肉毒毒素的神经毒组分的高频率应用的制作方法

专利名称：肉毒毒素的神经毒组分的高频率应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及通过给予包含肉毒杆菌毒素复合物的神经毒组分的组 合物治疗疾病和病症的方法，其中所述組合物不含肉毒杆菌毒素复合 物的任何其它蛋白质并且其中所述组合物以短间隔和/或高剂量给予。
更具体地，本发明涉及患者中由肌肉或外分泌腺的活动过度的胆 碱能神经支配引起或与之相关的疾病或病况的方法，所述方法包括给 予包括有效量肉毒杆菌毒素复合物的神经毒组分的组合物，所迷组合
物不含肉毒杆菌毒素复合物的任何其它蛋白质組分，其中(a)所迷患者 是人，(b)组合物通过注射给予，和(c)组合物以小于三个月的间隔给 予，所述间隔包括第一治疗和第二治疗，其中第二治疗给予的量可以 比第一治疗中给予的量更低、更高、或与之相等。本发明还涉及治疗 由患者的肌肉的病理学活性引起或与之相关的疾病或者病况的方法， 所述方法包括给予包括有效量肉毒杆菌毒素复合物的神经毒组分的組 合物，所迷组合物不含肉毒杆菌毒素复合物的任何其它蛋白质组分， 其中(a)所述患者是患有严重活动障碍或严重痉挛状态的人；(b)所述 组合物通过注射给予；和(c)给予的神经毒组分的有效量为成人大于 500 U/kg体重，儿童大于15 U/kg体重。最后，本发明还涉及减少面 部皱紋或皮肤皱损或消除面部不对称性的方法，所述方法包括对个体 给予包括有效量肉毒杆菌毒素复合物的神经毒組分的组合物，所述组 合物不含肉毒杆菌毒素复合物的任何其它蛋白质组分，其中(a)所述个 体是人；(b)组合物通过皮下或肌肉注射给予到涉及形成皮肤皱紋或不 对称性的一个或多个面部肌肉或肌肉群中或给予到其附近；和(c)组合 物以小于三个月的间隔给予，所述间隔包括第一治疗和第二治疗，其 中第二治疗中给予的量可以比第一治疗中给予的量更低、更高、或与
7之相等。
背景技术：
肉毒毒素由细菌梭状芽孢杆菌产生。肉毒毒素有七种抗原独特的
血清型，即，肉毒毒素A、 B、 C、 D、 E、 F和G。在从溶胞的梭状芽孢 杆菌培养物中释放时，肉毒毒素通常与其它细菌蛋白质结合， 一起形 成毒素复合物。这种复合物的神经毒亚单位在本文中被称为肉毒毒素
复合物的"神经毒组分"。术语"肉毒毒素"是指不含任何其它梭状 芽胞杆菌蛋白质的神经毒组分，而且在以下情况下是指"肉毒毒素复 合物"在不需要或不期望在神经毒组分的两种状态之间进行区分的 情况中。这种复合物通常包含另外的所谓的"无毒的"蛋白质，这在 本文中称作"络合蛋白"或"细菌蛋白"。神经毒组分和细菌蛋白的 复合物称为"肉毒杆菌毒素复合物"或"肉毒毒素复合物"。这种复 合物的分子量可以为约300， 000到约900, 000 Da。络合蛋白是例如各 种血球凝集素。这种毒素复合物的蛋白质本身没有毒性，但是为神经 毒组分提供稳定性并且引起肉毒杆菌中毒的口服毒性。与毒素复合物 不同，分离的和纯化形式(即，不含任何络合梭状芽孢杆菌蛋白)的神 经毒组分对酸敏感并且不能耐受胃肠道中的侵蚀性环境。
肉毒毒素复合物的神经毒组分最初作为单一多肽链形成，在血清 型A的情况中具有约150 kDa的分子量。在其它血清型中，已经观察 到神经毒组分为约145到约170 kDa，取决于细菌来源。例如，在血 清型A的情况中，多肽的蛋白水解加工产生双链多肽形式的活化多肽， 包括由二硫键连接的重链和轻链。在人类中，重链介导对突触前胆碱 能神经末梢的结合和毒素内在化到细胞中。轻链被认为引起毒性作用， 作为锌内肽酶和裂解负责膜融合(SNARE复合物)的特异性蛋白起作用 (参见例如，Montecucco C、 Shiavo G. 、 Rosetto 0: The mechanism of action of tetanus and botulinum neurotoxins. Arch Toxicol.1996; 18(Suppl.): 342-354))。通过破坏细胞内的膜融合过程，肉 毒毒素阻止乙酰扭碱被释放到突触间隙中。肉毒毒素在神经肌肉接头 的总体作用是中断神经肌肉传递，并且在作用上使肌肉去除神经支配。 肉毒毒素还在其它外周胆碱能突触有活性，引起唾液分泌或出汗减少。
肉毒毒素的每种血清型结合于突触前神经末梢上的血清型特异性 受体部位。肉毒毒素对于胆碱能神经元的特异性是基于重链对这些神 经末梢上的受体部位的高亲合力(参见Katsekas S. 、 Gremminloh G.、 Pich E. M. ， Nerve terminal proteins; to fuse to learn. Transneuro Science 1994; 17: 368-379)。
尽管其毒性作用，但是肉毒毒素复合物已经被用作许多疾病的治 疗剂。肉毒毒素血清型A在美国在1989年被批准用于人类，用于治疗 斜视、眼睑痉車、和其它病症。在商品名称BOTOX(Allergan Inc)和 商品名称DYSPORT(IpsenLtd)下有肉毒毒素A蛋白复合物市售。对于 治疗应用，将复合物直接注射到要治疗的肌肉中。在生理学pH，毒素 从蛋白复合物释放，并且发生期望的药理学作用。肉毒毒素的作用只 是暂时的，这就是要求肉毒毒素重复给药以保持治疗效果的原因。在 许多病例中，已经在肉毒毒素蛋白复合物的重复给药之后观察到肉毒 毒素的耐药性。患者形成相应水平的针对神经毒組分并且阻断其活性 的中和抗体(G(ischel H、 WohlfarthK、 Frevert J、 Dengler R、 Bigalke H. (1997) Exp Neurol. 1997 Sep; 147 (1): 96-102)。结果是，在(使 用例如Botox或Dysport的)那些患者中，用肉毒毒素复合物治疗不 再有效。随后给予肉毒毒素药物例如Botox或Dysport不起作用。如 果中止肉毒毒素蛋白复合物治疗，则抗体滴度可能降低。然而，必须 中止治疗的持续时间可能是过长的(参见例如Dressier D、 Bigalke H(2002) Botulinum toxin antibody titres after cessation of botulin認toxin therapy. Mov Disord 17: 170—173)。最初，认为对肉毒毒素复合物的耐药性是罕见的。随后的报道暗
示，在治疗颈部张力障碍的患者中，有约5%频率的抗体诱导的肉毒毒 素治疗失败(参见Kessler KR、 Skutta M、 Benecke R. , Long-term treatment of cervical dystonia with botulinum toxin A: efficacy, safety, and antibody frequency. German Dystonia Study Group. J Neurol. 1999 Apr; 246 (4): 265-74.)。这个观察结果是基于对单个
地点的患者的回顾性评价。然而，最近已经报道了更加频繁的发生率， 表明约20 。/。的^L治疗受试者受到影响(参见The Muscular Nerve May 2004， p. 630)。通常，认为抗体诱导的治疗失败的风险主要与给予单 剂量的肉毒毒素有关。
认为包含在复合物中的蛋白质可以增强免疫应答。肉毒毒素治疗 的抗体诱导的完全失效的另一个危险因素在于注射间隔，即，随后的 注射轮次之间的间隔。因此，给予肉毒毒素的常见的作法是每三个月 只给予一次，以降低抗体生成的危险。其中较早期出现的肉毒毒素给 药的作用停止的患者可通过口服药物治疗。然而，那些口服药物的有 效性是有限的。
