在动物中疫苗接种滴度的增强的制作方法

专利名称：：在动物中疫苗接种滴度的增强的制作方法
技术领域：
：本发明涉及可增强针对疫苗的抗体的滴度的组合物和疫苗的组合，以及4吏用该组合的方法。
背景技术：
：免疫应答包含两个不同的系统先天性系统和获得性(抗体介导的)系统。先天性系统是一种进化上古老的系统，它使用多种策略来预防感染。它们包括由皮肤提供的上皮细胞屏障、胃肠道和肺内衬和乳腺。另外，先天性系统包括胃(或反刍动物的皱胃)的酸性屏障和胃、胰腺和小肠的消化酶。最后，先天性系统包括白细胞、巨噬细胞和中性粒细胞。这些细胞首先通过独特标志物在病原体表面上的呈现来识别病原体，然后吞噬和杀死病原体。先天性系统提供初次免疫应答，并提供获得性抗体系统作出应答和形成与特定病原体斗争所需的抗体所需的时间。通常，人或动物需要一周至数周来形成抗体应答。在该干预时间中，生物体依靠先天性系统来排斥感染。获得性免疫系统可以响应于特定病原体、毒素、化学试剂或被生物体识别为抗原的(即免疫系统认为该抗原是非自身的)任意分子，形成抗体。当病原体感染人或动物时，与病原体有关的特定细胞标志物呈递给抗体产生细胞。获得性免疫系统然后经历称作"克隆扩增"的过程。具体而言，这允许大量生成产生抗体的细胞，所述抗体针对与该病原体有关的特定抗原。抗体由T-细胞和B-细胞合成。T-细胞在胸腺中成熟，并呈递结合在它们的胞外表面上的抗体。T-细胞然后自由地在血液中循环，并穿过淋巴组织。T-细胞通过结合的抗体结合病原体，从而导致病原体的4识别和随后的破坏。相反，由B-细胞生成的抗体分泌进血液，它们在其中自由循环。当B-细胞生成的抗体结合病原体时，它们启动导致该病原体的识别和杀死的事件级联。响应于免疫接种生成的抗体归类于抗体同种型。三种最重要的抗体同种型包括IgM,IgGl和IgG2。其它同种型包括、但不限于IgA，IgD，IgG3，IgG4和IgE同种型，和在家禽内的IgY同种型。适应性IgM应答是T-和B-细胞响应于抗原生成的第一抗体；但是，它是具有有限的抗原亲和力和特异性的相对"较弱的"抗体。更"有力的"抗体应答包含在IgGl和IgG2同种型内；但是，IgGl和IgG2同种型的形成需要更长的时间段。怀孕个体中的IgG同种型应答是特别重要的，因为它们是在出生时通过初乳从母亲传递给后代、并从而将被动免疫传递给新生儿的抗体同种型。人类医学和家畜产业中经常采用针对疾病的疫苗接种(也称作免疫接种)。例如，为了针对病原体接种，给动物施用非传染性病原体形式的疫苗，或仅仅施用病原体的一部分。获得性免疫系统通过生成抗体而对该疫苗作出响应。如果随后将动物暴露于活病原体，响应于该疫苗而生成的抗体会被迅速动员起来，然后识别和把向该病原体，以进行破坏。家畜产业依赖于针对家畜特异性疾病的免疫接种方案，以使由真菌、病毒和细菌感染引起的发病率和死亡率最小化。例如，在乳品产业中，经常针对大肠杆菌接种动物，因为这是最常见的乳腺感染形式之一(即乳腺炎)，并造成生产损失，和在严重情况下的奶牛损失。现有的疫苗接种方案会产生几个问题。例如，疫苗接种方案的功效随个体而异。具体而言，有些个体会响应于特定免疫接种方法形成高滴度(抗体的高血清浓度)，而其它个体则不会。由于抗体滴度和免疫系统对感染的应答之间存在直接关联，有些个体仍然对病原体感染是易感的，尽管它们已经接种过疫苗。结果，仍然需要提高疫苗的功效，以降低动物群体的疾病发生率。
