专利名称：禽霍乱微胶囊疫苗的制备方法
技术领域：
本发明为一种禽霍乱微胶囊疫苗的制备方法，属于生物工程技术领域。
背景技术：
禽霍乱是由多杀性巴氏杆菌引起的一种主要侵害家禽(鸡、鸭、鹅)和野禽的接触性败血性传染病，发病率和死亡率都很高。在预防禽霍乱的措施中，除了保持养殖环境的清洁卫生外，疫苗预防一直是防控禽霍乱疫病的主要方法。虽然我国目前具有预防禽霍乱的疫苗产品如“禽霍乱蜂胶灭活疫苗”和“G190冻干活疫苗”等，但这些疫苗仍有许多不足之处一是灭活疫苗注射后引起各种应激反应(注射局部炎症，肌肉坏死，减食减蛋，生长受抑等)；二是由于灭活疫苗中部分药残会造成食品污染，既不能用于生长快速型肉禽或者6周内准备上市的禽类使用，也不适宜口服；三是活疫苗也必须经注射途径免疫，而且不具有缓释功能，免疫保护期短(3个月左右)，保护率低(75％左右)，导致养殖者不得不在产蛋阶段反复用苗免疫，既影响了动物生产性能的充分发挥，也给养殖者造成了一定的经济损失。综上所述，这些问题的存在不但制约了禽霍乱疫苗预防效力的充分发挥，影响家禽生产性能、生长速度和经济效益，而且对人类的身体健康构成威胁。
发明内容
本发明的目的是针对现有禽霍乱疫苗所存在的缺点，提供一种禽霍乱微胶囊疫苗的制备方法，引入微胶囊技术，解决禽霍乱疫苗在生产实践中所出现的问题。
本发明的目的是通过以下技术途径实现的，禽霍乱微胶囊疫苗的制备方法，包括如下步骤(1)将A型多杀性巴氏杆菌冻干菌种经复苏传代后制成种子菌液，通过培养增殖获得含菌数90亿/ml以上的半成品；(2)半成品菌液经灭活检验合格后与等体积2％的海藻酸钠溶液经分散仪均质，进行初次乳化；(3)将上述乳液与等体积5％的壳聚糖溶液经高压乳化机进行二次乳化；(4)将最终制得的乳液经喷雾干燥器脱水，制成微胶囊疫苗干粉。
所述的制成禽霍乱微胶囊疫苗干粉粒径范围在1-15um，每克含菌体2000-4000亿。
种子菌液培养增殖菌数是采用扁瓶固体培养法或深层通气发酵培养法。
本发明方法科学，简单合理，生产稳定可靠，产品收率达85％以上。成品具有抗原含量高、缓释时间长、毒副作用低、成本低廉，使用方便、保存期长等优点。制成的疫苗除了能刺激机体产生体液免疫的抗体IgG和IgM外，还能刺激机体产生较高的粘膜局部免疫抗体sIgA，以及在粘膜表面诱导有效的细胞毒性T细胞(CTL)应答，因此可同时产生细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫。用本方法生产的禽霍乱微胶囊疫苗干粉每克可含菌体2000-4000亿。产品不加任何防腐剂，在常温密封条件下可保存2年不变质。
图1是本发明采用扁瓶固体培养法制成的禽霍乱微胶囊疫苗扫描电镜图片；图2是本发明采用深层通气发酵培养法制成的禽霍乱微胶囊疫苗扫描电镜图片；具体实施方式
实施例一将A型多杀性巴氏杆菌冻干菌种经复壮后，选取典型菌落培养后制成种子菌液，采用扁瓶固体培养法获得含菌数120亿/ml以上的半成品，经灭活检验后与海藻酸钠溶液混合进行初次乳化，再将此乳液与壳聚糖溶液混合进行二次乳化，将最终制得的乳液经喷雾干燥器脱水，制成微胶囊疫苗干粉，每克疫苗含菌体3500亿，疫苗粒径范围在2-9um(见附图1)。试验鸡接种此疫苗后3天产生免疫应答，免疫6个月内，平均保护率在80.67％。
实施例二将A型多杀性巴氏杆菌冻干菌种经复壮后，选取典型菌落培养后制成种子菌液，采用深层通气发酵培养法获得含菌数90亿/ml以上的半成品，经灭活检验后与海藻酸钠溶液混合进行初次乳化，再将此乳液与壳聚糖溶液混合进行二次乳化，将最终制得的乳液经喷雾干燥器脱水，制成微胶囊疫苗干粉，每克疫苗含菌体3000亿，疫苗粒径范围在1-12um(见附图2)。试验鸡接种此疫苗后3天产生免疫应答，免疫6个月内，平均保护率在76.32％。
权利要求
1.一种禽霍乱微胶囊疫苗的制备方法，其特征是包括如下步骤(1)将A型多杀性巴氏杆菌冻干菌种经复苏传代后制成种子菌液，通过培养增殖获得含菌数90亿/ml以上的半成品；(2)半成品菌液经灭活检验合格后与等体积2％的海藻酸钠溶液经分散仪均质，进行初次乳化；(3)将上述乳液与等体积5％的壳聚糖溶液经高压乳化机进行二次乳化；(4)将最终制得的乳液经喷雾干燥器脱水，制成微胶囊疫苗干粉。
2.根据权利要求1所述的禽霍乱微胶囊疫苗的制备方法，其特征是所述的禽霍乱微胶囊疫苗干粉粒径范围在1-15um。
3.根据权利要求1所述的禽霍乱微胶囊疫苗的制备方法，其特征是所述的禽霍乱微胶囊疫苗干粉每克含菌体2000-4000亿。
全文摘要
本发明公开了一种禽霍乱微胶囊疫苗的制备方法。该疫苗的制备方法是将A型多杀性巴氏杆菌冻干菌种经复苏传代后制成种子菌液，通过培养增殖获得含菌数90亿/ml以上的半成品；将半成品菌液经灭活检验合格后与等体积2％的海藻酸钠溶液经分散仪均质，进行初次乳化；将上述乳液与等体积5％的壳聚糖溶液经高压乳化机进行二次乳化；将最终制得的乳液经喷雾干燥器脱水，制成微胶囊疫苗干粉。该制备方法科学，简单合理，生产稳定可靠，产品收率达85％以上。采用了微囊化技术，成品具有抗原含量高、缓释时间长、毒副作用低、成本低廉，使用方便、保存期长等优点。
文档编号A61K9/50GK101062409SQ20071002279
公开日2007年10月31日 申请日期2007年5月29日 优先权日2007年5月29日
发明者刘学贤, 龚建森, 吕晓娟 申请人:江苏省家禽科学研究所