肉毒毒素蛋白复合物的另一个不利作用在于其在被注射到目标肌 肉中之后的区域性或系统扩散。单纤维肌电描记法(SF-EMG)已经表明 在远离注射部位的肌肉中增加的颤抖。例如，Alnty等人，1988 (Alny R. K. 、 Aminoff M. J. 、 Gelb D.J. 、 Uiwenstein D.H. ， Myomuscular effects distant from the site of botulinum neurotoxin injection. Neurology 1988; 38: 1780-1783)表明，通过注射到颈部肌肉中治 疗的患者在远离注射部位的肌肉中具有增加的颤抖和纤维密度。这些 异常在约三到六个月之后恢复正常。局部注射之后的肉毒毒素系统扩 散的其它证据是出现心血管反射和血压方面的变化。(参见Alny R. K. 、 Aminoff M. J. 、 Gelb D. J. 、 L5wenstein D. H. ， Myomuscular effects distant from the site of botulinum neurotoxin injection.Neurology 1988; 38: 1780-1783)。
在一些患者中，给予高剂量的肉毒毒素蛋白复合物可能影响不希 望治疗的肌肉。例如，在用肉毒毒素蛋白复合物治疗眼睑痉挛时，扩 散可以影响眼睑张开肌肉，引起眼险下垂。
因此，不仅是抗体生成的危险，而且有系统扩散的危险，使得需 要以相对低并且由此可能较差有效的剂量给予肉毒毒素。因此，医生 被强烈建议不要以比每三个月 一次更大的频率给予BOTOX或DYSP0RT。 这特别地适用于需要高剂量肉毒毒素的患者。

发明内容
考虑到以上所述，本发明的一个目的是为受到本文中提及的病症 困扰的患者提供治疗，其允许以缩短的间隔和/或使用相对高剂量给予 治疗用肉毒毒素制备物。因为治疗用肉毒毒素制备物是用于特定的目 标组织(例如特定的肌肉或腺体)， 一个重要的要求在于限制其扩散到 相邻组织中。最终的但并非不重要的要求在于降低治疗用肉毒毒素制 备物的抗原性。本发明的另一个目的是提供用适合的药物以灵活的和/ 或频繁的间隔治疗与痉挛或张力障碍肌肉相关的疾病的方法。本发明 的另一个目的是提供使用药物以频繁的间隔进行美容治疗，具有降低 的抗体生成危险和/或减少的系统扩散。
因此，本发明涉及治疗患者中由肌肉或外分泌腺的活动过度的胆 碱能神经支配引起或与之相关的疾病或病况的方法，所述方法包括给 予包括有效量肉毒杆菌毒素复合物的神经毒组分的組合物，所述组合 物不含肉毒杆菌毒素复合物的任何其它蛋白质組分，其中(a)所述患者 是人，(b)组合物通过注射给予，和(c)组合物以小于三个月的间隔给 予，所述间隔包括第一治疗和第二治疗，其中第二治疗给予的量可以 比第一治疗中给予的量更低、更高、或与之相等。值得注意的是，本发明的包括给予肉毒毒素复合物的神经毒组分 的方案通常允许治疗与肌肉或外分泌腺的活动过度的胆碱能神经支配 有关的任何病况，其中神经毒组分阻断乙酰胆碱分泌到突触间隙中。 因此，本发明提供的治疗对于以下适应症可能是直接的，所述适应症
中大多数详细描述在Dressier D(200t)) (Botulinum Toxin Therapy. Thieme Verlag， Stuttgart, New York)中 张力障碍
头部张力障碍 眼睑痉挛
口-下颌肌张力障碍
颌张开型
颌关闭型 夜间磨牙 Meige综合症
舌张力障碍
眼睑张开运用不能症 颈部张力障碍
颈项前屈
颈后倾
颈侧屈
斜颈 咽部张力障碍
喉张力障碍
痉挛性发音障碍/内收肌型
痉挛性发音障碍/外展肌型
痉挛性呼吸困难 肢张力障碍
臂张力障碍任务特异性张力障碍 指痉挛
音乐家型痉挛 高尔夫球手型痉挛 腿张力障碍
大腿内收、大腿外展 膝弯曲、膝伸展 踝弯曲、踝伸展
内翻足畸形 脚张力障碍
紋状趾
脚趾弯曲
脚趾伸展 轴向张力障碍
pisa综合症
肚皮舞舞蹈演员型张力障碍 节段性张力障碍 偏身性肌张力障碍
全身性张力障碍 X-连肌张力障碍
皮质基底退化型张力障碍 X-连肌张力障碍
迟发型张力障碍
脊髓小脑共济失调型张力障碍
帕金森氏病张力障碍
亨廷顿舞蹈病张力障碍
Hallervorden Spatz病张力障碍
多巴诱导的运动障碍/多巴诱导的张力障碍
迟发性运动障碍/迟发型张力障碍突发性的运动障碍/张力障碍
运动诱发的
非运动诱发的
动作诱导的
腭肌阵挛
肌阵挛
肌纤维颤搐
僵化
良性肌肉痉挛
遗传性下颌发抖
异常颌肌肉活性
半侧咀嚼肌痉挛
鳃肥大肌病
咀嚼肌增生
胫骨前肌增生
眼球震颤
振动幻详见
核上注视麻瘠
epilepsia partialis contimia
planning of spasmodic torticollis operation
外展肌声带瘫痪
recalcitant mutational dysphonia
上食管括约肌机能障碍
声带肉芽瘤
口吃
Gilles de la Tourette综合症中耳肌阵挛
保护性喉闭合喉切除术后的发音不能保护性眼睑下垂 睑内翻
括约肌0dii机能障碍 假性下食道迟緩不能症
非下食道食管运动肌病症 (nonachalsia oesophageal motor disorders) 阴道痉挛 手术后活动不能 震颤
膀胱机能障碍 逼尿肌括约肌协同失调 膀胱括约肌痉挛 半面痉挛
神经移植术运动障碍
美容用途
克罗病
蹙眉
面部不对称性
颏肌微凹(mentalis dimples)
僵人综合征
破伤风
前列腺增生
肥胖症治疗
嬰儿脑性麻痹
斜视
混合型
麻瘠型
视网膜脱离手术后伴生型 白内障手术后型无晶状体型
肌炎性斜视型
肌病性斜视型
分离的垂直离差型
作为斜视手术附属型
内斜视型
外斜视型
弛緩不能
肛裂
外分泌腺活动过强
Frey综合症
鲟鱼泪综合症
多汗症
腋部
手掌
足底
鼻溢液
相对唾液过多
中风型
帕金森病型
肌萎缩性侧索硬化型
痉挛状况
在脑炎和脊髓炎中
自身免疫过程
多发性硬化
横贯性脊髓炎
Devic综合症
病毒感染
细菌传染
16寄生虫感染真菌感染
遗传性痉挛下肢轻瘫卒中后综合症
半球梗塞形成脑干梗塞形成
脊髓梗塞形成
中枢神经系统创伤中
半球损害
脑干损害
脊髓损害
在中枢神经系统出血中脑内出血蛛网膜下出血硬脑膜下出血
##主内出j6l
在肺瘤形成中
半球肿瘤
脑干胂瘤
脊髓肿瘤
肉毒毒素可通过例如培养梭状芽孢杆菌细菌得到。本发明优选的梭状芽孢杆菌种类为肉毒杆菌。然而，重要的是，神经毒组分可得自任何其它细菌种类。条件是它是衍生自肉毒杆菌的神经毒组分的功能同系物。用于本发明方法的组合物总是包含神经毒组分，所述神经毒组分不含任何其它肉毒杆菌蛋白质。然而，在生产神经毒组分时，毒素可能作为包含神经毒组分的复合物从细菌分离得到，即，负责在人类中的毒性作用的蛋白质和其它细菌蛋白。随后，可以从毒素复合物
纯化得到神经毒组分。如本文中使用的，术语"毒素复合物"或"肉毒毒素复合物，，或"肉毒毒素神经毒素复合物"可互换使用，并且是
17指包括约150 kDa的神经毒组分和另外的无毒的肉毒杆菌蛋白质的高 分子量复合物，所述无毒的肉毒杆菌蛋白质包括血球凝集素和非血球 凝集素蛋白(Sakaguchi 1983; Sugiyama 1980)。
本发明考虑了治疗特征在于患有与肌肉或外分泌腺的活动过度的 胆碱能神经支配有关的疾病的患者。如本文中使用的术语"患者"是 指从来没有接触肉毒毒素的患者以及已经接触过肉毒毒素的患者。后 一种情况的患者可能已经形成了针对肉毒毒素复合物或其组分的抗 体。这种抗体可能是中和抗体。优选地，患者的抗体滴度不超过7mU, 特别地，中和抗体的滴度不超过7mU。术语"抗体滴度不超过…"是 指低于7 mU，例如，1 mU到6mU或0. 01 mU到1 mU。
