一种蛇床子素的快速检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种基于快速热解-气相色谱-质谱联用技术（PY-GC/MS法）快速检 测蛇床子素含量的方法。
【背景技术】
[0002] 蛇床子是中国长期以来用于治疗男性功能障碍的一种中药，其提取物中主要有效 成分为蛇床子素。蛇床子素是一种天然香豆素类化合物，化学名称为7-甲氧基-8-(3-甲 基-2- 丁烯基）香豆素，是已知的一种具有多种药理学和生化活性的天然化合物，具有潜在 治疗疾病的作用。天然蛇床子素主要存在于14种伞形科和17种芸香科植物中，是一类分 布广泛、药理作用广泛和使用广泛的中药活性成分。
[0003] 现代药理学研究表明，除了传统的应用领域外，蛇床子素还具有抗癌、抗氧化、抗 炎和免疫调节等活性。同时它还具有保护肝脏和保护神经的作用，也可抑制绝经后骨质疏 松症，并改善脂质代谢。蛇床子素多种多样的药理学作用使其在新药开发中，成为一类非常 有前景的天然先导化合物。此外，已有的含有蛇床子素的制剂应用广泛，包括：妇炎平、复方 芙蓉泡腾栓、解毒止痒散贴脐、克癣宁洗剂、黄四子土参汤、四子填精胶囊等等。因此，针对 蛇床子素及其各种制剂开发一种高效、快速的分析方法是十分必要的。
[0004] 现有对蛇床子素的分析检测主要采用高效液相的方法。受分析仪器的限制，往往 需要对样品进行较为复杂的前处理，通过萃取等方法将蛇床子素从药材或其复方制剂中分 离，随后采用HPLC/UPLC/SFCLC等液相色谱方法分析。该分析方法的样品处理过程复杂、总 体分析时间长。
[0005] 快速热解-气相色谱/质谱联用技术（PY-GC/MS)是一种高效的检测易挥发性成 分的技术，近年来发展迅速。低温下的热解过程是一种非常有效的热分离手段，通过控制 热解的温度和时间可以实现低沸点的复杂混合物的初步的气-液或气-固相分离；为气相 色谱提供一种在线的和实时的样品前处理和初步分离能力。分析检测过程中的热解时间、 温度、升温速率、载气流速、分流比、离子化温度等对分析结果的影响是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技术的特点，目前亟需提出一种针对蛇床子素的快速、微量检测方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种蛇床子素的快速检测方法，并基于此，初步判断蛇床 子等中药材及其制剂质量的高低。
[0007] 为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0008] 1)准确称取蛇床子或其复方制剂0. 02~5. OOmg得样品，将样品加入热解杯中；
[0009] 2)采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定； [0010] 3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中蛇床子素的 色谱峰，并获得样品中蛇床子素的相对含量。
[0011] 所述样品为块状或粉末状固体。
[0012] 所述热解的条件为：热解温度为180~400°C，热解时间为0. 1~2min。
[0013] 所述气相色谱的工作条件为：载气为流速0. 1~4. OmL/min的氦气，分流比为0~ 500 :1，升温程序为：初始温度为40~70°C，并保持O~3min，然后以彡20°C /min升至 300。。。
[0014] 所述质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为50~85eV，离子源 温度为215~245°C，单四级杆温度为145~185°C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电 压为1075~2980V，溶剂延迟为O~6min。
[0015] 所述相对含量采用面积归一化方法进行计算。
[0016] 所述蛇床子素的色谱峰的定性采用NIST08软件自动匹配计算。
[0017] 本发明的有益效果体现在：
[0018] 1)快速分离。现有方法是将蛇床子或其制剂通过萃取方法初步分离得到蛇床子素 溶液，过滤处理后，利用液相色谱分析，或薄层层析-光谱联用技术（TLC-SP)等检测其有效 成分；该方法的一般分析时间为4~24小时。本发明中通过热分离方法直接对蛇床子或其 制剂的低沸点物质进行初步分离，随后采用气相色谱进一步分离蛇床子素，大大节省了分 析时间，常规分析时间为〇. 1~〇. 3小时，提高了分析效率。
[0019] 2)灵敏度好，所需样品量少。HPLC检测方法受到仪器的限制，一般需要先分离得 到粗品溶液，因此需要的样品量较大，通常是几克到几十克不等；本发明方法的分析所用样 品量一般为〇. 02~lmg，提高了分析灵敏度。
[0020] 3)本发明优化了热解、色谱、质谱等检测条件，可以快速定性所需的色谱峰，实现 了快速和准确检测。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0022] 本发明针对蛇床子素熔沸点相对较低且易挥发的特点，采用快速热解-气相色谱 /质谱联用技术（PY-GC/MS)，充分将热分离和色谱分离相结合，实现蛇床子素的快速分离， 随后采用质谱定性和定量检测，达到快速、微量检测的目的。
[0023] 实施例
[0024] 一种基于PY-GC/MS检测蛇床子素的方法，以中药材蛇床子为例，但本发明的保护 范围不局限于该实施例，具体步骤如下：
[0025] 一、样品准备
[0026] 将取得的蛇床子（陕西紫杉科技股份有限公司，西安）准确称取 1.0 Omg (±0. 02mg)放入50 μ L的热解小杯中；
[0027] 二、热解：
[0028] 热裂解炉采用 Frontiers 的 PY2020is ;
[0029] ①热解温度：240 °C ;
[0030] ②热解时间：0· 40min。
[0031] 三、分离、检测
[0032] 色谱：
[0033] 气相色谱采用安捷伦7890A :
