专利名称：膦甲酸钠组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体地说，本发明涉及以膦甲酸钠为活性成分的药物组合物治疗Th1/Th2平衡紊乱的用途，尤其是乙型肝炎病毒引起的Th1/Th2平衡紊乱。
背景技术：
目前临床研究表明Th1/Th2平衡紊乱是导致多种疾病慢性迁延的主要机制，尤其在各类病毒引起的特定脏器的急性炎症转归为慢性炎症中，扮演了重要角色。因此Th1/Th2平衡紊乱是目前慢性病毒性炎症研究的热点。
辅助性T细胞是分泌产生细胞因子的主要细胞之，分为Th1和Th2两个亚群，Th1亚群分泌IFN-γ，IL-2，LT-α等，主要促进机体细胞介导的免疫反应，有利于病毒清除；Th2亚群分泌IL-4，IL-5，IL-6等，主要促进体液免疫反应。因此，Th1/Th2平衡对维持正常免疫功能具有非常重要的意义。导致Th1/Th2平衡紊乱的原因存在多种可能，目前认为主要是由于各类病毒感染引起如乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV)、柯萨奇B组病毒(CVB)等。
近年研究发现，Th1/Th2功能平衡紊乱主要表现为Th1功能低下而Th2功能亢进，Th1/Th2比值减小。Th1功能低下诱发机体免疫系统不能产生足量的TC细胞及Th1型细胞因子以杀伤、破坏病毒感染的靶细胞和抑制病毒基因的复制及表达，机体不能及时清除病毒；Th2型细胞因子则进一步抑制Th1的功能；病毒抗原的持续刺激又诱导特异性T细胞凋亡或无能，因此形成宿主对病毒抗原的免疫耐受，最终导致了各类病毒感染的慢性迁延。
目前临床缺乏专门用于治疗Th1/Th2平衡紊乱的有效药物。本发明人发现以膦甲酸钠作为有效成分的药物组合物能对Th1/Th2平衡紊乱进行有效调节，同时对上述病毒性疾病也能产生积极的治疗作用，从而完成了本发明。
发明内容
本发明的目的是提供一种药物组合物的抗Th1/Th2平衡紊乱的用途，尤其是慢性乙型肝炎病毒(HBV)引起的Th1/Th2平衡紊乱。
本发明所述的药物组合物包括膦甲酸钠和药用可接受的辅料。其中膦甲酸钠的含量可以为0.1％-10％，优选为0.5％-5.0％，最优选为1.0％-3.0％。
本发明所述组合物可以制备成适合多种给药方式的制剂形式。主要包括适合口服给药和注射给药的制剂形式。优选为注射制剂，最优选为静脉用大容量NaCL注射液。
适合口服给药的药物制剂是指药学上口服给药的常规剂型包括片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、滴丸、口服液、微丸剂等。优选为片剂、胶囊、滴丸剂。其中片剂包括素片、包衣片、缓释片、分散片、肠溶片、含片、咀嚼片、泡腾片等；胶囊包括硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、肠溶胶囊等；微丸剂包括普通微丸、缓释微丸、肠溶微丸、控释微丸等。辅料可采用药学可接受的常规辅料。采用药学常规制剂方式制备。
注射给药的制剂可以利用膦甲酸钠与无菌载体采用药学常规方法制备而成，并且根据所需的浓度将其溶解于载体中。在制备溶液时，可以将活性成分溶解于注射用水并过滤灭菌，之后灌注到容器中密封保存。有利的是，为了适合静脉注射可以加入注射剂常用的辅助剂诸如防腐剂、缓冲剂、酸碱度调节剂、渗透调节剂、增溶剂、稳定剂、抗氧剂等。
本发明人考察了膦甲酸钠组合物对免疫功能低下模型大鼠的免疫器官以及Th1/Th2平衡的影响，发现本发明所述的膦甲酸钠组合物能有效调节模型大鼠Th1/Th2比值紊乱并明显改善大鼠受损的免疫功能。通过这个实验可以说明本发明所述的膦甲酸钠组合物能够恢复Th1/Th2功能平衡。