如本文中使用的术语"活动过度的胆碱能神经支配"是指特征在 于有异常高的量的乙酰胆碱释放到突触间隙中的突触。"异常高的" 是指通过例如将释放与相同类型但不处于活动过度状态的突触的释放 相比，相对于可得到的参照活性有最多25°/。的提高、最多50%或更大的 提高，其中肌肉张力障碍可能是活动过度状态的表现。"最多25%" 是指例如约1%到约25%。进行所需测量的方法是本领域中已知的。
在本发明上下文中使用的术语"约"是指"大约"或"近似"。 在数值的情况中，不限于严格的数值定义，该术语可以解释为评价一 个数值为所示值或范围的+/-10%。
在本说明书中使用的术语"神经毒组分，，或"神经毒素组分"是 指肉毒毒素复合物的亚单位，其具有神经毒活性并且在血清型A情况 下具有约150 kDa的分子量。术语"神经毒组分，，还包括在肉毒杆菌 的其它血清型中发现的功能同系物。在本发明的优选实施方案中，神 经毒组分不含任何其它肉毒杆菌蛋白，优选也不含可能与神经毒组分 结合的RNA。神经毒组分可能是约150kDa的单链前体蛋白或蛋白水解加工过的神经毒组分，包括约50kDa的轻链(Lc)和约100kDa的重链(He)，轻链和重链可通过一个或多个二硫键连接(综述参见例如Simpson LL， Ann Rev Pharmacol Toxicol. 2004; 44:167-93)。本领域技术人员应该理解，只有在蛋白水解激活之后才能得到完整的生物活性，尽管可以想象未加工的前体可以发挥一些生物学功能或者是部分活性的。"生物活性"是指(a)受体结合，(b)内在化，(c)移动跨越核内体膜到胞液中，和/或(d)涉及突触小泡膜融合的蛋白质的内肽酶水解裂解。评价生物活性的体外测定法包括小鼠LD5。测定法和小鼠偏,寸月鬲观'J定'法，i口 Pearce LB、 Borodic GE、 First ER、 MacCallumRD (1994) (Measurement of botulinum toxin activity: evaluationof the lethality assay. Toxicol Appl Pharmacol 128: 69-77) 和Dressier D、 Lange M、 Bigalke H (2005) (The mouse diaphragm assayfor detection of antibodies against botulinum toxin type B. MovDisord 20: 1617-1619)所述的。
生物活性通常表示为小鼠单位(MU)。如本文中使用的，IMU是在腹膜内注射之后杀死50%的特定小鼠种群的神经毒组分的量，即，小鼠i.p.LD5。(Schantz & Kauter, 1978)。术语"小鼠单位(MU)"和"单位"或"U"可互换使用。或者，生物活性可以表示为致死剂量单位(LDU)/ng蛋白质(即，神经毒组分)。本文中使用的术语"MU"可与术语"U"或"LDU"互换使用。
术语"有效量"是指在给药之后产生病征部分或完全消除的神经毒组分的量。有效量通常为1到2000MU，但是可以使用最大为5000MU的剂量。在将高剂量的神经毒组分给予患者时，将治疗分为一个以上的治疗时期可能是有利的。术语"一个以上的治疗时期"是指例如2、3、 4、 5、 6、 7、 8、 9个治疗时期。
优选地，用于本发明方法的神经毒组分从肉毒杆菌的培养物纯化得到。培养肉毒杆菌和从中纯化毒素复合物的方法已经描述在现有技
术中(在 Schantz & Kauter， 1978. Microbiological methods. Standardized assay for Clostridium botulinum neurotoxins. J Assoc Off Anal Chem 1978; 61 (1): 96-99中综述)。可以实质上如 DasGupta & Sathyamoorthy的方法所述从肉毒杆菌纯化神经毒组分 (DasGupta BR、 Sathyamoorthy V. Purification and amino acid composition of type A botulinum neurotoxin. Toxicon. 1984; 22 (3):415-24)。为此，将肉毒杆菌A型在例如20 L发酵器中在 包括2%朊蛋白胨、1 %酵母抽提物、1 °/。葡萄糖和0. 05%巯基乙酸钠的 培养基中培养。在生长72小时之后，通过加入3 N硫酸使毒素沉淀(最 终的pH = 3.5)。将沉淀和离心的生物材料用pH 6. 0的0. 2 M磷酸钠 緩冲液提取。在通过用硫酸鱼精蛋白沉淀除去核酸之后，通过加入硫 酸铵使毒素沉淀。将已经溶解并且相对于pH 6. 0的50 inM礴酸钠透析 的沉淀物在相同的pH结合于DEAE-Sephadex⑧柱，并且用150mMNaCl 洗脱。随后在已经用pH 7.9的50 mM Tris/HCl緩冲液平衡的 QAE-Sephadex⑧柱上进行色镨纯化。毒素通过NaCl梯度洗脱。在最后 的步骤中，将毒素在SP-Sephadex上在pH 7. G色谱纯化。在这种情况 中，使用NaCl梯度(O 300mM)将结合的毒素从柱洗脱。通过SDS聚丙 烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析纯化的毒素，并且其通常表现出 95+/-5%的纯度。
肉毒毒素神经毒素，特别是上述的毒素复合物，以前被分为七个 血清学独特的类型，A、 B、 C、 D、 E、 F和G。最近几年中，已经鉴定 了 A-血清型(Al和A2)和C-血清型(Cl和C2)的独特种群。在这里，这 些种群都被称为"亚型"。
血清型A的神经毒组分可以在商品名XE0MIN商购自Merz Pharmaceuticals,为不含肉毒杆菌毒素复合物的任何其它蛋白质的组 合物。或者，用于本发明方法的神经毒组分可以通过重组基因表达产生。 为此，可以将编码神经毒组分或其突变物的开放读框克隆到感兴趣的 宿主细胞中适合于基因表达的载体中。重组基因表达和蛋白质纯化的 方法是本领域技术人员已知的。
重组的编码神经毒组分的核酸分子可以得自已知的核酸序列或可 以通过重组技术或化学合成从两个或更多个已知序列重组得到。嵌合 的神经毒组分的实例是通过例如将神经毒组分的第一血清型的轻链与 第二血清型的重链融合而产生的分子。化学合成的实例是整个神经毒 组分的化学合成。
还包括的是包含l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 IO或最多20个氨 基酸突变的遗传修饰的神经毒组分。突变可以是置换、插入或缺失。 优选地，突变不损害如上所述的任何生物学活性。然而，还考虑了使 用突变调节神经毒组分的生物活性。
还包括的是包含化学修饰的氨基酸的肉毒毒素的神经毒组分，例 如一个或多个氨基酸被糖基化、乙酰化或以其它方式进行修饰，这样 可能有利于毒素的摄取或稳定性。特别优选的是神经毒组分的脂化 (lipidation)。可以借助例如酶促的体外反应或使用适宜的化学反应 条件为神经毒组分添加修饰性残基。或者，可以通过在宿主细胞内的 酶的表达反向提供修饰性的酶促功能。
使用上面描述的方法允许显著提高治疗频率而不诱导针对神经毒 组分的中和抗体。在这方面，需要指出的是，在本发明之前，已知的 治疗方案严格避免以小于三个月的间隔给药肉毒毒素，因为肉毒毒素 的更频繁给药被认为增加在被治疗患者中诱导免疫应答的可能性。支以避免这种问题。
在本发明的优选实施方案中，进行第二治疗以便改善第一治疗的 治疗效果。这会允许更有效地给药适宜的肉毒毒素剂量。例如，在第 一治疗时期中，可以给予神经毒组分的接近最佳剂量。如果患者的病 征没有充分响应，则可以在第二或随后的治疗时期中给予更多的神经 毒组分。因此，考虑到本发明方法的降低的危险，可以使用许多治疗 时期以便接近有效治疗患者所需的最佳剂量。
