灯盏花素口服组合物及其制备方法

专利名称：：灯盏花素口服组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明属药物制剂领域，涉及灯盏花素口服组合物及其制备方法。
背景技术：
：灯盏花素(Brevescapine)是从菊科植物短葶飞蓬(原名灯盏花，又名灯盏细辛，ErigeronBreviscapus)中分离得到的一类黄酮类物质，主要含灯盏乙素(Scutellarin，化学名为4'，5，6-三羟基黄酮-7-葡萄糖醛酸苷)。药效学研究表明，灯盏花素具有扩张脑血管，降低脑血管阻力，增加脑血流量，改善微循环，提高血脑屏障通透性的作用。灯盏花素在临床上广泛用于治疗脑血栓、脑梗塞以及类型未定的中风后瘫痪等症。灯盏花素的上市制剂品种有灯盏花素注射液、灯盏细辛注射液、灯盏花素片、灯盏花颗粒。灯盏花素注射给药虽然吸收快，生物利用度高，但患者使用顺应性差，且制备、包装、运输和贮存等步骤较为复杂；灯盏花素属黄酮类化合物，水溶性和脂溶性均很差，其口服制剂吸收生物利用度极低，据报道灯盏花素片口服生物利用度仅为0.40±0.19%(葛庆华等，灯盏花素在犬体内的药动学和绝对生物利用度研究，中国医药工业杂志，2003，34(12):618-620)。FDA(美国食品药品监督管理局)认为决定药物口服吸收的生物药剂学性质主要是药物溶解度大小和粘膜通透性的高低，并以此为标准将药物分为l、II、III和IV类。灯盏花素属于IV药物，即溶解度低和粘膜通透性低的药物，该类药物口服生物利用度往往较低。为此，提高灯盏花素口服生物利用度的关键因素应当是提高其溶解度和肠粘膜通透性。现有技术公开的灯盏花素口服制剂，大多缺乏具针对性的同时解决灯盏花素上述缺陷的手段，有的公开技术仅是口服剂型的单纯变化，如口腔崩解片(CN1695629A;CN1698638A;CN1429618A;CN1582955A)、分散片(CN1530113A;CN1416817A)、缓释或控释制剂(CN1233327C;CN1212114C;CN1205940C;CN1172679C;CN1480147A;CN1530114A;CN1565472A;CN1515264A)、舌下片(CN1634105A)、软胶囊(CN1069520C)等；有的采用制剂新技术以提高灯盏花素的溶解度或溶出度，例如制备滴丸(CN1565471A;CN1480148A;CN1408392A;CN1768763A;CN1437950A;CN1531929A;CN1444947A);采用固体分散技术(CN1102392C);纳米技术(CN1364516A);采用环糊精包合技术(CN1739537A);采用自乳化技术(CN1593449A)，但公开的自乳化制剂中的表面活性剂和助表面活性剂高达80%(最优选择)，可能会产生胃肠的毒副反应；就增加灯盏花素粘膜通透性而言，目前文献及专利报道很少，仅公开了灯盏花素磷脂复合物(CN1359682A)，利用磷脂较强的亲脂性增加复合物中灯盏花素的膜通透能力，但其制备复杂，稳定性欠佳，且磷脂价格较贵，于生产或成本控制均为不利。综上所述，解决灯盏花素口服吸收生物利用度的问题，应当就其不良的生物药剂学性质而针对性的采取措施。
发明内容本发明目的在于提供一种能够有效增加灯盏花素口服生物利用度的灯盏花素口服组合物及其制备方法，本发明通过增加灯盏花素粘膜通透性和溶解度达到提高其口服生物利用度的目的。本发明提供的灯盏花素口服组合物是由灯盏花素、脂肪酸三甘酯和脂肪酸单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者任何比例的混合物和表面活性剂组成。本发明所述的脂肪酸三甘酯，碳链为C6-C18，饱和或不饱和均可，其中选用的长链三甘酯可以是大豆油、玉米油或酰基转移的玉米油(Maisine)、Labrafi啦M1944、Labrafi啦M2125、PlurolOleiqueCC497、Gelucire33/01(Gattefosse)等，可选用的中链三甘酯，碳链为C8-C1t3，商品名可以是Miglyco啦812N(Saso1)、Captex355EP、Captex350、Captex300EP(Abitec)等，也可以选用上述油以任何比例的混合物。优选碳链为C8-do的中链三甘酯。所述的脂肪酸单甘酯、脂肪酸二甘酯或两者以任何比例的混合物，碳链为C6-C18,饱和或不饱和均可。优选碳链为C8-do的单甘酯、双甘酯或者单/双甘酯，其中常用的C8单甘酯的商品名有lmwitor988(SasolCorp.)