发明内容本发明涉及用于增强疫苗的功效的组合和使用该组合的方法。本发明的组合使用具有下述组分的组合物P-1,3(4)-内切葡聚糖水解酶，P-1，3(4)葡聚糖，硅藻土，矿物土和葡甘露聚糖。将该组合物饲喂给将要接受疫苗接种或正在接受疫苗接种的动物。该组合通过增加针对疫苗的抗体的血清浓度(滴度)来增加疫苗的功效。甚至在从动物饮食撤出该组合物后，仍然保持增加的抗体血清浓度。附图简述图1显示了蛋白印迹实验的结果，它们证实了所述组合物对中性粒细胞L-选择蛋白的表达的影响，如实施例l所述。图2显示了蛋白印迹实验的结果，它们证实了未加热的和加热的(造粒的)形式的所述组合物对中性粒细胞L-选择蛋白的表达的影响，如实施例2所述。图3的图总结了所述组合物对大鼠中性粒细胞中编码L-选择蛋白的mRNA的表达的影响，如实施例3所述。图4显示了蛋白印迹实验的结果，它们证实了所述组合物对中性粒细胞白介素-iP(IL-1P)的表达的影响，如实施例4所述。图5的条形图总结了用于定量针对J5疫苗的IgGl滴度的ELISA结果，如实施例6所述。图6的条形图总结了用于定量针对J5疫苗的IgG2滴度的ELISA结果，如实施例6所述。图7的条形图解释了低剂量(15克/天)和高剂量(30克/天)的组合物对肉牛中白介素-1P的表达的影响，如实施例6所述。图8显示了蛋白印迹实验的结果，它们证实了所述组合物对肉牛中中性粒细胞L-选择蛋白的表达的影响，如实施例6所述。图9的条形图总结了用于定量总IgGl和IgG2滴度的ELISA结果，如实施例7所述。优选实施方案的描述根据要求，本文公开了本发明的组合物的详细实施方案；但是，应当理解，公开的实施方案仅仅是本发明的示例，它们可以以不同方式来实施。因此，本文公开的具体细节不应当被理解为限制性的，而是仅仅作为权利要求的基础，并作为教导本领域技术人员以事实上任意适当方式不同地采用本发明组合物的代表性基础。本发明提出了增强动物免疫功能的组合和使用该组合的方法。一般而言，本发明的组合使用具有下述组分的组合物p-l，3(4)-内切葡聚糖水解酶，p-l，3(4)葡聚糖，硅藻土，矿物土和葡甘露聚糖。所述组合物与疫苗组合使用，所以动物对组合物的摄入增强疫苗的功效。如这里所定义的，疫苗会刺激免疫系统，包括当施用给动物时抗体的产生。疫苗的增强的功效的一个迹象是动物血清中增加的针对疫苗抗原的抗体滴度。所述组合可以有效地用于祠养许多物种的个体或动物，例如哺乳动物，包括人类和禽类。在一个优选的实施方案中，所述组合用于家畜哺乳动物。所述组合可以同样好地用于反刍动物和非反刍动物。反刍动物的实例包括、但不限于牛，绵羊，山羊，奶牛，鹿，野牛和水牛。非反刍动物包括猪，马，母猪等。在一个特别优选的实施方案中，将该组合物的组合用于绵羊和牛家畜。在一个实施方案中，在动物正在接受疫苗接种的期间，将该组合物祠喂给动物。一个典型的疫苗接种方案需要在确定的时间段施用至少一个、通常几个剂量的疫苗，以使免疫系统的刺激和抗体的产生最大化。在一个优选的实施方案中，从开始疫苗接种方案之前每日给动物饲喂组合物，继续至开始疫苗接种方案后。在替代实施方案中，可以在开始疫苗接种方案之后或在开始该方案的同时，给动物祠喂该组合物0所述组合的疫苗可以引起对病原体、毒素、药物或其它分子的应答。所述疫苗可以是DNA疫苗，其中将编码抗原的DM分子注射进动物，导致抗原的合成和随后对抗原的免疫应答。在一个优选的实施方案中，所述组合的疫苗刺激针对造成疾病的病原体的抗体的产生。在一个特别优选的实施方案中，所述疫苗剌激针对造成乳腺炎的病原体的抗体的产生。J5疫苗是一种这样的可商业得到的乳腺炎疫苗(可从Pfizer得到)。人和动物通常接种疫苗来对抗的、且可以从增强功效的方案获益的病原体和疾病的其它实例包括、但不限于，传染性牛鼻气管炎(IBR)，副流感3型(PI3)，牛病毒性腹泻病毒(BVDV)，牛呼吸道合胞病毒(BRSV)，轮状病毒，冠状病毒，弯曲杆菌属，巴斯德氏菌属，传染性结膜炎，沙门氏菌属，梭状芽胞杆菌属，钩端螺旋体病，布氏菌病，新城病，禽痘，丹毒，禽霍乱，马立克氏病病毒(MDV)，传染性支气管炎病毒(IBV)，禽脑脊髓炎，球虫病，鼻肺炎，马流行性感冒，马链球菌，马病毒性动脉炎，马单核细胞埃里希体病，脑脊髄炎，西尼罗河脑炎，狂犬病，细小病毒，腺病毒，博德特氏菌属，莱姆病，贾第虫属，百日咳，麻渗病毒，甲型肝炎和乙型肝炎，白喉和脊髓灰质炎。