专利名称：：疫苗组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新的联合疫笛制剂。为使赋予抗多种病原体的保护所需的免疫接种次数最少、降低给药成本以及增加接受率和覆益率，io联合疫苗(提供抗多种病原体的保护)非常理想。有许多资料证实的抗原竟争(或干扰)现象使多组分疫苗的开发复杂化。抗原千扰是指观察给予时观测到的免瘦应答减'J、。
背景技术：
：15已知联合疫禽可预防百日咳博德特氏菌(i^rt/eteltope/'^M'i'5)、破伤风4复菌(C7os加iZwwtetowi)、白对囊棒杆菌(C"orj膨toefer/w/wfApM/ierwe)和可逸预防乙型肝炎病毒和/或b型流感嗜血菌(/fflewo-i7w,s〃#/狄《加6)(参见例如WO93/24148和WO97/00697)。
发明内容20本发明涉及生产迄今为止最具挑战性的多价疫苗，给予该疫苗可预防或治疗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌(Mw附朋g故c&')的感染，优选还预防或治疗流感嗜血菌、肺炎链J泰菌(SVn尸tococc，歸p/ie冊MOTioe)、甲型肝炎病毒和/或脊髓灰质炎病毒的感染，其中所述疫苗的组分不明显干扰25该疫笛中任一组分的免疫学功效。因此，在本发明的一方面，提供一种多,免疫原性组合物，用于给宿主提供保护作用以抵抗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒和脑膜炎奈瑟氏球瞎所引起的疾病，该多价免疫原性組合物包含3()(a)或者灭活全细胞百日咳博德特氏翁(Pw)，或者两种或多种非細胞百日咳組分(Pa)[优选后者]，(b)破伤风类毒素(TT或T),(c)白喉类毒素(DT或D)，(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或麵)，(e)灭活發髓灰盾炎病毒(IPV),和(f)载体*白和选自以下細菌的荚膜多糖的任一种或二者的綴合物Y型脑膜炎奈暴氏球菌(MenY)和C型驗膜炎奈5瑟氏球菌(MenC),以及(g)可逸载体憂白和B型流感嗜血翁(Hft))荚膜多糖的綴合物以上的免疫原性組合物还可含有1、2、3、4、5或6种逸自以下的组分A型脑膜炎条瑟氏球菌多糖[MenA](优逸缀合型)、W型io脑膜炎奈瑟氏球菌多糖[MenW〗(优逸缀合型)、伤寒沙门氏菌f，/H)Vi多糠、脑膜炎奈瑟氏球菌(优逸B血清型)外膜小泡、一种或多种脑膜炎奈瑟氏球菌(优逸B血清型)外膜(表面暴露的)蛋白以及灭活、减毒甲型肝炎病毒(HepA-优逸称为《HawixTM"[SmitliKHneBeeeh纖Biologicak〗的制品)，这些組分对组合物中的任D—种抗原都不存在显著干扰问题在本发明第二方面，提供各种各样的含有2种或3种多价免疫原性组合物的高级药盒，所述药盒能够保护宿主抵抗百日咳博德特氐菌、破伤风梭菌、白喉捧軒菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒和肺炎链球菌以及可逸的脑膜炎奈瑟氏球菌和流感嗜血翁所？)起的20疾病。在本发明第二方面的第一个实施方案中，提供一种含2#多价免疫原性组合物的药盒，用f保护宿主抵抗百日i博緣特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰廣炎病毒和肺炎链球菌以及可逸的脑膜炎奈瑟氏球菌和流慼嗜血菌所引起的疾病。25所述药盒含有的第一个容器包含(a)或者灭活全細胞百日咳博德特氏菌(Pw)，或者两种或多种非細胞百日咳組.分(Pa)[优逸后者]，(b)破伤风类毒素(TT或T)，(e)白喉类毒素(DT或D)，(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或HB)，和(e)灭活脊髓灰盾炎病毒(IPV)，'所述药盒含有的第二个容器包含5(2a)载体蛋白和肺炎链球菌荚膜多糖的一种或多种缀合物，〖其中所迷笑膜多糖优逸得ljrt下肺炎球菌血滂型L2、3、4、5、6A、6B、7F、8、亂亂墜、區、12F、14、15B、i7F、18C、進、亂20、22F、23F和33F〗。