422甘油、E431聚氧乙烯(40)硬脂酸酯、E432聚氧乙烯山梨糖醇酑单月桂酸酯/聚山梨糖醇酯20、E433聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯/聚山梨酸酯80、E434聚氧乙烯山梨糖醇酐单棕榈酸酯/聚山梨酸酯40、E435聚氧乙烯山梨糖醇酐单硬脂酸酯/聚山梨酸酯60、E436聚氧乙烯山梨糖醇酐三硬月旨酸酯/聚山梨酸酯65、E440果胶、E440i果胶、E440ii酰胺化果胶、E442磷脂酸铵(ammoniumphosphatide),E444蔗糖醋酸异丁酸酯、E445^M^香甘油酯、E450二磷酸盐、E450i二磷酸二钠、E450ii二磷酸三钠、E450iii二磷酸四钠、E450iv二磷酸二钟、E450v二磷酸四钾、E450vi二磷酸二钧、E450vii二磷酸二氬钧、E451三裤酸盐、E451i三磷酸五钠、E451ii三磷酸五钾、E452聚磷酸盐、E452i聚磷酸钠、E452ii聚磷酸钾、E452iii聚磷酸钠钙、E452iv聚磷酸钓、E460纤维素、E460i微晶纤维素、E460ii纤维素粉末、E461曱基纤维素、E463羟丙基纤维素、E464羟丙基甲基纤维素、E465曱基乙基纤维素、E466羧甲基纤维素、E469酶水解的羧甲基纤维素、E470a脂肪酸的钠盐、钾盐及锔盐、E470b脂肪酸的镁盐、E471脂肪酸甘油一酯及脂肪酸甘油二酯、E472a脂肪酸甘油一酯及脂肪酸甘油二酯的乙酸酯、E472b脂肪酸甘油一酯及脂肪酸甘油二酯的乳酸酯、E472c脂肪酸甘油一酯及脂肪酸甘油二酯的柠檬酸酯、E472d脂肪酸甘油一酯及脂肪酸甘油二酯的酒石酸酯、E472e脂肪酸甘油一酯及月旨肪酸甘油二酯的单乙酖基良双乙酰基酒石酸酯、E472f混合的脂肪酸甘油一酯及脂肪酸甘油二酯的乙酸酯及酒石酸酯、E473脂肪酸蔗糖酯、E474蔗糖甘油酯、E475脂肪酸聚甘油酯、E476多聚蓖酸聚甘油酯、E477脂肪酸丙二醇酯、E479与脂肪酸甘油一酯及脂肪酸甘油二酯相互作用的加热氧化的大豆油、E481硬脂Sfc^-2-乳酸钠、E482硬脂SL^-2-乳酸钾、E483硬月旨酰酒石酸酯、E491脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、E492脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、E493脱水山梨糖醇单月桂酸酯、E494脱水山梨糖醇单油酸酯或E495脱水山梨糖醇单棕榈酸酯.稳定剂是保持食物稠度或组成的物质。以实例提及的稳定剂为抗坏血酸(E300)、尿素(E972b)、乳酸铁(II)(E585)、葡糖酸铁(E579)、甘油酯(E445)、卵磷脂(E322)、偏酒石酸(E353)、果胶(E440)、蔗糖醋酸异丁酸酯(E444)及氯化锡(II)(E512)。防腐剂是通过保护食物免受微生物的有害影响从而延长其存放期的物质。