专利名称：藁本内酯组合物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及藁本内酯组合物及其制备方法与应用，尤其涉及藁本内酯乳剂及软胶囊剂及其制备方法与应用。
背景技术：
藁本内酯的结构及物理性质结构式 分子式及分子量C12H14O2190，不饱和度为6。
化学名3-亚丁基-4，5-二氢苯酞英文化学名3-butylidene-4，5-dihydrophthalide英文名ligustilide性状描述微黄色带香味的油状物，沸点168～169℃/6mmHg。可溶于正己烷、环己烷、石油醚、乙醚、醋酸乙酯、甲醇等。
藁本内酯的化学结构为苯酞类，3位上连有活泼的丁烯基，均为化学不稳定因素，在室温自然放置条件下，可发生脱氢、氧化、水解、降解等多种异构化反应，极易异构化成其他丁烯基呋内酯类化合物，长时间放置使样品由透明澄清、可流动的液体逐步转变成褐色、粘稠的半固体或固体，氧化成多种复杂产物乃至最后消失，给制备和保存带来不便。已有实验表明，藁本内酯在室温下保存15d纯度由99.48％降至41.97％，GC分析表明其降解产物十分复杂。
藁本内酯的不稳定性不仅不利于保存，而且限制了藁本内酯制剂的制备与应用。目前藁本内酯的保存方法有1.山东绿叶制药的李桂生等人经研究发现，降低保存温度，藁本内酯在-20℃时基本稳定，参见李桂生，马成俊，李香玉等，藁本内酯的稳定性研究及异构化产物的GCMS分析[J]，中草药，2000，31(6)405。藁本内酯在不同温度条件下的稳定性见表1。
表1藁本内酯稳定性考查结果(含量％)
“-”表示因藁本内酯的纯度已发生明显降低而未进行检测2.浙江大学周长新等人应用PCM溶剂化效应模型进行量子化学理论计算，结合气相色谱研究了常温下溶剂效应对藁本内酯稳定性的影响，参见周长新，李新华，藁本内酯的稳定性与溶剂化效应的关系[J]，药学学报，2001，36(10)793。溶剂化效应对稳定性影响的研究表明，藁本内酯在溶剂中稳定性大大增强，经气相色谱检验，在氯仿中常温下保存25d纯度由97.98％降至96.36％，在环已烷中相同条件下降至91.24％。文献报道纯品藁本内酯在室温条件下15d即有约58％的异构化。藁本内酯在空气中与在溶剂中的异构化途径相同，只是由于溶剂化效应的影响使溶质与溶剂反应体系增加了溶剂化能，反应活化能增大，总能量降低而更加稳定。结果表明，作为评价当归、川芎等重要常用中药质量的藁本内酯在常温下空气中极不稳定，但在溶剂中保存可以在一定程度上防止其异构化的发生，计算结果证明由于溶剂化效应的影响，使藁本内酯在溶剂中更稳定，同时溶剂的极性对藁本内酯的稳定性也有影响。适当极性的溶剂，如氯仿，可以使藁本内酯在常温下比较稳定地保存，为制备和保存藁本内酯提供了研究基础。
3.中国中医研究院的李慧等人，在藁本内酯中加入适宜的药用辅料，并比较添加前后指标成分的含量变化情况发现试验筛选的3种稳定剂对藁本内酯均一定的稳定作用，其中以稳定剂B的效果更显著。稳定剂C的试验数据均一性相对较差，同组数据之间存在偏差，可能原因是藁本内酯在其中分散性差所致，参见李慧，王一涛，藁本内酯稳定性的影响因素及稳定化措施，江西中医学院学报2003，15(1)56～57。结果见表2。
表2不同稳定剂对藁本内酯含量的影响
虽有稳定剂B可稳定藁本内酯，但文章并未提供具体配方，专利检索也未见申请。
上述保护藁本内酯的方法，除3法未知外，其余两法难于在工业化制剂生产中使用，3法由于未见处方，无法借鉴。
