专利名称：：疫苗组合物的制作方法疫翁组合物5本发明是分案申请，原申i貪的申请日为2002年3月28日，申请号为02811091.9(PCT/EP02/03573),发明名称为"疫苗组合物"0才支术领域本发明涉及新的联合疫苗制剂。为使赋予抗多种病原体的保护所需的免疫接种次数最少、降低给药成本以及增加接受率和覆盖率，io联合疫苗(提供抗多种病原体的保护)非常理想。有许多资料证实的抗原竟争(或干扰)现象使多组分疫苗的开发复杂化。抗原干扰是指观察给予时观测到的免疫应答减小。挾术背景15已知I关合-疫笛可预防百日咳ff德特氏菌(Sor血te/toj9er加,w'w)、破和可选预防乙型肝炎病毒和/或b型流感嗜血翁(/foe顯'，M/wsW/Jwen加e)(参见例如WO93/24148和W'O97/00697)。
发明内容20本发明涉及生产迄今为止最具挑战性的多价疫苗，给予该疫笛可预防或治疗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌(W.we"OTpfefo)的感染，优逸还预防或治疗流感嗜血菌、肺炎链J求菌(泣re/tococcwA'/7wew附o"we)、甲型肝炎病毒和/或脊髓灰盾炎病毒的感染，其中所述疫苗的组分不明显干扰25该疫苗中任一组分的免疫学功效。因此，在本发明的一方面，提供一种多价免疫原性组合物，用于给宿主^是供保护作用以"t氐抗百日咳博德特氏菌、石皮伤风梭菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒和脑膜炎杏瑟氏球翁所引起的疾病，该多价免疫原性組合物包含30(a)或者灭活全细胞百日咳博德特氏菌(Pw)，或者两种或多种非细胞百日咳组分(Pa)[优选后者],(b)破—伤风类毒素(TT或T)，(e)白喉类毒素(DT或D)，(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或画)》(e)灭活脊髓灰质炎病毒(IPV),和(f)载体蛋白和逸自以下细菌的莢膜多糠的任一种或二者的綴合物Y型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型脑膜炎奈5瑟氏球菌(MenC)，以及(g)可逸载体l白和B型流感嗜血菌(Hib)荚膜多糖的缀合物。以上的免疫原性组会物还可含有1、2、3、4、5或6种逸自以下的組分A型脑膜炎奈瑟氏球菌多糖[MenA](优逸缀合型)、W型W脑膜炎奈瑟氏球菌多糖[Men司(优逸缀合型)、楼寒沙门氏菌(&lioe//oVi多糖、脑膜炎奈瑟氐球菌(优逸B血'清型)外膜小泡、一种或多种驗膜炎奈瑟氏球菌(优选B血清型)外膜(表面暴露的)蛋白以及灭活、减毒甲型肝炎病毒(HepA-优逸称为"Havnx"[SmithKlineBeeehamBiotogicals的制品)，这些鍾分对组合物中的4壬15—种抗原都不存在显著千扰问题。在本发明第二方面，提供各种各样的含有2种或3种多价免疫原性組合物的高级药盒，所迷药盒能够保护襠主抵抗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒梓菌、乙型肝炎病毒、發髓灰廣炎病毒和肺炎链球^以及可逸的脑膜炎奈瑟氏球菌和统感嗜血菌所引起的20疾病。在本发明第二方面的第一个实施方案中，提供一种含2种多价免疫原性組合物的药盒，用亍保护宿主抵抗百日喧博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰艰炎病毒和肺炎链球菌以及可逸的脑膜炎奈瑟氏球菌和流感嗜血菌所引起的疾病。25所述药盒含有的第一个容器包含(a)或者灭沽全細胞百日咳博德特氏菌(Pw)，或者两种或多种非細胞百日咳組分(Pa)[优逸后者，(b)破伤风类毒素(TT或T)，(c)白喉类毒素(DT或D),(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或flBi,和(e)灭活脊髄灰质炎病毒(1PV)，所述药盒含有的第二个容器包含5(2a)载体蛋白和肺炎链球菌荚膜多糖的一种或多种缀合物，.,所述药盒含有的第三个容器包含(3a)载体蛋白和逸自以下細菌的芙膜多糖的任一种或二者的缀合物Y型驗膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型脑膜炎奈瑟氏s求菌(MenC)，和(3b)载体蛋白和B型流感嗜血菌(ffib)荚膜多糖的綴杏物。