所述组合的组合物的组分可以通过本领域普遍已知的方法制备，且可以从商业来源得到。P-1，3(4)-内切葡聚糖水解酶从长枝木霉(7Wc力ocTer鹏/0/7《/6r"力/a"迈)菌抹的深层发酵生成。桂藻土可作为可商业得到的酸洗涤的产物得到，其含有95M二氧化硅(Si02)，它的剩余组分未测定，但是主要由分析化学家协会(AssociationofAnalyticalChemists)(A0AC，2002)定义的灰分(矿物质)组成。0-l，3(4)葡聚糖和葡甘露聚糖可以来自源自初級灭活酵母(酿酒酵母)的酵母细胞壁提取物的商业制品，其化学组成如表l所示8<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>在该组合物中使用的矿物土(铝硅酸盐)可以是多种可商业得到的粘土中的任一种，包括、但不限于，蒙脱石，膨润土和沸石。在该组合的一个优选实施方案中，P-l，3(4)-内切葡聚糖水解酶、硅藻土、葡聚糖和葡甘露聚糖和矿物土各自以约0.05-3%、1-40%、1-20%和40-92%的重量比相组合。在另一个优选实施方案中，P-1，3(4)-内切葡聚糖水解酶、硅藻土、葡聚糖和葡甘露聚糖和矿物土各自以0.1-3%、5-40%、2-15%和40-80°/。的重量比相组合。在一个特别优选的实施方案中，卩-1，3(4)-内切葡聚糖水解酶、硅藻土、葡聚糖和葡甘露聚糖和矿物土各自以0.2-3%、20-40°/。、4-10%和50-70°/。的重量比相组合。在一个实施方案中，所述组合物是干燥的、自由流动的粉末，其适合直接包含进可商业得到的祠料、食品，或作为完全混合的食物或饮食的增补剂。该粉末可以与固体或液体飼料或与水相混合。在另一个实施方案中，将组合物制成颗粒。在一个实施方案中，当直接掺入祠料时，所述组合物可以以约0.1至约20kg/吨(2000磅)饲料的量加入。在一个优选的实施方案中，所述组合物以约0.5kg至约10kg/吨饲料的量加入动物飼料或食物中。在一个特别优选的实施方案中，所述组合物可以以约1至约5kg/吨饲料的量加入到饲料中。当以饲料干物质的百分比表达时，本发明的组合物可以以约o.oi至约2.5%(按重量计)、优选约0.0125%至约2%(按重量计)的量加入到动物饲料或食物中。在一个优选的实施方案中，所述组合物以约0.05至约1.5%(按重量计)、优选约0.0625%至约1°/。(按重量计)的量加入到动物伺料或食物中。在一个特别优选的实施方案中，本发明的组合物以约0.1至约0.7%(按重量计)、优选约0.125°/。至约0.5°/。(按饲料重量计)的量加入。或者，本组合的组合物可以以每天约0.01克至约1克/千克活体重、优选约0.012克至约0.5克/千克活体重、更优选约0.016克至约0.37克/千克活体重的量，作为添加剂直接饲喂哺乳动物或禽动物。在一个特别优选的实施方案中，所述组合物可以以每天约0.05克至约0.20克/千克活体重的量提供用于许多物种。作为实例，所述组合物可以在约2克/头/天至约8克/头/天的范围内提供给绵羊。对于牛动物，所述组合物可以在约10克/头/天至约60克/头/天的范围内提供。本领域技术人员会明白，饲喂的组合物的量可以随动物物种、动物大小和加入该组合物的饲料的类型而变化。现在提供实例来解释具有某种程度特异性的组合物的概念。实施例1用绵羊进行实验，其目的是测定组合物的增加免疫抑制动物中的中性粒细胞L-选择蛋白(一种先天性免疫系统标志物)的表达的能力。将动物(每组6头)分成2組对照组和实验组。对照组接受高能量食物，其由可随意得到的剁碎的干草、每天每头l磅磨碎的玉米和每天每头l磅烘焙的小麦粗粉(millrun)组成，持续28天。