在本发明以上药盒的其它有利实施方案中，第一个容器还含有-.10(f)载体蛋白和选自以下細菌的荚膜多糖的任一种或二者的缀合物Y型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型脑膜炎奈瑟氏球籙(MenC)，和(g)载体蛋白和B型流感嗜血菌(Hib)英膜多糖的缀合物；或者笫二个容器还含有(2b)载体蚤白和选自以下細菌的笑膜多糖的任一种或二者的缀合物Y型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型脑膜炎奈瑟氏球菌15(MenC),和(2c)载体蛋白和B型流感嗜血菌(ffib)荚膜多糖的缀合物；或者第一个容器还含有(f)栽体蛋白和逸自以下细菌的笑膜多糖的任一种或二者的綴合物Y型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenC)，而第二个容器还含有(2b)载体蛋白和B型流感嗜血菌(Hib)荚膜多糖的缀合物；或者第一个容器还含有(f)载体20蛋白和B型流感嗜血菌(ffib)荚膜多糖的缀合物，而第二个容器还含有(2b)载体蛋白和逸自以下細菌的英膜多糖的任一种或二者的缀合物Y型脑膜炎奈瑟氏球菌OlenY)和C型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenC)。在本发明笫二方面的笫二个实施方案中，提供一种含2#多价免疫原性组合物的药盒,用于保护宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破25伤风梭菌、白喉棒杆菌、.乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎痛毒、脑膜炎奈瑟氏球菌和流感嗜血菌所引起的疾病。所述药盒含有的第一个容器包含(a)或者灭活全细胞百日咳博德特氏菌(Pw)，或者两种或多种非细胞百日咳组分(Pa)[优逸后者]，(b)破伤风类毒素(TT或T),'(e)白喉类毒素(DT或D),(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或腦)，和5(e)灭活脊髓灰應炎病毒(IPV),所述药盒含有的第二个容器包含(2a)载体蛋白和逸自以下細菌的笑膜多糠的任一种或二者的緩合物Y型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenC),和io(2b)载体蛋白和B型流感嗜血菌(Hib)英膜多糖的缀合物。—在本发明第二方面的第三个实施方案中，提供一种含3种多价免疫原性组合物的药盒，用于保护宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、甶喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒和脑膜炎奈瑟氐球菌、流感嗜血菌和肺炎健球翁所引起的疾病。15所述药盒含有的第一个容器包含(a)或者灭活的全细胞百日咳博德特氏菌(Pw),或者,种或'多种非細胞百日咳組分(Pa)[优选后者，(b)破伤风类毒素(TT或T),(e)白喉类毒素(DT或D)，加(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或HB),和(e)灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)，所述药盒含有的第二个容器包含(2a)载体蛋白和肺炎链球菌笑膜多糖的一#或多种缀合物，[其中所述莢膜多糖优逸得自以下肺炎球菌血清型1、2、253、4、5、驗、6B、7F、8、置亂亂亂12F、14、15B、HF、18C,19A—、19F、20、22F,23F和33F，所述药盒含有的第三个容.器包含(3a)载体蛋白和逸自以下細菌的英膜多糖的任一种或二者的缀合物Y型脑膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型脑膜炎奈瑟氏J恭菌(MenC)，和(3b)栽体蛋白和B型流感嗜血菌(Hib)芙膜多糖的缀合物。以上本发明药盒的任一种容器或上述容器还可含有i、2、3、4、55、6或7种选自以下的組分A型脑胰炎奈瑟氏球菌多糖[Mei:iA](优选缀合型)、W型脑膜炎奈瑟氏^jt菌多糖[MenW](优选缀合型)、伤寒沙门氐菌Vi多糖、脑膜炎奈瑟氐球萌(优逸B血清型)外膜小泡、—种或多种脑膜炎奈瑟氏球菌(优逸B血清型)外膜(表面暴露的)蛋白、HepA(如上所述)和一种或多种肺炎链球菌蛋白(优逸表面暴露的)，i(》这些组分对组合物中的任一种抗原都不存在显著干扰问题。所述药盒的容器可牟独包装，或者优选一起包装。所述药盒最好在两个或两个以上容器中提供一张疫苗给药说明书。其中，药盒中的一个容器包含某一多糖缀合物，优选药盒中的其它容器没有相同缀合物。!5本发明人惊奇地发现，以上述方式提供的药盒有利地以最佳方式将各种抗原呈递给宿主免疫系統。所述药盒给执业医师提供最佳的宿主免疫接种方法，该方法其有以下一种或多种优势(优逸2种或3种，最优选全部)全部抗原的保护效力、最小的反应原性、最小的栽体抑制f扰、最小的佐剂/抗原干扰或最小的抗原/抗原千扰。按20此方法以最少次数(2次)给予可实现这些目标，优选就医时同时给予。尽管在优选实施方案中第一个和第二个容器(追用时的第三个容器)的疫苗在不同部位(如下所迷)同时给予，但在一个选择性实施方案中，本发明人设想可将第一个和第二个容器的内含物混合(优逸临用前混合)，然后作为单剂疫苗给予。