由于藁本内酯的不稳定性从而导致制备稳定的藁本内酯制剂的困难。目前，还暂无可供临床应用的藁本内酯制剂。本发明人致力于寻找一种提高藁本内酯稳定性的稳定剂，并开发出稳定的藁本内酯制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种稳定的藁本内酯组合物，该藁本内酯组合物至少由藁本内酯及药用植物油组成，植物油的作用实质上是稳定剂的作用，由于植物油的存在而大大提高了藁本内酯组合物的稳定性。
本发明的另一目的在于提供上述藁本内酯组合物的制备方法，该方法简单、可靠，适用于工业化生产。
本发明的再一目的在于提供上述藁本内酯组合物的医药用途。
本发明的组合物还可以进一步包括水、多元醇如甘油和PH调节剂如氢氧化钠。
本发明所述药用植物油包括大豆油、花生油、芝麻油、橄榄油和菜籽油等能够与藁本内酯共存，并能达到稳定藁本内酯作用的植物油。藁本内酯与植物油的质量比为1∶1-1∶50。
本发明所述组合物中的多元醇如甘油的含量为2-2.5％。
本发明所述藁本内酯组合物优选为藁本内酯乳剂或软胶囊。
本发明所述藁本内酯组合物的制备方法主要包括如下步骤
(1)用植物油分散、溶解藁本内酯将植物油和藁本内酯按1∶1-1∶50的比例混合均匀。
(2)包蔽以隔离空气和光线将步骤(1)所得含藁本内酯的植物油包裹在胶材球或囊中，或包裹在包括卵磷脂的脂质体所形成的微球中，以有效隔绝空气和光线。
步骤(1)中植物油和藁本内酯的混合方法有两种一种是植物油与藁本内酯直接进行混合；另一种是在卵磷脂参与下，适当的植物油与藁本内酯、甘油和水形成水包油型脂质微球脂肪乳。
本发明藁本内酯组合物的各种剂型可以按照常规制备方法制得。制得的组合物可稳定存放三个月至三年。
本发明所述组合物给药途径包括口服或注射给药，给药剂量以藁本内酯计算为0.1mg-50mg/kg体重。
本发明所述组合物具有治疗和预防与微循环障碍有关的疾病的作用。药理试验的结果表明该化合物具有以下药理作用1、显示良好的改善微循环作用，对高分子右旋糖酐所致急性微循环障碍模型的影响如下对血液流速流态的影响表现为3.0、1.5、0.75mg/kg三个剂量组均能明显改善血液流动状态(P＜0.01)，使血液流态粒缓流改善为线粒流和粒流；微血管造影法显示各剂量组均能增加血流速度，缩小耳眼循环时间(P＜0.01)。此外，微血管造影法显示出还可明显减少微血管渗漏，降低微血管通透性(P＜0.01)，进而阻止水肿的发生。藁本内酯各剂量组血液鲜红程度强于模型组，与正常组相似。因此可用于微循环障碍疾病的治疗和预防，包括休克、糖尿病并发症、心肺功能障碍、脑功能障碍及多脏器衰竭等的治疗和预防。
2、藁本内酯具有显著降低内毒素休克小鼠死亡率的作用，其作用强度强于地塞米松。其最大特点是可有效避免由于大剂量内毒素所致循环障碍，主要表现在可维持小鼠体温正常，而模型组和地塞米松组动物体温急剧下降。藁本内酯组死亡率为30％，地塞米松组死亡率为60％，模型组死亡率为80％。
3、藁本内酯具有显著的对抗油酸所致大鼠呼吸窘迫综合征的作用，具体表现为显著降低肺水肿、肺瘀血，改善呼吸功能及减慢心率的作用。
4、藁本内酯具有显著的对抗心绞痛、心肌梗死的作用。
具体实施例方式
以下将通过具体实施例对本发明欲保护的藁本内酯组合物及其制备方法与用途进行详细描述，但并无意于限制本发明的保护范围。
实施例1将295g藁本内酯溶解在2680g大豆油中，利用常规软胶囊制备技术制备成装量为250mg的软胶囊。经室温放置1年半后显示，内容物基本稳定。结果见表3。
表3藁本内酯稳定性考查结果(含量％)