根据本发明，第 一和第二和随后的治疗时期可以在前一个治疗时
期的至少一天之后安排。术语"之后的至少一天"是指例如l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9或10天，或l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11 或12周。然而，本发明还考虑了第二治疗在第一治疗之后的只几小时， 例如2、 3、 4、 5、 6、 7或8小时之后安排。
在优选实施方案中，第二 (随后的)治疗在第一 (前一个)治疗的效 力开始下降的时间点进行。使用这种治疗方案，患者可以实现稳定的 生活质量。
对于患者的参数"稳定的生活质量"的测定如下通过参考本发明 治疗的一种病况，即，眼睑痉挛，基于所谓的眼睑痉挛障碍指数(BSDI) 进行示例性描述。眼睑痉享障碍指数[BSDI]是用于评价由BEB引起的 日常生活的具体活动损伤的自我评定评分标准，Goertelmeyer R、 Brinkmann S、 Comes G、 Delcker A， The Blepharospasm Disability Index (BSDI) for the Assessment of Functional Health in Focal Dystonia, Clin. Ne訓physiol. 2002; 113(1): S77-S78。
所述评分标准是在每次探访时由患者进行回答。它包括要进行评 价的6个项目，每个项目分为5-分列表(即，每项0-4分)，分别为"没有损害"、"轻度/中度/重度的损害"和"由于我的疾病不再可能"。
所述6个项目是"开车"、"阅读"、"看电视"、"购物"、"步 行"和"进行日常活动，，。与忽略了不适用项目的情况中的评分标准 的其它功能性评分标准不同，BSDI允许对除"进行日常活动"之外的 五个项目回答'不适用，。
通过将所有适用和回答的项目加和并且除以回答的项目数计算未 缺失项目的BSDI平均分数。
然而，在本发明内，可对于要治疗的许多其它疾病和病况得到这 种参数，例如用于颈部张力障碍的颅颈张力障碍调查表(CCDQ 24) (Mueller J、 Wissel J、 Kemraler G、 Bodner T、 Poewe W， Quality of life in patients with craniocervical dystonia: development of the CCDQ-24, Mov. Disord. 2000; 15(Suppl 3): 761;和HRQL， 用于痉挛状态的 Swedish Short Form 36 Health Survey Questionnaire(SF-36)(Welmer AK、 von Arbin M、 Widen Holmqvist L 、 Sommerfeld DK , Spasticity and its association with functioning and health—related quality of life 18 months after stroke, Cerebrovasc. Dis. 2006; 21(4): 247-253)。
在患者的每次再注射治疗或最后一次治疗中，计算实际的BSDI观 察结果和基线的BSDI数值之间的差
△ bsdi = BSDI实际一 BSDI基线
在被治疗患者的第 一次探访过程中和第 一次注射药物之前测定
BSDI基线。分别在每次(再)注射药物和其后3周测定BSDI实际。
根据第一治疗记录的A丽值，用下列方式为每位患者指定三个阶
23层中的一个
阶层l(中等的改善)-1.00 < A, <-0. 65 阶层2(明显的改善):-1.35 < △, <-1. 00 阶层3(症兆和症状消除)ABSDI <-1. 35
如果计算的A腿值中没有一个大于阈值Ac，则将患者分类为应答 者，即，患者表现出稳定的生活质量水平。阈值Ac的数值取决于该 患者所属的阶层。阈值的数值为
阶层1: Ac =-0.40 阶层2: Ac =-0. 75 阶层3: Ac =-1. 10
应答者表现出基线BSDI值降低，因此表示生活状态的质量有改善。 改善的最小程度由阈值Ac给出。Ac的数值随阶层数减小，因为阶层 2的患者表现出比阶层1的患者更强的对最初注射的响应(产生较低的 BSDI差)，阶层3的患者比阶层2的患者反应更强。
最后，对观察到的再注射治疗当天的BSDI水平和基线BSDI水平 之间的差进行分析，以研究在再注射时(预期的治疗效果变弱的时间) 生活质量水平是否随时间有任何改善。
用于本发明的药物的上述指定和要求的给药方式通常属于医生治 疗患者的活动。然而，给药方式也可以是药物生产的一部分，在于例 如药物的包装包含对医生和/或患者明确适用的说明书传单，和/或包 装明确地适宜于允许本发明的给药方式。
24在本发明的说明书中使用的术语"每次治疗注射的总量"是指总 的剂量并且表示在单次治疗过程中应用于患者的神经毒素总量。单次 治疗可以包括一次或多次的注射。例如，胸锁乳突肌、头夹肌和斜方
肌的治疗包括l、 2、 3、 4或5次注射，而肩胛提肌或斜角肌的治疗可 以只包括1到3次注射。如本文前述指出的，治疗使用的量取决于许 多参数，所述参数为本领域已知的。这种参数包括例如神经毒组分的 血清型、注射的目标组织、和患者的许多特异性因素。本发明考虑了 在给予上述的神经毒组分总量过程中可以将单次治疗分为两个或更多 个治疗时期。这对于要给予大量神经毒组分的情况特别适用。
此外，基于本发明方法的实施方案，现在有可能更有效地治疗需 要另外给药神经毒组分的患者。这可能适用于例如在第一或先前的治
情况,
在本发明的另一个优选实施方案中，患者是需要高剂量神经毒组 分的患者。在本发明的另一个优选实施方案中，(a)患者是重度运动障 碍或重症痉挛状态的患者和(b)给予的神经毒组分有效量为成人大于 500U或儿童大于15 U/Kg体重。
基于本发明的实施方案，现在有可能用更大得多的量的神经毒组 分治疗患者。在成年患者中，这种量可为例如大于500 U神经毒组分。
如本发明中使用的，大于500 U的量为例如500 U以上并且最大 为550 U，最大为600 U，最大为700 U，最大为800 U，最大为900 U， 最大为1000 U，最大为1100 U，最大为1200 U，最大为1300 U，最 大为1400 U，最大为1500 U，最大为1600 U,最大为1700 U，最大 为1800 U，最大为1900 U或最大为2000 U的量。优选地，给予的剂
25量为500到900 U，更优选为约850 U。在儿童中，"高的量"是指大 于15 U/kg，并且最大为16U/kg，最大为17 U/kg，最大为18 U/kg， 最大为19 U/kg，最大为20 U/kg的量。
在本发明更优选的实施方案中，大于500 U的量为成人用量或15 U/kg体重的量为儿童用量，并且所述量如下给予(a)在第一时期过程 中注射这个量的第一部分和(b)在一个或多个随后的治疗时期过程中 注射剩余的部分，其中随后的治疗时期在第一治疗时期之后的至少一 天安排。神经毒组分的总有效量可以在同一天或在不同天给予，即， 在不同的治疗时期给予。优选地，在给予高的神经毒组分量时，可以 将要给予的总量分开并且在两个或更多个治疗时期中给予。这样，可 以将不适合在单次治疗时期给予的大的量给予患者，而不会观察到显 著的不利影响。
在本发明的另一个优选实施方案中，患者是已经用肉毒毒素治疗 但是抱怨治疗效果降低并且需要在治疗之后3个月期满之前进行治疗 的人。