在这期间，它们也接受每天2次注射地塞米松(一种免疫抑制性药物)。实验组接受每天摄入组合物(5克/头/天)，持续28天，并接受相同的饮食和地塞米松注射作为对照。实验组的组合物是65.8%(重量)的矿物土，0.20%(重量)的内切葡聚糖水解酶，9.0%(重量)的葡聚糖和葡甘露聚糖，和25%(重量)的锻烧过的硅藻土。在研究结束时，回收血样，使用Percoll梯度离心纯化中性粒细胞。使用蛋白印迹技术和对L-选择蛋白特异性的抗体，评估中性粒细胞中L-选择蛋白表达的量。如图1上图所示，没有接受组合物的动物具有低的且可变的L-选择蛋白表达。如图1下图所示，接受组合物的动物表现出L-选择蛋白表达的一致增加。上图代表6头对照免疫抑制动物。下图代表6头实验免疫抑制动物，它们在饮食中接受所述组合物。实施例2在该研究中，当在造粒的饮食中提供实施例1的实验组合物时，检查绵羊中先天性免疫系统的刺激。基础饮食由21.55%大麦、10.0%芸苔、5%酒糟、40%磨碎的玉米、1.50%石灰石、0.01%硫酸锰、0.01%微维生素E、4.0%糖蜜、0.25%单钙(mono-cal)、0,25°/。氯化钾、0.60%氯化钠、0.03%亚硒酸钠、15.79%小麦粗粉、0.01%硫酸锌、0.75%硫酸铵和0.25%硫酸钴组成。当将实验组合物加入到该饮食中时，其含量为0.6%，替代小麦粗粉的那部分。将28头绵羊分给4种处理，包括对照组，接受粉末形式的实验组合物的组，接受造粒形式的实验组合物的组(其中颗粒在160。F的温度制备)，和接受造粒形式的实验组合物的组(其中颗粒在180flF的温度制备)通过每天注射地塞米松，免疫抑制所有动物。除了施用通过在高温制备颗粒来生产的颗粒形式的组合物以外，使用与实施例1相同的方法，进行研究。进行该研究的原理是，确定加热组合物(在颗粒形成中需要)是否会灭活组合物的增强先天性免疫的能力。如图2所示，没有接受组合物的绵羊(对照)在中性粒细胞中表达非常低水平的L-选择蛋白。提供甚至造粒的(加热的)形式的实验组合物仍然会显著增强中性粒细胞L-选择蛋白的表达。在图2中，最上面的图代表饲喂不含组合物的对照饮食的免疫抑制动物中的中性粒细胞L-选择蛋白表达。第二幅图(粉末)代表如实施例1所述的接受未加热的自由混合形式的实验组合物的免疫抑制动物中的L-选择蛋白表达(实验组)。第三幅图和第四幅图代表接受造粒ii形式的实验组合物的免疫抑制动物中的中性粒细胞L-选择蛋白表达。在图3中使用的颗粒通过加热至160°F来制备，图4颗粒在生产饲料过程中加热至180。F。实施例3用大鼠进行实验，来研究组合物是否具有增强非反刍动物模型的先天性免疫的能力。在该研究中，将大鼠分配给2个处理组之一一个对照组(未添加的饮食)和一个实验组，其中以1%饲料干重将实施例1的组合物加入饮食中。在该实验中，给大鼠饲喂含有或不含实验组合物的商业化的磨碎的大鼠食物。在该研究中没有釆用使用地塞米松注射的免疫抑制。14天后，通过心脏穿刺从麻醉的大鼠采取血样。使用Percoll梯度离心，从血样分离中性粒细胞，使用TriZol分离总RNA。然后通过定量反转录酶聚合酶链式反应(QRT-PCR)，使用为大鼠L-选择蛋白试验特别开发的引物，测定中性粒细胞RM样品中编码大鼠L-选择蛋白的信使RNA(mRNA)的浓度。通过将它们显示为p-肌动蛋白mRNA的比例，标准化L-选择蛋白mRNA的量，所述P-肌动蛋白mRNA以相当恒定的水平在所有细胞中表达。如图3所示，与实施例l和2的结果相一致，所述组合物使L-选择蛋白mRNA的表达增强了超过6-倍(P<0.05)。该研究证实，通过实施例1和2的蛋白印迹显示的L-选择蛋白的增强表达，可以由编码该蛋白的mRNA的增加造成。这暗示着，所述组合物会改变编码L-选择蛋白的基因的转录速率。