实施例2在配料罐内加入5kg大豆油(用真空抽入)，升温至80℃，加入0.6kg卵磷脂，搅拌5-8分钟，至卵磷脂全部分散开后加入藁本内酯250g，开启循环泵，将配料罐内的油液与甘油液按比例混合，开启高速搅拌。加入氢氧化钠液(1moL/L)，调节PH6.0-7。停止搅拌，加入过滤注射用水至全量50000ml，搅拌均匀，为初乳液，测甘油含量，PH值(甘油含量95％-105％、PH值6.0-7.0)。冷却初乳液至55-60℃，开动低压均质机，让初乳液在机内循环匀化，开动高压均质机，让乳液进入机内循环匀化，反复均化10次。前9次匀化后，均将乳液通过热交换器冷却至50-55℃左右，第10次匀化后，乳化液温度冷却至20±3℃，PH值6.0-7.0。乳液经低压均质机再经5um滤器过滤，即可分装得藁本内酯脂质微球脂肪乳剂。经室温放置3个月后显示，内容物基本稳定。结果见表4。
表4藁本内酯稳定性考查结果(含量％)
实施例3将60g藁本内酯溶解在3000g大豆油中，利用技术制备成装量为250mg软胶囊。经室温放置1年半后显示，内容物基本稳定。结果见表5。
表5藁本内酯稳定性考查结果(含量％)
实施例4在配料罐内加入5kg大豆油(用真空抽入)，升温至80℃，加入0.6kg卵磷脂，搅拌5-8分钟，至卵磷脂全部分散开后加入藁本内酯150g，开启循环泵，将配料罐内的油液与甘油液按比例混合，开启高速搅拌。加入氢氧化钠液(1moL/L)，调节PH6.0-7。停止搅拌，加入过滤注射用水至全量50000ml，搅拌均匀，为初乳液，测甘油含量，PH值(甘油含量95％-105％、PH值6.0-7.0)。冷却初乳液至55-60℃，开动低压均质机，让初乳液在机内循环匀化，开动高压均质机，让乳液进入机内循环匀化，反复均化10次。前9次匀化后，均将乳液通过热交换器冷却至50-55℃左右，第10次匀化后，乳化液温度冷却至20±3℃，PH值6.0-7.0。乳液经低压均质机再经5um滤器过滤，即可分装得藁本内酯脂质微球乳剂。经室温放置3个月后显示，内容物基本稳定。结果见表6。
表6藁本内酯稳定性考查结果(含量％)
实施例5将100g藁本内酯溶解在100g花生油中，利用常规软胶囊制备技术制备成装量为250mg的软胶囊。经室温放置1年半后显示，内容物基本稳定。结果见表3。
表7藁本内酯稳定性考查结果(含量％)
实施例6将10g藁本内酯溶解在400g菜籽油中，利用常规软胶囊制备技术制备成装量为250mg的软胶囊。经室温放置1年半后显示，内容物基本稳定。结果见表3。
表8藁本内酯稳定性考查结果(含量％)
实施例7藁本内酯对内毒素休克小鼠的保护作用。
昆明种小鼠，18±2g，100只，分为5组，分别为模型组、藁本内酯小剂量(BT-L)组、藁本内酯中剂量(BT-M)组、藁本内酯大剂量(BT-H)组和地塞米松组，其中BT表示藁本内酯，以上各表示方式同样适用于以下各实施例。
各组动物复制小鼠内毒素休克模型后，藁本内酯各组灌胃给药，地塞米松组腹腔注射给药，观察24小时小鼠的存活率，及动物一般情况和活动状态。结果见表9。
表9藁本内酯对内毒素休克小鼠死亡率的影响
由表9可知，该模型是成功的。模型组和地塞米松组动物表现为周身发冷，唇色发紫，而各BT组动物体温正常，唇色与给药前无显著性变化。试验结果表明藁本内酯具有显著降低内毒素休克小鼠死亡率的作用。
实施例8藁本内酯对高分子右旋糖酐所致急性家兔微循环障碍模型的影响研究将受试新西兰家兔(体重2.0-2.5kg)，按体重随机分为6组，每组10只。包括①正常对照组(NS)；②模型组(CONTROL)；③BT-H组；④BT-M组；⑤BT-L组；⑥阳性药-脑得生组(NDSH)。