这种治疗效果的降低可以通过治疗日历监视，其中患者以每天的 基础记录其病症的严重程度(这种治疗日历是例如，由Merz Pharmaceuticals经销的)。
在本发明的又一个优选实施方案中，活动过度的腺体是自主的外 分泌腺，并且将组合物注射到所述腺体中或其附近。
在优选实施方案中，自主的外分泌腺是(a)选自汗腺、泪腺、唾液 腺和粘液腺体；或(b)与选自Frey综合症、聘鱼泪综合症、腋部多汗、 手掌多汗、脚底多汗、头和颈的多汗、身体多汗、鼻溢液、或中风、 帕金森病或肌萎缩性侧索硬化患者的相对唾液分泌过多的疾病或病况有关的活动过度的腺体。然而，需要指出的是，神经毒组分治疗的目 标组织涵盖活动过强的任何外分泌腺。因此，考虑了可以将本发明用于
治疗在Sobotta、 Johannes: (Atlas der Anatomie des Menschen, 22. Auflage. Band 1 und 2. Urban & Fischer, 2005)中提及的任何腺 体，所述文献被并入本文作为参考。
本发明还涉及治疗患者的由肌肉的病理学活动引起或与之相关的 疾病或病况的方法，所述方法包括给予含有效量肉毒杆菌毒素复合物 的神经毒组分的组合物，所述组合物不含肉毒杆菌毒素复合物的任何 其它蛋白质组分，其中(a)所述患者是患有重症运动障碍或严重痉挛状 态的人；(b)所述组合物通过注射给予；和(c)给予的神经毒组分的有 效量为成人超过500 U或儿童超过15 U/kg体重。
在本发明的优选实施方案中，所述量为用于成人的超过500 U的 总量，或用于儿童的15U/kg体重的量，并且其中所述量如下给予(a) 通过在第一治疗时期过程中注射这个量的第一部分和(b)在一个或多 个随后的治疗时期过程中注射剩余的部分，其中随后的治疗时期在第 一治疗时期之后的至少一天安排。
在本发明的另一个优选实施方案中，组合物以小于三个月的间隔 给予，所述间隔包括第一治疗和第二治疗，其中在第二治疗中给予的量 可以低于、高于或等于第一治疗中给予的量。
在本发明的又一个优选实施方案中，所述疾病或病况是包括肌肉 的张力障碍。术语"涉及张力障碍或肌肉张力障碍的疾病或病况"是 指涉及张力障碍性肌肉的病况。优选地，所述病况选自全身性张力障 碍、节段性张力障碍、局限性张力障碍、多灶性张力障碍和偏身性张 力障碍。局限性张力障碍优选选自颅侧张力障碍、颈部张力障碍、肢 张力障碍、躯干张力障碍、和痉挛性言语障碍。颈部张力障碍也称为痉挛性斜颈，特征在于在颈和肩部的肌肉的无意识的、不适当的肌肉
活动过强，导致异常的头移动和姿势、痉挛或颤动(Fahn S, Assessment of the Primary Dystonias. In: Munsat TL， editor. Quantification of Neurologic Deficit.Boston:Butterworths;1989. p. 241-270. (ID 1760137))。将神经毒组分注射到患病的颈和肩部肌肉在 大多数患者中引起症状的显著緩解。
在本发明更优选的实施方案中，张力障碍是(a)选自(l)颅侧张力 障碍，包括险痉挛、颌张开或颌关闭型的口-下颌张力障碍、夜间磨牙、 Meige综合症、舌张力障碍、眼睑张开的运用不能，(2)颈部张力障碍， 包括颈前倾、颈后倾、颈侧倾、斜颈，(3)咽张力障碍，(4)喉张力障 碍，包括内收肌型或外展肌型的痉挛性言语障碍、痉挛性呼吸困难， (5)肢张力障碍，包括臂张力障碍，例如任务特异性张力障碍，包括书 写痉挛、音乐家型痉挛或高尔夫球手型痉挛，腿张力障碍，包括大腿 内收、大腿外展、膝屈曲、膝伸展、踝屈曲、踝伸展、或内翻足畸形， 脚张力障碍，包括紋状趾、脚趾屈曲或脚趾伸展，轴张力陣碍，例如 Pisa综合症或肚皮舞舞蹈演员型张力障碍、节段性张力障碍、偏身性 张力障碍或全身性张力障碍，(6) X-连肌张力障碍，(7)皮质基底节 变性的张力障碍，(8)迟发型张力障碍，(9)脊髓小脑共济失调的张力 障碍，(IO)帕金森病的张力障碍，(ll)亨廷顿舞蹈病的张力障碍，(12) Hallervorden Spatz病的张力障碍，(13)多巴诱导的运动障碍/多巴 诱导的张力障碍，(14)迟发性运动障碍/迟发性张力障碍，(15)发作 性运动障碍/张力障碍(诱发性的、非诱发型的、动作诱导的)；或(b) 包括选自斜颈、颈侧倾、颈后倾、颈前倾、屈肘、前臂前旋、屈腕、 拇指内扣(thumb-in-palm)或握拳的临床表现。
下表提供临床表现和可能涉及的肌肉的非限制性列表，根据本发 明的揭示，所述肌肉是优选的目标肌肉。临床表现 可能的目标肌肉
斜颈 头夹肌、胸锁乳突肌、斜方肌
颈侧倾 胸锁乳突肌、头夹肌、斜角肌复合体、肩胛提肌
颈后倾 头夹肌、颈斜方肌
颈前倾 胸锁乳突肌、斜角肌复合体、颏下复合体、舌骨上和舌骨下肌肉群
"痉挛性言语障碍"是由喉部的一个或多个肌肉的无意识运动引 起的声音异常。痉挛性言语障碍患者谈话有困难。痉挛性言语障碍引 起声音中断或具有绷紧的、受限的、受压制的或费力的音质。如本文 中揭露的，将神经毒组分注射到喉部的患病肌肉通常改善声音。
睑痉挛是一种进行性疾病，其特征在于眼轮匝肌的自发的、双向
的、间歇的或持续的无意识收缩(Grandas F、 Elston J、 Quinn N、 Marsden CD. Blepharospasm: A review of 264 patients. J Neurol Neurosurg Psychiatry 1988; 51(6): 767-772. (ID 1759120); Jankovic J、 Orman J. Blepharospasm: Demographic and clinical survey of 250 patients. Ann Ophthalmol 1984; 16 (4): 371-376. (ID 1761786); Mauriello JA、 Leone T、 Dhillon S、 Pakeman B、 Mostafavi R、 Yepez MC. Treatment choices of 119 patients with hemifacial spasm over 11 years. Clin Neurol Neurosurg 1996; 98(3): 213-216 (ID 1777068))。根据本发明的方法，将肉毒毒素作为局部注
症治疗。
在另一个优选实施方案中，用肉毒毒素A型预处理表现出效力持 续时间短的良性原发性险痉享患者通过以缩短的注射间隔给予所述肉 毒素神经毒素，用不含络合蛋白的肉毒素神经毒素治疗，即，以小于 三个月的间隔给予。优选地，不含络合蛋白的肉毒素神经毒素是高度
29纯化的肉毒素神经毒素A型。在患者报告处理效果降低时给予新的肉 毒素神经毒素注射剂由于所述治疗方案，所述患者可以实现如上所述 的稳定的生活质量，优选如以上论述所确定的。
在本发明的更优选实施方案中，所述肌肉选自同侧夹肌、对侧胸 锁乳突肌、同侧胸锁乳突肌、头夹肌、斜角肌复合体、肩胛提肌、 postvertebralis、同侧斜方肌、肩肝提肌、两侧的头夹肌、上侧斜方 肌、deep postvertebralis、两侧胸锁乳突肌、斜角肌复合体、颏下 复合体、肱桡肌、肱二头肌、旋前方肌、旋前圆肌、屈腕肌、尺侧腔 屈肌、拇长屈肌、拇收肌、拇短屈肌/对向肌、指浅屈肌、指深屈肌。
在本发明的优选实施方案中，所述疾病或病况是包括肌肉的痉挛 状态。
