促胰岛素肽缀合物制剂的制作方法

专利名称：促胰岛素肽缀合物制剂的制作方法
促胰岛素肽缀合物制剂本申请要求于2007年12月11日递交的美国临时申请号61/007,346、于2008年 2月15日递交的美国临时申请号61/029,295、和于2008年12月3日递交的美国临时申请 号61/200,879的优先权，每一个临时申请被整体通过引用并入本文。
1.发明领域本发明提供了包含促胰岛素肽缀合物的药物制剂及其施用方法。所述制剂可用 于治疗糖尿病或其它促胰岛素肽相关疾病。2.
背景技术：
2000年估计全世界所有年龄人群的糖尿病流行程度是2.8%或者1.71亿，而2030 年预计为 4.4%或 3.66 亿。参见 Wild 等，2004，Diabetes Care 27 (5) 1047-1053。仅 在美国，2005年糖尿病的流行程度估计为2080万或美国人口的7%。参见Centers for Disease Control and Prevention, 2005, National DiabetesFact Sheet General Information and National Estimates on Diabetes in theUnited States, 2005。所有糖尿病个体中大约 95%具有 II型疾病。糖尿病目前在美国是第五位导致死亡的主要原因，并与源于心血管疾病、肾 衰、失明和下肢截肢的过高发病率相关。与之类似，肥胖对世界人口的影响逐渐增加。据世界卫生组织估计1995年全世 界有2亿肥胖成人，另有1800万五岁以下儿童归为超重。到2000年，肥胖成人数已增至 超过 3 亿。参见 Formiguera 等，2004, Best Practice &Research Clinical Gastroenterology, 18 6， 1125-1146。促胰岛素肽已作为一种可能用来控制II型非胰岛素依赖性糖尿病以及相关代 谢紊乱如肥胖症的治疗剂进行研究。最近已经表明，促胰岛素肽与白蛋白缀合在体内 能够提供更长的持续作用时间，同时保持促胰岛素肽的低毒性和治疗优势。参见例如 Giannoukakis，Curr Opin Investig Drags.4 (10) 1245-9(2003)。此类药物产品制剂能够用 于提供稳定和持续的效果。因而，本领域需要包含促胰岛素肽缀合物的药物制剂。3.发明概述本发明提供了能够提供促胰岛素肽缀合物的稳定性和维持其生物活性的药物制 剂。本发明提供的药物制剂包括液体和冻干制剂、单位剂型和多次剂型、及其组合。所 述药物制剂能够适合于通过胃肠外途径如皮下、静脉内、肌肉内、经皮、动脉内、腹膜 内施用，或通过口服途径、表面途径或吸入途径施用。一方面，本发明提供了包含促胰岛素肽缀合物、缓冲液、张力调节剂、稳定 剂、表面活性剂和任选的防腐剂的药物制剂，其中所述制剂的pH约为3.0至8.0。在一 些实施方案中，所述制剂的pH约为4.0至8.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约 4.0至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约6.0至8.0。在一些实施方案中，所 述制剂的pH为约6.0至9.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.0至7.0。在一 些实施方案中，所述制剂的pH为约4.5至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约 5.0至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.1至6.0、约5.2至6.0、约5.3至6.0、约5.4至6.0、约5.5至6.0、约5.6至6.0、约5.7至6.0、或约5.8至6.0。在一些实 施方案中，所述制剂的 pH 为约 3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、
4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、 5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、 7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9 或 9.0。在具 体实施方案中，所述制剂的pH为约5.0。在另一具体实施方案中，所述制剂的pH为约 7.0。所述促胰岛素肽可以是本领域技术人员已知的任何促胰岛素肽。例如，其可以 是任何能够刺激激素胰岛素合成或表达或引起该刺激的肽。在一些实施方案中，所述促 胰岛素肽选自胰高血糖素样肽1、艾塞那肽-3(exendin-3)和艾塞那肽-4(exendin-4)， 以及它们的前体、衍生物或片段。在优选的实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽_4 或其衍生物。本发明描述了示例性的衍生物。所述促胰岛素肽缀合物可以是与白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛 素肽与人血清白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与重组人血清白蛋白缀
口 o另一方面，本发明提供了药物制剂，其包含浓度为约lmg/ml至约lOOmg/ml的 白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物；缓冲液；张力调节剂；稳定剂；表面活性 剂和任选的防腐剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。在优选的实施方案中，白蛋白与 艾塞那肽_4的缀合物是艾塞那肽-4(l-39)-Lys4°( e _AEEA_MPA)_NH2白蛋白缀合物。 术语“艾塞那肽-4(l-39)Lys4°(e-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物”是指通过使下式化
合物
HN
y
H V\\ O
His-Gly-Giu-Gly-Thr-Ph -Thr-Ser-Asp-Leu Ser Lys-Gfn-Met"Giu-Giu-Gfu-Ala-Val-Afg-Leu-Phe-lte~Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Giy-Giy-Pro-Ser-Ser-Giy-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser
H O(SEQ ID NO 35)与白蛋白共价键合制备的缀合物，其产生下式的缀合物
0H
HN 九0▽、。
JO
His-Giy-Glu-Gty-Thr-Phe-Hir-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-GIn- I -Glu-Aia-Val-^-g-Leu-Phe-lle-Glg-Trp-Leu-
H I!