实施例4中性粒细胞，先天性免疫系统的细胞，能发出信号并从而通过白介素-1P(IL-1p)的分泌上调获得性免疫系统对抗体的产生。为了研究所述组合物的诱导中性粒细胞增加IL-1P的合成的能力，评估从与实施例1所述相同的绵羊采取的中性粒细胞中IL-1P的浓度。为了完成该研究，使用了蛋白印迹和对IL-1P特异性的抗体。如图4所示，没有每天提供组合物的动物含有实质上不可检测水平的IL-1P;但是，给动物提供组合物会造成IL-1P表达的显著增加(P<0.05)。在图4中，上图代表6头对照饲喂的免疫抑制动物。下图代表6头实验组合物饲喂的免疫抑制动物，它们接受组合物。使用蛋白印迹分析和对IL-1P特异性的抗体，测定IL-1P的浓度。这些数据表明，组合物具有不仅增加先天性免疫的标志物(例如，L-选择蛋白；实施例1，2和3)而且也增加上调适应性免疫系统的关键信号传递分子(即，IL-IP)的表达的能力。实施例5该实验的目的是，测定在给围产奶牛饲喂组合物之后哪些基因在中性粒细胞中差异化表达。在该研究中，检查了组合物增加IL-1P在中性粒细胞中表达的机理。围产奶牛是一种良好的模型，因为妊娠应激导致免疫抑制，使得奶牛对感染特别易感。在该实验中，将8头围产奶牛分配给不具有实验组合物的对照饮食，将8头牛分配给在它们的饮食中接受实施例1的组合物的实验组(56克/天/头)。给动物饲喂饮食约28天，直到分娩。在分泌后12-15小时，通过颈静脉穿刺回收500ml血样，通过大规模Percoll梯度离心制备中性粒细胞。使用TriZol方法从中性粒细胞分离RNA，然后使用反转录酶反转录成cDNA。在反转录过程中，采用差别染色的基于核苷酸的染料(Cy3和Cy5)，使得从2个不同处理(对照和实验)组合成的互补DNA(cDNA)掺入不同颜色。然后将来自实验和对照组的cDNA样品应用于BoTL-5微阵列载玻片。该微阵列在密西根州立大学的动物功能基因组学中心(CenterforAnimalFunctionalGenomics)制备，在栽玻片上含有l500个基因(各自一式三份排列)。然后使从实验和对照组样品产生的cDNA竟争与阵列上的1500个基因的结合，再通过对比阵列上每个斑点处Cy3和Cy5信号的相对丰度，评估基因的相对表达。然后统计13分析数据，以鉴别差别表达的那些基因(其中P<0.05的那些基因)。结果表明，超过20个基因在取自实验组的牛中性粒细胞中差别表达(P〈0.05)。白介素转化酶(ICE)是一种这样的上调节基因。这使用QRT-PCR和对牛ICE序列特异性的引物予以证实。ICE是无活性的前IL-10向有活性的分泌型IL-1P转化过程中的限速酶。因而，通过它的增加中性粒细胞ICE活性的表达和引起的IL-1P的分泌的能力，所述组合物可以上调适应性免疫(即，例如增加抗体滴度)。实施例6为了测试组合物增强疫苗的功效的假设，检查了疫苗接种后滴度的形成。将18头肉牛(每组6头牛)分配给3种处理之一对照，处理l，(15克组合物在饮食中/头/天)和处理2(30克组合物/头/天)。动物的饮食由随意提供的草灰饮食组成，其中含有提供14%粗蛋白、3%粗脂肪和20%粗纤维的每天添加剂(表2)。在整个试验中，给动物提供12磅该添加剂/头/天。将实施例1的实验组合物直接混合进该添加剂，从而将15克/头/天和30克/头/天的预期摄入分布递送给处理1和2中的牛。给动物施用这些饮食处理56天，然后从处理1和2的饮食撤去组合物。所有动物维持相同的不含组合物的对照饮食，直到第84天。在实验的第7、21和35天，给所有动物施用大肠杆菌J5疫苗(Pfizer)。该疫苗接种(即，3次注射，间隔14天)遵循生产商的推荐。该疫苗在乳品业中商业化地用作降低大肠杆菌状乳腺炎可能性的措施。该疫苗和大多数其它疫苗的限制是滴度变化和有限的应答。