在本发明的更优选实施方案中，痉挛状态是涉及(a)中风后痉挛状 态、由脑性麻瘠引起的痉挛状态；或(b) (1)与(a)包括涉及多发性硬化、 横贯性脊髓炎、Devic综合症有关的自身免疫处理，(b)病毒感染，(c) 细菌感染，(d)寄生虫感染或(e)真菌感染有关的脑炎和脊髓炎的痉享 状态，(2)遗传性痉挛下肢轻瘫，(3)半球梗死形成、脑干梗死形成或 脊髓梗死形成所致的卒中后综合症，(4)涉及例如半球损害、脑干损害、 脊髓损害的中枢神经系统创伤，(5)中枢神经系统出血，例如脑内出血、 妹网膜下出血、硬脑膜下出血、或脊柱内出血，或(6)瘤形成，例如半 球肿瘤、脑干肿瘤、或脊髓肿瘤。其它治疗可以是治疗膀胱、痉車性 膀胱、失禁、痉挛性括约肌、由脑性麻痹引起的痉車状态、或前列腺 肥大。
术语"中风后痉挛状态"是指在中风发病之后发生的痉車状态。 中风是长期残疾的主要原因，在19%(2)到38%的患者中发生痉挛状态 (Watkins CL、 LeathleyMJ、 Gregson JM、 Moore AP、 Smith TL、 Sha函AK. , Prevalence of spasticity post stroke. CI in Rehabi1 2002; 16 (5): 515-522. (ID 1915001))。痉享状态定义为特征在于由伸张反 射的超兴奋性引起的作为上运动神经原综合症(4)的一个组成部分的 具有夸大的肌腱痉挛的张力性伸张反射的速度依赖性增加(肌紧张性) 的运动异常。在一些患者中，痉挛状态可能是有利的，如在臀部和膝 伸肌痉挛状态的情况中，其可以允许负重，患肢如夹板一样起作用。 然而，在大多数患者中，痉挛状态引起日常生活的活动困难，例如穿 衣和清洁握拳的手掌(6)。根据本发明的揭示，与相应肌群的痉挛状态 有关的残疾的常见的临床表现可以用神经毒组分治疗。
术语"膀胱"是指膀胱的病症，经常但不一定是由于脊髓损害或 多发性硬化或创伤引起的，导致尿失禁和排尿受损。优选地，神经毒 素给药的目标肌肉是横紋尿道括约肌，如在别处描述的(Schurch B. The role of botulinum toxin in neurourology. Drugs Today 2004; 40(3): 205-212. (ID 3097145); Schurch B、 De S6ze M、 Denys P、 Chartier-Kastler E、 Haab F、 Everaert K等人Botulinum toxin type a is a safe and effective treatment for neurogenic urinary incontinence: results of a single treatment, randomized, placebo controlled 6-month study.J Urol 2005; 174(1): 196-200. (ID 3528462))。
术语"失禁，，表示尿失禁，是指不能控制尿从膀胱流出。有各种 种类和程度的失禁，其都在本发明范围内溢流性失禁是指如下的状 态，其中在排尿后膀胱保留尿液，使得膀胱大部分时间保持充满，导
致无意识的尿从膀胱漏出；压力性尿失禁是指在膀胱压力增加时的无 意识排尿，如在咳嗽或举起重物时的张力情况下；完全性失禁是指不 能有意识控制膀胱颈和尿道的括约肌，导致保留能力完全丧失。在治 疗失禁时，可以借助膀胱镜检查将本文中提及的组合物通过例如注射 至i逼尿肌中，把三角区湘卜除在夕卜(Schurch B. The role of botulinumtoxin in neurourology. Drugs Today 2004; 40(3): 205-212. (ID 3097145); Schurch B、 De Seze M、 Denys P、 Chartier-Kastler E、 Haab F、 Everaert K等人，Botulinum toxin type a is a safe and effective treatment for neurogenic urinary incontinence: results of a single treatment, randomized, placebo controlled 6-month study. J Urol 2005; 174(1): 196-200. (ID 3528462))。
术语"前列腺肥大，，是指其中前列腺的正常成分大小和数量增加 的前列腺增大。它们的增大的体积可以压缩通过前列腺中心的尿道， 阻止尿通过尿道从膀胱流出。这可以导致尿潴留，并且需要频繁的排 尿。如果前列腺肥大是严重的，则可能发生完全阻塞。在将本文中所 述的组合物注射到前列腺中之后，观察到症状显著减轻、前列腺的血 清指示物明显减少、前列腺体积显著减小、排尿后的残余尿体积减少、 和尿流速显著增大。类似的结果已经在别处有所描述(Maria G、 BrisindaG、 Civello IM、 Bentivoglio AR、 Sganga G、 AlbaneseA.， Relief by botulinum toxin of voiding dysfunction due to benign prostatic hyperplasia: results of a randomized, placebo-controlled study. Urology 2003; 62(2): 259-265. (ID 2562820))。
"脑性麻瘠"描述了宽的范围，包括引起局部麻疾的锥体功能异 常；引起张力障碍、僵硬、痉挛状态和痉挛的锥体外系功能异常；运 用不能因素和协调功能异常。脑性麻痹(KomanLA、 Mooney JF、 Smith BP、 Goodman A、 MulvaneyT. ， Management of spasticity in cerebral palsy with botulinum-A toxin: report of a preliminary, randomized, double-blind trial. J Pediatr Orthop 1994; 14(3): 299-303. (ID 1767458) ; Pidcock FS. The emerging role of therapeutic botulinum toxin in the treatment of cerebral palsy. J Pediatr 2004; 145(2 Suppl): S33-S35. (ID 2994781))可以发生在脑出血、昏厥、早产和其它围产期并发症之后。它是引起不协调运 动、局部麻痹和各种形式肌肉活动过强的终生病况。在根据本文中披 露的方法治疗时，脑性麻痹患者经验活动过度的肌肉的功能性改善。
在本发明的更优选实施方案中，痉孪性肌肉是平滑肌或横紋肌。 治疗肌肉活动过强病症时神经毒组分的目标组织可以原则上包括如
Sobotta、 Johannes: At las der Anatomie des Menschen. 22. Auflage. Band 1 und 2. Urban & Fischer, 2005中所述的人体的所有横紋肌 和平滑肌，所述参考文献中提及的肌肉都被并入本文作为参考。本发 明的方法可以以任何这些肌肉作为目标。
法，所述方法包括对个体给予包括有效量的肉毒杆菌毒素复合体的神 经毒组分的组合物，所述组合物不含肉毒杆菌毒素复合体的任何其它 蛋白质组分，其中(a)所述个体是人；(b)所述组合物通过皮下或肌肉 注射到涉及形成皮肤皱紋或不对称的一种或多种面部肌肉或肌肉群中 或其附近给予；和(c)组合物以小于三个月的间隔给予，所述间隔包括 第一治疗和第二治疗，其中在第二治疗中给予的量可以低于、高于或 等于第一治疗中给予的量。
