一种中药材的粉碎方法

专利名称：一种中药材的粉碎方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材的粉碎方法，尤其是一种加分散介质对中药材进行超微粉碎的方法，属中药领域。

背景技术：
一、超微粉碎研究进展 1超微粉碎原理及意义 超微粉碎技术是使物料微细及超细化的机械加工方法，是提供超微粉体的重要手段之一。近20年来，该项技术获得迅速发展，国外已广泛应用于冶金、陶瓷、纺织及航空航天等工业领域，国内无机物的纳米技术(如磁带用磁粉)获得了较快的发展。中药行业引入微粉概念始于20世纪90年代末，虽然起步较晚，但由于粉碎是中药生产及应用中的基本加工技术，因此超微粉碎也愈来愈引起人们的关注，超微粉碎技术已显露出特有的优势和广阔的应用前景。
在中药材的粉碎过程中，药材受到强烈的正向挤压力和切向剪切力的作用，运用高速、高能量进行粉碎，细胞被挤压、剪切，细胞壁被撕裂、断开，细胞被破碎成碎片或被压破，所得到的粉末粒径一般达300目以上、中心粒径达15～35μm，细胞破壁率达95％以上，“破壁”的药粉其所含化学成分直接暴露出来，与传统的中药药粉(化学成分存在于完整的细胞壁内)相比，产生了“质”的变化，初步的药理实验已证实细胞级超细微粉能明显提高药效，在中药现代化方面有广泛应用。其原理目前初步认为细胞破壁后的超微粉末可以全成分保留其中的各种成分，这些成分之间形成油/水型或水/油型固态乳化物，细胞级超细微粉易被小肠吸着、停留时间长，利于吸收，同时直接暴露的化学成分及乳化态的全成分易于透膜吸收，大大提高了其生物利用度。
中药超微粉碎给中药剂型改革和中药现代化带来了一场革命，提高了细胞破壁率、比表面积、有效成分溶出度、生物利用度，能增强药理作用、减少用药量、节省药材和保护药材资源，同时还可改善气味、口感，提高药品质量，相对目前常规粉碎、水煎煮或有机溶剂提取等方法具有无可比拟的优势。尤其对于树脂类药材、动物药及贵重药材如血竭、水蛭、麝香、牛黄等，由于这些药材中成分不明确，不宜提取，大多经常规粉碎后入丸散应用，而引入超微粉碎技术后，将对传统的制剂工艺带来深远的影响，使原有物料处于一种超微细粉末的“新的状态”，充分发挥超微细粉独特的理化性质，中药的有效成分不但不会丢失或减少，而且还会被人体更充分吸收利用，中医药的特色将得到更大的发挥。
2中药超微粉碎存在的问题 尽管中药超微粉碎研究已成热潮，但有一些具有实际应用意义的问题或难题，至今没有得有效的解决，这些问题或难题包括(1)在药材粉碎过程中，随着颗粒粒径的减小，所需进一步粉碎的能量不断增大，当颗粒粒径达到一定程度后，粉碎效率明显降低；(2)既便在粉碎完成后，由于粒径的减小仍然容易导致表面能增加，使颗粒处于不稳定状态；流动性差，易聚集形成假大颗粒；可湿性增加，易吸潮；吸附性增加，易吸附空气中的杂质；(3)由于以上问题的存在，导致中药微粉在制剂过程中出现粉体流动性差、分剂量不准确、易吸潮、片剂不易成型等技术问题，严重影响了中药微粉的实际应用，成为中药超微粉碎技术或中药超微粉与中药制剂相衔接的瓶颈。
在其他工业领域，也存在以上类似的问题，如磁粉或墨粉的生产，解决方法就是加水粉碎，使生成的细粉迅速分散到水中，减弱其聚集作用，待粉碎完成后，再将水排除、烘干，即得到细致均匀的磁粉或墨粉。但这一方法并不能直接移植至中药领域，因为前者都是矿物质，性质相对稳定，既不溶于水中，受热又不会破坏，也不存在制剂的过程；而中药则不同，所含成分复杂、性质各不相同，如果也加液粉碎，那么粉碎后的固液分离过程(无论是过滤还是加热浓缩)必将对液体中的成分造成损失或破坏。因此，在中药领域，加液(一般指水)超微粉碎的方法，一直被认为是不可行的。


发明内容
本发明的目的在于提供一种新的超微粉碎方法，尤其是应用于中药的超微粉碎方法 本发明目的是这样实现的 一种加分散介质制备中药超微粉的方法，其特征在于将待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加适宜分散介质一并置于超微粉碎设备中，进行超微粉碎，即得。
该粉碎方法尤其适用于以下几种中药材 a、水蛭、蛤蚧、熊胆、麝香、牛黄、羚羊角、鹿茸、蟾酥、蛤士蟆油、海马、全蝎、蜈蚣、虻虫、蚂蚁等动物类药材； b、血竭、龙血竭、乳香、没药等树脂类药材； c、冰片、冬虫夏草、藏红花、西红花、蜂胶等贵重药材。
上述制备方法，具体可以是以下方法中的任意一种 a.取待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加0.01～5倍量适宜的固体分散介质，用振动磨超微粉碎10～60分钟，即得。
b.取待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加0.2～5倍量适宜的液体分散介质，用振动磨超微粉碎10～60分钟，即得。
在上述方案中，所涉及到的分散介质按其状态，可分成固体分散介质、液体分散介质两大类，具体为 固体分散介质可以选自但不限于如下的一种或几种的组合固体聚乙二醇、微粉硅胶、微晶纤维素、环糊精、硬脂酸镁、滑石粉、淀粉、羧甲淀粉钠、丙烯酸树脂、羟丙甲、卡泊姆。