、CapmulMCMC8(AbitecCorp.)等，C8-C10单/二甘酯的商品名有lmwitor742(SasolCorp.)、CapMumMCM(AbitecCorp.)、CapmulMCMC10(AbitecCorp.)、LabrafacCC(Gattefosse)等；所述的表面活性剂可以选用下列一种或一种以上1.聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯(例如商品名Tween)，包括以下产品聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)、聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯(Tween40)、聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯(Tween60)、聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(Tween80)、聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯(Tween85);2.聚氧乙烯脂肪醇醚类(例如商品名Brij，苄泽)，优选该类产品为Brij35;3.聚氧乙烯脂肪酸酯类(例如商品名Myrj，卖泽)，优选该类产品为Myrj52;4.氧化乙烯-氧化丙烯嵌段共聚物(例如商品名Pluronic，泊洛沙姆)，优选该类产品为PluronicF68(泊洛沙姆188);5.聚乙二醇氢化蓖麻油(例商品名CremophorRH40)或聚乙二醇蓖麻油(CremophorEL);6.琥珀酸维生素E聚乙二醇酯(TPGS)，商业上可来源于EastmanFineChemicalCompany);7.聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯(例如商品名为Labrasol，Gattefosse);9.磷脂，包括卵磷脂和豆磷脂。优选的表面活性剂为CremophorEL、Tween80、TPGS和Labrasol。本发明的灯盏花素口服组合物，其特征在于脂肪酸单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者的混合物与脂肪酸三甘酯与表面活性剂的比例为1:0.26:0.22，优选比例为1:14:0.41，最优选比例为1:3:0.5。本发明通过下述方法制备灯盏花素口服组合物首先将脂肪酸单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者的混合物和表面活性剂混合均匀后，加入灯盏花素，搅拌均匀，最后加入脂肪酸三甘酯再搅拌均匀即得本发明灯盏花素口服组合物。灯盏花素少量溶解在组合物中，而大部分为混悬态，灯盏花素可以任何比例混悬于组合物中；将上述制备好的组合物灌装硬胶囊、软胶囊、肠溶硬胶囊，或者胶囊灌装后再进行肠溶包衣可得肠溶硬胶囊或肠溶软胶囊等制剂；将上述制备好的组合物，用二氧化硅、硫酸钙、糊精或交联聚乙烯吡咯烷酮等固体载体吸附，使形成固体粉末，再制成颗粒或微丸，再进一步制备成片剂、胶囊、颗粒剂等或所述制剂的肠溶形式。本发明的口服组合物经体外消化实验、翻转肠囊实验、溶解度实验和在体吸收实验，结果证实，在胃肠道内能够提高灯盏花素经肠粘膜的通透能力以及增加灯盏花素的溶解度和溶出度，显著提高灯盏花素肠吸收生物利用度，本发明针对灯盏花素存在的口服不良的生物药剂学性质，解决了现有技术存在的缺陷，实现了在胃肠道内能够提高经肠粘膜的通透能力以及增加溶解度和溶出度的效果，显著提高灯盏花素肠吸收生物利用度，同时具有制备简单方便、毒性低以及贮存稳定性好等优点。图1是灯盏花素口服组合物体外消化曲线图。图2是灯盏花素组合物经十二指肠吸收的血药浓度-时间曲线(n-4)图。图3是口服组合物十二指肠给药后肠粘膜的组织切片显微镜图。其中，A为对照组一灯盏花素生理盐水混悬液的切片图，显微镜观察显示绒毛保持完整、无脱落等现象；B显示十二指肠给予实施例4后小肠绒毛与对照组相似，没有损伤；C显示十二指肠给予实施例5后小肠绒毛略有变短及脱落现象，但总体上保持绒毛较完整的形态；D为阳性对照组，即十二指肠给予0.1%曲拉通，作切片观察发现小肠绒毛严重融合并且脱落。