本发明的方法允许治疗面部肌肉或患者皮肤的皱紋或面部的不对 称性。典型地，在这种美容性治疗中使用较小的神经毒组分量。这种 量优选为1到5、 5到10、 10到20、或20到50单位。这种总量可以 在同一天给予或者在治疗的随后的一天给予。例如，在第一治疗时期 过程中，可以给予剂量的第一部分。这个第一部分优选是次最佳的部 分，即，其不能完全去除皱紋或皮肤皱紋。在一个或多个治疗时期过 程中，可以给予总剂量的剩余部分。
在本发明的优选实施方案中，将组合物注射到蹙眉的皱紋、水平的前额皱紋、鸡爪紋、口周褶皱、颏裂(mental ceases)、双下巴(popply chin)、和/或颈阔肌带中。
在本发明的另一个优选实施方案中，所述肌肉选自头夹肌、胸 锁乳突肌、斜角肌复合体、肩胛提肌、半棘肌、头最长肌、颈最长肌、 多裂肌、头下斜肌、头上斜肌、头后大直肌、头后小直肌、斜方肌/ 水平部分、斜方肌/颈部、舌骨上肌肉、舌骨下肌肉、二腹肌、内侧翼 肌、外侧翼肌、咬肌、颞肌、目艮轮匝肌、鼻肌、降眉间肌、皱眉肌、 口角降肌、降下唇肌、额肌、提上唇肌、提上唇鼻翼肌、口轮匝肌、 笑肌、颧小肌、颧大肌、三角肌、肱三头肌、肱桡肌、肱二头肌、旋 前方肌、旋前圆肌、屈腕肌、尺侧腔屈肌、拇长屈肌、对向肌、骨间 肌、封1状肌、拇收肌、拇短屈肌、指浅屈肌、指深屈肌、内收肌群、 股四头肌、腦绳肌腱、小腿三头肌、胫骨后肌、拇长屈肌、胫骨前肌、 拇长伸肌、趾长伸肌、拇短屈肌、趾短屈肌、推旁肌。
上述提及的神经毒组分可以是组合物或药物组合物的一部分。这 种药物组合物可以包含另外的药学活性组分。"药物组合物，，是其中 包含或含有用作药物或诊断剂的活性成分的制剂。这种药物组合物可 适合于诊断用或治疗用对人类患者给药(即，通过肌肉或皮下注射)。 药物组合物可以为冻干或真空干燥的、重构的、或在溶液中。在重构 时，优选通过加入无菌的生理盐水(O. 9% NaCl)制备重构的溶液。
这种组合物可以包含另外的组分，例如pH緩冲剂、赋形剂、稀释 剂、防冻剂、和/或稳定剂。
"pH緩冲剂"是指能够将组合物、溶液等的pH值调节到某一数值 或某一 pH范围的化学物质。
"稳定"、"使稳定"或"稳定化"是指活性成分，即，重构的或水溶液的药物组合物中的神经毒组分，相对于所述生物学活性的神
经毒组分被并入药物组合物中之前的毒性，具有大于约20%、 30%、 40%、 50°/。、 60%、 70%、 80°/。、 90%、和最多约100%的毒性。制备物的活性可 以如本文其它地方所述内容测定。
"防冻剂"是指一种赋形剂，其使得活性成分，即，重构的或水 溶液的药物组合物中的神经毒组分，相对于在药物组合物中被冷冻干 燥之前生物学活性神经毒组分的毒性，具有大于约20%、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 90%、和最多约100°/。的毒性。制备物的活性可 以如本文其它地方所述内容测定。
这些稳定剂的实例是明胶或白蛋白，优选是人源的或得自重组来 源。稳定剂可以通过化学方法或通过重组基因工程进行修饰。在本发 明的优选实施方案中，考虑了在冷冻干燥过程中使用醇类例如，肌醇、 甘露醇作为防冻赋形剂来稳定蛋白质。
在本发明更优选的实施方案中，稳定剂可以是非蛋白的稳定剂， 包括透明质酸或聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二或其两个或多种的混合物。 这种组合物被认为是具有显著稳定性的更安全的组合物。
在本发明的更优选实施方案中，药物组合物可以包含神经毒组分 和透明质酸或聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇，这种组合物任选地用适合 的pH緩冲剂进行pH稳定化，特别是使用乙酸钠緩冲剂，和/或使用防 冻剂多元醇稳定化。
除了神经毒素组分之外，药物组合物无论是否包括另外的组分例 如白蛋白、透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙二醇稳定剂，所述药 物组合物在约+8C到约-2()C的温度存储时在六个月、 一年、两年、三
年和/或四年的时间保持其效力实质上无变化。另外，所示的药物组合物在重构时可具有约20%到约100%的效力或回收率。
本发明范围内的药物组合物可以包括神经毒組分和一种或多种另 外的組分。优选地，在重构或注射时，本文中披露的药物组合物具有 约4到7. 5的pH，更优选约pH 6. 8到pH 7. 6，最优选pH 7. 4到7. 6。 通常，本发明的药物组合物包括约6pg到30 ng的量的神经毒组分。 优选地，神经毒组分的生物活性在小鼠LD50试验中决定为50到250 LDs。单位每ng神经毒组分。更优选地，神经毒组分的生物活性为约150 LD5。。
本发明的药物組合物可以包含神经毒素和透明质酸。透明质酸使 神经毒素稳定化。本文中披露的药物组合物在重构或在注射时可具有 约4到7. 5的pH。本发明药物组合物中的透明质酸优选以0. 1到10mg 的量与本发明的神经毒组分组合，优选在200 U/ml肉毒毒素溶液中为 每ml含1 mg的透明质酸。更优选地，所述溶液还包含1-100 mM,特 别是10 mM的乙酸钠緩冲液。
在另一个优选实施方案中，组合物可以包含多元醇作为防冻剂。 可以使用的多元醇的实例包括例如，肌醇、甘露醇和其它非还原性醇。
特别地，优选本发明的药物组合物不含蛋白质稳定剂的那些实施 方案不含有时用作防冻剂的海藻糖或麦芽三糖或相关的糖或多羟基化 合物。
本发明药物组合物中的聚乙烯吡咯烷酮优选以10到500 mg的量 与本发明的神经毒组分组合，优选在200 U/ml肉毒毒素溶液中为每 ml含100 mg的聚乙烯吡咯烷酮。更优选地，所述溶液还包含1-100mM， 特别是IO mM的乙酸钠緩冲液。本发明药物组合物中的聚乙二醇优选以10到500 mg的量与本发 明的神经毒组分组合，优选在200 U/ml肉毒毒素溶液中为每ml含100 mg的聚乙二醇。更优选地，所述溶液还包含1-100 fflM，特别是10mM 的乙酸钠緩冲液。
因而，本发明在更优选的实施方案中包括配制为药物组合物的神 经毒组分，所述组合物包含透明质酸稳定剂或聚乙烯吡咯烷酮稳定剂 或聚乙二醇稳定剂。另外，所述药物组合物可以包含乙酸钠緩冲系统 和/或醇类防冻剂。
以下实施例只是作为例证提供，而不是限制性的。
实施例l:用于治疗颈部张力障碍的肉毒毒素疗法
对患有颈部张力障碍的45岁男性患者进行肉毒毒素疗法的评价。 在所有适当的检查之后，建立注射方案，并且给予总剂量为300MU的 不含络合蛋白质的肉毒毒素。在2周后的再评价中，症状学得到改善， 但是需要包括另外的目标肌肉和增加最初注射的目标肌肉中的肉毒毒 素剂量。二周以后，再一次对患者进行再评价，治疗结果是最佳的。
没有发生副作用。到目前为止，在7个随后的注射轮次中，治疗 结果得到维持，而没有任何抗体诱导的疗法失败的迹象。
实施例2 :用于治疗瞼痉挛的肉毒毒素疗法短的作用持续时间。
对患有睑痉挛的61岁女性患者用总剂量为4脂U的本发明的包含 神经毒组分的、不含络合蛋白质的药物治疗，得到极好的结果。在注 射神经毒组分4周之后，效果开始减弱。又过两周之后，治疗的效果几乎完全中断。在最初注射轮次之后的7周进行再次注射。以最初的 剂量重复用神经毒组分的疗法，并且得到相同的效果。6个随后的注 射轮次中继续用神经毒组分的治疗，得到极好的治疗结果并且没有任 何由抗体诱导的治疗失败的迹象。
实施例3:用于治疗全身性痉享状态的肉毒毒素疗法 高剂量应用。
35岁男性患者患有低含氧量脑损伤，伴有全身性痉挛状态。将不 含络合蛋白质的总剂量750MU的本发明的神经毒组分分为250MU的三 个部分以l天间隔给予。在给予2周之后，状况显著改善。没有发现 局部的或区域性的或系统性的副作用。在7个随后的注射轮次中，治 疗效果稳定，并且没有出现副作用。没有由抗体诱导的治疗失败的迹 象。
