专利名称：从当归中提取分离藁本内酯的方法
技术领域：
本发明涉及从天然产物当归中提取分离藁本内酯的方法及藁本内酯的保藏方法。
背景技术：
当归为伞形科当归Angelica sinensis(Oliv1)Diels的干燥根，味甘平，性温。功能补血、和血、调经止痛、润肠通便。主治血虚萎黄、眩晕心悸、月经不调、经闭痛经、虚寒腹痛、肠燥便秘、痈疽疮疡。我国最早的药学著作《神农本草经》就有关于当归的记载，至今仍广泛应用于临床，素有“十方九归”之称。当归富含挥发油，藁本内酯则是其中含量最高的有效成分。研究发现，藁本内酯具有解痉、止咳平喘等抗胆碱活性。随着国内外对中药的认同程度和需求量的不断增加，对当归挥发油的提取及挥发油中藁本内酯的分离纯化研究具有重要的意义和广阔的应用前景。
目前对当归精油的提取分离方法主要有1.水蒸气蒸馏法提取挥发油后，再用常规柱层析分离或高效液相分离；2.有机溶剂提取酯溶性成分后常规柱层析分离或高效液相分离；3.CO2超临界萃取后常规柱层析分离或高效液相分离。
现有技术中的水蒸气蒸馏法耗时较长，而且提取温度较高，使低沸点组分得率较低，且容易使某些组分的结构发生异构化，特别是当归挥发油中的主要成分藁本内酯在高于40℃时其结构易发生变化，使藁本内酯提取率降低；现有技术中的有机溶剂萃取法多利用正己烷或者乙醇为溶剂进行提取，但正己烷价格太高，而乙醇的沸点太高，既造成能耗过大，也更容易使所提取的藁本内酯的结构发生变化，因此这类方法并不利于工业化生产，而且现有技术的有机溶剂法的提取物较杂，不易分离纯化；超临界CO2流体萃取技术提取杂物较多，也不利于藁本内酯的进一步纯化。
根据文献报道，现阶段分离藁本内酯主要有常规柱层析分离和高效液相分离两种方法。但常规柱层析分离所需时间较长，对于结构易变的藁本内酯的分离十分不利；而高效液相分离只能得到较少的量品，且成本较高，不利于大规模的工业化应用。
另据“当归挥发油的提取与成分分析”(食品与机械，2006，22(2)，24-26)一文披露，现有技术中藁本内酯的提取率较低。如水蒸气蒸馏法的藁本内酯提取率仅为0.15％；有机溶剂萃取法所得藁本内酯的提取率为0.95％；超临界CO2萃取法所得藁本内酯的提取率为1.04％。
另一方面，由于藁本内酯本身极不稳定，在存贮中极易发生改变。因此如何长期存贮藁本内酯至今仍是一个未解决的问题。
发明内容
本发明提供一种可克服现有技术不足，有较高的提取率，在提取过程中尽可能少的发生藁本内酯变性，所得到的产品有较高纯度，采用既价格低廉又为低毒的提取溶剂的藁本内酯提取和快速分离方法。
其次，本发明提供一种可以长期稳定存贮藁本内酯的方法。
本发明的提取与分离方法是先将干当归粉末用石油醚回流提取，石油醚沸程为30～60℃。再将所得提取物在中压液相色谱仪上用硅胶柱进行层析分离，用石油醚与乙酸乙酯体积比为13∶1～20∶1的混合液为洗脱液进行洗脱，得到藁本内酯。
经试验表明，本发明从当归中提取藁本内酯的方法中，石油醚的用量是20mL/g，石油醚回流温度最好为30～40℃，所用的硅胶柱中硅胶粒度为300～400目。在洗脱时所用的洗脱液石油醚与乙酸乙酯的最佳体积比为15∶1。
本发明的方法中，推荐采用的柱材料及规格为Biotage Si 25+M(Biotage公司生产)。
本发明的方法，其最佳的洗脱条件是在流速为25ml/min，每个样品管接收体积为9ml的条件下进行梯度洗脱。
为能稳定存贮藁本内酯，本发明采用将藁本内酯置于可密封的瓶内，抽出瓶内的空气，充入氩气，再将其放置于-5℃条件下避光储存。这里所述的可密封的瓶子最好是带有密封磨口，或者带有密封螺口，或者类似密封安培瓶的用玻璃制成的瓶子。
本发明的藁本内酯提取分离方法成本低廉，易于操作控制，所需能耗较少，能够在很短的时间内迅速提取分离得到大量纯品藁本内酯，与现有文献方法相比，本发明的方法能够使藁本内酯的提取率达到最高、异构化程度降到最低。
本发明的存贮方法可以长期稳定保藏藁本内酯。
图1为石油醚提取物的GC-MS谱图及数据。图2为中压快速分离色谱柱分离后藁本内酯1H NMR谱图。图3为中压快速分离色谱柱分离后藁本内酯13CNMR和DEPT谱图。图4为中压快速分离色谱柱分离后藁本内酯的高分辨质谱。图5为中压快速分离色谱柱分离后纯藁本内酯的HPLC检测谱图及数据。