以实例提及的稳定剂为E200山梨酸、E201山梨酸钠、E202山梨酸钾、E203山梨酸钩、E210苯甲酸、E211苯甲酸钠、E212苯甲酸钾、E213苯甲酸钧、E214对羟基苯甲酸乙酯/PHB酯、E215乙基对羟基苯曱酸钠/PHB乙酯钠盐、E216对羟基苯甲酸丙酯/PHB丙酯、E217对羟基苯曱酸丙酯钠盐/PHB丙酯钠盐、E218对羟基苯甲酸甲酯/PHB-甲酯、E219对羟基苯甲酸甲酯钠盐/PHB-曱酯钠盐、E220二氧化硫、E221亚硫酸钠、E222亚硫酸氢钠、E223偏亚硫酸氢钠/二硫化二钠、E224偏亚硫酸氢钟/亚硫酸钾、E226亚硫酸钾、E227亚硫酸氩钩、E228亚硫酸氩钾、E230联苯/联二苯、E231邻苯基酚、E232邻苯基酚钠、E233逸苯迷唑、E234乳链菌肽、E235游霉素、E239六甲亚基四胺、E242碳酸氢二甲酯、E249亚硝酸钾、E250亚硝酸钠、E251硝酸钠及E252硝酸钾'本发明范围中的防结块剂是天然存在或合成的物质，其通过防止颗粒块结和并粘在一起来提高食物的流动性。提及的实例有E530氧化镁、E535亚铁氰化钠、E536亚铁氰化钾、E541酸式磷酸钠铝、E551二氧化硅、E552硅酸4丐、E553ai硅酸镁、E553aii三硅酸镁(不含石棉)、E553b滑石(不含石棉)、E554硅酸钠铝^556硅酸钓铝。本发明范围中的增味剂意指天然存在或合成的物质，其能够使食物的味道更完美或增进食物的味道。增味剂包含调味品。提及的实例为E620谷氨酸、E621谷氨酸钠、E622谷氨酸钾、E623二谷氨酸钓、E624谷氨酸铵、E625二谷氨酸镁、E626鸟苷酸、E627鸟苷酸二钠、E628鸟苷酸二钾、E629鸟苷酸钩、E630次黄嘌呤核苷酸、E631次黄噪呤核苷酸二钠、E632次黄噤呤核苷酸二钾、E633次黄噪呤核苷酸二钙、E6345-核糖核苷酸钾、E6355-核糖核苷酸二钠、E640甘氨酸;SJE650乙酸锌。在一个实施方案中，本发明所使用的制品可包含助剂。根据本发明助剂意指用来改善产品性质(诸如尘化性质、流动性、吸水能力及储存稳定性)的物质。助剂可基于如乳糖或麦芽糖糊精的糖类，基于如玉米棒扭盼、麦麸及大豆,的谷类或豆类产品，基于无机盐，钩盐、镁盐、钠盐或钾盐等，以^-泛酸或其盐本身(D-泛酸盐用化学方法或通过发酵制造)。在另一实施方案中，本发明所使用的制品可包含栽体.合适的栽体是"惰性"的栽体材料，即不与本发明制品所使用的组分发生不利相互作用的材料。显然，栽体材料对于分别用作(例如)食物及动物饲料中的助剂必须是安全的。合适的栽体材料不但可为无机栽体而且可为有机栽体.提及的合适栽体材料的实例为低分子量的无机或有机化合物以;M目对高分子量的有机化合物，其是天然或合成来源的。合适的低分子量的无机栽体的实例为盐类，如氯化钠、碳酸钓、硫酸钠及硫酸镁，硅藻土或硅酸或硅酸衍生物，如二氧化硅、珪酸盐或a。合适的有机载体的实例尤其为糖类，如葡萄糖、果糖、蔗糖以及糊精及淀粉产品。提及的相对高分子量的有机载体的实例为淀粉与纤维素制品，尤其诸如玉米淀粉、玉米棒粗粉、磨碎的稻壳粉、精制麦麸或谷类面粉，例如小麦、黑麦、大麦及燕麦面粉或麸及其混合物'本发明所使用的制品可包含混合物形式的其他组分、栽体及助剂。化合物T在制品中的重量分数可在广泛的范围内变动且通常根据源于选定的应用领域(例如，农畜伺养、喂养家畜或人类营养)的实际考虑来加以确定。在本发明的一个实施方案中，适合本发明使用的制品可包含(例如)5wto/o至10wt。/。，优选为10wt。/o至20wt。/。，特别优选20wtr。至30wt0/。，进一步优选为30wt%至40wt0/。的化合物T。但亦可选用更大的重量百分数。本发明所使用的制品最简单地是通过混合组分来产生。同样，其可通过混合各个组分的溶液，且(如果需要)随后移除溶剂来制备。多种组分的混合物以各组分的任何重量比率存在。混合的最简单形式为将组分一^tA混合机。