液体分散介质可以选自但不限于如下的一种或几种的组合大豆油、花生油、菜子油、玉米油、芝麻油、红花油、油酸乙酯、椰子油酯类、向日葵油单甘油酯、蜂蜡、聚乙二醇(PEG)、甘油、丙二醇、山梨醇、磷脂、胆固醇、吐温、司盘、帕洛沙姆。
在上述方案中，振动磨的工作温度可以为室温或通冷却水、液氮等低温下操作；而上述所用分散介质中固体分散介质以微粉硅胶、固体聚乙二醇、环糊精中的一种或几种的组合物分散效果最好，液体分散介质以聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐温中的任意一种或几种的组合物分散效果最好，对生物利用度的改善最明显，因此发明人进行了进一步设计，制定了如下优化的技术方案，但本专利所包含技术方案可选自但不仅限于如下技术方案中的任意一种 a.取待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加0.02～2倍量的微粉硅胶、固体聚乙二醇、环糊精中一种或几种的组合物，用振动磨超微粉碎20～60分钟，即得。
b.取待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加0.2～2倍量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐温中任意一种或几种的组合物，用振动磨超微粉碎20～60分钟，即得。
其中上述聚乙二醇组合物进一步优选的比例为聚乙二醇-丙二醇-甘油-吐温的比例为6～9∶1～3∶0～3∶0～3。
最后，按照所得超微组合物的状态不同，发明人设计剂型选择如下 加固体分散介质所得超微混合物可用于直接制备丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂等固体制剂。
加液体分散介质所得超微混合物可用于直接制备软胶囊剂、硬胶囊剂、口服凝胶剂、固体/半固体的透皮制剂和口服乳剂等固体或半固体制剂，尤其是直接用于灌装中药软胶囊、硬胶囊。
有益效果 本发明的技术方案，从实用的角度考虑，结合制剂的需要，加适宜分散介质超微粉碎制备半成品，直接制成所需制剂。因而所选分散介质不是水，而是多种药用辅料，这看似简单的改进，却是多年来本领域技术人员都未想到并付诸实施的，该方法一定程度上解决了超微粉碎应用到中药制剂中的适应性问题，突破了常规超微粉碎效率不断降低的技术困挠，打破了先制粉再制剂的思维模式，也摒弃了中药不能加介质超微粉碎的传统观念，这一方法越过了中药超微粉碎与中药制剂相衔接的瓶颈，是将粉碎与制剂完美结合的最佳工艺，必将极大推动超微粉碎技术在中药单味药、复方尤其是复方中的应用，是超微粉碎技术在中药药剂中应用的新趋势，达到节约药材、简化制剂工艺的双赢效果。具体来说，本专利方法除具有提高粉碎粒度，提高生物利用度，节省药材等优势外，还具有以下优势 1.充分考虑药材性质植物类药材、矿物类药材，虽韧性强如灵芝孢子，但一般超微粉碎即可达到粉碎效果，而树脂类药材、动物类药材及难粉碎的贵重药，常规工艺粉碎过程中极易“返粗”或受热变软、蛋白变性等问题，粉碎物中有明显的片状物，为钢棒之间挤压所致；且放置过程中极容易重新聚合。而根据药材性质，加适宜的基质进行超微粉碎，具有以下优点a.完全避免了粉碎过程中复聚现象，药物粉碎过程中迅速被分散，避免黏连、复聚；b.极大的提高了药材的粒度，其中加固体分散介质所得混合物90％粒子粒径在20μm以内，其中心粒径在12μm以内；加液体分散介质，比湿法粉碎粒度更细，所得混合物90％粒子粒径在10μm以内，其中心粒径在4μm以内，较常规超微粉碎粒度大大提高；c.采用加分散介质粉碎法，粉碎时间比原来缩短，粉碎效率比原来大大提高；d.更重要的是，采用此法操作，可避免超微粉碎物在放置过程中的聚合，解决该类成分存储中稳定性差的问题。
2.充分考虑制剂的需要 将粉碎与制剂结合起来，从制剂的角度出发，考虑制剂的稳定性、生物利用度的提高等因素，选择合适的分散介质，例若制备成胶囊剂，常选择加入5～10％的微粉硅胶进行粉碎，所得混合物稳定性好、流动性强，可直接用于充填胶囊；若拟制备软胶囊，可选择加入植物油或PEG400，另加适宜的助悬剂、稳定剂等药剂学常用辅料，一并粉碎，所得流体或半流体直接用于充填软胶囊。
3.没有后续工艺，解决工艺生产中存在问题由于该工艺为粉碎后直接制成制剂，因此不存在液体、固体难于分离等问题；又因粉碎中加入了分散介质，使超微粉体的流动性大大改善，吸湿性降低，使制剂更容易成型、稳定，避免了超微粉体固有的缺陷。
4.辅料本身的优点对改善超微粉碎的作用 ①微粉硅胶的应用 又名白炭黑，其无臭、无味，不溶于水；与绝大多数药物不发生反应，有良好的流动性和附着力；促崩解，作润滑剂，能增加溶出，固体分散，因其质轻、体积大，流动性好，用作分散介质，能显著改善超微粉的流动性，避免分子间团聚，保证制剂的重量差异，其在超微粉碎过程中应用意义重大。