在第0、l4、28、"和56天，使用颈静脉穿刺采取血样，在这些天，从动物的饮食去除组合物。所有动物维持共同的不含组合物的饮食，直到第84天。也在第82天釆取血样，以测定在从饮食中撤走后是否维持组合物诱导的滴度的任何变化。通过离心，从所有动物制备血清。使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)，评估3种不同的免疫球蛋白级分(IgM，IgGl和IgG2)中对大肠杆菌J5疫苗接种特异性的抗体的浓度。为了测定IgM、IgGl和IgG2免疫球蛋白级分中的大肠杆菌J5滴度，培养大肠杆菌培养物(从JeanneBurton博士得到，密西根州立大学动物科学系动物功能基因组学中心)，收获，并用于包被96孔平板。随后，将来自动物的血清样品(1:5000稀释)加入包被的平板的各个孔中，温育i小时，以使动物血清中的抗体结合大肠杆菌J5抗原。用含有吐温-20的磷酸盐緩冲盐水(PBS)洗涤ELISA平板。将特异性结合牛IgM、IgGl或IgG2(BethLaboratories,Montgomery,TX)的第二抗体(辣根过氧化物酶(HRP)缀合的羊抗牛)加入洗涤过的平板。给第二抗体缀合辣根过氧化物酶。用第二抗体温育另外1小时后，再次用PBS和吐温-20洗涤平板。将过氧化物酶底物TMB(四甲基联苯胺)加入平板，通过使用ELISA平板读数器测量在450nm的吸光度，定量得到的显色反应。如表3所示，实验组合物对与IgM抗体同种型有关的大肠杆菌J5滴度的发展没有影响(在P>0.05的阈值)。但是，所述组合物刺激和维持IgGl和IgG2抗体同种型的J5滴度，如图5和6和表4和5所示。在已经接受处理1和处理2的动物中，IgGl滴度在第56天增加(P<0.05)(表4和图5)。在第82天之前，对照动物中的滴度已经落回实验前(第0天)水平。但是，已经饲喂处理1或处理2的动物具有与对照动物相比升高的J5滴度(P<0.05)。实际上，在56天后从饮食去除本发明组合物后，已经接受处理1或2的动物没有表现出IgGl滴度的损失(表4和图5)。如表5和图6所示，关于IgG2级分，加入15g/头/天(处理l)或30g/头/天(处理"的组合物造成了在42天J5IgG2滴度的逐步增加(即与对照相比，高剂量使滴度增加了57%，低剂量使滴度增加了30%),尽管该效应不是统计上显著的P<0.05(P值是O.16)。56天后，处理2(组合物的高剂量)造成了J5滴度的显著升高(P<0.05)。处理1(组合物的低剂量)在该时间点造成了IgG2级分内J5滴度的升高，尽管该效应不是统计上显著的，阈值为P<0.05(P值是0.12)。在研究的第82天，在从饮食撤去组合物后，饲喂高剂量组合物的动物具有IgG2级分内的升高的滴度(与对照相比增加了14%);但是，该效应不是显著的，阈值为P<0.05(P值是0.09)。这些数据表明，在从饮食撤去组合物后，所述组合物具有增加IgGl级分的滴度的能力，并且具有维持IgGl级分的滴度的能力(P〈0.05)。所述组合物也具有增加IgG2级分内的滴度的发展的能力(P<0.05)。l吏用针对IL—1P的ELISA(R+DSystemsMinneapolis,MN))，也检查了来自对照、处理1和处理2动物的血清样品中的IL-1p浓度。如图7所示，结果表明，28天后，处理1和处理2增加了IL-1P的血清浓度。56天后，低剂量的組合物也显著升高了IL-1P的血清浓度(P<0.05)。在研究的第56天，高剂量的组合物造成了血清IL-1P的大量增加；但是，该效应不是显著的P<0.05(P值=0.23)。尽管不希望受理论的约束，所述组合物可以刺激先天性免疫系统(辨余，通过中性粒细胞激活)和中性粒细胞，然后通过IL-1P的分泌刺激获得性免疫系统。