以上本发明药盒的任一种容器或上述容器还可含有L2、3、4、55、6或7种选自以下的组分A型脑膜炎奈瑟氏球菌多糖[MenA〗(优逸缀合型)、W型脑膜炎奈瑟氏球茵多糖[MenW](优选缀合型)、伤寒沙门氏菌Vi多糖、脑膜炎奈瑟氐珠菌(优逸B血清型)外膜小泡、一种或多种脑膜炎奈瑟氏球菌(优逸B血清型)外膜(表面暴露的)蛋白、HepA(如上所述)和一种或多种肺炎链球菌蛋甶(优选表面暴露的)，i()这些组分对组合物中的任一种抗原都不存在显著干扰问题。所述药盒的容器可单独包装，或者优逸一起包装。所述药盒最好在两个或两个以上容器中提供一张疫苗给药说明书。其中，药盒中的一个容器包含某一多糖缀合物，优逸药盒中的其它容器没有相同缀合物。15本发明人惊奮地发现，以上述方式提供的药盒有利地以最佳方式将各种抗原呈递给宿主免疫系统。所述药盒给执业医师提供最佳的宿主免疫接种方法，该方法具有以下一种或多种优势(优选2种或3种，最优逸全部)全部抗原的保护效力、最小的反应原性、最小的载体抑制干扰、最小的佐剂/抗原f扰或最小的抗原/抗原干扰。按尽管在优选实施方案中第一个和第二个容器(途用时的第三个容器)的疫苗在不同部位(如下所述)同时给予，位在一个选#性实施方案中，本发明人设想可将第一个和第二个容器的内含物混合(优选临用前混合)，然后作为羊剂疫笛给予。2具体实施方式本发明的抗原破伤风类毒素(TT)的制备方法是本领城公知的。例如，优选通过从破伤风梭菌培养物纯化毒素然后化学解毒生产TT,但可逸地通过純化所述毒素的重组或基因工程解毒类似物(如EP209281所述)制备。"破伤风类毒素"也包括全表蛋白的免疫原性片段(例如片段C自参见EP478602)。白喉类毒素(DT)的制备方法也是本领域公知的。例如，优逸通5过从白喉棒軒菌培养物纯化毒素然后化学解毒生产DT,但可选地通过純化所述毒素的重組或基固工程鮮毒类似物(例如CRM197，或US4,709，017、US5,843,711、US5,601,827和US5,917,017所述的其它突变体)制备。非细胞百曰咳组分(Pa)是本领域/^知的。实例包括百日咳类毒素io(PT)、丝状血细胞凝集素(FHA)、pertactm(PRN)和凝集原2和3。这些抗原部分纯化或高度純化。优选在疫苗中使用2种或多种非細胞百曰咳组分。更优选在疫苗中楼入以上示例非细胞百日咳組分中的2、3、4种或全部5种最优逸包括PT、FHA和PRN。PT可通过多种方式生产,例如通过从百日咳博德特氏菌培养物纯化毒素然后i5化学解毒制备，或者通过魄化PT的基S工程解毒类似物(例如1JS5,085,862所述)制备。WO93/248公开了适亍本发明的灭活全细胞百日喧博德特氏菌(Pw)制备方法，也公开了适亍生产DT-TT-Pw-HepB和DT-TT-Pa-HepB疫翁的配制方法。20灭活脊髄灰质炎病毒(IPV)优选包含疫苗领域视为标准的1、2和3型。最优选的是Salk脊髓灰质炎疫翁。通常，本发明的肺炎链球菌疫^包含多糠抗原(优逸缀合型)，其中所述多糖得自逸自以下的至少4种肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、2519A、19F、20、22F、23F和33F。4种血清型优选包括6B、14、19F和2SF。更优选在组合物中包括至少7种血清型，例如得自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F。,更优逸在组合物中还包括7种以上的血清型，例如至少11种血清型。例如，一个实施方案中的组合物包括ll种得自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F的笑膜多糖(优逸缀合型)。尽管本发明还考虑了其它的多糖抗原，例如23抗原(例如血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B,17F、認、皿、護、20、22F、23F5和33F),但在本发明的优选实施方案中，包括至少D种多糖抗原(优逸缀合型、对亍老年人接种疫苗(例如为了预防肺炎)，上述的优逸11价抗原組合物中包括血清型8和12F(最优逸还有15和22)形成13/15价疫笛是有利的，而对f婴儿和学步幼儿(更关注中耳炎)，包含血清型106A和19A形成13价疫苗有利缀合物細菌荚膜多糖缀合物可包含任何含至少一种T辅助表位的载体肽、多歉或蛋白。