②聚乙二醇400的应用 作为美国药典推荐用软胶囊辅料，引入到超微粉碎中，进一步高度分散，能大大提高生物利用度，效果更突出，这一点在药理试验中有报道；另有文献报道，聚乙二醇类对动物蛋白具有结构修饰作用，修饰后的蛋白不容易被蛋白水解酶降解，而且不容易被肾小球滤过，所以血药半衰期得以延长。同时聚乙二醇对蛋白抗原表位的物理屏障作用，可以使蛋白的免疫原性或抗原性下降或消除。在药物粉碎过程中直接加入聚乙二醇400，可使其及时、充分地与药物成分相结合，其结合效果是传统“先粉碎后混合”方法所不能比拟的。
③环糊精的应用 分散介质中加入适量羟丙环糊精或β-环糊精，可对待粉碎药材如麝香、冰片或药材中挥发油类成分有直接包和作用，且包封率及包和效率高，可有效保护挥发性或升华性强的成分，提高此类成分在制剂中的稳定性。
5、方便制剂，提高制剂稳定性 采用加入适宜分散介质超微粉碎的方法，所得超微混合物根据临床需要可直接制成制剂，且所得混合物高度均匀乳化，粒度小，稳定性好，无分层现象，可用该方法解决留粉药材制备软胶囊易分层、沉淀等长期困扰的难题，同样也能提高如胶囊剂、散剂等其他制剂超微粉体的稳定性，且制备工艺简便易行，是将粉碎与制剂完美结合的最佳工艺，必将在今后的超微制剂生产中被推广。
6、单味药材、中药复方均可 本专利申请所提出方法，不仅适用于中药材的加工，还可以用于含动物药、树脂药、贵重药留粉的中药复方的进一步开发利用，如七厘散为伤科常用药，其每年销售额的30％以上用于购买中药材，若采用加分散介质超微粉碎，在保证疗效的基础上，减量应用，可节省约50％的药材，其直接经济收益非常可观，所以该技术具有非常广阔的市场前景。
为进一步说明本发明所取得的有益效果，发明人从粉碎效果、超微混合物稳定性和药理试验三方面进行说明 一、粉碎效果 选择血竭(单味、树脂药材)和接骨七厘散(处方组成包括炙乳香、炙没药、当归、土鳖虫、烫骨碎补、硼砂、血竭、煅自然铜及酒制大黄)为代表，分别进行常规超微粉碎和加1倍量PEG-丙二醇(9∶1)超微粉碎，分别粉碎30分钟，采用WJ9200激光粒度仪分别测定粒度，结果见表1。
由表1可看出，常规超微粉碎的血竭最大粒径大于200μm(为复聚的碎片，约占6～8％，可过筛检查)，中心粒径在2)μm左右；加液体分散介质后，最大粒径小于20μm的粒子，中心粒径在4μm左右；常规超微粉碎的接骨七厘最大粒径约为200μm(为复聚的碎片，约占4～6％，可过筛检查)，中心粒径在24μm左右；加液体分散介质后，最大粒径在21μm左右，中心粒径在4μm左右；因此，加分散介质后，极大的提高了药材的粒度，效果显著。
二、制剂稳定性 试验目的比较常规超微粉碎和加介质超微粉碎所得半成品的稳定性 试验药物 ①接骨七厘常规超微粉制备软胶囊内容物取净接骨七厘药材，预粉碎后，超微粉碎，所得微粉加1.5倍量PEG400-丙二醇(9∶1)作基质，作软胶囊内容物，供稳定性试验用； ②接骨七厘加分散介质直接粉碎制备软胶囊内容物取净接骨七厘药材，预粉碎后，加1.5倍量PEG400-丙二醇(9∶1)作粉碎介质，超微粉碎，所得混合物作软胶囊内容物，作稳定性试验用。
试验方法 离心实验分别取5g样品置离心管中，以3000rpm离心20min，观察有无分层现象。
耐寒耐热实验分别取适量样品置低温2-5℃，30d；及高温50-53℃，24h，观察样品的色泽、稠度、均匀性有无变化。
室温留样观察法分别取样品适量，各装三只具塞试管，采用室温留样观察法测定样品3个月后，外观性状是否稳定。研究结果见表2。
由试验结果可知，以新思路超微粉碎所得混合物，稳定性好，无分层现象，可初步确定以该方法解决留粉药材制备软胶囊易分层、沉淀等长期困扰的难题。
三、药理试验验证 为进一步验证本发明在为了证明本发明药物制剂在提高体外溶出度和生物利用度，节约药材、提高药效方面的贡献，发明人根据其药材性质、单方、复方分类，选择血竭(树脂类药材)、水蛭(动物类药材)、七厘散(复方，处方包含矿物、动物、植物、树脂类药材)、西黄丸(麝香、牛黄、乳香、没药，动物药+树脂类药材)为代表，采用本发明的方法制备超微混合物，并依据其功能主治，进行了动物对比药效学实验。
(一)血竭超微粉碎前后药理对照试验 一、基本资料 1、受试药物血竭思药牌，中国云南省思茅制药厂；血竭普通粉思药牌血竭粉碎收集80～100目粉末；血竭超微混合物选择PEG400-丙二醇(9∶1)作基质，经超微粉碎混合得到，平均粒径(3.96±0.22)μm，含药量50％，超微粉组给药相当原生药量的1/2进行试验。空白对照以生理盐水作空白。
2、试验动物NIH小鼠，20±2g，雌雄各半，由北京医科大学实验动物中心提供。
二、试验内容 1.小鼠血浆复钙时间试验 NIH小鼠，雌雄各半，随机分为3组，每组12只，按表3所列药品及剂量灌胃给药，每天1次，连续8天。于第8天给药后1小时摘取眼球，取血1ml，放入加有柠檬酸钠溶液的离心管内，混匀后1000r/min离心10min。取上层血浆80μl于内径8mm的试管中，再加生理盐水80μl，混匀，于37℃水浴中温育2分钟，再加入80μl氯化钙溶液(0.25mol/l)，混匀，置于37℃水浴中，立即计时，记录自加氯化钙溶液至纤维蛋白凝固所经历的时间。结果见表3。