此类混合机是本领域技术人员已知的，例如可获自Ruberg公司(直立式双轴混合机(型号HM(10-500001))、环层混合机-造粒机(型号RMG)、连续聚结干燥器(型号HMTK)、直立式单轴混合机(型号VM(10-500001))、容器混合机(型号COM(50-40001))。其他混合机亦可获自L6dige，Drais，Engelsmann。混合机可分批或连续操作。在分批混合机中，通常将待混合的所有组分按照期望比率装栽并且接着将其混合足够的时间，范围为几分钟至几小时。规定混合时间及混合压力从而使得组分均匀分布于混合物中。在连续混合的情形下，(如果需要)在组^混后将其连续添加。在连续混合机，同样以使得组分均匀分布于混合物中的方式选择滞留时间及混合压力。与分批混合的情形相比，连续混合情形下的混合时间通常较短且压力较高。混合一般在室温下进行，但亦可在更高或更低的温度下进行，此取决于所用的物质。在优选的实施方案中，制品以固体形式存在。根据应用需求，制品可为10jim至5000jim平均颗粒大小，优选20nm至1000nm平均颗粒大小的粉末。所得的粉状产品的颗粒大小分布可用MalvernInstrumentsGmbH，MastersizerS的仪器进行研究。组分的混合物可能为纯#^物，即以所要颗粒大小与浓度比率将物质混合在一起，如果需要可添加其他添加剂，物质亦可(举例而言)通过包衣(如果需要)加以保护。此外，可使用核-壳结构，即一种组分位于里面作为核而另一组分作为外壳处于外面，或反之亦然.当然，在这些结构的情形下，如果需要亦可使用其他包衣。同样可能的是将物质以共同的栽体材料或保护性胶体共同的基质囊封在一起。这些实例是本领域技术人员已知的，且在(例如)R.A.Morten:Fat-SolubleVitamins,PergamonPress,1970，131至145页中描述。可通过本领域技术人员熟悉的结晶、沉淀、干燥、造粒或聚结方法或目前教科书中描述的其他用来形成固体的方法制造粉末。本发明范周内的动物有机体意指分类学上指定为动物界(animalia)的有机体.优选的那些是脊推动物亚门(vertebrata)，其中有四足超纲(tetrapoda)(陆生脊推动物)及鱼纲(pisces).特别优选是鸟纲(鸟)及哺乳纲(哺乳动物)，其所包括的现代人(人(Homosapiens))是特别优选的哺乳动物。进一步优选纯正猪科(Suidae)、牛亚科(Bovinae)、雉及其亲缘动物(雉科(Phasianidae))、鸭、鹅及天鹅(鸭科(Anatidae))、马科(Equidae)、鲤科(Cyprinidae)及鲑科(Salmonidae)。这些科中最优选的是被称为家畜^J艮畜的那些动物。本发明范围内的家畜意指非独立生存的，与人类相适应且主要由人类养于家居住所中的动物。特别优选的家畜是猫与犬。本发明范围内的农畜意指人类出于经济目的而饲养的动物。特别优选的农畜是家养牛属(西藏黄牛(Bostaurus))、家鸡属(家鸡(Gallusgallusdomesticus))、家^M^"属、家养绵羊属(Ovisamnionaries)及驯养型的A^(灰雁(Anseranser))。动物有机体的蛋白质比例意指存在于有机体中的所有蛋白质组分的总量，并且不仅包含可溶的(例如酶、激素)而且包含结合的及纤维状的(纤维性的)结构蛋白质，例如影响肌肉细胞收缩的肌动蛋白、M^蛋白及j^jMi蛋白。增加动物有机体的蛋白质比例意指由于动物有机体总重量中蛋白质比例造成的重量的增加。