具体实施例方式实施例1LabrafacCC3.13gMaisine0.63gCremophorEL6.25g灯盏花素0.4g制备时，按上述处方量，称取LabrafacCC和CremophorEL，混合均匀，在不断搅拌下加入灯盏花素，最后再加入Maisine，搅拌均匀即得。实施例2lmwitor9881.39gLabrafi啦M19448.33gBrij350.28g灯盏花素0.4g制备时，按上述处方量，称取lmwitor988和Brij35，混合均匀，在不断搅拌下加入灯盏花素，最后再加入Labrafi啦M1944，搅拌均匀即得。实施例3CapMumMCM4.00gCaptex3504.00g磷脂2.00g灯盏花素0.4g制备时，按上述处方量，称取CapMumMCM和磷脂，混合均匀，在不断搅拌下加入灯盏花素，最后再加入Captex350，搅拌均匀即得。实施例4lmwitor7421.67gMiglycol812N6.67gTween801.67g灯盏花素0.4g制备时，按上述处方量，称取lmwitor742和Tween80，混合均匀，在不断搅拌下加入灯盏花素，最后再加入Miglycol812N，搅拌均匀即得。实施例5CapmulMCMC102.22gMiglycol812N6.67gTPGS1."g灯盏花素0.04g制备时，按上述处方量，称取CapmuKE)MCMC10和TPGS，混合均匀，在不断搅拌下加入灯盏花素，最后再加入Miglycol812N，搅拌均匀即得。实施例6CapMum⑧MCM1.25glmwitor7421.25g大豆油5.00gCremophorE匕2.50g灯盏花素0.4g制备时，按上述处方量，称取CapmulMCM、lmwitor742禾卩CremophorEL，混合均匀，在不断搅拌下加入灯盏花素，最后再加入大豆油，搅拌均匀即得。实施例7lmwitor9883.33gCaptex3553.33gCremophorEL1.67gLabrasol1.67g灯盏花素0.4g制备时，按上述处方量，称取lmwitor988、CremophorEL禾口Labrasol，混合均匀，在不断搅拌下加入灯盏花素，最后再加入Captex⑧355，搅拌均匀即得。实施例8以实施例2所制得的灯盏花素口服组合物作为基质制备成软胶囊，其中每粒软胶囊含灯盏花素20mg。实施例9以实施例5所制得的灯盏花素口服组合物直接灌肠溶硬胶囊，其中每粒胶囊含灯盏花素20mg。实施例10称取实施例4所制得的灯盏花素口服组合物10g，在研磨状态下逐次加入微粉硅胶共5g，制得灯盏花素口服组合物的固体粉末，测定该粉末休止角为39.5°,堆密度为0.54g/cm3。实施例11将实施例10所制得灯盏花素口服组合物固体粉末灌装0号胶囊，胶囊在高效包衣锅中用肠溶包衣材料EudragitL100-55包衣，获得灯盏花素肠溶胶囊，每粒胶囊含灯盏花素20mg或40mg。实施例12实施例1100g微晶纤维素120g蒸馏水36g乙醇18g制备灯盏花素口服组合物微丸时，称取微晶纤维素，先后加入蒸馏水和乙醇，揉合均匀，再加入实施例1所制备的灯盏花素组合物，制成软材。将所制备的软材密闭15h后，然后用挤出滚圆设备制备微丸，粒径16-24目之间占85%以上。将微丸在流化床中用肠溶包衣材料EudragitL100-55包衣1h,继续干燥0.5h后，取出后置于45-5(TC条件下热处理12h即制得灯盏花素微丸。将微丸灌装0号胶囊，每粒胶囊含灯盏花素20mg或40mg。实施例13实施例630%麦芽糊精15%交联聚乙烯吡咯烷酮15%微晶纤维素40%制备灯盏花素口服组合物片剂时，称取实施例6所制备的灯盏花素组合物，在搅拌状态下先后加入麦芽糊精和交联聚乙烯吡咯烷酮，固化完全，测得休止角为38.5°，再加入微晶纤维素，混合均匀，直接粉末压片，即得灯盏花素片剂，每片含灯盏花素20mg。实施例14体外消化实验为了探索灯盏花素口服组合物中的油在体内的消化行为及其消化酯解产物对灯盏花素粘膜通透性的影响，根据体内消化体系的有关生理参数建立体外消化模型如下首先配制缓冲液，其组成为50mM三羟甲氨甲垸-马来酸(Trizmamaleate)、150mMNaCl和5mMCa2+，调节pH至6.8;再用该缓冲液配制胆盐胶束溶液(由5mM牛磺去氧胆酸钠和丄25mM磷脂酰胆碱组成)；消化实验开始时，将9ml的胆盐胶束溶液与0.5g的口服组合物一实施例4和实施例5(两者不含灯盏花素)或0.5g的对照组(MigIycol812N)混合搅拌均匀后加入胰脂酶溶液(浓度为1000U/ml)lml，立即计时并用0.2MNaOH滴定以维持整个体系pH6.8，以不同时间油消化酯解的百分率作图，见图2。