2.小鼠凝血时间试验 NIH小鼠，雌雄各半，随机分成3组，每组12只，按表4中所列的药品及剂量灌胃给药，每天1次，连续给药6d。于第6天给药后1h，用内径为0.1mm的毛细管在小鼠眼内眦球后静脉丛取血。从血液吸入毛细管的时刻开始计时，血液注满后放在桌上，每30s小心折断毛细管两端约0.5mm，观察到有血凝丝形成时停止计时。毛细管两端时间读数的平均值即为小鼠的凝血时间。结果见表4。
3.小鼠断尾出血时间试验 NIH小鼠，雌雄各半，随机分成3组，每组12只，按表5中所列的药品及剂量灌胃给药，每天1次，连续给药6d。于第6天给药后1h，用利剪在距小鼠尾端8mm处断尾，让血液自然流出，每隔20s用滤纸轻触断尾处，至不再出血时为止，所历时间为小鼠的断尾出血时间。结果见表5。
试验结果表明，不同粒径的血竭粉末和血竭超微粉均能显著缩短出血时间、凝血时间、血浆复钙时间，表明血竭有显著的止血促凝的作用。
血竭超微粉组缩短小鼠血浆复钙时间、缩短小鼠凝血时间和出血时间试验中与血竭普通粉比较有显著性差异。表明通过减小血竭粒径的方法增加血竭比表面积，能显著增强血竭的止血促凝作用。
(二)水蛭超微粉碎前后药理对照试验 一、基本资料 1、受试药物水蛭购自建联药店，经鉴定合格；水蛭普通粉取干燥净水蛭粉碎，收集100目粉末；水蛭超微混合物选择PEG400-丙二醇(9∶1)作基质，经超微粉碎混合得到，平均粒径(3.89±0.43)μm，含药量50％，超微粉组给药相当原生药量的1/2进行试验。空白对照以生理盐水作空白。
2、试验动物NIH小鼠，20±2g，雌雄各半，由北京医科大学实验动物中心提供。
二、试验内容 1.供试品对小鼠凝血时间的影响 NIH小鼠，随机分为3组，每组12只。按表6中所列的药品及剂量灌胃给药，用生理盐水作对照。每天3次，连续给药3d，第4天给药1h后，从小鼠眼内毗球后静脉丛取血，按毛细管法，测定各组小鼠的凝血时间，经t检验统计分析，结果见表6。
实验表明，水蛭普通粉与水蛭超微粉均有确切的抗凝活性，超微粉的抗凝活性明显优于普通散。
2.供试品对小鼠出血时间的影响 NIH小鼠，随机分为3组，每组12只。按表7中所列的药品及剂量灌胃给药，用生理盐水作对照。每天2次，连续灌胃3d，第4天给药1h后，用剪尾法测定各组小鼠剪尾5mm的出血时间。结果见表7。
实验表明，水蛭普通粉与水蛭超微粉均有确切的抗凝活性，超微粉的抗凝活性明显优于普通散。
3供试品对小鼠体内抗栓作用的影响 因小鼠尾出血时间，与鼠颈动脉旁路血栓形成法具有很好的平行性，故可作为一种简便易行的抗血栓形成药物的体内初筛法用于实验。NIH小鼠，随机分为3组，每组12只。以给定剂量灌胃3d，第4天给药1h后，将小鼠固定，距尾尖3mm处剪断，垂直放入(37±1)℃生理盐水中，使尾端在液面下3cm，记录出血时间，结果见表8。
实验表明，体内抗栓作用，也以超微散为优。
(三)七厘散超微粉碎前后药理对照试验 一、基本资料 1、受试药物七厘散普通粉，取干燥净药材，按照原标准工艺粉碎，收集100目粉末；七厘散超微混合物，选择PEG400-丙二醇-甘油(6∶3∶1)作基质，经超微粉碎混合得到，平均粒径(4.92±0.61)μm，含药量50％，超微粉组给药相当原生药量的1/2进行试验；以NS作空白。
2、试验动物NIH小鼠18～22g，雌雄兼用，Wistar大鼠，雌雄兼用，200～250g；均由北京医科大学实验动物中心提供。
3、试验仪器电子天平，北京赛多利斯仪器有限公司；热板仪，山东省医学科学院实验仪器研究所。
二、试验内容 试验1小鼠的热板法试验 调节恒温水浴热板温度为55±0.5℃，预热10min。取经筛选合格的小鼠随机分为3组，每组12只。分别为七厘散普通粉组、超微粉组和空白对照组，灌胃给药。将上述小鼠放入热板仪，测定不同时间段(30min、60min、90min、120min)的痛阈值。结果见表9。
试验结果表明，与空白对照组相比，七厘散组与超微粉制剂组均能显著提高小鼠的痛阈值，超微粉碎组与七厘散普通粉组作用效果相当，即本品超微粉相当原处方1/2倍量与七厘散组效果相当，起到减量应用的功效。
试验2止血试验 取试验小鼠，随机分组，分别为七厘散组、超微粉组和空白对照组，每组12只。灌胃给药，连续给药3d。末次用药后2小时，距离尾尖2mm处断尾，观察出血时间。结果见表10。
试验结果表明，超微粉组在相当于七厘散1/4剂量时即已显效，在相当于七厘散1/2剂量时，已有明显的止血效果。
试验3活血化瘀试验 取试验小鼠，随机分组，用0.2％戊巴比妥钠ip30mg/kg麻醉，保持试验环境及所给药物恒温(30±0.5℃)，将麻醉小鼠放于观察台上，耳廓去毛，并垫耳托，使其平展以便于观察，在耳廓与耳托间滴加液体石蜡，将观察板置于多部位微循环观察系统显微镜下进行观察，并用计算机进行数据处理和显示，记录给药前小鼠耳中动脉第三分支微动脉、微静脉的血管直径及血流速度，作为正常指标，分别在耳廓涂以不同药物；10min后用棉试子轻擦去所涂药物，观察上述各项指标的变化情况。用药后血管直径及血液流速增加百分率计算公式为血管直径增加％＝(用药后血管直径-用药前血管直径)/用药前血液直径×100％；血管流速增加％＝(用药后血管流速-用药前血管流速)/用药前血液流速×100％。结果见表11。