使用的栽体蛋白优逸逸自破伤风类毒素、白喉5类毒素、C画197、重组白喉毒素(如US4,709,017、WO93/25210、WO95/33481或WO00/48638任一个所述)、肺炎链球菌的肺炎球菌溶血素(优逸化学解毒的或解毒突变体)、脑膜炎奈瑟氏球菌OMPC和流感嗜血菌D蛋白(EP594610)。由于已知的载体押制诈用，如果在本发明的每种组合物中将其中所包含的多糖抗原("n"抗原)与一20种以上的载体缀合是有利的。B此，可在一种载体上(独立地)携I(IFl)种多糠，西在不同的载体上携帶1种多糖，或在一种载体上揭帶(》2)种多糠，而在两种不同的载体上携帶2种多糖，依此类推。例如，在含4种細菌多糖缀合物的疫禽中，1种、2种或全部4种缀合物都可以缀合至不同的载体。然而，D發白在本发明的組合物中用作载25体有利，因为D蛋由可用于组合物中的各种(2、3、4或更多种)多糖而没有显箸的载体押制作用。最优选是以H&作为TT繳合物，肺炎球菌多糖作为D蛋白、DT或CRM197綴合辆，而MenA、MenC、MenY和MenW作为TT或PD的缀合物。D蛋白还是一种有用的载体，因为它还提供了另一种可提供抗流感嗜血蓠保护的抗原。可采用任何已知的方法(例如Likhite的美国专利4,372，945和Armor等的美国专利4,474,757)，将所述多糖与所述载体蛋白连接。优逸的是进行CDAP缀合(WO95/08348)。5在CDAP中，优选的是使用氰化剂四氟硼酸1-氰基-二曱基氨基吡啶镜(CDAP)来合成多糖-發白缀合物。氰化反应可在相对温和的条件下透行，这遊免了碱敏感性多糖的水解。该合成方法允许直接与载体蛋白偶联。本发明免疫原性组合物优逸配制为疫苗，以下述方式体内给予被組合物中的其它各种組分所削弱》所述基本不被削弱是指在免疫接种时，所获得的针对每种組分的抗体效价(例如IgG)超过该抗原羊独给予时所蔽得效价的60%,优逸超过70%,t优逸超过80%，再更优逸超过卯％，最优逸超过95-100%。令人感兴趣的是,对于上述的药盒组合，在免疫接种时所获得的抗Hib荚膜多糖或某些肺炎球菌多糖的抗体效价有可能接近或超过该抗原羊独給予时所袭得效^r的ioo%。'本发明免疫原性组合物优逸配制为体内给予*主的疫*，使得疗者中的血清保护标准。这在整个群体的疫苗功效评价中是一个重25要的试验。高于所述抗原血清錄化型宿主的相关抗体效价是众所周知的，这种效价由WHO之类的组织公布。统计学显著的受治疗者样品优选超过80%血清*牝型，更优逸超过90%,再更优选超过93%，最优i4为96-100%。本发明的免疫原性组合物优逸加有佐剂。合遞的佐剂包括4g魏，例如氣氧化鋁凝胶(alum)或磷酸鋁，位也可以是铜盐、铁盐或辞盐，或者可以是酰化酪氛酸或酰化糠、P日离f或阴离予衍生化多糖或聚裤腈的不溶性悬浮液。5还可以逸择为TH1型应答优先诱导物的佐剂，从而有助于免疫应答的细胞介导分支。高水平的Thl型細胞B子往往利于讲导出对给定抗原的細胞介导的免疫应答，而高氷平的Th2型細胞因子往往利亍箭导出对所述抗原的体淡免疫应答。io促进主要为Thl应答的合途佐剂系统包括单裤醃脂质A或其衍生物;'特别是脱自O，酜化单裤酰脂质A，以复羊,酰脂腐A(优逸3-脱-O銑化羊磷酰脂盾A(3D-MPL))和鋁盐的组合。一种增强系统包括单,酰脂质A和鬼香衍生物的組合，特别是WO94/00153公开的QS21和3D^IPL的组合，或者如WO96/33739公开的用胆固15醇将QS21谇灭从而反应原性4交弱的一种组合物。WO95/17210描述了一种特别有效的佐剂制剂，其在氷包油乳剂中含有QS21、3D-MPL和生育酚。疫苗可还含有兔香》更优逸QS2L制剂还可含有水包油fL剂和生育酚(WO95/17210》包含寡核苷酸的未甲基化CpG(WO96/02555)也是TH1应答的优先箭导物，遞合应用于本发明;，20在上述免疫原性組合物中4S盐是优逸的佐剂。具体地说，HepB优选应当吸附到磷酸钼上，然后和其它组分混合。Pertaetin优逸吸附到&氧化德上，然后和其它组分混合。