通过临床实验，本发明人发现给予Th1/Th2平衡紊乱的患者治疗剂量的含膦甲酸钠的药物组合物可以有效提高Th1/Th2的比值。该组合物对各类病毒尤其是乙型肝炎病毒引起的Th1/Th2平衡紊乱作用显著。特别是对改善乙型肝炎病毒造成的慢性重度乙型肝炎和黄疸型慢性重度乙型肝炎患者的Th1/Th2功能紊乱具有显著疗效。
本说明书中所述的膦甲酸钠，其化学名为膦甲酸三钠盐六水合物或膦酰甲酸三钠六水合物。
本说明书中所述Th1/Th2平衡紊乱是指各种原因导致的Th1、Th2之间功能平衡的失调，尤其是指采用Th1、Th2分泌的具有特征性的细胞因子作为指标所表示的Th1/Th2功能紊乱。
本说明书中所述各种导致Th1/Th2平衡紊乱的原因存在多种可能，主要是指但并不仅指各类病毒如乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV)、柯萨奇B组病毒(CVB)等尤其是乙型肝炎病毒(HBV)。
本说明书所述的乙型肝炎病毒引起的Th1/Th2平衡紊乱，尤其指慢性重度乙型肝炎或黄疸型慢性重度乙型肝炎患者的Th1/Th2功能紊乱。
由于Th1/Th2平衡紊乱在多种疾病的发展和转归过程中均扮演了重要角色，因此本医药组合物对发病过程中出现Th1/Th2平衡紊乱的各类疾病也具有积极的治疗作用，尤其是对人类乙型肝炎和丙型肝炎的治疗作用最为显著。
本发明人通过实施例1、2、3详细说明本发明的有益效果。
具体实施例方式
我们结合实施方式具体说明本发明。以下实施例仅用于说明本发明的技术内容，并非用于限制本发明的范围。
实施例1膦甲酸钠组合物对免疫功能低下大鼠Th1/Th2平衡的影响。
模型制备给雄性Wistar大鼠隔日1次皮下注射醋酸考的松100mg/kg，连续14d制成免疫功能低下大鼠模型。
试剂及实验方法IFN-检测试剂盒；IL-4检测试剂盒。方法大鼠50只200g±20g，
♀各半。随机分成5组正常组、模型组以及大、中、小剂量给药组。模型组和各给药组用上述方法造模。造模同时开始腹腔注射给予同体积膦甲酸钠注射液，剂量分别为200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg，模型组和正常组给予同等体积生理盐水。实验结束后各组大鼠称重，眼眶静脉取血，处死解剖脾脏称重计算脾指数，离心分离血清冻存于-20℃备检。实验采用双抗体夹心ELISA法，具体操作按照说明书进行。测定各血清标本中IFN-γ，IL-4的浓度(pg·ml-1)。以IFN-γ浓度代表Th1，IL-4浓度代表Th2，从而计算Th1与Th2的比值。结果见表3、4。
表3膦甲酸钠注射液对大鼠IFN-γ、IL-4以及Th1/Th2的影响
*p＜0.05为与正常组比较；#p＜0.05为与模型组比较。
表4膦甲酸钠注射液对大鼠体重、脾重以及脾指数的影响
*p＜0.05为与正常组比较；#p＜0.05为与模型组比较。
实验结果可知，腹腔注射给予免疫功能低下模型大鼠膦甲酸钠注射液，能提高大鼠血清IFN-γ浓度，同时降低血清IL-4的含量，提高Th1/Th2比值，大、中剂量组作用相当。由表4可知免疫功能低下模型组大鼠体重和脾重以及脾指数较正常组均有明显下降，给予膦甲酸钠注射液后上述指标有所恢复，尤其是大、中剂量组脾指数接近正常值，小剂量组也有升高趋势但没有统计学差异。
本实验说明膦甲酸钠注射液能有效改善醋酸考的松诱导的大鼠免疫功能低下，恢复Th1/Th2的平衡失调。
实施例2慢性乙型肝炎轻、中度患者25例，男性15例，女性10例；病例诊断均按中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会于2000年9月全国病毒性肝炎学术会议(西安)联合修订的《病毒性肝炎防治方案》进行。将上诉患者随机分成对照组和治疗组，治疗组给予膦甲酸钠注射液3g/次，一日两次，连续4周。