试验结果表明，超微粉组与七厘散组对小鼠耳廓微动脉、微静脉均有明显的扩张作用，并使血管内血流速度明显增加，尤其以动脉扩张、动脉血流速增加显著，提示本品有较好的改善微循环的作用。即提示可以改善股骨头坏死区域的血循环，从而起到治疗的作用。试验中，超微粉1/2剂量组与七厘散组效果相当，证明了超微粉的明显的药理效果。
试验4小鼠急性毒性试验 一日内给小鼠灌胃普通粉、超微粉各85g/kg，相当于临床70kg人每公斤体重日用量的145倍以上，连续观察七天，小鼠一般状况良好，无一死亡，说明本品低毒、安全。
试验5大鼠长期毒性试验 取Wistar大鼠，连续给药30天，对大鼠的活动、行为、进食、饮水、毛色、粪尿等一般状况未见显著影响，且无一死亡，大鼠的血液学、血液生化学和重要脏器病理组织指指标均无显著改变，给药结束后经过10天恢复观察，未观察到其它的后遗和继发的毒性作用。提示超微制剂临床应用安全、低毒。
(四)西黄丸超微粉碎前后药理对照试验 本发明药物制剂具有清热解毒，和营消肿的功能，用于痈疽疔毒，瘰疬，流注，癌肿等疾病的治疗。发明人还根据其功能主治，从食道癌、肝癌、胃癌三大肿瘤及相关药效学着手对本品药效学进行了研究。
一、基本资料 受试药物超微西黄制剂，给药剂量按相当生药量折算，设计给药剂量相当普通西黄丸剂量的1/3(超微粉组1)、1/2(超微粉组2)、2/3(超微粉组3)。
西黄丸九寨沟天然药业有限公司，批号030305。
受试动物Wistar大鼠，雌雄兼用，150～210g；昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g；均由山东医科大学实验动物中心提供。
主要仪器3F-3型高速微量离心机，华兴机轮公司生产；双目倒置读数显微镜，长春第一光学仪器厂生产；TF光热测痛仪，中国医学科学院药物研究所生产；电子天平，AEL-200型，日本SHIMADZU公司产品。
试验1抗肿瘤作用试验研究 试验方法取接种7d的肝癌(HepA)小鼠腹水，用灭菌生理盐水按1∶4稀释，每只鼠腹腔接种0.2ml(约25×106个细胞/ml)，接种后第2天随机分组，每天灌胃给药一次，共计9d。然后记录各组小鼠存活时间，并计算生命延长率。
生命延长率(％)＝给药组平均存活天数/对照组平均存活天数×100％。
取接种7-10d的小鼠肉瘤(S180)瘤块，按1∶4加入灭菌生理盐水匀浆成细胞悬液，分别于每只鼠右腋下接种0.2ml(约25～28×106癌细胞/ml)。接种后第2天随机分组，每天给药，共计9d，第10d处死小鼠、剥离瘤块称重，并计算瘤重抑制率。
抑瘤率＝1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重×100％。
结果见表12。
表12结果表明，西黄丸与本品制剂1、2、3均能不同程度延长腹水型肝癌小鼠的生存期，可抑制小鼠S180实体瘤的生长，与对照组相比有显著性差别。其抗肿瘤作用本品制剂2与西黄丸相当。
综上所述，本品制剂能抑制小鼠肉瘤(S180)和肝癌(HepA)的生长。荷瘤小鼠灌胃给药，抑瘤率均大于30％，生命延长率均大于130％，疗效较好。
试验2改善微循环试验研究 1.对大鼠血液流变性的作用 取Wistar大鼠，造模，对急性血瘀模型大鼠的治疗作用结果见表13。
表13结果表明，西黄丸与本品制剂1、2、3能显著降低模型大鼠的纤维蛋白原含量、血沉和血小板黏附率。给药前后血液相对黏度的改变表明其主要通过降低血浆粘度来降低全血粘度，从而显著改善大鼠血液循环。本品制剂2与西黄丸作用相当。
2.对大鼠肠细膜微循环的作用 取健康大鼠60只，禁食不禁水12h后，用20％乌拉坦(0.4ml/100g)腹腔注射麻醉，背位固定，于一侧壁切开长约3～4cm的切口，拉出十二指肠插管结扎后复位准备给药，再拉出一段空肠袢，平铺于特制的有机玻璃灌流水池内，用大头针将肠管固定，肠系膜平铺于充以30℃的15ml洛氏营养液灌流池，用双目倒置显微镜放大80倍进行观察测量(显微镜头内装有测微尺)。试验分为6组，每组10只。试验结果见表14。
表14结果表明，西黄丸与本品制剂1、2、3组均可显着增加大鼠肠细膜毛细血管管径和毛细血管流速，本品制剂2与西黄丸作用相当。
综上所述，本品制剂可降低高粘高凝大鼠血液粘度，减少血小板的数量，也可能降低其粘附率，通过此作用可达到活血化瘀的目的。另本品制剂还可使肠系膜血管扩张，血细胞流速加快，毛细血管开放数增加，说明可改善肠系膜微循环。
试验3增强免疫力试验研究 1.对S37肉瘤小鼠免疫器官重量的影响 取小鼠50只，每组10只，于接种S37瘤株后次日开始给药，每日1次，连续给药10天，并于停药后次日将小鼠脱颈致死，取出脾脏、胸腺，用滤纸吸干水分，扭力天平称重，并计算脾指数和胸腺指数。结果见表15。