25具体实施例方式本发明的抗原破伤风类毒素(TT)的制备方法是本领域公知的。例如，优逸通过从破伤风梭歸培秦物純化毒素然后化学解毒生,TT，扭可选地通过純化所述毒素的重组或基因工穉解毒类似物(如EP209281所述)制备。"破伤风类毒素，，也包括全长蛋白的免疫原性片段(例如片段O参见EP478602)。白喉类毒素(DT)的制备方法也是本领域公知的。例如，优逸通5过从白喉棒軒菌培养物純化毒素然后化学解毒生产DT,《旦可逸地通过纟t化所述毒素的重组或基因工程解毒类似物(例如CRM197,或US4,709,017、US5，843,711、US5,601,827和US5,917,017所述的其它突变体)制备。非细胞百日咳组分(Pa)是本领域/厶知的。实例包括百曰咳类毒素w(PT)、丝状血細胞凝集素(FHA)、pertaet雄(P画)和凝集原2和3。这些抗原部分純化或高度純化。优选在疫苗中使用2种或多种非細胞百曰咳組分。更优逸在疫笛中捧入以上示例非細胞百日咳组分中的2、3、4种或全部5种。最优逸包括PT、FHA和P丽。PT可通过多种方式生产，例如通过从百日咳博德特氏菌培养物純化毒素然后15化学解毒制备，或者通过纯化PT的基因工耀解毒类似物(例如US5,085,862所迷)制备。.WO93/Ml48公开了途f本发明的灭活全細胞百日咳博稳特氏菌(Pw)制备方法，也公开了遞于生产DT-TT-Pw-HepB和DT-TT-Pa-HepB疫苗的配制方法。20灭潘脊髓灰质炎病毒(IPV)优逸包舍疫笛领城梘为麵准的1、2和3型。最优逸的是Salk脊髓灰质炎疫翁。通常，本发明的肺炎链球菌疫翁包含多糖抗原(优逸缀合型)，其中所述多糖得自选自以下的至少4种肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、2519A,19F、20、22F、23F和33F。4种血清型优选包括6B、14、19F和23F。史优逸在组合辆中包括至少7种血清型，例如得自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F。更优逸在组合物中还包括7种以上的血清型，例如至少11种血清型。例如，一个实施方案中的组合物包括ll种得自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F的荚膜多糖(优选缀合型)。尽管本发明还考虑了其它的多糖抗原，例如23价抗原(例如血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、!7F、18C、19A、19F、20、22F、23F5和33F),扭在本发明的优逸实施方案中，包括至少13种多糖抗原(优逸級合型、对f老年人接种疫苗(例如为了预防肺炎)，上途的优选11价抗原组合物中包括血清型8和12F(最优选还有15和22)形成13/15价疫苗是有利的，而对于婴儿和学步幼儿(更关注中耳炎),包含血清型io6A和19A形成13价疫苗有利。缀合物细菌荚膜多糖缀合物可包含任何含至少一种T辅助表位的载体肽、多肽或*白使用的载体蛋白优逸逸自破伤风类毒素、白喉15类毒素、CRM197、重组白喉毒素(如US4,709,017、WO93/25210、WO95/33481或WO00/48638任一个所述)、肺炎链球菌的肺炎球菌溶血素(优逸化学解毒的或解毒突变体)、脑膜炎奈瑟氏球菌OMPC和流感嗜血菌D蛋白(EP594610).由于已知的栽体抑制作用,如果在本发明的每种組合物中将其中所包含的多糖抗原("n"抗原)与一20种以上的栽体缀合是有利的。因此,可在一种栽体上(独立地)携带(ll-l)种多糖，而在不同的载体上揭带1种多糖，或在一种载体上携带(n-2)种多糖，而在两种不同的载体上携帶2种多糖，依此类推。例如，在含4种細菌多糖缀合物的疫笛中，1种、2种或全部4种缀合物都可以缀合至不同的栽体。然而，D蛋白在本发明的组合物中用作栽25体有利，@为D蛋白可用于组合物中的各种(2、3、4或更多种)多糖而没有显著的栽体抑制作用。最优逸是以Hib作为TT後合物，肺炎球菌多糠作为D蛋白、DT或CRM197缀合物，而MenA、MenC、丄MenY和MenW作为TT或PD的缀合物。D蛋白还是一种有用的载体，因为它还提供了另一种可提供抗流感嗜血菌保护的抗原。可采用任何已知的方法(例如Likhite的美国专利4，372，945和Armor等的美国专利4,474,757)，将所途多糖与所述载体發白遂摟。优选的是进行CDAP綴合(WO95/08348)。5在CDAP申，优选的是使用氛化剂四歡，酸l，氰基,二甲基氛基吡啶镄(CD人P)来合成多糖-蛋白缀合物。氰化反应可在相对温和的条件下进行，这避免了减敏感性多糠的水解。该合成方法允许直接与载体蛋白偶联。本发明免疫原性组合物优逸配制为疫苗，以下述方式体内给予宿主所述组合物的各种组分经配制使各种组分的免疫原性基本不被组合物中的其它各种组分所削弱。