实施例4:肉毒毒素的美容应用难以建立注射方案和短的作用持 续时间
将存在有肌肉性蹙眉皱紋和水平额侧皱紋的40岁女性客户用 2 OMU的不含络合蛋白质的肉毒毒素(即，本发明的神经毒组分)治疗。 2周以后，症状有所改善，但是需要注射另一个20MU的肉毒毒素。2 周以后，患者对结果完全满意。4周以后，有利的效果开始减弱，使 得需要再注射总剂量40MU的肉毒毒素。到目前为止，客户经历了每次 总剂量为40MU的4次随后的注射轮次。没有由抗体诱导的治疗失败的 迹象。
权利要求
1. 治疗患者的由肌肉或外分泌腺的活动过度的胆碱能神经支配引起的或与之相关的疾病或病况的方法，所述方法包括给予含有效量的肉毒杆菌毒素复合体的神经毒组分的组合物，所述组合物不含肉毒杆菌毒素复合体的任何其它蛋白质组分，其中(a)所述患者是人，(b)所述组合物通过注射给予，和(c)所述组合物以小于三个月的间隔给予，所述间隔包括第一治疗和第二治疗，其中在第二治疗中给予的量可以低于、高于或等于第一治疗中给予的量。
2. 权利要求l的方法，其中进行第二治疗是为了改善第一治疗的 治疗效果。
3. 权利要求1或2的方法，其中(a) 所述患者是患有重症运动障碍或严重痉挛状态的患者；和(b) 给予的神经毒组分的有效量为成人超过500 U，儿童超过15 U/kg体重。
4. 权利要求3的方法，其中所述量是用于成人的超过500 U的总 量和用于儿童的超过15 U/kg体重，并且其中所述量如下给予(a) 在第一治疗时期过程中注射这个量的第一部分；和(b) 在一个或多个随后的治疗时期过程中注射剩余部分，其中随后 的治疗时期在第一治疗时期之后的至少一天安排。
5. 权利要求1到4中任一项的方法，其中所述患者是人，其已经 用肉毒杆菌毒素进行治疗但是抱怨治疗效果降低并且在治疗之后3个 月期满之前需要治疗。
6. 权利要求l到5中任一项的方法，其中活动过度的腺体是自主 的外分泌腺，并且将组合物注射到所述腺体中或其附近。
7. 权利要求6的方法，其中(a) 所述腺体选自汗腺、泪腺、唾液腺、和粘液腺体；或(b) 所述腺体与选自以下的疾病或病况有关Frey综合症、鳄鱼泪 综合症、腋部多汗、手掌多汗、脚底多汗、头和颈多汗、身体多汗、 鼻溢液、或患有中风、帕金森病或肌萎缩性侧索硬化的患者的相对唾 液分泌过多。
8. 治疗患者的由肌肉的活动过度的胆碱能神经支配引起的疾病 或病况的方法，所述方法包括给予含有效量的肉毒杆菌毒素复合体的 神经毒组分的组合物，所述组合物不含肉毒杆菌毒素复合体的任何其 它蛋白质组分，其中(a) 所述患者是患有重症运动障碍或严重痉挛状态的人；(b) 所述组合物通过注射给予；和(c) 给予的神经毒组分的有效量为成人超过500 U，儿童超过15 U/kg体重。
9. 权利要求8的方法，其中所述量是用于成人的超过500 U的总量和用于儿童的超过15 U/kg体重，并且其中所述量如下给予(a) 在第一治疗时期过程中注射这个量的第一部分；和(b) 在一个或多个随后的治疗时期过程中注射剩余部分，其中随后 的治疗时期在第一治疗时期之后的至少一天安排。
10. 权利要求8或9的方法，其中组合物以小于三个月的间隔给 予，所述间隔包括第一治疗和第二治疗，其中在第二治疗中给予的量可 以低于、高于或等于第一治疗中给予的量。
11. 权利要求1到10中任一项的方法，其中所述疾病或病况是涉 及肌肉的张力障碍。
12. 权利要求11的方法，其中，所述张力障碍(a)选自(l)颅侧张力障碍，包括睑痉挛、颌张开或颌关闭型的口-下颌张力障碍、夜间磨牙、Meige综合症、舌张力障碍、眼睑张开的 运用不能，(2)颈部张力障碍，包括颈前倾、颈后倾、颈侧倾、斜颈， (3)咽张力障碍，(4)喉张力障碍，包括内收肌型或外展肌型的痉挛性 言语障碍、痉挛性呼吸困难，(5)肢张力障碍，包括臂张力障碍，例如 任务特异性张力障碍，包括书写痉莩、音乐家型痉挛或高尔夫球手型痉 挛，腿张力障碍，包括大腿内收、大腿外展、膝屈曲、膝伸展、踝屈 曲、踝伸展、或内翻足畸形，脚张力障碍，包括紋状趾、脚趾屈曲或 脚趾伸展，轴张力障碍，例如Pisa综合症或肚皮舞舞蹈演员型张力障 碍、节段性张力障碍、偏身性张力障碍或全身性张力障碍，(6) X-连 肌张力障碍，(7)皮质基底节变性的张力障碍，(8)迟发型张力障碍， (9)脊髓小脑共济失调的张力障碍，(IO)帕金森病的张力障碍，(11) 亨廷顿舞蹈病的张力障碍，(12) Hallervorden Spatz病的张力障碍， (13)多巴诱导的运动障碍/多巴诱导的张力障碍，(14)迟发性运动障碍 /迟发性张力障碍，(15)发作性运动障碍/张力障碍(诱发性的、非诱发型的、动作诱导的)；或(b)包括选自斜颈、颈侧倾、颈后倾、颈前倾、屈肘、前臂前旋、 屈腕、拇指内扣(thumb-in-palm)或握拳的临床表现。
13. 权利要求11的方法，其中所述肌肉选自同侧夹肌、对侧胸锁 乳突肌、同侧胸锁乳突肌、头夹肌、斜角肌复合体、肩胛提肌、 postvertebralis、同侧斜方肌、肩肝提肌、两侧的头夹肌、上侧斜方 肌、deep postvertebralis、两侧胸锁乳突肌、斜角肌复合体、颏下 复合体、肱桡肌、肱二头肌、旋前方肌、旋前圆肌、屈腕肌、尺侧腔 屈肌、拇长屈肌、拇收肌、拇短屈肌/对向肌、指浅屈肌、指深屈肌。
14. 权利要求1到10中任一项的方法，其中所述疾病或病况是涉 及肌肉的痉挛状态。
15. 权利要求14的方法，其中所述痉挛状态是涉及(l)与(a)包括 涉及多发性硬化、横贯性脊髓炎、Devic综合症有关的自身免疫过程， (b)病毒感染，(c)细菌感染，(d)寄生虫感染或(e)真菌感染有关的脑 炎和脊髓炎的痉挛状态，(2)遗传性痉挛下肢轻瘫，(3)半球梗死形成、 脑干梗死形成或脊髓梗死形成所致的卒中后综合症，(4)涉及例如半球 损害、脑干损害、脊髓损害的中枢神经系统创伤，(5)中枢神经系统出 血，例如脑内出血、蛛网膜下出血、石更脑膜下出血、或脊柱内出血， 或(6)瘤形成，例如半球肿瘤、脑干肿瘤、或脊髓肺瘤或(7)中风后痉 挛状态，或(9)由脑性麻痹引起的痉挛状态。
16. 权利要求14的方法，其中所述肌肉是平滑肌或横紋肌。
17. 减少面部皱紋或皮肤皱紋或去除面部不对称性的方法，所述 方法包括对个体给予含有效量的肉毒杆菌毒素复合体的神经毒组分的 组合物，所述组合物不含肉毒杆菌毒素复合体的任何其它蛋白质组分， 其中(a) 所述个体是人；(b) 所述组合物通过皮下或肌肉注射给予到涉及形成所述皮肤皱 紋或不对称的一种或多种面部肌肉或肌肉群中或其附近；和(c) 所述组合物以小于三个月的间隔给予，所述间隔包括第一治疗 和第二治疗，其中在第二治疗中给予的量可以低于、高于或等于第一治 疗中给予的量。
18. 权利要求17的方法，其中将所述组合物注射到蹙眉的皱紋、 水平的前额皱紋、鸡爪紋、鼻口周褶皱、颏裂、双下巴、和/或颈阔肌 带中。
19. 权利要求17或18的方法，其中注射的肌肉选自皱眉肌、眼 轮叵肌、降眉间肌、枕额肌的额肌、眼轮匝肌的眶部、鼻肌、上唇口轮匝肌、下唇口角降肌、颏肌和颈阔肌；那些是涉及形成上述皱 纟丈的肌肉。
20. 权利要求1到19中任一项的方法，其中所述神经毒组分选自 A型、B型、C型、D型、E型、F型、G型或其混合物。
全文摘要
本发明涉及通过给予包含肉毒杆菌毒素复合体的神经毒组分的组合物治疗疾病和病症的方法，其中所述组合物不含肉毒杆菌毒素复合体的任何其它蛋白质，并且其中所述组合物以短间隔和/或高剂量给予。
文档编号A61K38/48GK101460190SQ200780020682
公开日2009年6月17日 申请日期2007年6月28日 优先权日2006年6月29日
发明者D·德莱斯勒, M·马克思, R·贝纳克, S·格拉弗 申请人:莫茨药物股份两合公司