Met-Glu-Glu-Glu-Aia-Val-^-g-Leu-Phe-lle-Glg-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser ,(SEQ ID NO 34),其中X是白蛋白半胱氨酸34的硫原子。本领域技术人员将会理解能够通过使白 蛋白半胱氨酸34侧链巯基共价连接[2-[2-[2_马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基] 乙酸接头，该接头再共价连接艾塞那肽-4(l-39)Lys4°-NH2羧基末端赖氨酸即赖氨酸40 的￡氨基，来形成艾塞那肽-4(1-39)Lys4°(￡-AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物。在一些实施方案中，所述药物制剂包含5_30mM磷酸钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml艾塞那肽_4 (1 -39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，所述 缓冲液的pH为6.5-7.5，还含有100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠禾口 l_30mg/L聚 山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含5-30mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ ml艾塞那肽-4(l-39)Lys4°( e _AEEA_MPA)_NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为 6.5-7.5，还含有100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠和l_30mg/L聚山梨醇酯80。在 具体实施方案中，所述制剂包含lOmM磷酸钠缓冲液中的川！！^/！^艾塞那肽^^钔 Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液还含有100_200mM氯化钠、 1-lOmM辛酸钠和l_30mg/L聚山梨醇酯80，其中所述制剂的pH为约5.0、5.1、5.2、 5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、 7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9 或 8.0。在具体实施方案中，所述制剂 包含1 OmM磷酸钠缓冲液中的1 Omg/ml艾塞那肽_4 (1 -39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2 白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为7.0，还含有100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠 和l-30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含lOmM磷酸钠缓冲液中 的10mg/ml艾塞那肽_4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的 pH为7.0，还含有135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实 施方案中，所述制剂由以下成分组成lOmM磷酸钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ ml艾塞那肽-4(l-39)Lys4°( e _AEEA_MPA)_NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为 7.0，还含有135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方 案中，所述制剂由以下成分组成10mM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(l-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为7.0，还含有135mM氯化 钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。 