为了使本发明紐合物中的佐剂(特别是鋁盐)水平最小化，多糖缀合物可以不透行佐剂化《本发明还提供一种生,疫笛制剂的方法，该方法包括将疫苗组25分和药学上可接受的赋形剂混合在一起的步膝。特别优逸的本发明DTPa组合物(羊独使用或者作为上述药盒之—的第一个容器的内含物)包含TT、DT、Pa(优逸包含PT、FHA和PRN-PRN优逸吸附到&氧化4S上)、HepB(优逸吸附到磷酸鋁上)、IPV、MenC(优逸缀合D蛋白、TT、DT或CRM197)以及可逸的MenY(优选缀合D蛋白、TT、DT或CRM197)。所述组合物还可以可逸地含有Hib(优选綴合TT和/或未吸附佐剂)。所述疫苗优逸以2小瓶提供，第一瓶含液体形或的DTPa-IPV-HepB,而第二瓶含冻干形式的5MenC(以及可选的Me:nY和/或Hib),最好有蔗糖、乳糖或海藻糖之类的抗結块剂。所述小瓶内容物可在临使用前'混合在一个容器中，然后以一次给药/注射给予宿主。该组合物也可以用于上述药盒(第一个容器的内含物)。.因包含Hib(优选缀合TT和/或未吸附佐剂)和/或MenC和MenYio(优逸缀合I〕蛋白、TT、DT或CRM197和/或未吸附佐剂)的任一种或二者的容器的药盒起见，i亥组合物优选以冻干形式储存，最好有嚴糖、乳糖或海藻糖之类的抗結决剂。因含本发明DTPa组合物(单独使用或作为上述药盒之一的第一个容器的内含物)的容器包含DTPa和Hib和/或MenC和MenY的任u—种或二者(其中Hib和/或Men组分缀会TT)起见，优逸平衡疫苗中的TT含量，使得单个容器中的总TT含量不超过临界l阔值(例如40、45、50、60、70或80figTT)，以降低、最'卜化或防止TT缀合多糖的TT免疫千扰或载体抑制。该阈值优逸为50吗。本发明人发现上述缀合物中的多糖:TT比率可降低至1:0.5-1.5(重量)(优选1:0.6-1.2，20最优选大约1:1),在此范围有益。例如在DTPa-HBJPV-Hib(TT)-MenC(TT)疫笛中5DTPa中T的量优逸应当降至通常的称准量以下(优逸约常规量的1/4至3/4,最优选约常规量的1/2)，例如降低至10，30吗TT，优选20-25吗TT。例如，如果缀合Hib的TT量大约为12吗TT，而缀合MenC的TT量大约为5〖丄gTT,未缀合TT的量为24昭，则25总TT量约为41,。特别优逸的Hib/肺炎球菌多糖組合物(萃独使用或作为上迖药盒之一的笫二个容器的内含物)包含ffib(优逸缀合TT和/或未吸附佐剂)和多种(例如!、2、3、4、5、6、7、8、9,10或11种以上)肺炎球菌多糖缀合物(例如以上"本发明的肺炎ll球菌疫苗，，一段所迷的那些组合物)。最优逸包括ll种多糖(得自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F)。肺炎球菌多糖ft逸缀会至PD、DT、CRM197或TT。在一个优逸实施方案中，Hib多糖抗原未吸附到佐5剂上，具体地说是4Si上。l管肺炎球菌多糖抗原可透行佐剂化(优选吸附到磷酸4S上)，但它们也没有吸附到佐剂上，具体地说是4g袭上。在一个具体的实施方案中，组合物中不存在铝盐佐剂。本发明組合物可以包括其它抗原(例如脑膜炎奈瑟氏球菌C型荚膜多糖缀合物[优选缀合到D蛋白、TT、DT或CRM197上和/或未吸附佐剂)，io扭在一个选捧性实施方案中，Hib和肺炎球菌多糖缀合物是组合物中仅存的抗原在以上制剂的其它具体实施方案中，Hit)和肺炎球菌多糖未&合至同一载体(具体地说该载体是CRM197)。.所述疫苗可以以1个容器(内容物或者为激体形式或者为冻干形式)或2个小瓶提供，第一瓶含Hit)(优逸冻干的)，第二瓶含肺炎球15菌抗原.(优逸液体形式)。冻干组合物最好有^糖、ll糖或海藻糠之类的抗结决剂。所述小瓶的内容物可在临使用前渡合在一个容器中，然后以一次给药/注射给予宿主。对于这样的制剂，在免疫接种时所疢得的抗ffib荚膜多糖的抗体效价有可能接近或最常见是超过该抗原单独给于时所袭得效价的100%在优逸的实施方案中，组合物中20的肺炎球菌多糖缀合物与其单独给予相比没有A现(明显的)有害作用(就保护性功效而论)。这可根据测量最后初次剂量(初次剂量通常为出生后第一年中给予3次免疫接种)后1'i^〗fc糖抗体的初次后凡何平均浓度(GMC)评价。本发明疫苗的GMC(两/ml)优逸应当超it未缀合Hib的肺炎球菌多糖给予时的GMC的55%(更优逸超过60%、2570%、80%或90%)。