专利名称：含有肿节风提取物黄酮有效部位的药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物药肿节风，具体地说是一种含有肿节风及同科属植物提取物的药物组合物黄酮及其用途。
背景技术：
肿节风(Sarcandra glabra(Thunb)Nakai)为金粟兰科草珊瑚属植物干燥全草又名草珊瑚、九节茶、接骨木、驳骨茶、骨消风等。为多年生常绿草本，分布于江西、安徽、浙江、湖南、湖北、四川、广东、广西等省，江西省为主要产地。肿节风有活血祛瘀、止痛、清热解毒等功效。用于治疗常见炎症、风湿性关节炎。近代用于癌症辅助治疗，对多种恶性肿瘤如胃癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、直肠癌等有辅助治疗作用。肿节风含黄酮类、香豆素、有机酸、挥发油、皂苷、酚类、鞣质、多糖等多成分。肿节风注射液、口服液、片剂用于血小板减少性紫癜患者升高血小板，也用于癌症辅助治疗。目前市售肿节风注射液、口服液、片剂是肿节风粗提物粗制剂，其含量测定用香豆素、有机酸，而含黄酮量不明确。有文献报道肿节风总黄酮类提取物可用于血小板紫癜及癌症辅助治疗，未明确总黄酮类提取物的纯度，更未明确其是否达到50％以上(50％至99％)的纯度，即其黄酮的纯度达到什么程度不明确，更无黄酮有效部位及其注射剂产品批准上市。按国家药监局新药管理办法规定中药“有效部位”必须达到50％以上的纯度，即必须达到50％以上的纯度才是中药“有效部位”。
发明内容
本发明的目的是要提供一种含有肿节风提取物黄酮的有效部位的药物组合物及其制备方法和用途，肿节风提取的黄酮有效部位达到50％以上(50％至99％)的纯度，以此制成各种注射剂。
本发明的目的可以采取以下方法来实现一种含有肿节风提取物黄酮有效部位的药物组合物，其特征在于所述的肿节风中提取出黄酮的有效部位的纯度为50％至99％。
所述的黄酮有效部位单独或混合或与其它植物提取物或化合物混合制成的制剂，其制剂包括注射剂即针剂，包括粉针剂、小针剂、大针剂、乳浊型注射剂、混悬型注射剂。
含有肿节风提取物黄酮有效部位的药物组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤总黄酮部位及成分的提取分离黄酮类总提取物可以选择以下的一种方法提取得到醇回流提取、醇渗漉提取或水煎煮，其中醇回流提取方法是取肿节风药材粗粉，用35％～95％乙醇6～10倍量作溶剂，浸渍1小时后，加热回流提取2～4次，每次1～4小时，回收乙醇，干燥，即得总提物；醇渗漉提取方法是取肿节风粗粉，用25％～95％乙醇作溶剂，浸渍后，以1～7ml/分钟的速度进行渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，干燥，即得总提物；煎煮提取的方法是取肿节风药材加6～10倍量水煎煮，每次1～3小时，滤过，滤液合并，浓缩，干燥即得总提取物；分离精制总黄酮及其单体有效成分可以选择以下的一种方法提取得到大孔树脂吸附法、超临界萃取法或有机溶剂提取法，其中有机溶剂提取法有机溶剂乙酸乙酯法提取肿节风干浸膏中的总黄酮用水将肿节风干膏超声溶解，用乙酸乙酯反复萃取，得总黄酮；超临界萃取法肿节风总提取物，置入超临界萃取器中，调节流量，压力20-50MPa、温度100-350℃、时间60-120min得萃取物总黄酮；大孔树脂吸附法大孔吸附树脂提取肿节风干浸膏中的总黄酮取肿节风总浸膏，用水稀释后，再用恒流泵泵入已预处理的大孔吸附树脂吸附，用水洗柱，水洗后用50～90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥得固形物即为总黄酮；
干燥方法分离精制后的黄酮类提取物可以采用烘干法、真空干燥法或喷雾干燥法。
含有肿节风提取物有效部位的药物组合物应用于抗肿瘤作用，增效减毒作用，抗肿瘤放、化疗的毒性反应包括减轻白细胞下降及血小板减少。
含有肿节风提取物有效部位的药物组合物应用于治疗血热妄行、皮肤紫斑、原发性血小板减少性紫癜及继发性血小板减少性紫癜，升高血小板。
含有肿节风提取物有效部位的药物组合物应用于抗菌抗炎，治疗咽喉炎、气管支气管炎、肺炎、角膜炎、蜂窝组织炎、阑尾炎。
具体实施例方式
下面详细描述本发明的实施方案。