本发明范围内的蛋白质比例的增加是(例如)由于动物有机体总重量中蛋白质比例(用百分数表示)(下文中被称为PPTW(有机体总重量的蛋白质百分数))造成的其重量增加。用PPTW表示的增加可按如下方法算出，例如(i)确定包含化合物T的制品喂饲/摄入前与喂飼/摄入结束后PPTW的差异，制品按如下方式施用每天至少给动物有机体施用每kg体重0.05g的化合物T，持续至少七天的时期；(ii)比较下列两组动物有机体的PPTW:a)每天至少施用每公斤体重0.05g的化合物T，持续至少7天时期的动物有机体，以及b)属于对照组且接受其中仅化合物T被取代物质(如助剂)替换的制品的动物有机体.使用这些测量时，必须注意a)必须对一定数量的足以获得统计学确定性结果的动物有机体进行研究及b)所有测量都使用相同的方法进行。统计学数据的确定性所需的群体大小及统计学方法是本领域技术人员已知的.为了确定PPTW，可使用破坏性测量方法。破坏性测量方法需要在动物i^测试前进行屠宰。在此为了能够检测的蛋白质比例的统计学显著性增加，必须在喂饲化合物T之前，在足够大的动物群体的基础上，检测动物物种在选定饲养条件(圏舍密度、年龄、哏饲速率、喂饲质量、性别、围舍温度等)下的平均PPTW。在这种情形下，可将动物于在喂饲化合物T后达成(使用相同的破行比较:并且可基于与平均j的显著差异来获得增加值。''''本发明中动物蛋白质比例的增加可以从由蛋白质与脂肪比例的重量百分数所形成的商(蛋白质重量百分lt/脂肪重量百分数，下文中称为P/F商)的增加来确i^。在使用本发明制品的情况下，P/F商的增加不仅是由于总体重中蛋白质比例的增加，而且是由于同时发生的总体重的脂肪百分数的降低。P/F商的增加可按如下方法算出，例如(iii)确定动物总重量中蛋白质及脂肪百分数并且确定P/F商的形成和比较，所述P/F商是从包含化合物T的制品的喂饲/^A之前与喂饲/才ILA完成之后的值确定的，这些制品如(i)所述喂饲；(iv)比较如(ii)所述的a)测试动物与b)对照动物的P/F商。在这些测量中，还必须使用统计数据确定性所必需且本领域技术人员已知的群体大小及统计学方法。此外，还可以使用破坏性方法来确定P/F商。为了能够在此检测P/F商的统计学显著性增加，如以上确定PPTW所述，必须在喂饲化合物T之前确定动物的平均P/F商，在此情形下，可将动物在喂饲化合物T之后达成(使达成的平均值进行比较，并且可基于与平均值的显著差异来获得增加值。PPTW及P/F商的变化还可引起瘦体重的变化。因此本发明的制品的成功使用可以从由于动物有机体总重量的蛋白质比例造成的重量增加来确认，并且也可从瘦肉或肌肉比例的增加及因此从瘦体重的增加来确认，确定畜体组成及瘦体重的方法是本领域技术人员充分已知的.在此可在破坏性方法(在屠宰的动物身上进行测量)与非破坏性方法(在存活动物身上进行测量)之间进行区分。破坏性方法可使用光学方法，可以从样本中估算未分割的畜体的肉比例(光学分级探针或光导纤维)。对于这些测量，可使用Fat-O-Meat'er(FOM)仪器。这些仪器通过光学方法确定背部脂肪和肌肉厚度并且估算畜体的肌肉比例。但是，也可以用专门开发的电磁扫描仪来估算畜体组成。对于此方法，还经常使用总体电导率(缩写TOBEC)。在此方法中，使畜体通过磁场。因为肌肉组织与脂肪组织有不同的电导率，所以根据组织比例吸收不同强度的磁场能量。非破坏性方法有多种方法可用来评估存活动物的瘦肉程度。