另一个元有害作用发生的指标是在给予免疫接种后1个月对比本发明疫苗和未级合扭b的疫苗时，抗体浓度不低亍0,5吗/ml的受治疗者百分比差弄不超过l(f/ci(优逸低于9%、7%、5%、3%或尽管上文提到了HftK肺炎球菌和脑膜炎球菌《多糖》，扭设想本发明可延伸至疫苗领域众所周知的ffib和肺炎球菌"分级多糖"和《寡*，，(多糖大小咸小至易处理的耀度，仍能够箭导宿主的保护性免疫应答)(参见例如EP497525)。有利的是，MenY可与天然多糖5分予量0.1、0,2、03、0,4、Oj、0,6、0。7、OJ或0,9倍的寡糖作为S^詹缀合物存在。在本发明再一方面，提供一种如本文所述用亍药物的免疫原性组合物或疫笛。在本发明再一方面，提供本发明免疫原性组合物在药物生产中io的用途，所述药物用于治疗或ff防由百日喧博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰膚炎病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌(和可逸流感嗜血菌)感染所引起的疾病。而且，还提供本发明免疫原性組合物在疫苗药盒生产中的用途，所述疫*药盒用亍治疗或预防由百日咳博德特氐菌、^皮伤风梭翁、白喉棒軒籙、乙型肝炎病15毒、鲁髓灰貭炎病毒、流感嗜血菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌感染所爿起的疾病。另外，还提供免疫人类宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰貭炎病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌(和可逸流感嗜血菌)所致疾痛的方法，该方法包括给予所述稽主20免疫保护剂量的本发明免疫原性组合物。本发明再一方面涉及用上述本发明药盒免疫人类宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒和脊髓灰盾炎病毒以1—种或多种流感嗜血菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌所致疾病的方法，该方法包括如下所述的同时给药方案。25同时给药方案该方案包括以下步樣给予宿主免疫保护剂f的药盒(例如本发明的一种药盒)第一个容器的免疫原性组合物，给予部位与给f该药盒第二个(或第三个)容器的免疫原性組合物的部位不同，这些部.位由不同的淋巴結引流。所述不同部位优逸为不同肢体。疫'翁给予优逸为互相之间在24小时之内，更优逸为同一天》最优逸为竊主就医时同时给予。优逸宿主随后用两种(或全部)疫苗以相同的方式再1次或5多次(优逸2次)免疫接种，每次间隔242周(优逸大约1个月)。经常在耀二次给予恭的2周和7个月之间可以给予第三次免疫接种。例如，可按照正常的DTP疫苗给药方案如上给予疫笛(例如三次接种体系，每次接种相隔1个月，如3、4和5月龄方案；或3、5和11月龄方案；或3、5和12月齡方案X这祥的给药方案使针对药盒的两10个(或全部)容器中的抗原的免疫应答最佳。可以相同的方式由A生后第二年至成年的任何时候给予疫翁加强。尽管接种优逸通过肌内途径透行，但可逸地在粘膜佐剂(优逸大肠軒菌的kwreth9或热不聴、定毒素[LT]及其突变体或片歡)存在下由粘膜进行加强可能有利，(例如鼻内给予疫笛易亍给終，特别是当宿l5主胃驗外接种时可非常好地趁作用)，疫禽的给药部位不需要引流至不同的淋巳結。还设想了容器中本发明免疫原性组合物在用于同时给药的本发明疫苗药盒生产方法中的用途。，在崎个或两个以上容器中包含TT的药盒本发明另一方面涉及用于同时给药(如上定义)的疫苗药盒，其中两个或两个以上容器的TT含量平衡至有利于减少、最小化或预防TT缀合多糖的TT免疫干扰或载体押制。TT是一种特别好的载体，但是巳知它如果在疫苗组合物中过量使用，特别是如杲还存在游离的25TT，那么它具有限制作用。如果过量使用，所有缀合TT的抗原都表现出抗体效价下降因此，本领域存在一个在火联合疫苗的许多不同领域(例如作为游离抗原或作为许多多糖抗原的载体)中如何使用TT而没有以上缺点的问题。