[0034] ①分析柱是HP-5MS弹性石英毛细管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m);
[0035] ②载气：高纯氦气，流速为1.0 mL/min ;
[0036] ③进样方式为分流进样，分流比为200 :1 ;
[0037] ④进样口温度为280 °C，传输线温度为290 °C ;
[0038] ⑤程序升温：初始温度为60°C，保持2min，然后以15°C /min升至300°C。
[0039] 质谱（采用安捷伦5975C):
[0040] ①EI源，正离子检测，电子能量为70eV ;
[0041] ②离子源温度为230°C，单四级杆温度为150°C ;
[0042] ③扫描方式为全扫描方式；
[0043] ④电子倍增器电压为2532V，溶剂延迟为4min。
[0044] 四、数据分析及处理
[0045] 色谱图的保留时间和积分面积由工作站自动完成，利用NIST08谱库定性色谱峰。 各挥发性成分的相对含量通过面积归一化法得到。
[0046] 本样品蛇床子热解组分中可辨认的峰为35个，成分及其保留时间列于表1。保留 时间及峰面积用安捷伦Chemstation计算，相对含量用面积归一化的方法计算。
[0047] 表1.蛇床子中挥发性成分的组成和含量U1= 13. 312 :蛇床子素）
[0048]
[0049] LlN 丄UOldbydO A I ^ 4/0 JM
[0050] LlN 丄UOldbydO /\ I ^ 〇/〇 JM
[0051] 五、精密度、重现性及稳定性实验
[0052] 1.精密度实验：以取自同一蛇床子的样品5份，按照上述方法连续进样5次，对相 对峰面积大于0. 5%的35个色谱峰进行分析，其相对保留时间和相对峰面积的RSD (相对标 准偏差）分别在2. 43~4. 75%和2. 76~4. 67%之间，说明本发明方法精密度良好。
[0053] 2.重现性实验：取同一批次蛇床子的样品5份，按照上述方法连续进样5次。结果 35个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在1. 26~4. 98%和2. 54~4. 59% 之间，说明本发明方法重现性良好。
[0054] 3.稳定性实验：取制备好的样品1份，分别在0、2、4、8、12、24h进样测定，结果35 个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于4. 39%，说明本发明方法在24h内测 定是稳定的。
[0055] 中药材因产地、季节、炮制方式的不同，其含水量、密度等都有细微的不同，继而其 复方制剂中的含量也有所不同。因此，需要的热解、分离和分析条件均不相同，据此得出本 发明中的条件范围。
[0056] 本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别 适用于微量样品检测（样品量可低至20 μ g)，并可用于对不同样品间的质量差别进行定量 的比较，应用性广，为该类中药材的质量标准和现代化应用提供了一条参考的思路和方法。
【主权项】
1. 一种蛇床子素的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 1) 准确称取蛇床子或其复方制剂0. 02~5. OOmg得样品，将样品加入热解杯中； 2) 采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定； 3) 经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中蛇床子素的色谱 峰，并获得样品中蛇床子素的相对含量。2. 根据权利要求1所述一种蛇床子素的快速检测方法，其特征在于：所述样品为块状 或粉末状固体。3. 根据权利要求1所述一种蛇床子素的快速检测方法，其特征在于：所述热解的条件 为：热解温度为180~400°C，热解时间为0. 1~2min。4. 根据权利要求1所述一种蛇床子素的快速检测方法，其特征在于：所述气相色谱的 工作条件为：载气为流速〇. 1~4. OmL/min的氦气，分流比为0~500 :1，升温程序为：初始 温度为40~70°C，并保持0~3min，然后以彡20°C /min升至300°C。5. 根据权利要求1所述一种蛇床子素的快速检测方法，其特征在于：所述质谱的工作 条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为50~85eV，离子源温度为215~245°C，单四 级杆温度为145~185 °C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电压为1075~2980V，溶剂 延迟为0~6min。6. 根据权利要求1所述一种蛇床子素的快速检测方法，其特征在于：所述相对含量采 用面积归一化方法进行计算。7. 根据权利要求1所述一种蛇床子素的快速检测方法，其特征在于：所述蛇床子素的 色谱峰的定性采用NIST08软件自动匹配计算。
【专利摘要】本发明提供一种蛇床子素的快速检测方法：1)样品的准备；2)PY-GC/MS检测；3)数据分析及定性和定量分析。本发明选择PY-GC/MS技术对蛇床子素含量进行检测，是针对实际生产、生活中蛇床子等以蛇床子素为主要活性成分的中药材，因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种蛇床子素快速、微量的检测方法，进而初步判断此类中药材的质量，本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别适用于微量样品检测，可用于对不同产地、品种、批次的蛇床子样品间的质量差别进行初步的比较，应用性广。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105136935
【申请号】CN201510598230
【发明人】龚频
【申请人】陕西科技大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月18日