表15结果表明，西黄丸与本品制剂1、2、3组均可显著提高S37肉瘤小鼠的脾指数和胸腺指数，促进其免疫功能。本品制剂2与西黄丸作用相当。
2.对荷S37肉瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 取接种S37肉瘤后50只小鼠，随机分为五组，给药方法同上，连续给药10天，于第10天早给药后，每鼠腹腔注射5％鸡红细胞混悬液0.4ml，10小时后脱颈处死，称重，消毒后腹腔注射2.5mlHank’s液(pH7.0～7.2)，轻揉腹部，在腹腔壁上剪一小口，吸取腹腔液2ml置于试管中，混匀后，吸少许滴于载玻片上，将玻片放在铺有湿纱布的搪瓷盘中，放入培养箱37℃孵育30分钟，用生理盐水冲洗去附在玻片表面的细胞，吸干，甲醇固定5分钟，用瑞氏染液染色10分钟，然后用水冲洗去浮色，晾干，显微镜下观察，计算巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，结果见表16。
表16结果表明，西黄丸与本品制剂1、2、3组均可显著地提高吞噬百分率和吞噬指数。本品制剂2与西黄丸作用相当。
综上所述，本品制剂可增强小鼠特异和非特异性的细胞及体液免疫功能。
试验4镇痛、消炎等试验的研究 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响试验研究小鼠50只，随机分为5组，每组10只；每日给药1次，连续3天；末次给药后30min，小鼠左耳涂以二甲苯0.05ml/只致炎，右耳作对照；15min后脱颈臼处死，沿耳廓基线剪下双耳，用6mm角膜环钻在左右耳相同位置冲下耳片，在电子分析天平上称重(精确到0.1mg)，左耳重量减去右耳重量之差值(单位mg)即为肿胀度，计算各组平均肿胀度并求出肿胀抑制率(％)，结果见表17。
表17结果表明，西黄丸与本品制剂1、2、3均能降低二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀率，说明其具有一定的抗炎作用。本品制剂2与西黄丸作用相当。
2.对光热致痛法所致小鼠痛阈值的影响 选用在TF光热测痛仪上预测痛阈值在3～10s范围的雌性小鼠52只，体重22～26g，随机分为5组，每组10～11只，在TF光热测痛仪上测定给药后30、60、120min各组小鼠的痛阈值，结果见表18。
表18结果表明，西黄丸与本品制剂1、2、3组小鼠给药后不同时间测定的痛阈值均较给药前或对照组有一定的延长趋势，药后痛阈值与对照组相比有显著性差异。本品制剂2与西黄丸作用相当。
试验5小鼠急性毒性试验 一日内给小鼠灌胃本品制剂85g/kg，相当于临床70kg人每公斤体重日用量的145倍以上，连续观察七天，小鼠一般状况良好，无一死亡，说明本品低毒、安全。
试验6大鼠长期毒性试验 取Wistar大鼠，试验前稳定7天，观察一般状况体重、进食、粪便、活动等情况均无异常，按体重随机分为四组，空白组与超微粉高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组30只，每笼5只，然后开始给药，按1ml/100g鼠重每天定时灌胃给药。每7天测一次体重并按体重变化调整给药量，连续给药45天，给药期间注意观察动物活动、毛色粪便、进食、体重变化等情况。每周称量一次体重，每周定食、定水，24小时后称剩余量，加入量与剩余量之差即为日食量、日饮水量。给药21天后，禁食不禁水12h，进行血液学、血生化学检验，每组各取20只动物处死进行病理解剖及病理组织学检查。其余大鼠做10天恢复期观察，复测上述指标。
连续给药21天，对大鼠的活动、行为、进食、饮水、毛色、粪尿等一般状况未见显著影响，且无一死亡，大鼠的血液学、血液生化学和重要脏器病理组织指指标均无显著改变，给药结束后经过10天恢复观察，未观察到其它的后遗和继发的毒性作用。提示超微粉制剂的安全、低毒。
通过对以上血竭、水蛭及传统中药复方七厘散、西黄丸超微前后药效学试验研究，由试验结果可以看出，除证明其治疗作用外，还进一步说明其只需1/2处方量，即可达到甚至超过原处方的效果，说明该药用物质已发生了质的变化，是一种新的药用物质。

具体实施例方式 下面列举实施例，进一步说明本发明，各实施例仅用于说明本发明，并不限制本发明。
实施例1超微粉碎制备龙血竭超微混合物 取干燥净龙血竭，用普通粉碎机进行粉碎后过20目筛，加1.5倍量PEG400-丙二醇(9∶1)混合物作基质，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，即得。
实施例2超微粉碎制备龙血竭超微混合物 取干燥净龙血竭，用普通粉碎机进行粉碎后过40目筛，加0.6倍量辛癸酸甘油酯作基质，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，即得。