本发明人发现了解决该问题的最佳方法；通过使用药盒同时给药方案(如上定叉)，可给予第一个容器含有的TT量不超过发生免疫干扰或载体抑制的临界阈值的疫苗和第二个容器(以及任选的第三个容器)含有的TT量不超过发生免疫干.扰或氧体押制的临界阈值的疫^，使得同时给予的总TT量高于该临界阈值，免5疫千扰(或载体抑制)减到最小(即低f如果该组分以一次注射给予)，优选根本不发生。临界阈值可为4()、45、50、60、70或80'ugTT，优逸約50iigTT。因此，可给f的最火总TT最高约为药盒容器数(2或3)乘以临界阈值所茯得的量。因此，本发明提供一种用于同时给予的含2(或3)个容器的药盒，w所述容器含有2(或3)种免疫原性組合物，每种組合物含有游离和/袭缀合形式的TT，其中每个容器的TT量不超过核界阈值，以预防或最小化TT免疫干扰(或载体抑制)作用，但所有容器中的总TT超过所述临界阈值。优逸至少一个容器应当含有游离(非缀合型)TT,最优逸应自包15含在DTPa或DTPw多价疫笛中。尽管存在的游离TT量可在大约42兩的正常水平左右，但本发明的另一优势使存在量降低(10-SO或10-加例如10、15、20、25或30歸)，银仍可激发最佳的抗TT抗体效价，而免疫干扰或载体抑制作用减至最小(或没有)。优选至少1个(但可能.是2或3个)容器应当包括至少1(但可能20是2、3、4、5、6、7或更多)种TT缀合多糖。当^离TT存在于1个容器中时，优选在药盒的一个其它容器中应当有至少一种TT缀合多糖。所述多糖可以为本申请所述的任何一种，优选为一种或多种肺炎球菌多糖(如上所述)或MenC、MenY或Hib。所途药盒优选为如上所逸的任一种本发明药盒。25药盒中存在的1、2、3或全部多糖-TT缀合物优选使多糖:TT比率降低(与标准缀合物相比)至1:0.5-1J(重量)(优选1:0.6-1.2，最优选大约1:1),使得所述级合物仍有免疫学功能，但容易将TT免疫干扰或载体抑制作用减至最+或杜絶。还提供使用上述药盒免疫人类宿主的方法，该方法包括在第一个部位给予宿主免疫保护剂量的笫一个容器的免疫原性组合物，在第二个部位给予宿主免疫保护剂量的笫二个容器的免疫原性组合物.(以及任选在第三个部4立給予宿主免疫保护剂量的笫三个容器的免疫5原性组合物)，真中所述第一和第二(和笫三)个部位通过不同的脉巴同时给药应当如上所述进行。第一和第二(和第三)个部位优选为緣主的不同肢体。第一和第二(和笫三)个容器的免疫原性组合物优选在同—天給,予。优选随后以相同的方式再1次或多次免疫接种宿主，io毎)夂间隔2，12周，更优逸再免疫接种2次，每次间隔大约1-2个月的周期。在,个或两个以上容器含DT或CRM197的药盒本发明的再一方面涉及同时给予(如上定义)的疫苗药盒，其中两15个或两个以上容器的DT含f(包括DT和任一免疫学等同突变体，如CRM197)平衡至有利亍增强DT(或CM197)缀合多糖的抗体效价，而反应原性减至最小(即反应原性比容器中的組分单次注射给予低)。DT和CRM197是非常好的栽体，扭是已知DT很大程度上促成了包含其的疫苗的反应原性。本发明人发现通过使用药盒同时给药方案(如20上定义)，笫一个容器中含高量(4(H50|ig，优选60-120歸，更优选70-100fig，最优选大约95貼)存在的DT(和/或CRM:197)的疫苗有利，其中第二个容器(和任逸的第三个容器)中含DT-或CRMW1缀合多糖的疫苗同时给f。本发明的优势在f:a)尽管第一个容器中的DT含量高，但高得25不足以诱发DT免疫千扰或栽体抑制作用，b)DT-或CRM-197多糖缀合物与笫一个容器分开，使得笫一个容器疫苗的反应原性没有增加，另c)针对缀合DT或CRM197的多糖的抗体效价没有降低,并可能增加(与所述缀合物羊独给予相比或与第一个容器中存在4交低量DT相比效价较高)。本发明因此提供一种用f同时给药(如上定叉)的含2(或3)个容器的药盒，容器含有2(或3)种免疫原性組合物，其中笫一个容器含有高量(如上定义)存在的DT内容物(DT力pCRM197;优逸游离或非5缀合型)，而第二(和第三)个容器包含一种或多种缀合DT和/或.CRM197的多糖。第一个容器优选应当包含游离(非級合型)DT,最优逸应当包含在DTPa或DTPw多价疫禽中。