结果表明，与对照组相比，实施例4和实施例5能够被快速消化，5min酯解率即达65%左右，而对照组为40%。口服组合物的酯解产物如脂肪酸钠、脂肪酸单甘酯与胆盐磷脂形成复杂的混合胶束，从而有效促进灯盏花素经肠粘膜的通透。实施例15翻转肠囊实验大鼠禁食过銜可自由饮水)，用20^的乌拉坦腹腔注射麻醉(lg/kg)。沿腹中线剪开腹腔后，取出空肠段6-7cm，置于冰冷的台氏液中，通入氧气，剪去肠系膜。用外径2.5mm的玻璃管将肠段轻柔翻转，使肠粘膜面向外，浆膜侧向内，结扎肠肛侧端，肠囊上端固定于取样口。从取样口向肠内注入空白台氏液作为接收液。向实施例14经消化酯解后的液体中添加K+、葡萄糖等使与台式液的成分大致相同，灯盏花素的浓度配制为500ng/ml，另外用pH6.8磷酸缓冲液配制相同浓度的灯盏花素溶液作为对照组，以上溶液作为翻转肠囊实验的供给液以考察灯盏花素的粘膜通透性。分别于15，30，45，60，90min从肠囊内取样0.6ml，1OOOOrpm离心10min，取澄清液0.4ml用HPLC测定灯盏花素浓度，同时补充同体积的等温台氏液。翻转肠囊实验进行1.5h后灯盏花素的累积通透百分率及增加倍数见表1，结果表明，本发明口服组合物在肠道经消化酯解后，其酯解产物有显著的促进灯盏花素粘膜通透作用。表l.灯盏花素经大鼠空肠累积通透百分率及增加倍数<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实施例5消化产物21.85±3.553.02实施例17灯盏花素口服组合物在体吸收实验取体重250g280g的SD大鼠16只，隔夜禁食(可自由饮水)，称重后腹腔注射水合氯醛(6.5%)溶液1ml/100g，麻醉后将其背位固定于手术台板上，作颈动脉插管以供取血用。大鼠随机分为4组，其中一组腹腔注射灯盏花素溶液，剂量为10mg/kg;另外三组沿腹中线剪开腹部，灯盏花素各组制剂十二指肠给药，分别是对照组一灯盏花素混悬液(生理盐水配制)、实施例5和实施例10，剂量均为80mg/kg。上述各组于给药前及给药后不同时间取血0.3ml，加至己含有肝素的塑料离心管中，6000rpm离心10min，取血浆迅速贮存于-20。C冰箱中，灯盏花素血药浓度HPLC测定的色谱条件为岛津LC-10AD高效液相色谱系统；SPD-10A紫外检测器；色谱柱为PhenomenexLunaC18(250mmx4.60mm，5ym);流动相为乙腈:0.2%磷酸缓冲液(22:78);流速为1ml/min;检测波长为335nm;AUFS为0.002，柱温40'C，进样量30nl。精密吸取恢复至室温的血浆样品，加入等体积的甲醇，漩涡振荡20s,6000rpm离心10min后，分离上清液，直接进样以外标法定量。标准曲线方程为浓度C0jg/ml)-1.18"0-5A+0.082(r-0.9993)，线性范围0.110ijg/ml。灯盏花素高、中、低血药浓度测定的日内精密度分别为5.94%、3.82%和2.92%，日间精密度分别为6.90%、5.32%和6.69%。方法专属性符合要求，血浆中的杂质不干扰灯盏花素的测定。实施例18依据实施例17的实验方法，灯盏花素十二指肠吸收的血药浓度一时间曲线见图2，平均药动学参数见表3，其中Cmax和Tmax取实测值，梯形法计算AUC。以灯盏花素腹腔注射作为对照计算灯盏花素制剂十二指肠给药的生物利用度。结果表明，对照组一灯盏花素混悬液吸收很差，生物利用度仅为2.40%。与对照组相比，实施例5和实施例10的灯盏花素吸收显著增加，与腹腔注射的AUC相比较，生物利用度分别为38.07%和35.18%，较对照组的F分别提高15.9倍和15.0倍。本发明的口服组合物能够显著提高灯盏花素肠吸收生物利用度，其原因可能与其消化酯解产物可以促进细胞膜流动性增加、降低粘液层粘度等而有利于灯盏花素的肠通透，同时也可以增加灯盏花素的溶解度而有利于其被动扩散通过肠粘膜，上述综合因素促使灯盏花素的吸收增加。表3.灯盏花素组合物在体十二指肠吸收的药动学参数(n-4)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例19依据实施例17的实验方法，十二指肠各给药组取血完毕后，用乙醚麻醉大鼠至死，剪取十二指肠段，用pH6.8PBS冲洗后置于多聚甲醛溶液中，作石蜡切片，用苏木精和曙红染色，在光学显微镜下观察小肠绒毛变化，结果见图3。