在一些实施方案中，所述药物制剂包含5-30mM醋酸钠缓冲液中的约lmg/ml至 约15mg/ml艾塞那肽_4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的 pH 为 4.5-5.5，还含有 l_15mM辛酸钠、0.05 至 0.2% (w/v)普朗尼克 F68 (pluronic F68)、 以及100-200mM氯化钠或2-8% (w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含 5-30mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽_4 (1-39) Lys4° ( e -AEEA-MPA) -NH2白蛋 白缀合物，所述缓冲液的pH为4.5-5.5，还含有l_15mM辛酸钠、0.05至0.2% (w/v)普朗 尼克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8% (w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制 剂包含lOmM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽_4 (1_39) Lys4° ( e -AEEA-MPA) -NH2 白蛋白缀合物，所述缓冲液还含有l_15mM辛酸钠、0.05至0.2% (w/v)普朗尼克F68、 以及100-200mM氯化钠或2-8% (w/v)山梨糖醇，其中所述制剂的pH为约4.5、4.6、 4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5。在具体实施方案中，所述制剂包含lOmM 醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽_4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合 物，所述缓冲液的pH为pH 5.0，还含有l_15mM辛酸钠、0.05至0.2% (w/v)普朗尼克 F68、以及100-200mM氯化钠或2-8% (w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂 包含lOmM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(l-39)Lys4°( e -AEEA-MPA) -NH2白 蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为5.0，还含有150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1% (w/ v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188(p0l0xamer 188))。在具体实施方案中，所述制剂 由以下成分组成lOmM醋酸钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml艾塞那肽_4(1_39)Lys40( e -AEEA-MPA)_NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为5.0，还含有150mM氯 化钠、5mM辛酸钠和0.1 % (w/v)普朗尼克F68 (即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案 中，所述制剂由以下成分组成lOmM醋酸钠缓冲液中的lOmg/ml艾塞那肽-4(1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液的pH为5.0，还含有150mM氯化 钠、5mM辛酸钠和0.1% (w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。另一方面，本发明提供了治疗糖尿病、肥胖症或可用促胰岛素肽治疗的其它疾 病或病症的方法，该其它疾病或病症例如前期糖尿病(例如，糖耐量受损(IGT)或空腹 血糖受损(IFG))；糖尿病，例如I型糖尿病；II型糖尿病；成人隐匿性自身免疫糖尿病 (“LADA”)，也称为成人迟发性自身免疫糖尿病；迟发性I型糖尿病；1.5型糖尿病； 类固醇诱发的糖尿病；人免疫缺陷病毒(HIV)治疗诱发的糖尿病；先天性或HIV相关脂 肪营养不良个体的糖尿病发展(“脂肪再分布综合症”)；肥胖症(即，BMI为30kg/ m2或更大)；超重(即，BMI为25kg/m2至30kg/m2)；代谢综合症(X综合症)；神经 系统紊乱；外科手术、胰岛素耐受；无知觉低血糖症；限制性肺疾病；胃肠紊乱，例如 肠易激综合症(IBS)、功能性消化不良；与胃肠紊乱相关的疼痛，例如与IBS和功能性消 化不良相关的疼痛；炎症性肠病(IBD)，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎；与IBD相关的 疼痛；高血糖症，例如与外科手术(例如，大的外科手术，例如冠状动脉搭桥术)相关的 高血糖症，例如与糖尿病(例如II型糖尿病)个体外科手术相关的高血糖症；代谢综合 症；冠状动脉心力衰竭(CHF)；与0细胞功能障碍相关的紊乱；与0细胞缺失相关的 紊乱；与0细胞数量不足相关的紊乱；或其它可用促胰岛素肽或促胰岛素肽缀合物治疗 的病症，所述方法包括向个体施用所述促胰岛素肽缀合物，例如本发明所述的药物制剂 之中的促胰岛素肽缀合物。另一方面，本发明提供了通过向个体施用有效量的促胰岛素肽缀合物，例如本 发明所述的药物制剂中的促胰岛素肽缀合物，并联合一种或多种第二治疗剂来治疗糖尿 病、肥胖症或其它可用促胰岛素肽治疗的紊乱的方法。在一些实施方案中，所述第二 治疗剂是抗糖尿病制剂。在一些实施方案中，所述抗糖尿病制剂是口服抗糖尿病制剂 (OAD)，例如双胍，例如二甲双胍。本发明还涵盖包含本发明的药物制剂和剂型的试剂盒。4.附图简述