实施例3超微粉碎制备龙血竭超微混合物 取干燥净龙血竭，用普通粉碎机进行粉碎后过60目筛，加3倍量吐温80-油酸乙酯-丙二醇(60∶20∶20)作基质，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，即得。
实施例4超微粉碎制备龙血竭超微混合物 取干燥净龙血竭，用普通粉碎机进行粉碎后过80目筛，加2倍量大豆油-司盘80-蜂蜡(9∶0.7∶0.3)作基质，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，即得。
实施例5超微粉碎制备龙血竭超微混合物 取干燥净龙血竭，用普通粉碎机进行粉碎后过100目筛，加0.1倍量微粉硅胶作分散剂，用振动磨机超微粉碎45分钟，制得中心粒径小于20μm的超微混合物，即得。
实施例6超微粉碎制备龙血竭超微混合物 取干燥净龙血竭，用普通粉碎机进行粉碎后过40目筛，加1倍量微粉硅胶-聚乙二醇4000(4∶1)作分散剂，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于20μm的超微混合物，即得。
实施例7超微粉碎制备水蛭超微混合物 取干燥净水蛭，用普通粉碎机进行粉碎后过20目筛，加1.5倍量PEG400-丙二醇(9∶1)混合物作基质，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，即得。
实施例8超微粉碎制备水蛭超微混合物 取干燥净水蛭，用普通粉碎机进行粉碎后过40目筛，加0.5倍量辛癸酸甘油酯作基质，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，即得。
实施例9超微粉碎制备水蛭超微混合物 取干燥净水蛭，用普通粉碎机进行粉碎后过60目筛，加3倍量吐温80-油酸乙酯-丙二醇(60∶20∶20)作基质，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，即得。
实施例10超微粉碎制备水蛭超微混合物 取干燥净水蛭，用普通粉碎机进行粉碎后过80目筛，加2倍量大豆油-司盘80-蜂蜡(9∶0.7∶0.3)作基质，用振动磨机超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，即得。
实施例11超微粉碎制备水蛭超微混合物 取干燥净水蛭，加0.2倍量微粉硅胶作分散剂，用振动磨机超微粉碎45分钟，制得中心粒径小于20μm的超微混合物，即得。
实施例12超微粉碎制备水蛭超微混合物 取干燥净水蛭，加1倍量聚乙二醇4000-微晶纤维素-羧甲淀粉钠(8∶1.5∶0.5)作分散介质，用振动磨机低温超微粉碎50分钟，制得中心粒径小于20μm的超微混合物，即得。
实施例13超微粉碎制备西黄超微粉丸剂 处方牛黄15g 麝香 15g 制乳香 550g制没药550g 制法取上述药材，干燥、洁净，混合，常规粉碎过40目筛，加0.2倍量微粉硅胶作分散剂用振动磨低温下超微粉碎45分钟，制得中心粒径小于20μm的超微混合物，用水泛丸，置通风干燥处阴干，即得超微丸剂。
实施例14超微粉碎制备西黄超微粉胶囊 处方牛黄15g 麝香 15g 制乳香 550g制没药550g 制法取上述药材，干燥、洁净，混合，常规粉碎过80目筛，加0.2倍量微粉硅胶作分散剂用振动磨低温下超微粉碎20分钟，制得中心粒径小于20μm的超微混合物，装胶囊，即得超微胶囊剂。
实施例15超微粉碎制备西黄超微粉软胶囊 处方牛黄15g 麝香 75g 制乳香 500g制没药500g 制法取上述药材，干燥、洁净，混合，常规粉碎过20目筛，加0.5倍量辛癸酸甘油酯作基质，用振动磨低温下超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，装软胶囊，即得超微软胶囊剂。
实施例16超微粉碎制备西黄超微粉软胶囊 处方牛黄15g 麝香 75g 制乳香 500g制没药500g 制法取上述药材，干燥、洁净，混合，常规粉碎过20目筛，加1.5倍量PEG400-丙二醇(9∶1)混合物作基质，用振动磨常温下超微粉碎30分钟，制得中心粒径小于10μm的超微混合物，装软胶囊，即得超微软胶囊剂。
附表 表1不同超微粉碎方法粉碎粒度检查表 表2稳定性研究结果表 表3血浆复钙时间试验结果(

n＝12) 表4凝血时间试验结果(

n＝12) 表5出血时间试验结果(

n＝12) 表6供试品对小鼠凝血时间的影响(

n＝12) 表7供试品对小鼠出血时间的影响(

n＝12) 表8供试品对小鼠体内抗栓作用比较(

n＝12) 表9对小鼠痛阈值的影响
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.0，***P＜0.001；与七厘散组比较，#P＜0.05。
表10止血试验
与空白对照组比较*P＜0.05；与七厘散组比较，#P＜0.05。
表11对小鼠耳廓微循环的影响
与空白对照组比较**P＜0.01，***P＜0.001。