图3A为对照组一灯盏花素生理盐水混悬液的切片图，显微镜观察显示绒毛保持完整、无脱落等现象；图3B显示十二指肠给予实施例4后小肠绒毛与对照组相似,没有损伤；图3C显示十二指肠给予实施例5后小肠绒毛略有变短及脱落现象，但总体上保持绒毛较完整的形态；图3D为另行设计的阳性对照组，即十二指肠给予0.1%曲拉通，作切片观察发现小肠绒毛严重融合并且脱落。实验表明本发明的灯盏花素口服组合物对小肠粘膜几乎没有毒性，能够保持小肠绒毛的完整性。权利要求1、一种灯盏花素口服组合物，其特征在于由灯盏花素、脂肪酸单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者任何比例的混合物和脂肪酸三甘酯和表面活性剂组成；所述的脂肪单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者的混合物与脂肪酸三甘酯与表面活性剂的比例为1∶0.2～6∶0.2～2。2、根据权利要求1所述的灯盏花素口服组合物，其特征在于所述的脂肪酸单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者的混合物与脂肪酸三甘酯与表面活性剂的比例为1:14:0.41。3、根据权利要求1所述的灯盏花素口服组合物，其特征在于所述的脂肪酸单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者的混合物与脂肪酸三甘酯与表面活性剂的比例为1:3:0.5。4、根据权利要求1所述的灯盏花素口服组合物，其特征在于所述的脂肪酸单甘酯、脂肪酸二甘酯或两者以任何比例的混合物，其碳链为C6-C18。5、根据权利要求1或4所述的灯盏花素口服组合物，其特征在于所述的脂肪酸单甘酯、脂肪酸二甘酯或两者以任何比例的混合物，是碳链为C8-C10的中链单甘酯、双甘酯或单/双甘酯混合物。6、根据权利要求1所述的灯盏花素口服组合物，其特征在于所述的脂肪酸三甘酯，其碳链为C6-C18。7、根据权利要求1或6所述的灯盏花素口服组合物，其特征在于所述的脂肪酸三甘酯，是碳链为C8-do的中链三甘酯。8、根据权利要求1所述的灯盏花素口服组合物，其特征在于所述的表面活性剂选自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚氧乙烯脂肪酸酯类、氧化乙烯-氧化丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇天然或氢化蓖麻油、琥珀酸维生素E聚乙二醇酯、聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯、磷脂或上述表面活性剂的混合物。9、根据权利要求8所述的灯盏花素口服组合物，其特征在于所述的表面活性剂是聚乙二醇天然或氢化蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、琥珀酸维生素E聚乙二醇酯或聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯。10、权利要求1所述的灯盏花素口服组合物的制备方法，其特征是包括下述步骤按比例将脂肪酸单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者的混合物和表面活性剂混合均匀后，加入灯盏花素，搅拌均匀后，加入脂肪酸三甘酯再搅拌均匀，得灯盏花素口服组合物。11、按权利要求10所述的制备方法，其特征是将所获得的组合物灌装硬胶囊、软胶囊或肠溶硬胶囊，或者胶囊灌装后再行肠溶包衣制得肠溶硬胶囊或肠溶软胶囊。12、按权利要求10所述的制备方法，其特征是将所获得的组合物，用二氧化硅、硫酸钙、糊精或交联聚乙烯吡咯烷酮固体载体吸附，使形成固体粉末，再制成颗粒或微丸后，制成肠溶形式的片剂、胶囊或颗粒剂。全文摘要本发明属药剂领域，涉及灯盏花素口服组合物及其制备方法。本发明由特定比例的灯盏花素、脂肪酸三甘酯和脂肪酸单甘酯或脂肪酸二甘酯或两者任何比例的混合物和表面活性剂组成，其中的灯盏花素可以任何比例混悬于组合物中。实验证实，本口服组合物的消化酯解产物能够促进灯盏花素肠粘膜通透能力和溶解度的增加，在体实验表明能提高灯盏花素肠吸收生物利用度。本发明灯盏花素口服组合物制成软胶囊、硬胶囊、微丸或片剂等固体剂型或这些剂型的肠溶形式。本发明同时具备制备简单、毒性低、贮存稳定性好等优点。文档编号A61K31/7048GK101185653SQ20071016255公开日2008年5月28日申请日期2007年10月12日优先权日2006年10月16日发明者腾沈,翁伟宇申请人:复旦大学