所述基本不被削弱是指在免疫接种时，所f臭得的4十对每种组分的抗体效价(例如IgG)超过该抗原单15独给予时所褒得效价的60%,优逸超过70%，更优选超过80%,番更优逸超过卯％,最优逸超过95400%。令人感^趣的是，对于上述的药盒组合，在免疫接种时所荻得的抗ffib荚膜多糖或某些肺炎球翁多糖的抗体效价有可能接近或超过该抗原单独给子时所荻得效《介的100%/20EMM本发明免疫原性組合物优逸S5制为体内给予宿主的疫苗，使得疗者中的血清保护标准。这在整个群体的疫苗功效评价中走一个重25要的试猃。高于所迷抗原血清转化型宿主的相关抗体效价是众所周知的，这种效价由WHO之类的組织公布。统计学显箸的受治疗者样品优选超过80%血清粉化型，更优选超过90%，再更优逸超过93%，最优逸为96400%。本发明的免疫原性组合物优逸加有佐剂》合遞的佐剂包括鋁盐，例如氛氧化4S凝股(alum)或裤睃鋁，但也可以是俩盐、铁盐或姅盐，或者可以是酰化酪氛酸或酰化糖、阳离子或F月离子桥生化多糖或聚辦腈的不溶性悬浮液。5还可以逸摔为THi型应答优先if导物的佐剂，从而有助于免疫应答的細胞介导分支。高水平的Thl型細胞B予往往利于箭导由对给定杭原的細胞介导的免疫应答，而髙^c平的Th2型細胞國子往往利于餘导出对所途抗原的体激免疫应答。io促进主要为Thl应答的合遞佐剂系統包括单裤酰脂展A或其衍生物，特别是1脱4>酰化单,酰脂质A，以及单裤酰脂质A(优逸3，脱-O酰化单,酰脂廣A(3D-MPL))和^盐的I且合。一种增强系统包括羊裤酰脂质A和鬼瞽衍生物的組合，特别是WO94/00153公开的QS21和3D自MPL的组合，或者如WO96/33739公开的用胆固15醇将QS21lf灭从而反应原性收弱的一种組合物。WO95/17210描述了—种特别有效的佐剂制剂，其在水包油扎剂中含有QS21、3D-MPL和生育酚。疫翁可还含有息瞽，更优选QS21。制剂还可含有氷包油乳剂和生育酚(WO95/17210)。包含寡核番酸的未甲基化CpG(WO96/02555)也是TH1应答的优先讲导物，途合症用f本发明20在上述免疫原性组合物中铝盐是优选的佐剂。#体地说》HepB优选应当吸附到礴酸45上，然后和其它组分混会。Pertactm优逸吸附到氢氧化鋁上，然后和其它组分混合。为了使本发明组合物中的佐剂(特别是4S盐)氷平最小化，多糖綴合物可以不进行佐剂化。本发明还提供一种生产疫苗制剂的方法,》该方法包挺将疫苗組25分和药学上可接受的赋形剂混合在一起的步骤。特别优逸的本发明DTPa组合物(羊独使用或者作为上述药盒之一的第一个容器的内含物)包含TT、DT、Pa(优选包含PT、FHA和PRN-PRN优选吸附到氣氣化4S上)、HepB(优逸吸附到磷酸凝上)、IPV、MenC(优选缀合D蛋白、TT、DT或C画197)以及可选的MenY(优选缀合D蛋白、TT、DT或CRM197)。所述组合物还可以可选地含有扭b(优选缀合TT和/或未吸附佐剂)所述疫苗优选以2小瓶提供，第一瓶含液体形式的DTPa-lPV-HepB,而第二瓶含冻千形式的5MenC(以及可选的MenY和/或Hib),最好有蔑糖、乳糖或海藻糖之类的抗结块剂。所述小瓶内容物可在临使用前混合在一个容器中，然后以一次给药/注射给予宿主。该组合物也可以用于上迷药盒(第一个容器的内含物)。因包含Hib(优逸缀合TT和/或未吸附佐剂)和/或MenC和MenY10(优选缀合D蛋白、TT、DT或CRM197和/或束吸附佐剂)的任一种或二者的容器的药盒起见，该组合物优选以冻干形式储存，最好有蔑糖、孔糖或海藻糖之类的抗結決剂。因含本发明DTPa组合物(单独使用或作为上述药盒之一的第一个容器的内含物)的容器包含DTPa和Hib和/或Men,C和MenY的任15—种或二者(其中Hib和/或Men组分缀合TT)起见，优选平衡疫苗中的TT含量，使得单个容器中的总TT舍量不超过临界l，值(例如40、45、50、60、70或80貼TT)，以降低、最小化或防止TT綴合多糖的TT免疫干扰或载体抑制。该阈值优逸为50pg。本发明人友现上述缀合物中的多糖:TT比率可降低旦1:0.5-1,5(重量)(优逸1:0,64.2,20最优选大约1:1)，在此范围有益。例如在DTPa-HB-IPV-Hib(TT)-MenC(TT)疫苗中，DTPa中T的量优逸应当降至通常的标准量以下(优逸约常规量的1/4至3/4，最优选约常规量的1/2)，例如降低至10-30吗TT,优选20,25pgTT。例如，如果缀合扭b的TT量大约为12薄TT，而缀合MenC的TT量大约为5貼TT，未缀合TT的量为24f丄g、则25总TTf约为41歸。特别优选的扭b/肺炎球菌多糖組合物(羊独使用或作为上述药盒之一的第二个容器的内含物)包含Hib(优i4級合TT和/或束吸附佐剂)和多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11种以上)肺炎球菌多糖缀合物(例如以上"本发明的肺炎链球菌疫—段所述的那些组合物)。