最常用的为超声波法或回声探测法。另一种不但可估算存活动物而且可估算畜体肉比例的方法为生物电阻抗法。该方法测量动物身体对交流电的电导率且从中推导出身体组成。其他估算身体组成的技术为X-射线计算机断层术(CT)及磁共振波谦(核磁共振，NMR),与超声仪器相比，这些测量技术容许更高程度的精确性。举例而言，其甚至可能可靠地测量个体动物身体组成的微小变化。同样可通过所谓的体脂肪分析天平，使用生物电阻抗法进行人类体脂肪分析。为了增加动物有机体的蛋白质比例，可以如下方式使用本发明的制品化合物T每天施用的剂量为每kg动物有机体重量O.Olg至20g，优选为0.02g至15g，特别优选为0.03g至10g，进一步优选为0.04g至8g，最优选为0.05g至6g。但是，也可施用更高剂量的本发明的制品。本发明用途所需要的制品量还可在一天内分成多个较小的部分。为了本发明动物有机体蛋白质比例的增加，必须以如上所述的量施用化合物T，持续至少7天，优选为14天，特别优选为21天，进一步优选为28天的时期.但是，也可以将合适剂量的本发明化合物T持续施用一段更长的时期，例如动物的整个生存期。在本发明的另一优选的实施方案中，将化合物T或含有其的制品添加至动物飼料或人类食品中.在此本发明的制品用于农畜及家畜(如猪、家禽、牛以及猫与犬)的动物伺料中是特别优选.在此可将制品以液体、粉末、预混合物、片剂、胶嚢剂或混悬剂的形式添加至飼料中。在一个实施方案中，将制品独立于饮食，作为标准饮食的补充或独立于标准饮食，以液体、粉末、片剂、胶嚢剂或混悬剂的形式施用给动物有机体o本发明还涉及本发明的制品在人营养方面作为治疗剂的用途。本发明范围内的治疗剂意指(例如)在大众运动及竟技运动，特别在健美运动中，不仅用来减轻体重而且用来使肌肉增加的药剂。此明确涵盖本发明制品在食物疗法食物或功能性食物方面的用途。此外，治疗剂引^A体瘦体重的增加。在一个实施方案中，治疗剂意指那些不仅用于预防，而且用于治疗性治疗营养相关的、遗传相关的肥胖症或由代谢紊乱所致的肥胖症的物质。在肥胖症的治疗性治疗中，本发明的制品可按本领域技术人员通常已知，合适于并可用于使用常规技术制备药物剂型的方式进行配制。此类技术描述于(例如)"Remington'sPharmaceuticalScienceHandbook",MackPublishingCo.,NewYork,美国，第17版，1985。此类药物剂型或食物添加剂可为液体、粉末、预混合物、片剂、胶嚢剂或混悬剂.已经发现包含化合物T的制品以蛋白质比例增加(PPTW增加)的方式对动物代谢具有持续的生理效应。此外，已经发现由于施用本发明的制品，总体蛋白质含量的增加伴随着总体脂肪比例的降低(P/F商增加)。已经发现本发明的制品尤其适用于动物营养，实施例分析方法l.确定整体粗蛋白质1)从氮含量确定小鼠粗蛋白质含量的方法，根据Kjeldahl(Kjeldahl，J.:Z.anal.Chem.22，366-382.1883)修改。2)原理屠宰实验动物且在移除胃肠道之后，通过称量确定动物的重量。接着将实验动物于液氮中快速冷冻且使之匀浆。对所得样品进行湿法消化。将酸性消化液用氢氧化钠变为碱性。将所释放的氨通过蒸馏移除且收集于确定量的硫酸中，剩余的硫酸用氢氧化钠溶液滴定.3)试剂3.1)硫酸钾，分析级3.2)催化剂氧化铜(II)、CuO，分析级；或结晶硫酸铜、CuS04.5H20，分析级；或汞，或氧化汞、HgO，分析级。