缀合DT/CRM197的多糖可以是本申请描述的任一种；优*以io下的一种或多种肺炎球菌多糖1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、..9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F或33F、MenC、MenY或Hik按照本发明，维持的针对当，最优选增强。'15优逸所迷药盒是如上所途的本发明药盒的任一种。药盒中存在的1、2、3或^p多糖-DT(CRM197)缀合物优逸使多糖:DT/CRM197比率降低(与樣准級合物相比)至1:0,5-L5(重量)(优选1:0.6-1,2,最优逸大约1:1)。还提供使用上迷药盒免疫人类宿主的方法，该方法包括在第一20个部位给予宿主免疫保护剂量的第一个容ll的免疫原性组合物，在第二个部位给予宿主免疫保护剂量的第二个容器的免疫原性组合物(以及任逸在第三个部位给予宿主免疫保护剂量的第三个容器的免疫原性组合物)，其中所述笫一和第二(和笫三)个部位通过不同的淋巴结引流。.25同时给药应当如上所述进行。第一和笫二(和第三)个部位优逸为宿主的不同肢体。笫一和第二(和笫三)个容器的免疫原性組合物优逸在同一天给予。优逸隨后以相同的方式再1次或多次免疫接种宿主,每次间隔2-12周，更优逸再免疫接种2次，每次间隔火约个月的周期。本发明的疫苗制剂可用来保护或治疗易感染嘧乳动物，方法是将所速疫禽经全身或釉膜途緣给药。这些給药方法可包括经肌内、腹腹内、皮内或皮下途径注射；或通过口腔/消化道、呼吸道(例如异5内)、泌尿生殖道ft膜给药。每剂疫苗的抗原量可根据在典型疫笛申i奮发免疫保护应答但不造成明显副作用的量透行选捧。这种量裉据所用特定免疫原及其怎样提呈而有所变化。一般认为每剂包含0.1400iig多糖，优逸0》50fig,优选0,W0jig,其中1-5pg是最优逸的剂量范围。10疫笛中蛋白抗原的含量通常在1400歸的范围内，优逸5，50re,最通常在5,25吗的范围内。在初次.免疫后，受治疗者可接受一次或数次途当间隔的加强免疫。在《疫笛设计》中对疫翁的制备方法透行了综合论述("亚基及15佐剂方法"(PowellM,R&New懇識M丄編辑)(1995)PlenumPressNewYork)。Fullerton的美国专利4，235，877描述了脂艰体包褒化。实施側.提供实施例仅用以说明本发明，元意P艮制本发明的'范围20实施例1:DT-TT-Pa-lPV-HepB(I)TPaIPVHepB)疫苗的制备如WO93/24148所途进行。所述疫笛按照商品名Iirf證ix-PeNTaTM(SmithKlineBeecliamBiologieak)商购025实施例2:MenC或MenC-MenY疫苗的制备MenC:脑膜炎奈瑟氐球菌C型荚膜多糖缀合至D*白或TT(使用CDAP技术)，每0.5mi人剂量缀合物中存在的多糖量为5两。pH调节至6.1,在蔑糖存在下漆干。MenCMenY:将緩合至D蛋白或TT(使用CDAP挾术)的脑膜炎奈瑟氏球菌C型荚膜多糖和缀合至D蛋白或TT的脑膜炎奈瑟氏球菌Y型荚lt多糖混合在一起.，每0.5ml人剂量每种綴合物中的多糖量为5iig。pH调节至6.1，并在篇糖存在下冻干。5实施例3:DT-TT-P錢JPV-HepB-MenC-MeiiY(DTPaIPVHepB層enCMeiiY)或DT-TT鹏Pa-夏PV,HepB,MeiiC(DTPaIPVHepB扁enC)疫翁的制备使用前(同一天)核时混合实施例1和实施例2的疫笛。10实施例4:Hib-ll价肺炎球菌缀合(Hib/Strep11V)疫苗的制备b型流感嗜血菌荚膜多糖缀合至TT(每剂缀.合物中的多糖为10將)，于pH6,1、扎糖存在下冻亍[Hiberix1^(SmithKHneBeeehamBiologicais)]，将其临B會(使用的同一天)溶解在缀合PD(每剂每种缀15合物中的多糖为1吗)的11价肺炎球菌英膜多糖(血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F)的液体溶液中。先前肺炎球菌疫胬已经吸附到O,5mgAF+(A1P04)上。实施倒5:临床试验20对,滋辦4瘦,^^iC以三剂(3、4、5月龄)方案给予德国婴儿实施例4的疫笛和对風疫苗《免疫应答結果(最后1次初次给药后1个月测量的結果)如下。