最优选包括11种多糖(得自血清型1、3、4、5、6B,7F、9V、14、18C、19F和23F)。肺炎球菌多糖优选级合至PD、DT、CRMi97或TT。在一个优选实施方案中，ffib多糖抗原未吸附到佐5剂上，具体地说是铝盐上。尽管肺炎球菌多糖抗原可进行佐剂化(优选吸附到磷酸铝上),但它们也没有吸附到佐剂上，具体地说是铝盐上。在一个具体的实施方案中，组合物中不存在鋁盐佐剂。本发明组合物可以包括其它抗原(例如脑膜炎奈瑟氏球菌C型荚膜多糖缀合物[优选缀合到D蛋白、TT、DT或CRM197上和/或未吸附佐剂)，io但在一个选择性实施方案中，ffib和肺炎球菌多糖缀合物是组合物中仅存的抗原。在以上制剂的其它具体实施方案中，Hib和肺炎球菌多糖未缀合至同一载体(具体地说该载体是CRM197)。所述疫翁可以以1个容器(内容物或者为液体形式或者为冻干形式)或2个小瓶提供，第一瓶含扭b(优选冻干的)，第二瓶含肺炎球15菌抗原(优逸液体形式)。冻千组合物最好有,、糖、乳糖或海藻糖之类的抗结块剂。所述小瓶的内容物可在临使用前混合在一个容器中，然后以一次给药/注射给予#主。对于这样的制剂，在免疫接种时所获得的抗Hib笑膜多糖的抗体效价有可能接近或最常见是超过该抗原羊独给予时所袭得效价的100%在优逸的实施方案中，组合物中20的肺炎球菌多糖缀合物与其单独给予相比没有出现(明显的)有害作用(就保护性功效而论)这可根椐测量最后初次剂量(初次剂量通常为出生后第一年中给予3次免疫接种)后1个月抗多糖抗体的初次后几何平均浓度(GMC)评价。本发明疫苗的GMC(ng/mi)优逸应i超过未缀合Hib的肺炎球菌多糖给予时的GMC的55%(更优逸超过60%、2570%、80%或90%)。另一个无有害作用发生的指标是在给子免疫接种后1个月对比本发明疫苗和未缀合扭b的疫苗时，抗体浓度不低于0,5pg/mi的受治疗者百分比差异不超过l(m(优逸低于9%、7%、5%、3%或1%)。l管上文擬到了Hib、肺炎球菌和脑膿炎球菌"多糠'，，但设想本发明可延伸至疫苗领城众所周知的Hib和肺炎球菌"分级多糖"和"寡糠"(多糠火小减小至易处理的程度，仍能够if导宿主的保护性免疫应答)(参见例如FP497525)。有利的是，MenY可与天然多糠5分子量0,1、0.2、0丄0.4、0.5、0,6、0,7、0,8或0,9倍的腾作为Sl唐缀合物l在。在本发明*—方面，提供一种如本文所述用亍药物的免疫原性组合物或疫笛。在本发明再一方面，提供本发明免疫原性組合物在药物生,中io的用途，所述药物用于治疗或预防由百日咳博德特氏菌、i皮伤风梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒、.鲁髓灰廣炎病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌(和可逸流感嗜血歸)感染所？l起的疾病。而且，还提供本发明免疫原性組合物在疫苗药盒生产中的用途，所述疫笛药盒用于治疗或预防由百日咳博緣特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病15毒、脊髓灰艰炎病毒、流感嗜血菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌感染所引起的疾病。另外，还提供免疫人类宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒杆菌、乙型肝炎病毒、务髓灰质炎痛毒和脑膜炎奈瑟氐球菌(和可逸流感嗜血菌)所歉疾病的方法，该方法包栝给予所途宿主20免疫保护剂量的本发明免疫原性组合物。本发明#—方面涉及用上述本发明药盒免疫人类宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破伤风梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒和脊髓灰廣炎病毒以及一种或多种流感嗜血菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌所致疾病的方法》该方法包括如下所述的同时给药方案。25同时给药方案该方案包括以下步雞给予宿主免疫保护剂量的药盒(例如本发明的一种药盒)第一个容器的免疫原性組合物，给予部位与给予该药10152025盒第二今(或第三个)容器的免疫原性組合物的部位不同，这些部《立由不同的淋巴結引流。所述不同部位优逸为不同肢体。疫翁给予优逸为互相之间在24小Bt之内，更优逸为同一天，最优逸为宿主就医时同时给予。优逸宿主随恭用两种(或4^)疫禽以相同的方式再1次或多次(优逸2次)免疫接种，每次间隔2-12周(优逸大约1个月)a经常在第二次给予后的2周和7个月之间可以给f笫三次免疫接神。例如，可按照正常的DTP疫笛给药方案如上给予疫苗(例如三次接种体系》毎次接种相P惑1个月，如3、4和5月龄方案；或3、5和11.