图1显示了在25°C孵育6个月的制剂的SEC-HPLC时程纯度图。图2显示了在40°C孵育3个月的制剂的SEC-HPLC时程纯度图。图3显示了在25°C孵育6个月的制剂的RP-HPLC肽降解物图。图4显示了在40°C孵育3个月的制剂的RP-HPLC肽降解物图。图5显示了含醋酸钠缓冲液的制剂与含磷酸钠缓冲液的制剂在25 °C的 SEC-HPLC纯度比较。图6显示了含醋酸钠缓冲液的制剂与含磷酸钠缓冲液的制剂在25°C的RP-HPLC 肽降解物比较。图7显示了含醋酸钠缓冲液的制剂与含磷酸钠缓冲液的制剂在25°C孵育6个月后 的SDS-PAGE比较。图8显示了不同pH的制剂在25°C的SEC-HPLC纯度比较。
图9显示了不同pH的制剂在25°C的RP-HPLC肽降解物比较。图10显示了含不同张力调节剂、pH 5.0的制剂在25°C的SEC-HPLC纯度比较。图11显示了含不同张力调节剂、pH 5.0的制剂在25°C的RP-HPLC肽降解物比较。图12显示了含不同稳定剂、pH 6.0的制剂在25°C的SEC-HPLC纯度比较。图13显示了含不同稳定剂、pH 6.0的制剂在25°C的RP-HPLC肽降解物比较。图14显示了含不同浓度艾塞那肽-4(1_39)-Lys4°( e _AEEA_MPA)_NH2白蛋白 缀合物、pH 6的山梨糖醇制剂在25°C的SEC-HPLC纯度比较。图15显示了含不同浓度艾塞那肽-4(1_39)-Lys4°( e -AEEA-MPA)_NH2白蛋白 缀合物、pH 6的山梨糖醇制剂在25 °C的RP-HPLC纯度比较。图16 显示了含 10mg/ml 艾塞那肽 _4(1-39)-Lys40( e -AEEA-MPA)_NH2 白蛋白 缀合物、pH 5.0醋酸钠缓冲液、150mM氯化钠和5mM辛酸钠的制剂的SEC-HPLC纯度图。图17 显示了含 10mg/ml 艾塞那肽 _4(1-39)-Lys40( e -AEEA-MPA)_NH2 白蛋白 缀合物、pH 5.0磷酸钠缓冲液、150mM氯化钠和5mM辛酸钠的制剂的SEC-HPLC纯度图。图18 显示了含 10mg/ml 艾塞那肽 _4(1-39)-Lys40( e -AEEA-MPA)_NH2 白蛋白 缀合物、pH 5.0醋酸钠缓冲液、150mM氯化钠和5mM辛酸钠的制剂的RP-HPLC肽降解 物图。图19 显示了含 10mg/ml 艾塞那肽 _4(1-39)-Lys40( e -AEEA-MPA)_NH2 白蛋白 缀合物、pH 5.0磷酸钠缓冲液、150mM氯化钠和5mM辛酸钠的制剂的RP-HPLC肽降解 物图。5.优选实施方案的详细说明5.1 定义如本文所用，除非另有说明，以下术语应具有如下含义如本文所用，除非另有说明，“约”是指该术语所修饰数值上下不超过10%的 数值。例如，术语“约20mg/ml”表示ISmg/ml至22mg/ml的范围。在“约”用于 pH范围的情况下，例如“约pH5.0，该pH值在该术语所修饰pH上下不超过0.5。因 而，“约pH 5.0表示pH 4.5至5.5的范围。与之类似，“约pH7.0表示pH 6.5至pH 7.5 的范围。如本文所用，“个体”指动物，如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物(例 如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在优选的实施方案中，所述 个体是人。在某些实施方案中，所述个体是非人动物，例如非人动物如牛、绵羊、山羊 或马。所述个体可为雄性或雌性。如本文所用，“促胰岛素”表示具有促胰岛素活性，即刺激激素胰岛素合成或 表达或引起该刺激的能力。促胰岛素肽包括但不限于GLP-1、艾塞那肽_3、艾塞那 肽-4，以及肽例如GLP-1、艾塞那肽_3和艾塞那肽-4等肽和其它促胰岛素活性肽的前 体、衍生物或片段。“胰高血糖素样肽_1( “GLP-1)和“GLP-1衍生物”为肠道激素，它们一般在高血糖症期间刺激胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、刺激(促)胰岛素生物合成、以 及减慢胃排空和酸分泌速度。在一些实施方案中，胰高血糖素样肽是GLP-l(7-37)。在 一些实施方案中，胰高血糖素样肽是GLP-1 (7-36)。一些GLP和GLP衍生物，如本文 SEQ ID NO 3-15所述的那些，促进细胞对葡萄糖的吸收但并不刺激胰岛素的表达，如 美国专利号5,574,008中所公开的那样，其在此被全文通过参考引入本文。