3.3)硫酸；分析级，密度1.843.4)浮石，粒状，以盐酸洗涤且经燃烧3.5)锌，分析级，粒状3.6)硫酸，0.1N;3.7)硫酸，0.5N3.8)甲基红指示剂将300mg甲基红溶解于100ml乙醇中，浓度为94。/o至96o/o(V/V)。3.9)氢氧化钠溶液，分析级，浓度40。/。(W/V)3.10)硫化钠溶液，分析级，饱和的3.11)硫代硫酸钠溶液，浓度8。/。(W/V)，Na2S203.5H20，分析级3.12)氢氧化钠溶液，0.1N;3.13)氩氧化钠溶液，0.25N4)装置根据Kjddahl(见上)的消化装置及蒸馏装置；5)消化称取lg样品(精确至lmg)并置于消化装置的烧瓶中。加入10g硫酸钾(3.1)、适量催化剂(3.2)(0.3g至0.4g的氧化铜或0.9g至1.2g的硫酸铜或一滴汞或0.6g至0.7g的氧化汞)、251111硫酸(3.3)及几粒浮石(3.4)并且混合烧瓶的内容物。首先适度加热烧瓶，接着随着不时摇晃加热直至物质碳化且泡沫消失，且最终加强热直至液体均匀沸腾。避免对烧瓶壁及沉积至烧瓶壁上的有机部分过度加热。一旦溶液澄清且无色(当使用含铜催化剂时为浅绿色)，就使其再保持沸腾l小时；此后使其冷却.随着连续转动，小心加入250ml至356ml的水，在此种情形下石克酸盐应完全溶解。使混合物冷却；接着加入一些锌粒(3.5)。将10ml至25ml的硫酸(3.6)或(3.7)(取决于预期的氮含量)及几滴曱基红指示剂(3.8)加入至蒸馏装置的收集烧瓶中。将该烧瓶连接至蒸馏装置的冷凝器且其最外端降低至收集烧瓶的液体中至少lcm深。通过活塞漏斗将IOOml氢氧化钠溶液(3.9)緩慢注入蒸馏烧瓶中。当使用汞催化剂时，另外添加10ml硫化钠溶液(3.10)或25ml硫代硫酸钠溶液(3.11)至蒸馏烧瓶中。将该烧瓶以如下方式加热于30分钟内蒸发掉150ml液体。此段时间结束后，使用石蕊试纸监测塔顶馏出物的中性反应。若反应是碱性的，则继续蒸馏。当在石蕊试纸上证明塔顶馏出物为中性时停止蒸镛.在蒸馏操作过程中，将收集烧瓶的内容物不时转动JJ见察其颜色。当其变成微黄色时，立刻加入业已精确量测其量的硫酸(3.6)或(3.7).7)滴定在收集烧瓶中，通过氢氧化钠溶液(3.12)或(3.13)(取决于所用硫酸的当量浓度)滴定过量的硫酸直至颜色变成亮黄色.8)方法的对照为了确定试剂中是否无氮，进行没有待分析的样品的空白实验(蒸馏及滴定)。为了控制方法的精确度，在lg无氮蔗糖存在下，使用L5至2.0g的分析级的N-乙酰苯胺(熔点U4。C，N%:10.36)来进行分析(消化、蒸镏及滴定)。1g的N-乙酰苯胺消耗0.5N硫酸14.80ml。9)结果计算测定所消耗的硫酸量。0.1N硫酸lml相当于1.4mg氮。将氮的量乘以系数6.25。结果以样品的百分lt^示.10)可重复性相同样品两次平行测定之间的差异，对于含量，少于粗蛋白质含量低于20%，0.2%的绝对性差异；粗蛋白质含量为20%至40%，1.0%的相对性差异；粗蛋白质含量高于40%，0.4%的绝对性差异。其他关于粗蛋白质确定分析的合适方法及注意事项可参看如下出版物"DiechemischeUntersuchungvonFuttermitteln,，[Chemicalanalysisoffeedstuffs，MethodenbuchIII[MethodBook111；Naumann，K.