建立模型后，将对照组和模型组给等体积生理盐水，其它组灌胃给药，1小时后，观察记录给药后微循环情况。
①血液流态流速的观察根据田牛血流速度分级测定法测定。其方法为根据血流运动形式，将流速分成七级(1)线流(2)线粒流(3)粒线流(4)粒流(5)粒缓流(6)粒摆流(7)停滞。
试验结果通过计算机运用SAS软件进行RIDIT分析，测定结果见表10。
表10对DEXTRAN T500所致急性家兔微循环障碍的流态流速分级的影响
注给药组与模型组相比，**表示P＜0.01。
模型组与对照组相比，★★表示P＜0.01。
由表10可知，模型组与正常组相比，软脑膜微血管内血流速度明显减慢，由正常的线流、粒线流变为粒流或粒缓流(P＜0.01)；藁本内酯各剂量组和脑得生组给药1小时后，与模型组相比，均能明显改善血流流态(P＜0.01)，藁本内酯随着剂量的增加，药效有增强的趋势。
②对红细胞聚集的影响按田牛的三级分类法观察记录。其方法分为以下三级(1)红细胞轻度聚集(2)红细胞中度聚集(3)红细胞重度聚集。
试验结果通过计算机运用SAS软件进行RIDIT分析，测定结果见表11。
表11对DEXTRAN T500所致急性家兔微循环障碍红细胞聚集的影响
注与模型组相比，**表示P＜0.01。
模型组与对照组相比，★★表示P＜0.01。
由表11可知，模型组微血管内红细胞出现中度聚集，个别出现重度聚集，与生理盐水对照组相比，红细胞聚集明显(P＜0.01)；藁本内酯各剂量组和脑得生组给药1小时后，均能改善红细胞聚集(P＜0.01)。脑得生片对红细胞聚集的影响与藁本内酯中剂量组相当。
③血液流速测定以微血管造影法测定耳-眼循环时间表示表12对DEXTRAN T500所致急性家兔微循环障碍血液流速的影响(x±s)
注与模型组相比，**表示P＜0.01。
模型组与对照组相比，★★表示P＜0.01。
由表12可知，与对照组比，模型组静注高分子右旋糖酐后，耳眼循环时间明显延长(P＜0.01)；藁本内酯各剂量组和脑得生组给药1小时后，均能明显缩短耳眼循环时间(P＜0.01)，藁本内酯各组间差异不显著。
④微血管通透性改变的观察——以微血管造影法来显示将已观察耳眼循环时间的动物，采用微循环观察仪观察微血管内外荧光物质的变化。参照上海医科大学病理生理教研室的分级方法，将荧光物质渗出分为四级(1)渗出不明显(-)(2)轻度渗出(+)(3)中度渗出(++)(4)重度渗出(+++)试验结果通过计算机运用SAS软件进行RIDIT分析，测定结果见表13。
表13对DEXTRAN T500所致急性家兔微循环障碍微血管通透性的影响(x±s)
注与模型组相比，**表示P＜0.01。
模型组与对照组相比，★★表示P＜0.01。
由表13可知，与对照组相比，模型组静注高分子右旋糖酐后，家兔微血管外荧光物质明显增多(P＜0.01)；藁本内酯各剂量组和脑得生组给药1小时后，均能明显减少软脑膜微血管外荧光物质(P＜0.01)，各剂量组差异不显著。
⑤微血管形态观察通过对各组动物进行显微摄像观察，藁本内酯各剂量组对红细胞聚集、血色、血液流动状态、微血管周围渗漏及毛细血管中红细胞的灌注情况均有明显的改善作用，而脑得生片除其血色无改善外，其余指标基本与藁本内酯相同。同时，藁本内酯各剂量组血液鲜红程度强于模型组，与正常组相似。