IL-1p特异性地增加B-细胞的提高IgG2滴度的发展速率和维持IgGl级分内的滴度的能力。使用如图8所示的蛋白印迹，也评估了中性粒细胞L-选择蛋白的蛋白浓度。关于大鼠研究(实施例4)，也测定L-选择蛋白的mRNA浓度，但是使用牛特异性的引物。测得与对照处理相比，处理l(15g实验组合物/头/天)和处理2(30g实验组合物/头/天)增加了(P<0.05)中性粒细胞L-选择蛋白的浓度。表2成分添加剂百分比(作为饲料基础)棉花壳32.5玉米25.0小麦粗粉6.25芸莒粗粉7.50酒糟8.73石灰石0.75Dynamate0.25氧化镁0.15苜蓿粗粉14.0尿素0.50莫纳菌素钠0.01硫酸锌0.01硒0.04氯化钠0,30糖蜜4.00表3研究的天数对照(在450nm的吸光度)处理l(在450nm的吸光度)处理2(在450nm的吸光度)第14天0.4770.4040.391第28天0.7360.4090.424第42天0.8420.4050.408第56天1.970.7171.6517表4研究的天数对照(在450nm的吸光度)处理l(在450nm的吸光度)处理2(在450認的吸光度)第o天0.0350.0360.033第28天0.0650.0450.035第42天0.0580.0650.109第56天0.238a0.543b0.471b第82天0.033a0.549b0.573b不具有共同上标的行内的值的差异是显著的(P<0.05阈值)。表5研究的天数对照(在450nm的吸光度)处理l(在450nm的吸光度)处理2(在450nm的吸光度)第o天0.0790.1040.091第28天0.2200.2290.215第42天0.2280.2960.358笫56天0.306a0.401a0.681b第82天0.1780.1790.252不具有共同上标的行内的值的差异是显著的(P<0.05阈值)。实施例7用绵羊进行实验，来研究实施例1的实验组合物响应于在实施例6中采用的J5大肠杆菌疫苗接种而增强适应性免疫的能力。将动物(12只动物/处理)分配给3种处理对照，处理l(每天每头3克实施例1的实验组合物)或处理2(每天每头6克实施例1的实验组合物)。给动物伺喂这些饮食75天，在实验的第7、21和35天，接种PfizerJ5疫苗。在第0、35和75天采取血样。在从饮食撤走处理1或处理2组合物后第90天，也釆取血样，以测定该组合物是否具有维持滴度的能力。18在该研究中，使用识别IgGl和IgG2绵羊同种型的第二抗体(HRP缀合的兔抗羊IgG:BethLaboratories,Montgomery,Texas)。表6和图9显示了来自组合的绵羊IgGl和IgG2级分的数据。在进行ELISA的该研究中使用的方法与在实施例6中所述的方法相同，例外是，改用抗羊IgG抗体(VMRD，Pullman,WA)。在第35天，高剂量的实验组合物造成总IgGl和IgG2滴度的升高。在第75天，低和高剂量的组合物造成J5滴度的逐步升高。具体而言，低剂量造成滴度17%增加，高剂量造成J5滴度31%增加。在第90天，与对照祠喂动物相比，处理1中的动物不具有滴度的升高。但是，在接受高剂量的组合物的处理2中的动物表现出J5滴度的24%升高。这些数据支持了实验6的观察，因为实验组合物的施用增加了IgGl和IgG2级分内滴度的发展，并在从饮食撤去实验组合物后维持滴度另外15天。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>本发明用于增加组合的IgG级分的J5滴度，尽管P值大于P<0.05阈值。应当理解，已经描述的本发明的组合物的实施方案是本发明组合物的原理的一些应用的解释。本领域技术人员可以作出许多改进，而不背离该组合物的真实精神和范围。本文所述的不同特征可以以任意组合使用，而不限于本文特别指出的已有组合。