月龄方案；或3、5和12月龄方案)。这样的给药方案使4十对药盒的,个(或全部)容器中的抗原的免疫应答最佳。可以相同的方式由出生后第二年至成年的任何时候給予疫苗加强尽管接种优逸通辻肌内途径进行，但可逸地在粘膜佐剂(优逸.大肠軒菌的laureth9或热不穩定毒素[LT]1其突变体或片段)存在下由粘膜进行加强可能有利，(例如鼻内给予疫翁易于给药，特别是当宿主胃肠外接种时可非常好地起作用)，疫苗的给药部位不需要引流至不同的淋巴結'。明疫笛药盒生产方'法中的用途。在两个或酌个以上容器中包含TT的药盒本发明另一方面涉及用于國时给药(如上定义)的疫翁药盒，其中两个或两个以上容器的TT含量平衡至有利于减少、最小化或预防TT綴合多糖的TT免疫干扰或载体抻制。TT是一种特别好的载体，但是已知它如果在疫翁组合物中过量使用，特別是如果还存在游离的TT，那么它具有限制作用。如果过f使用，所有缀合TT的抗原都表现出抗体效价下降。B此，本领城存在一个在火联合疫苗的许多不同领城(例如作为游离抗原或作为许多多糖抗原的载体)中如何使用TT而没有以上缺点的问题。本发明人发现了解决该问题的最佳方法；通过使用药盒同a于给药方案(如上定义)，可给予第一个容器含有的tt量不超过发生免疫千扰或载体抑制的核界阈值的疫翁和笫二个容器(以及饫逸的第三个容器)含有的TTf不趦过发生免疫f扰或载体押制的临界阔值的疫苗，使得同时给予的总TT量高于该临界阈值，免5疫f扰(或载体抻制)减到最小(即低于如果该組分以一次注射给予)，优逸裉本不发生。临界阈值可为40、45、50、60、70或80隨TT优选约SOfigTX因此，可给予的最大总TT最高约为药盒容器数(2或3)乘以临界阔值所袭得的f。H此，本发明提供一种用f同时給予的含2(或3)个容器的药盒，io所述容器含有2(或3)种免疫原性組合物，每种组合物含有游离和/或級合形式的TT，其中每个容器的TT量不超过临界阈值，以预防或最小化TT免疫干扰(或载体押制)作用，《旦所有容器中的总TT超过所述临界阈值。优逸i少一个容器应当含有游I(非缀合型)TT,最优逸应当包15含在DTPa或DTPw多*疫籥中尽管存在的游离TT量可在火约42,的正常水平左右，但本发明的另一优势使存在量降低(10，30或10，20jig，例如10、15、20、25或30^g),但仍可激发最佳的抗TT抗体效价，而免疫干扰或载体押制作用减至最小(或没有)》优逸至少1个(但可能是2或3个)容器应当包括至少1(但可能20是2、3、4、5、6、7或更多)种TT綴合多糖。当游离TT存在于1个容器中时，优逸在葯盒的一个其它容器中应当有至少一种TT缀合多糖所述多糖可以为本申请所述的任何一种，优选为一种或多种肺炎球菌多糠(如上所途)或MenC、MenY或ffik所述药盒优逸为如上所述的任一种本发明药盒。25药盒中存在的1、2、3或^多糖^TT綴合物优逸使多糖:TT比率降低(与极、准缀合物相》匕)至1:0,5-1J(重量)(优逸1:0,6，1.2,最优逸大约1:1),使得所述缀合物仍有免疫学功能，偉容易将TT免疫f扰或载体抑制作:用减至最小或杜絶，还提供使用上述药盒免疫人类宿主的方法，该方法&括在第一个部位给予竊主免疫保护剂量的笫一个容器的免疫原性组合物，在笫二个部位给予德主免疫保护剂量的第二个容器的免疫原性组会物.(以及任选在第三个部位给予宿主免疫保妒剂量的第三个容器的免疫5原性组合物)，其中所述第一和笫二(和笫三)个部位通过不同的淋巳結引流。同时给药应当如上所途进行第一和第二(和第三)个部位优逸为宿主的不同肢体。第一和第二(和第三)个容器的免疫原性組合物优逸在同一天给予。优逸隨后以相同的方式再1次或多次免疫接种宿主，io每次间隔242周，更优逸再免疫接种2次，每次间P函大约个月的周期。在两个或两个以上容器舍DT或CRM197的荡盒本发明的孫一方面涉及同时给予(如上定义)的疫翁药盒，其中两15个或两个以上容器的DT含量(包括DT和任一免疫学等同突变体，如CRM197)平衡至有利于增强DT(或CM197)级合多糖的抗体效价，西反应原性减至最小(即反应原性比容器中的組分单次注射给予低)。DT和CRM197是非常好的载体，但是已知DT很大程度上促成了包含其的疫苗的反应原性。本发明人发现通过使用药盒同时給药方案(如20上定义)，第一个容器中含高量(40450,，优逸《M20兩，更优逸70400最优逸大约95,)存在的DT(和/或CRM197)的疫笛有利，其中第二个容器(和任选的第三个容器)中含D卩或CRM197^缀合多糖的疫笛同时给予。本发明的优势在亍a)l管第一个容器中的DT含f高，《旦高得25不足以i秀发DT免疫f扰或载体押制作用，b)DT，或CRM，197多糖缀合物与第一个容器分开，使得笫一个容器疫禽的反应原性没有增力a，另c)针对緩合DT或CRM197的多糖的抗体效价没有降低，并可能增加(与所述缀合物单独给予相比或与笫一个容器中存在较低fDT相比效价较高)。