具体实施例方式
本发明在实际的试验中是将干当归粉末用石油醚回流提取，再将所得提取物用硅胶柱进行层析分离。在试验中采用30～40℃的提取温度；在分离时所用的层析洗脱液为石油醚与乙酸乙酯的混合液，其石油醚与乙酸乙酯的体积比为13∶1～20∶1，层析硅胶柱中的硅胶粒度为300～400目。在这一系列的提取分离条件下，得到理想的产物。以下提供本发明最佳的实施方法取干当归粉末10g至于500mL圆底烧瓶中，加入200mL石油醚，恒温水浴32℃，保持回流30min，提取3次，回收溶剂，得到石油醚提取物。其收率可高达2.510％，提取物中藁本内酯的含量经高效液相色谱或气相色谱-质谱检测高达55％以上。图1的气相色谱-质谱检测结果显示提取物中藁本内酯的含量达到76.82％，表明利用此提取方法所得提取物中藁本内酯的提取率要明显高于文献报道方法。参见图1及表1。
对石油醚提取物的分离可采用如下两种方式将石油醚提取物920mg至于蒸发皿中，加入1.66g硅胶(300-400m)拌样，然后将拌匀后的样品在中压快速分离色谱仪(柱型25+M)上进行层析分离；或者将石油醚提取物先用7mL石油醚进行稀释，然后再将稀释后的提取物在中压快速分离色谱仪(柱型25+M)上进行层析分离。
进行分离时以石油醚∶乙酸乙酯＝15∶1为洗脱液，在检测波长为254nm、流速为25ml/min及每个样品管接收体积为9ml的条件下进行梯度洗脱，最终得到330mg藁本内酯样品。
对所得样品分别用1H NMR谱、13C NMR和DEPT谱，以及高分辨质谱分析，分析结果见附图2、3、4和5。由图2的1H NMR谱，图3的13C NMR和DEPT谱以及图4的高分辨质谱分析可知，所得样品的结构即为Z-藁本内酯，图5的分析表明利用中压快速分离色谱柱分离后的样品纯度在95％以上。本发明最佳实施例的提取率为1.93％。
本发明的提取率以及现有技术的提取率比较参见表1。
表1
将藁本内酯放置于西林瓶内，抽出瓶内的空气，充入氩气，再将其放置于-5℃条件下避光储存。储存三个月后，经核磁共振1H NMR和13C NMR以及HPLC检测未发现变化，说明该条件下储存能够保证藁本内酯稳定不变。
权利要求
1.从当归中提取分离藁本内酯的方法，其特征是取干当归粉末用石油醚回流提取，石油醚沸程为30～60℃，再将所得提取物在中压液相色谱仪上用硅胶柱进行层析分离，以石油醚与乙酸乙酯体积比为13∶1～20∶1的混合液为洗脱液进行洗脱，得到藁本内酯。
2.根据权利要求1所述的从当归中提取藁本内酯的方法，其特征是在提取过程中，石油醚用量是20mL/g，回流温度为30～40℃。
3.根据权利要求1或2所述的从当归中提取分离藁本内酯的方法，其特征在于所用的硅胶柱中硅胶粒度为300～400目。
4.根据权利要求3所述的从当归中提取分离藁本内酯的方法，其特征在于洗脱时所用的洗脱液石油醚与乙酸乙酯的体积比为15∶1。
5.根据权利要求4所述的从当归中提取分离藁本内酯的方法，其特征在于所用的柱规格为25+M。
6.根据权利要求5所述的从当归中提取分离藁本内酯的方法，其特征在于洗脱的条件为流速为25ml/min及每个样品管接收体积为9ml的条件下进行梯度洗脱。
7.藁本内酯的稳定保藏方法，其特征是将藁本内酯置于可密封的瓶内，抽出瓶内的空气，充入氩气，再将其放置于-5℃条件下避光储存。
全文摘要
本发明公开从天然产物当归中提取分离藁本内酯的方法和藁本内酯的保藏方法。本发明的提取与分离方法是先将干当归粉末用石油醚回流提取，再将所得提取物在中压液相色谱仪上用硅胶柱进行层析分离；其保藏方法是将藁本内酯置于可密封的瓶内，抽出瓶内的空气，充入氩气，再将其放置于－5℃条件下避光储存。本发明的提取分离方法可比现有技术有更高的收率，本发明的保藏方法可以使藁本内酯不发生改变，并可长期保存。
文档编号A61K36/232GK101088996SQ20071013890
公开日2007年12月19日 申请日期2007年7月18日 优先权日2007年7月18日
发明者高坤, 许鹏飞, 王鹤翔 申请人:兰州大学