一、黄酮有效部位的提取分离及含量测定本发明的中药肿节风黄酮类总提取物可以通过将肿节风进行醇回流提取、醇渗漉提取或水煎煮提取得到，其中A、醇回流提取方法是取肿节风药材粗粉，用35％-95％乙醇6-10倍量作溶剂，浸渍1小时后，加热回流提取2-4次，每次1-4小时，回收乙醇，干燥，即得总提物；B、醇渗漉提取方法是取肿节风粗粉，用25％-95％乙醇作溶剂，浸渍后，以1-7ml/分钟的速度进行渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，干燥，即得总提物；C、煎煮提取的方法是取肿节风药材加6-10倍量水煎煮，每次1-3小时，滤过，滤液合并，浓缩，干燥即得总提取物。
分离精制上述A、B、C肿节风提取物，任何1种再经有机溶剂提取法、或大孔吸附树脂吸附法、或超临界萃取法分离精制获得总黄酮。
机溶剂提取法有机溶剂乙酸乙酯法提取肿节风干浸膏中的总黄酮用一定量的水将肿节风干膏超声溶解，用一定量的乙酸乙酯反复萃取，乙酸乙酯采用3因素，3水平正交试验确定工艺路萃取，得总黄酮的含量大于50％，总黄酮的回收率在80％以上。
超临界萃取法肿节风提取物，置入超临界萃取器中，调节流量、压力20-50MPa、温度100-350C、时间60-120min得萃取物。测定萃取物中的总黄酮含量，总黄酮的回收率。总黄酮的回收率总黄酮量大于50％，总黄酮的回收率在80％以上。
大孔树脂吸附法大孔吸附树脂提取肿节风干浸膏中的总黄酮取肿节风总浸膏，用水稀释后，再用恒流泵泵入已预处理的大孔吸附树脂吸附。用水洗柱，水洗后用50-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥得固形物即为总黄酮，黄酮的含量大于50％，总黄酮的回收率在80％以上。
总黄酮含量测定对照品溶液制备精密称取105℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置100ml容量瓶中，加60％乙醇70ml，置水浴上微热溶解，放冷，加60％乙醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10ml，置50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
标准曲线制备精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，与6.0ml分别置25ml量瓶中，各加水5ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，用6ml水同法作空白，照分光光度法在500nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液制备精密称取总提物20mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇10ml，溶解，加水稀释定容至刻度，摇匀，即得。精密吸取1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“各加水5ml”起依法操作，以供试品溶液1ml，加水稀释至25ml作空白，过滤，取滤液依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。
经测定总黄酮类以芦丁计算含达到50％以上至99％的纯度。
干燥方法本发明分离精制后的黄酮类提取物可以采用烘干法、真空干燥法、喷雾干燥法。烘干法、真空干燥法干燥时间长，真空干燥前须在水浴上预干燥，将水分控制在20％以内，真空干燥时易拉干成蜂窝状，干燥可在2～3天内完成，反之，含水量高，真空干燥时会溢出，而烘干法所需时间更长。喷雾干燥时间短，可在数小时内完成。三种方法如何选择，可视实际条件。
二、总黄酮有效部位的抗肿瘤及抗肿瘤的增效减毒应用及升白升血小板作用黄酮有效部位及其配制成注射剂整体实验及体外实验均证明有明显的直接抗肿瘤的作用及增效减毒作用，抗肿瘤，放、化疗的毒性反应包括减轻白细胞下降及血小板减少，也可应用于原发性血小板紫癜及继发性血小板紫癜，升高血小板及抗菌抗炎。
(一)整体实验通过对多种肿瘤试验证明，我们提出的黄酮有效部位及其配制成注射剂有明显的直接抗肿瘤的作用。