，Neumann-Neudamm，J.;1982;"UntersuchimgeniiberdieStickstoffbestimmungnachKjehldahl"[StudiesofKjehldahlnitrogendetermination]Rufeger，H.,Z.Tierphysiol.，Tierern汪hr"Futtermittelkunde22，49，1966/67;第2页，ibid.189-199;"ZurRationalisierungderRohproteinbestimmung"[Rationalizationofcrudeproteindetermination].DickhautG，Mitteilungs-bl.d.GDCh-Fachgr.Lebensmittelchemieu.gerichtl.Chemie24，189-191，1970)。2.总体粗脂肪的确定1)该方法用来测定小鼠中粗脂肪含量.由于在提取前，骨及其他的身体固体部分未移除，因此用2b)中所描述的变通方法来确定实验动物的总体粗脂肪。2)原理2a)将如实施例l所述获得的样品用乙醚(3.2)提取。蒸发掉溶剂且将醚提取物干燥并称重。2b)在若不预先水解则无法用乙醚自其中完全提取出脂肪的样品的情形下，将样品在蒸发热下用盐酸水解。冷却溶液并过滤。接着如所述用乙醚提取业已洗涤并干燥的残余物。3)试剂3.1)硫酸钠，分析级，无水3.2)乙醚，无水，密度0.720，沸点34.5'C，实际上不含过氧化物3.3)盐酸，大约3N3.4)助滤剂，例如珪藻土、Hyflo-supercel3.5)四氯化碳，分析级4)装置4.1)根据索氏提取器(Soxhlet)的提取装置或相当的装置4.2)带温度控制器的加热装置，防爆4.3)真空干燥箱(低于0.133bar)5)方法2a)称取5g样品(精确至lmg)且将其与2至3g(如果需要可更多"危酸钠(3.1)混合。将混合物注入不含脂肪的提取套管中且于提取装置(4.1)中用乙瞇(3.2)提取6小时。当使用索氏提取装置时，必须将加热设定成使溶剂每小时至少排出15次。将提取物收集于装有一些浮石碎片的干燥配衡烧瓶中。提取后，蒸发掉乙醚，接着在75'C，低于0.133巴的真空干燥箱(4.3)中干燥残余物1.5小时，且冷却后于干燥器中称重。再次干^30分钟时间确保脂肪的重量已保持恒定。重量减少必须小于lmg。方法2b)称取2.5g样品(精确至lmg)且置于400ml玻璃烧杯或300ml锥形瓶中。接着，加入IOO1111盐酸(3.3)及几片浮石。在玻璃烧杯上盖上表面亚，或在锥形瓶上安装回流冷凝器。将混合物用小火或在加热板加热至沸腾且保持轻微沸腾l小时.通过不时转动防止物质沉积在容器壁上。接着，冷却混合物且加AX量的助滤剂(3.4)以使得过滤过程中不发生脂肪损失，用润湿的不含脂肪的双折纸滤器进行过滤。将残余物用清水洗涤直至酸性反应消失。此后测试滤液是否含脂肪。滤液中存在脂肪表明在水解前需要先根据方法2a用乙醚提取样品。将含有残余物的双折滤紙折i^来，置于表面皿上且在95至98'C于干燥箱中干燥1,5小时。然后，将滤纸连同残余物一^t进提取套管中且用乙醚提取。接下来的步骤如同2a中所述。6)结果计算结果以样品的百分lt^示。7)可重复性相同样品的两次平行测定之间的差异不会超过0.3%粗脂肪。在高脂肪含量的产品(其难以粉碎或不适合移除缩分(reduced)均相样品)的情形下，则按如下方法进行称取20g样品(精确至lmg)且将其与至少IOg硫酸钠(3.1)混合。接着根据方法2a用乙醚(3,2)提取混合物。