本发明固此提供一种用于同时给药(如上定义)的含2(或3)个容器的药龛，容器含有2(或3)种免疫原性组合物，其中第一个容器含有高量(如上定义)存在的DT内容物(DT加CRM197;优逸游离或非5缀会型)》而第二(和第三)个容器包含一种或多种缀合DT和/或.CRM197的多糖。第一个容器优逸应当包含游离(非缀合型)DT,最优选应当包含在DTPa或DTPw多*疫禽中。缀合DT/CRM197的多糖可以是本申请描迷的任一种；优逸以10下的一种或多种肺炎球菌多糖1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F或33F、MenC、MenY或扭b。按照本发明，维持的针对当》最优逸增强》15优逸所述药盒是如上所述的本发明药盒的任一种药盒中存在的1、2、3或全部多糖-DT(CRM197)緩合物优逸使多糖:DT/CRM197比率降低(与标准级合物相比)至l:0,515(f:量)(优逸1:0.6-1,2,最优逸大约1:1)。还提供使用上述药盒免疫人类lt主的方法，该方法包括在第一20个部位给予宿主免疫保护剂量的第一个容器的免疫原性組合物，在第二个部位给予宿主免疫保护剤f的第二个容器的免疫原性组合物(以及任逸在第三个部位给予宿主免疫保护剂量的第三个容器的免疫原性组合物)，其中所述第一和笫二(和第三)个部位通过不同的淋巴結引流。25同时给药应当如上所述进行。第一和第二(和第三)个部位优逸为宿主的不同肢体。第一和第二(和第三)个容器的免疫原性组合物优逸在同一天给予。优逸随后以相同的方式番1次或多次免疫4晏种宿主，每次间隔2-12周，更优逸兽免疫接种2〗夂，每次间隔大约W个月的周期。本发明的疫翁制剂可用来保护或治疗易感染哺扎#物，方法是将所述疫苗级全身或钻膜途径给药。这些给药方法可包括经肌内、腹腹内、皮内或皮下途径注射；或通过口腔/消化道、呼吸道(例如鼻5内)、泌尿生殖道黏膜给药。每剂疫笛的抗原f可裉椐在典型疫苗中诱发免疫保护应答《旦不造成明显副作用的量进行选择。这种量根椐所用特定免疫原及其怎样提呈而有所变化。一般认为每剂包含O丄IOO離多糖，优逸0丄S0两，优逸0.1-10pg，其中1-5gg是最优选的剂量范BKw疫苗中發白抗原的含f通常在I，IOO歸的范B内，优逸5-50歸，最通常在弘25叫的范,内8在初次免疫后，受治疗者可接受一次或数次途当间隔的加强免疫。在《疫1t设计》中对疫苗的制备方'法进行了综合论迷("亚基及15佐剂方法"(PowellM.F.&Newm纖M,J,編辑)(1995)PienumPressNewYork)。Fuilerton的美国专利4，235,877描述了脂质体包隶化。实施例提供实施例仅用以说明本发明，无意限制本发明的范围》20实施例复DT-TT-P錢-IPV4IepB(DTP錢IPVIfcpB)疫苗的制备如WO93/24148所述进行。所述疫翁按照商品名Irf證ix，PeNTa(SmitliKlineBeechamBiologicals)商购》25实施例2:MenC或MenCMeiiY疫苗的制备MenC:脑膜炎奈瑟氏球菌C型莢膜多糖缀合至D*白或TT(使用CDAP技术)，每0,5ml人剂量缀合物中存在的多膽量为5ggpH调节至6.1，在蘼糖存在下冻干MenCMenY:将缀合至D蛋白或TT(使用CDAP挾术)的脑膜炎奈瑟氏球菌C型荚膜多糖和缀合至D蛋白或TT的脑膜炎条瑟氏球菌Y型莢fli多糖混合在一起，毎0,5mi人剤量每种綴会物申的多糖量为5,pH调节至6.1，并在蔑糖存在下冻f。实施例3:DT-TT-Pa鹏IPV-HepB-Me鼓C-MenY(DTFaffVHeiiB層eiiCMeiiY)或DT-TT-Pa-夏PV-HepB鹏M缓C(DTPaIPVHepB細enC)疫翁的制备使用前(同一天)临时混合实施例1和实施例2的疫苗。10实施例4:Hib-l1价肺炎球菌缀合(Hib/Strepl1V)疫苗的制备b型流感嗜血菌莢膜多糖缀合至TT(每剂缀合物中的多糖为10jig)，于pH6。1、扎糖存在下冻干[HiberkT滅(SmithKlineBeechamBiologicak)〗，将其临时(使用的同一天)溶解在缀合PD(每剂每种缀15合物中的多糖为1,)的ll价肺炎球菌英膜多糖(血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F)的液体溶液中。先前肺炎球菌疫*已经吸附到0.5mgAJ3+(A1K)4)上。实施例5:临床试验20以三剂(:3、4、5月龄)方隶給f德国婴儿实施例4的疫翁和对感疫笛。免疫应答結果(最恭1次初次给药后1个月测f的結果)如下。