1、直接抗肿瘤实验在直接抗小鼠S180实体瘤试验及直接抗小鼠S180腹水型肿瘤试验，通过腹腔注射、肌肉注射、尾静脉注射方式给药环磷酰胺、目前市售的肿节风注射液、肿节风黄酮50％以上(50％至99％)纯度的有效部位，实验结果表明肿节风黄酮有效部位抑瘤率在30％和50％之间，使S180肿瘤小鼠的生命延长率60～156％，黄酮有效部位有明显的直接抗肿瘤的作用。
表1 肿节风黄酮有效部位抗肿瘤S180结果(x±s，n＝10)
2、增效实验环磷酰胺治疗小鼠S180实体瘤增效试验中，通过腹腔注射、肌肉注射、尾静脉注射方式给药环磷酰胺减少剂量20mg/kg及环磷酰胺剂量为20mg/kg分别加用肿节风黄酮50％以上(50％至99％)纯度的有效部位。实验结果表明单用环磷酰胺20mg/kg的抑瘤率在5％和20％之间，与肿节风黄酮有效部位合用时抑瘤率在30％和70％之间，说明肿节风黄酮有效部位与环磷酰胺合用时可明显增强化疗药环磷酰胺抗肿瘤作用。
表2 肿节风黄酮有效部位抗肿瘤S180增效实验结果(x±s，n＝10)
3、减毒实验在50％以上(50％至99％)纯度的黄酮对环磷酰胺、阿糖胞苷治疗小鼠S180实体瘤减毒试验中，通过腹腔注射、肌肉注射、尾静脉注射这四种方式给药环磷酰胺、阿糖胞苷和分别加肿节风黄酮50％以上(50％至99％)纯度的有效部位的注射剂。实验结果表明小鼠在给药环磷酰胺、阿糖胞苷后都出现血小板和白细胞显著下降，分别加肿节风黄酮有效部位后，白细胞和血小板明显的上升，说明肿节风黄酮有效部位和化疗药合用时有明显的减毒作用。
表3 肿节风黄酮有效部位抗肿瘤S180减毒实验结果(x±s，n＝10)
(二)体外实验1、对体外培养肿瘤细胞生长抑制作用实验在对体外培养的小鼠S180、卵巢癌SKOV细胞、胰腺癌SW1990细胞的生长抑制作用的实验中，肿节风黄酮有效部位对上述肿瘤细胞生长的抑制率在20％至95％之间，说明黄酮50％以上(50％至99％)纯度的有效部位具有抗肿瘤作用。
2、体外抑菌实验在体外抑菌试验中，采用绿脓杆菌、肺炎杆菌、变形杆菌、大肠杆菌、白色念球菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、甲链球菌、卡他球菌、流感杆菌、肺炎双球菌、链球菌及脆弱类杆菌等15种117株菌，经MIC和MSC试验表明50％以上(50％至99％)纯度的有效部位有不同程度的抗菌作用。
权利要求
1.一种含有肿节风提取物黄酮有效部位的药物组合物，其特征在于所述的肿节风中提取出的黄酮有效部位的纯度为50％至99％。
2.根据权利要求1所述的含有肿节风提取物黄酮有效部位的药物组合物，其特征在于用所述的黄酮有效部位单独或混合或与其它植物提取物或化合物混合制成的制剂，其制剂包括注射剂即针剂，包括粉针剂、小针剂、大针剂、乳浊型注射剂、混悬型注射剂。
3.根据权利要求1或2所述的含有肿节风黄酮提取物有效部位的药物组合物的应用，其特征在于应用于抗肿瘤作用，增效减毒作用，抗肿瘤放、化疗的毒性反应包括减轻白细胞下降及血小板减少。
4.根据权利要求1或2所述的含有肿节风黄酮提取物有效部位的药物组合物的应用，其特征在于应用于治疗血热妄行、皮肤紫斑、原发性血小板减少性紫癜及继发性血小板减少性紫癜，升高血小板。
5.根据权利要求1或2所述的含有肿节风黄酮提取物有效部位的药物组合物的应用，其特征在于应用于抗菌抗炎，治疗咽喉炎、气管支气管炎、肺炎、角膜炎、蜂窝组织炎、阑尾炎。
全文摘要
本发明公开了一种含有肿节风黄酮提取物有效部位的药物组合物，它的有效部位的纯度为50％至99％。用所述的有效部位单独或混合或与其它植物提取物或化合物混合制成的制剂包括注射剂即针剂，包括粉针剂、小针剂、大针剂、乳浊型注射剂、混悬型注射剂。制备方法包括水煎醇沉、不同浓度醇提、乙酸乙酯萃取、大孔树脂、超临界提取等制备成的黄酮有效部位。本发明可用于抗肿瘤及增效减毒，抗肿瘤放、化疗的毒性反应，包括升白细胞及升血小板，也能升高原发性及继发性血小板减少性紫癜患者的血小板，或用于常见细菌感染性疾病。
文档编号A61P27/02GK1839902SQ200610049218
公开日2006年10月4日 申请日期2006年1月18日 优先权日2006年1月18日
发明者连晓媛, 张治针, 汤祖麟 申请人:江西博士联科技研究开发有限责任公司