权利要求1.一种用于增强疫苗功效的组合，其包含疫苗；包含β-葡聚糖、β-1，3(4)-内切葡聚糖水解酶、锻烧过的硅藻土、矿物土和葡甘露聚糖的组合物；且其中与在没有所述组合物情况下抗体的滴度相比，所述组合物增加针对疫苗的抗体的滴度。2.权利要求1的组合，其中所述组合物和所述疫苗施用给家畜。3.权利要求1的组合，其中所述组合物以按所述祠料的干重计约0，01%至约2.5%的重量比的范围加入动物饲料中。4.权利要求l的组合，其中所述组合物以约0.01克/千克所述动物体重至约1克/千克所述动物活体重的范围加入动物祠料中。5.权利要求l的组合，其中所述疫苗和组合物施用给牛家畜。6.权利要求1的组合，其中所述组合物以每头动物每天约10克至约60克的范围施用给牛家畜。7.权利要求1的组合，其中所迷疫苗和组合物施用给绵羊。8.权利要求l的组合，其中所述组合物以每只动物每天约2克至约IO克的范围施用给绵羊。9.权利要求1的组合，其中所述疫苗刺激抗乳腺炎的抗体的产生。10.权利要求l的组合，其中所述疫苗是PfizerJ5疫苗。11.权利要求1的组合，其中与在没有所述组合物时所述IgGl或IgG2抗体的滴度相比，所述组合物增加IgGl或IgG2类抗体的滴度。12.权利要求1的组合，其中与在没有所述组合物时所述IgGl抗体的滴度相比，所述组合物增加IgGl类抗体的滴度。13.权利要求1的组合，其中与在没有所述组合物时所述IgG2抗体的滴度相比，所述组合物增加IgG2类抗体的滴度。14.权利要求1的组合，其中与在没有所述组合物时所述IgGl或IgG2抗体的滴度相比，在从所述动物的饮食中撤走所迷组合物后维持所述IgGl或IgG2类抗体的滴度。15.权利要求1的组合，其中与在没有所述组合物时所述IgGl抗体的滴度相比，在从所述动物的饮食中撤走所述组合物后维持所述IgGl类抗体的滴度。16.—种增强疫苗的功效的方法，其包含a.提供一个或多个接种疫苗的个体；和b.给该个体施用包含p-葡聚糖、p-1，3(4)-内切葡聚糖水解酶、锻烧过的硅藻土、矿物土和葡甘露聚糖的组合物。17.权利要求16的方法，其中所述组合物每天施用给所述个体。18.权利要求16的方法，其中所述组合物以按所述饲料的干重计约0.01%至约2.5°/。的重量比的范围加入个体的饲料中。19.权利要求16的方法，其中所述组合物以约0.01克/千克所述动物活体重至1克/千克活体重的范围加入所述个体的饲料中。20.权利要求16的方法，其中与在没有所述组合物时所述IgGl或IgG2抗体的滴度相比，所述组合物增加IgGl或IgG2类抗体的滴度。21.权利要求16的方法，其中与在没有所述组合物时所述IgG2抗体的滴度相比，所述组合物增加IgG2类抗体的滴度。22.权利要求16的方法，其中所述个体是牛，疫苗和所述组合物施用给所述牛。23.权利要求16的方法，其中所述个体是牛家畜，所述组合物以每头动物每天约IO克至约60克的范围施用给所述牛家畜。24.权利要求16的方法，其中所述个体是绵羊，疫苗和所述组合物施用给所述绵羊。25.权利要求16的方法，其中所述个体是绵羊，所述组合物以每只动物每天约2克至约IO克的范围施用给所述绵羊。26.权利要求16的方法，其中所迷一个或多个接种疫苗的个体已经接种过疫苗，该疫苗刺激抗乳腺炎的抗体的产生。27.权利要求26的方法，其中所述疫苗是PHzerJ5疫苗。全文摘要本发明涉及加入到动物饲料中的组合物，其与疫苗组合使用以增强疫苗的功效。在其它效应中，所述组合物提高针对该疫苗的抗体的滴度。文档编号A61K31/715GK101466386SQ200780022219公开日2009年6月24日申请日期2007年4月19日优先权日2006年4月26日发明者N·E·福斯伯格,S·B·庞特尼申请人:奥姆尼根研究有限责任公司