表12对移植性小鼠肿瘤S180和HepA的抑制作用(x±s，n＝10) 注与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01 表13对急性血瘀模型大鼠血液黏度影响的研究(x±s) 注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表14对大鼠肠细膜微循环的作用(x±S，n＝10) 注各组给药前后自身比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表15对S37肉瘤小鼠免疫器官重量的影响(x±S，n＝10) 注*P＜0.05，**P＜0.01与NS比较 表16对荷S37肉瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(x±S，n＝10) 注*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001与NS比较 表17对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(X±s) 注与对照组比较*P＜0.05 表18对光热致痛法所致小鼠痛阈值的影响(X±s) 注与对照组比较*P＜0.0权利要求
1.一种加分散介质制备中药超微粉的方法，其特征在于将待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加适宜分散介质一并置于超微粉碎设备中，进行超微粉碎，即得。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于可以是以下方法中的任意一种
a.取待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加0.01～5倍量适宜的固体分散介质，用振动磨超微粉碎10～60分钟，即得。
b.取待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加0.2～5倍量适宜的液体分散介质，用振动磨超微粉碎10～60分钟，即得。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于方法a.中所用固体分散介质可以选自但不限于如下的一种或几种的组合固体聚乙二醇、微粉硅胶、微晶纤维素、环糊精、硬脂酸镁、滑石粉、淀粉、羧甲淀粉钠、丙烯酸树脂、羟丙甲、卡泊姆。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于该方法的步骤为取待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加0.02～2倍量的微粉硅胶、固体聚乙二醇、环糊精中一种或几种的组合物，用振动磨超微粉碎20～60分钟，即得。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于方法b.中所用液体分散介质可以选自但不限于如下的一种或几种的组合大豆油、花生油、菜子油、玉米油、芝麻油、红花油、油酸乙酯、椰子油酯类、向日葵油单甘油酯、蜂蜡、液体聚乙二醇、甘油、丙二醇、山梨醇、磷脂、胆固醇、吐温、司盘、帕洛沙姆。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于该方法的步骤为取待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加0.2～2倍量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐温中任意一种或几种的组合物，用振动磨超微粉碎20～60分钟，即得。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于聚乙二醇-丙二醇-甘油-吐温的比例为6～9∶1～3∶0～3∶0～3。
8.如权利要求2、3或4所述的制备方法在制备丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂等固体制剂中的应用。
9.如权利要求2、5、6或7所述的制备方法在制备软胶囊剂、硬胶囊剂、口服凝胶剂、固体/半固体的透皮制剂和口服乳剂等制剂中的应用。
10.如权利要求2、5、6或7所述的制备方法在制备中药软胶囊、硬胶囊囊液中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种新的中药材粉碎方法，属中药领域。该方法是将待粉碎中药材，常规粉碎过20～100目筛，加适宜分散介质一并置于超微粉碎设备中，进行超微粉碎，即可得到均匀分散的中药超微粉。该方法解决了中药超微粉存在的制剂困难，可使中药超微粉直接用于制剂。
文档编号A61K9/48GK1994332SQ20061020000
公开日2007年7月11日 申请日期2006年1月5日 优先权日2006年1月5日
发明者高淑英 申请人:北京凯瑞创新医药科技有限公司