试剂及方法试剂IFN-检测试剂盒；IL-4检测试剂盒。方法IFN-γ，IL-4检测采用双抗体夹心酶联分析法。从已平衡至室温的密封袋中取出所需板条，分别将标本及不同浓度标准品(100μL/孔)加入相应孔中，然后再加入生物素化抗体工作液(50μL/孔)和酶结合物(20～25℃)共同孵育120min。洗板3次，先后加入底物A，B各100μL/孔，避光置室温10～30min。加入终止液50μL/孔，混匀后即刻在ELISA读数仪上测量A450值，绘制标准曲线，并测定各血清标本中IFN-γ，IL-4的浓度(ng·L-1)。以IFN-γ浓度代表Th1，IL-4浓度代表Th2，从而计算Th1与Th2的比值。
实验结果表1膦甲酸钠注射液对慢性中轻度乙型肝炎IFN-γ、IL-4以及Th1/Th2的影响
*p＜0.05为与对照组比。
实验结果表明，给予患者注射治疗剂量的膦甲酸钠注射液能明显提高慢性乙肝患者的TH1/TH2比值，改善患者的TH1/TH2平衡紊乱。
实施例3本实验考察慢性重度乙型肝炎患者在治疗前后IFN-γ，IL-4变化以此推算药物治疗对患者Th1与Th2功能的影响。选择在整个治疗阶段未发生死亡的慢性重度乙型肝炎患者12例(男性11例，女性1例)和重型慢性乙型肝炎患者9例(均为男性)。病例诊断均按中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会于2000年9月全国病毒性肝炎学术会议(西安)联合修订的《病毒性肝炎防治方案》进行。两组在综合治疗的基础上均给予膦甲酸钠注射液3g/次，一日两次，连续4周。检测治疗前后患者Th1/Th2的比值变化。
试剂及方法试剂IFN-检测试剂盒；IL-4检测试剂盒。方法上述各组病例患者各抽取静脉血3ml，分离血清冻存于-20℃备检。实验采用双抗体夹心ELISA法，具体操作按照说明书进行。测定各血清标本中IFN-γ，IL-4的浓度(pg·ml-1)。以IFN-γ浓度代表Th1，IL-4浓度代表Th2，从而计算Th1与Th2的比值。
实验结果表2膦甲酸钠注射液对慢性重度乙型肝炎、重型慢性乙型肝炎患者治疗前后Th1/Th2的影响
*p＜0.05为与给药前对应数据比较。
从上述结果可以看出，经过膦甲酸钠注射液的治疗，两组患者给药前后IFN-γ变化没有显著差异，而给药后IL-4显著降低，Th1/Th2明显升高。表明膦甲酸钠注射液能明显改善慢性重度乙型肝炎和重型慢性乙型肝炎患者的Th1/Th2平衡紊乱。
权利要求
1.一种以膦甲酸钠为活性成分的药物组合物在制备治疗Th1/Th2平衡紊乱的药物中的用途。
2.权利要求1所述的用途，其中Th1/Th2平衡紊乱是指各类病毒引起的Th1/Th2平衡紊乱。
3.权利要求2所述的用途，其中各类病毒引起的Th1/Th2平衡紊乱是指乙型肝炎病毒引起的Th1/Th2平衡紊乱。
4.权利要求3所述的用途，其中乙型肝炎病毒引起的Th1/Th2平衡紊乱是指慢性重度乙型肝炎或黄疸型慢性重度乙型肝炎患者的Th1/Th2功能紊乱。
5.根据权利要求1所述的用途，其中组合物为注射剂。
6.权利要求5所述的用途，其中所述的注射剂为大容量NaCL注射液。
7.权利要求1-6任一所述的用途，其中以膦甲酸钠为活性成分的药物组合物中膦甲酸钠占组合物总质量的0.1-10％。
8.权利要求1-6任一所述的用途，其中以膦甲酸钠为活性成分的药物组合物中膦甲酸钠占组合物总质量的0.5-5.0％。
9.权利要求1-6任一所述的用途，其中以膦甲酸钠为活性成分的药物组合物中膦甲酸钠占组合物总质量的1.0-3.0％。
全文摘要
本发明提供了一种以磷甲酸钠为活性成分的药物组合物治疗Th1/Th2平衡紊乱的新临床用途，尤其是在治疗因乙型肝炎病毒引起的Th1/Th2平衡紊乱中的用途。
文档编号A61P31/00GK1943582SQ20061009728
公开日2007年4月11日 申请日期2006年10月27日 优先权日2006年10月27日
发明者沈军, 徐中南 申请人:江苏正大天晴药业股份有限公司