实施例9藁本内酯对油酸所致大鼠呼吸窘迫综合征的保护作用将实验动物-SD雄性大鼠随机分为正常对照组、油酸致伤组、油酸致伤+BT-H、油酸致伤+BT-M、油酸致伤+BT-L、油酸致伤+地塞米松六个组，致伤组按0.15ml/kg尾静脉缓慢注入，正常对照组注入等量生理盐水。注射后立即给予相应药物。观察各组动物一般表现，呼吸频率、幅度，于注射油酸6小时后，开胸取肺，进行病理学观察。
试验结果①呼吸频率与一般状态动物注射油酸后逐渐发生呼吸急促，口唇紫绀。藁本内酯使动物处于较为安静的状态，呼吸频率趋于正常，口唇紫绀现象明显减轻。
②病理学观察油酸损伤组，肺体膨大，表面呈暗红色充血水肿状，见弥散大片状出血瘀斑，切面见多量红色泡沫状液体溢出；藁本内酯各剂量组肺体积较小，表观为红褐色，充血程度较轻，散在点状出血和小片瘀血斑，切面仅见少量粉红色泡沫样液体溢出。地塞米松的瘀血状改善不如藁本内酯组。
③肺系数和肺湿/干重比值油酸损伤组肺系数和肺湿重/干重比值显著增加；而藁本内酯保护系数和肺湿重/干重比值均比油酸组显著降低，提示肺水肿被缓解。结果见表12。
表12藁本内酯对油酸所致大鼠肺损伤的影响(x±s)
☆☆与空白组比较；★★与模型组比较。
权利要求
1.藁本内酯组合物，其特征在于，该组合物由藁本内酯及可药用的植物油组成，藁本内酯与植物油的质量比为1∶1-1∶50。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括水、多元醇和PH调节剂，其中多元醇的重量含量为2-2.5％。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，其中多元醇为甘油，PH调节剂为氢氧化钠溶液。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述的植物油包括大豆油、花生油、芝麻油、橄榄油和菜籽油。
5.根据权利要求1或2或3所述的组合物，其特征在于，所述组合物的存在形式为乳剂或软胶囊剂。
6.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述组合物的存在形式为乳剂或软胶囊剂。
7.一种制备权利要求1-6的组合物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)植物油分散、溶解藁本内酯将药用植物油和藁本内酯按一定比例混合均匀。(2)包蔽隔离空气和光线将含藁本内酯的植物油包裹在胶材球或囊中，或包括卵磷脂的脂质体所形成的微球中，有效隔绝空气和光线。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的植物油和藁本内酯的混合方法有两种一种是二者直接进行混合；另一种是在卵磷脂参与下，植物油与藁本内酯、甘油和水形成水包油型脂质微球脂肪乳。
9.权利要求1-6的组合物在制备治疗和预防与微循环障碍有关的疾病的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种藁本内酯组合物，该组合物至少由藁本内酯及可药用的植物油组成。本发明还涉及藁本内酯组合物的制备方法，该方法工艺简单可靠，适用于工业化生产，其主要包括将药用植物油和藁本内酯按一定比例混合均匀，然后将含藁本内酯的植物油包裹在胶材球或囊中，或卵磷脂所形成的微球中，以制成乳剂或胶囊剂。本发明进一步涉及藁本内酯组合物的医药用途。
文档编号A61K31/365GK1695611SQ200410043159
公开日2005年11月16日 申请日期2004年5月12日 优先权日2004年5月12日
发明者刘俊, 魏玉平 申请人:北京九龙制药厂