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>A组41Pn-Pd+Infenrix-HeXaTM(Inf證ix-Penta加上加入的Hib缀合物-DTP^HB自IFV-Hib)D组=11Pn，Pd/Hib十Infamix-PeNTa窗(DTPa-HB-IPV)屮表示同时给予(在不同lt在)，而不是混合给于。抗体浓度不低于0.5|ig/ml的受治疗者百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>100yo的受治疗者的抗PRP(Hib多糖)抗体浓度不低于1.0吗/ml。Hibenx(非吸附型Hib,TT緩合物)在相似给药方案后的GMC約为6pg/m。按照ELISA抗体测定，接受11Pn-PD/Hib疫苗的婴儿的免疫应5答与观测到的接受所有血清型的IIPifPD疫苗的婴儿的免疫应答相似，血清型1、3和9V是例外，因为观察到11Pn,PD/ffib疫^的几何平均浓度有下降的趋势。但是，95%的置信区间重叠表明，这*差异不明嚴^11PiHPD/Hib疫饕诱导A抗全部11种血清型的功能性(调理素吞io噬作用)抗体。Hib疫苗和肺炎球菌缀合疫苗的混合没有明显干扰肺炎球菌免疫应答，并且与两种已注册的疫笛Infanrix，HeXa和Hiberix相比，令人惊奇地增强抗PRP庄答。1520研究1:可以评价与MenC缀合疫翁混合的Infa雄ix-PeNTa局Hib疫苗给予或与和HAerix混合的11价肺炎球菌疫苗同时給予的安全性和免疫原性。可以同时评价PD和TT载体的MenC缀合物。所述疫苗可作为3剂疫苗给予婴儿。可在不同Ji体、就医时同时注射。研究2:可以'烀《介与MenC-MenY缀合疫苗混合的Infanrix-PeNTa与Hib疫苗给予或与和Hftenx混合的11价肺炎球菌疫笛同时给予的要全25性和免疫原性。可以同时评价PD和TT载体的MenC和MenY缀合物所途疫苗可作为3剂疫苗给予要儿。可在不同肢体、就医时同时注射。权利要求1.一种多价免疫原性组合物，其用于保护宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌引起的疾病，所述组合物含有(a)包含百日咳类毒素和FHA的非细胞百日咳组分，(b)破伤风类毒素，(c)白喉类毒素，(d)乙型肝炎表面抗原，(e)灭活脊髓灰质炎病毒，(f)载体蛋白和细菌荚膜多糖或寡糖的一种或两种缀合物，其中所述细菌选自Y型脑膜炎奈瑟氏球菌和C型脑膜炎奈瑟氏球菌。2.权利要求1的免疫原性组合物，其还含有载体蛋白和細菌荚膜多糖或寡糖的一种或多种缀合物，其中所述細菌选自b型流感嗜血菌、A型脑膜炎奈瑟氏球菌和W型脑膜炎奈瑟氏球菌。3.权利要求1或2的免疫原性組合物，其还含有灭活、减毒的甲型肝炎病毒。4,权利要求1-3的免疫原性组合物，其中所用载体蛋白选自20破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、重組白喉毒素、脑膜炎奈瑟氏球菌的OMPC、肺炎链球菌的肺炎球菌溶血素和流感嗜血菌D蛋白。5,.权利要求1-4的免疫原性组合物，其配制为体内给予宿主的疫苗，其中所述她合物的各种组分经配制使各种組分的免疫原性25不被组合物中其它各种组分所削弱。6.权利要求1-4的免疫原性组合物，其配制为体内给予宿主类受治疗者中的血清保护#准7.权利要求1-6的免疫原性组合物，其还含有佐剂。8.权利要求7的免疫原性组合物，其中所述佐剂为IS益。9.权利要求14的免疫原性组合物在生产用予治疗或预防由百日咳博德特氏菌、破伤风棱菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌感染引起的疾病的药物中的应用。10,—种制备权利要求1-8的多价免疫原性組合物的方法，该方法包括将所迷各种组分混合在一起的步橡。全文摘要本发明涉及新的高级DTP型联合疫苗制剂以及同时给予的联合疫苗药盒。还提供了这些疫苗和药盒的给药方法。文档编号A61P31/04GK101112618SQ200610107410公开日2008年1月30日申请日期2002年3月28日优先权日2001年4月3日发明者C·卡皮奥,D·勒穆瓦纳,D·布特里奥,J·普尔曼,P·M·德斯蒙斯申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司