将所得的经收集的提取物用四氯化碳(3.5)定容至500ml且进行混合.取出50ml溶剂且置于小的干燥的装有浮石颗粒的配衡烧瓶中，蒸发掉溶剂，接着干燥混合物且如方法2a进行后续步骤。将套管中的提取残余物除去溶剂且粉碎至lmm。将该物质再次放进提取套管中(不可添加硫酸钠)且用乙醚提取；后续步骤如方法2a进行。基于第一次提取的等分试样确定最终结果，且以样品的百分数表示如下(10a+b)*5a-等分试样中第一次提取后的以g为单位的醚提取物b-第二次提取后的以g为单位的醚提取物实施例3:标准饲料的组成小鼠/大鼠(饲料可获自ProvimiKlibaAQCH-4303Kaiseraugst)__<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>实施例l小鼠PPTW(总重量的蛋白质百分数)的增加及P/F商的增加。在饲养实验中，将48只小鼠(CD-1M(ICR)BR型)分成3个不同的组(組1、2;5L3)，每组16只动物，动物皆各自成对养于笼中.每对一起进行分析，其结果为每组有8个由两个个体组成的重复单元。实验开始时，动物为5周龄。小鼠皆成对养于笼中，自由饮水与取食。实验用的饲料是标准饲料(参见实施例3)。将标准饲料补充3%棕榈油及1%纤维素。组l(对照组)不喂飼羟基丙二酸。组2^3中，分别用羟基丙二酸替换饲料中的0.25%及0.75%纤维素。施用羟基丙二紀l天。此时间之后，屠宰动物并且如上所述确定总体脂肪及总体蛋白质百分数。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>饲料摄取与重量增加无显著差异.令人惊奇的是在喂饲羟基丙二酸的动物身上可观察到PPTW的增加，其也可以从P/F商的增加看出.权利要求1.羟基丙二酸、其衍生物或其混合物(化合物T)的用途，其用于制备适于增加动物有机体蛋白质比例的制品。2.根据权利要求l的用途，其中所述制品按如下方式施用每天给所述动物有机体喂飼每kg体重0.05至6g之间的化合物T。3.根据权利要求2的用途，其中所述制品施用至少7天的时期。4.根据权利要求1至3中任一项的用途，其中所述制品除化合物T外，进一步包含有机酸、类胡萝卜素、痕量元素、抗氧化剂、维生素、酶、氨基酸、矿物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、防结块剂、增味剂、栽体和/或助剂或所述物质的混合物。5.根据权利要求4的用途，其中所述制品添加至动物饲料或人类食品中。6.根据权利要求5的用途，其中所述制品用于农畜或家畜的饲养。7.根据权利要求6的用途，其中所述农畜和家畜为猪、家禽、牛、猫或犬。8.根据权利要求5的用途，其中所述制品作为治疗剂用于人类营养。全文摘要本发明的目的是鉴定及提供影响动物有机体蛋白质浓度的物质，并且提供基于此物质的用于动物及人类食品的制品。本发明所述目的是通过使用羟基丙二酸或其衍生物来实现的。因此本发明涉及羟基丙二酸或其衍生物用于制备适于增加动物有机体蛋白质浓度的制品的用途。本发明还公开了包含羟基丙二酸或其衍生物的制品在动物饲料或人类食品中的用途。文档编号A61K31/185GK101111161SQ200580047334公开日2008年1月23日申请日期2005年11月29日优先权日2004年12月1日发明者G·迪博尔德,J·卡尔,M·勒施,U·奥伯弗兰克申请人:巴斯福股份公司