“艾塞那肽-3是天然存在的GLP-1激动剂，分离自墨西哥毒蜥即珠毒蜥 (Heloderma horridum)的唾液分泌物，并与哺乳动物GLP-1氨基酸序列有53%的重叠， 如美国专利号5,424,286中所公开的那样，其在此被全文通过参考引入本文。艾塞那肽_3 的氨基酸序列为 HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG PSSGAPPPS (SEQ ID NO 16)。“艾塞那肽-4是天然存在的GLP-1激动剂，分离自希拉毒蜥即钝尾毒蜥 (Heloderma suspectum)的唾液腺毒液，并与哺乳动物GLP-1氨基酸序列享有53%的重 叠，如美国专利号5,424,286中所公开的那样，其在此被全文通过参考引入本文。艾塞那 肽 _4 的氨基酸序列为 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ ID
NO 17)。艾塞那肽_4以葡萄糖依赖性的方式降低胰高血糖素、增加胰岛素分泌，并模 拟GLP-1的某些作用，包括结合并激活人GLP-1受体。艾塞那肽_4通过恢复第一阶段 胰岛素反应、调控胰高血糖素分泌、延迟胃排空和降低食物摄入，来降低空腹和餐后的 葡萄糖浓度，从而改善血糖控制。“反应基团”是能够形成共价键的化学基团。此类反应剂能够与感兴趣的促胰 岛素肽偶联或键合而形成经修饰的促胰岛素肽。反应基团一般是羧基、磷酰基或酰基， 作为酯或混合酸酐，或亚胺基化合物，由此能够与白蛋白靶位点上的官能团例如氨基、 羟基或巯基等形成共价键。一般来说，酯包括酚类化合物或者是硫酯、烷基酯、磷酸酯 等。反应基团包括琥珀酰亚胺基和马来酰亚胺基。“官能团”是白蛋白上能与修饰的促胰岛素肽的反应基团反应形成共价键的基 团。官能团包括与酯反应体键合的羟基；与马来酰亚胺和马来酰亚胺基、亚胺基化合物 及硫酯基团键合的巯基；以及与反应体的羧基、磷酰基或酰基键合的氨基。“连接基团”是能够用来使反应基团与促胰岛素肽连接的化学部分。连接基团 可包括一个或多个烷基如甲基、乙基、丙基、丁基等基团，烷氧基，烯基，炔基，或被 烷基取代的氨基，环烷基，多环基团，芳基，聚芳基，取代的芳基，杂环基，以及取代 的杂环基。连接基团还可以包括聚乙氧基氨基酸，例如AEA((2-氨基)乙氧基乙酸)或 优选的连接基团AEEA([2-(2-氨基)乙氧基)]乙氧基乙酸)。如本文所用，“白蛋白”是指血浆中最丰富的蛋白质，视来源物种而定，其单 体形式的分子量约65-67千道尔顿。术语“白蛋白”与“血清白蛋白”可互换使用， 但不意味着限制与本发明促胰岛素肽形成缀合物的白蛋白的来源。因而，如本文所用的 术语“白蛋白”可以指从天然来源如血液或浆液中纯化的白蛋白，或者可以指化学合成 的白蛋白，或通过重组技术生产的白蛋白。本文所述促胰岛素肽缀合物的示例形式的白 蛋白在下文5.5.5.1节提供。“促胰岛素肽缀合物”包含的促胰岛素肽已经借助促胰岛素肽和白蛋白官能团 之间形成的共价键而与白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽已经被修饰而含有与白蛋白共价键合的反应基团。在一些实施方案中，反应基团借助连接基团与促胰 岛素肽偶联。“稳定”制剂包括这样的制剂，其中的肽或肽缀合物经储存后基本上保留其物 理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性。本领域有多种分析技术可以测量蛋白质的 稳定性，并且例如在 Lee，V., 1991，Peptide and Protein DragDelivery, 247-301 (Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.)和 Jones，A.1993, Adv.Drag Deliery Rev.10 29-90 中综
述。可在选定的温度、选定的时段测量稳定性。优选制剂在室温(约25°C)或40°C保持 稳定至少1、2、3、4、5或6个月，和/或在约2-8°C保持稳定至少1、2、3、4、5或6 个月。此外，在某些实施方案中，所述制剂优选在冷冻后(例如，-70°C)稳定。在某些 实施方案中，稳定性标准如下(1)视觉分析制剂保持清亮；(2)制剂的浓度、pH和渗 透压摩尔浓度不超过约士 10%的变化；(3)通过SEC-HPLC测量，不超过约10%、更优 选不超过约5 %、或最优选不超过约1 %的聚集形式；和⑷通过SDS-PAGE或RP-HPLC 测量，不超过10%、更优选不超过约5%、或最优选不超过的肽或肽缀合物降解。如本文所用，“稳定剂”是实现如本文所定义的“稳定”的制剂。如果经色度和/或透明度视觉检查，或通过紫外光散射、或通过大小排阻层析 测量，显示出基本上无聚集、沉淀和/或变性迹象，则肽或肽缀合物在药物制剂中“保 留其物理稳定性”。例如，如果少于约10%、更优选少于约5%、或最优选少于约的 肽或肽缀合物在制剂中作为聚集物存在，则所述肽或肽缀合物在药物制剂中保留其物理 稳定性。