抗肺炎球菌IgG抗体GMC(^g/ml)(通过ELISA检测)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>A组41Pn-Pd+Infanrix-HeXaTM(Infaniix-Penta加上加入的ffib缀合物-DTPa鹏膨IPV墨)D組=1IPirfd/Hib+Manrix-PeNTa(DTPa掘-ffV)+表示同时给予(在不同鼓在)，西不是混合给予抗体浓度不低f0.5gg/ml的受治疗者百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>100%的受治疗者的抗1麼(Hft)多糠)抗体浓度不低于1.0figZmLHibenx(非吸附型Hib-TT級合物)在相似给药方案后的GMC約为6,/ml換照ELISA抗体测定，接受11PirfD/Hib疫苗的婴凡的免疫应5答与观测到的接受所有血清型的llPn-PD疫苗的婴儿的免疫应答相似，血清型1、3和9V是例外，因为观察到llPn-PD/Hib疫笛的几何平均浓度有下降的趁势。但是，95%的置信区间重叠表明，这*羞异不明显11Pn-PD/Hib疫^诱导出抗全部11种血清型的功能性(调理素吞io噬作用)抗体。..Hib疫苗和肺炎球露綴合疫苗的混合没有明显f扰肺炎球菌免疫应答，并且与两种已注册的疫翁Infaiirix，HeXa和Hiberix相比5令人惊奇地增强抗PRP应答。15i€*4类滋奔3瘦可以评《斧与MenC缀合疫笛混合的Iiifeimx-PeNTa与Hib疫翁给予或与和Hibera混合的11价肺炎球菌疫苗同时给予的安全性和免疫原性。可以同时评价PD和TT载体的MenC缀合物。所述疫翁20可4为3剂疫^给子嬰儿。可在不同肢体、就医时同时注射。可以评价与MenOMenY缀合疫笛混合的Infanrix-PeNTa与ffib疫笛给予或与和Hibenx混合的11价肺炎球菌疫苗同时给予的安全25性和免疫原性。可以同时评价PD和TT载体的MenC和MenY緻合物所迷疫苗可作为3剂疫苗给予婴儿。可在不罔肢体、就医时同时注射。权利要求1.一种多价免疫原性组合物，其用于保护宿主抵抗由流感嗜血菌和肺炎链球菌引起的疾病，所述组合物包含(a)载体蛋白和B型流感嗜血菌荚膜多糖或寡糖的缀合物，(b)载体蛋白和肺炎链球菌荚膜多糖或寡糖的7种以上缀合物。2.权利要求1的免疫原性组合物，其中所述肺炎链球菌荚膜多糖或寡糖得自以下血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、〖()9V、IOA、IIA、12F、4、15B、17F、18C、進、19F、20、22F、23F和33F。3.权利要求2的免疫原性组合物，其包含载体發白和肺炎链球菌血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F荚膜多糖或寡糖的缀合物。154.权利要求1-3的免疫原性组合物，其还含有佐剂。5.权利要求1-3的免疫原性组合物，其中所述B型流感嗜血菌荚膜多糖或寡糖未吸附到铝盐佐剂上。6.权利要求5的免疫原性组合物，其中所迷肺炎链球—歸荚膜多糖或寡糖吸附到4S盐佐剂上。207,权利要求5的免疫原性组合物，其中所述B型流感嗜血菌上。8.权利要求〗-7的免疫原性组合物，其中所用栽体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、重組白喉毒素、脑膜炎奈瑟25氏球菌的OMPC、肺炎链球菌的肺炎球菌溶血素和流感嗜血菌的D蛋白。9,权利要求1-8的免疫原性组合物，其中所述B型流感嗜血菌荚膜多糖或寡糖和肺炎链球菌荚膜多糖或寡糖未缀合到同一种载体上。10.权利要求9的免疫原她组合物，其中所述B型流感嗜血菌荚膜多糖或寡糖和肺炎链珠菌荚膜多糖或寡糖都来缀合到CRM197上。11.权利要求8或9的免疫原性组合物，其中用于所述B型流感嗜血菌荚膜多糖或寡糖的载体蛋白是破伤风类毒素。12.权利要求8、9或11的免疫原性组合物，其中用于全部所迷肺炎链球菌荚膜多糖或寡糖的载体發由都是D蛋白。13.权利要求142的免疫原性組合物，其配制为体内给予宿主io的疫苗，其中所述组合物的各种组分经配制使各种组分的免疫原性不被組合物中其它各种组分所削弱。14.权利要求1-12的免疫原性组合物，真配制为体内给予宿主的疫lt，其产生的抗体效价高f每种抗原組分在可接受百分比的人类受治疗者中的血清保护#准。15.权利要求1-14的免疫原性组合物，其用于药物。16.权利要求1-14的免疫原性组合物在生产用于治疗或预防由流感嗜血菌和肺炎链球菌感染引起的疾病的药物中的应用。17.—种制备权利要求W4的多价免疫原性组合物的方法，该方法包括将所述各种组分混合在一起的步骤。全文摘要本发明涉及新的高级DTP型联合疫苗制剂以及同时给予的联合疫苗药盒。还提供了这些疫苗和药盒的给药方法。文档编号A61K39/385GK101112619SQ20061010741公开日2008年1月30日申请日期2002年3月28日优先权日2001年4月3日发明者C·卡皮奥,D·勒穆瓦纳,D·布特里奥,J·普尔曼,P·M·德斯蒙斯申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司