如果在给定时间的化学稳定性使得肽如下文所定义的那样被视为保留其生物活 性，则所述肽或肽缀合物在药物制剂中“保留其化学稳定性”。化学稳定性可通过检测 和定量化学改变形式的肽来进行评估。化学改变可以包括大小修饰(例如，裁剪)，这 能够利用例如大小排阻层析、SDS-PAGE和/或基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱 (MALDI/TOFMS)来评价。其它类型的化学改变包括电荷改变(例如，由于脱酰胺作用 而发生)，这能够通过例如离子交换层析来评价。如果药物制剂中的肽对于其目的用途而言有生物活性，则肽或肽缀合物在药物 制剂中“保留其生物活性”。例如，如果药物制剂中肽的生物活性为药物制剂制备之时 所呈现的生物活性的至少约70%、至少约80%、或更优选地至少约90% (在测定误差范 围内)，则生物活性得以保留。具体肽的生物活性将是本领域技术人员公知的该肽的生物 活性。例如，GLP-1的生物活性包括但不限于在高血糖症期间刺激胰岛素分泌、抑制 胰高血糖素分泌、刺激(促)胰岛素生物合成、减慢胃排空和酸分泌速度、以及减小血糖 水平。如本文所用，“缓冲液”是缓冲溶液，其对抗pH变化，并通过其酸碱共轭组分 的作用而使溶液的pH值维持在可接受的范围。本发明的缓冲液pH范围为约4至约8 ； 优选约5至约7 ；且最优选pH范围约5至约6。在一些实施方案中，缓冲液的pH为约 3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、 4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、 6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9 或 8.0。 控制pH在此范围的缓冲液的实例包括醋酸盐(例如醋酸钠)、磷酸盐(例如磷酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡萄糖酸盐、组氨酸盐、柠檬酸盐及其它有机酸缓冲液。如本文所用，“张力调节剂”是指以合适的量使制剂等渗的化合物，包括例 如氯化钠、氯化钙、氯化镁、乳糖、山梨糖醇、蔗糖、甘露醇、海藻糖、棉子糖、聚乙 二醇、羟乙基淀粉、甘氨酸等。“等渗”表示目的制剂与人体血液具有基本上相同的渗 透压摩尔浓度。等渗制剂一般具有约250至350m0sm、优选约250至约330m0sm的渗 透压摩尔浓度。渗透压摩尔浓度可以利用例如蒸汽压或冰点渗透压计来测量。如本文所用，“表面活性剂”是指在溶液中溶解时减小液体和固体之间的界面 张力的化合物，其可以添加到制剂中以减少重构蛋白质的聚集，和/或减少重构制剂中 颗粒的形成。可用于本文所述制剂和方法的表面活性剂的实例包括聚山梨醇酯(例如聚 山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188 (普朗尼克F68)) ； Triton ；十二烷基硫 酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖酐钠；月桂基_、肉豆蔻基_、亚油基(linoleyl)-、 或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基_、肉豆蔻基_、亚油基_、或硬脂基-肌氨酸；亚油 基-、肉豆蔻基_、或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰胺丙基_、椰油酰胺丙基_、亚油酰胺丙 基_、肉豆蔻酰胺丙基_、棕榈酰胺丙基(palmidopropyl)-、或异硬脂酰胺丙基-甜菜 碱(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基_、棕榈酰胺丙基_、或异硬脂酰胺丙基-二 甲基胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油酰基牛磺酸二钠；以及MONAQUAT 系列 (Monalndustries, Inc., Paterson, N.J.)、聚乙二醇、聚丙烯醇、以及乙烯和丙二醇的共 聚物等。如本文所用，“防腐剂”是指能够添加到制剂中基本上减小其细菌活性的化 合物，从而利于生产例如多次制剂。潜在防腐剂的实例包括间甲酚、苄醇、甲醇、乙 醇、异丙醇、羟苯丁酯、羟苯乙酯、羟苯甲酯、苯酚、甘油、木糖醇、间苯二酚、邻苯 二酚、2，6-二甲基环己醇、2-甲基-2，4-戊二醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、2-氯 苯酚、苄索氯铵、硫柳汞(水杨乙汞)、苯甲酸(羟苯丙酯)MW 180.2、苯甲酸MW 122.12、苯扎氯铵、氯丁醇、苯甲酸钠、丙酸钠和西吡氯铵。如本文所用，“膨松剂”是指能够大量添加到冻干混合物中并形成冻干饼物理 结构的化合物(例如，利于生产基本上均一的、保持通孔结构的冻干饼)。示例性的膨松 剂包括甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和山梨醇。除了提供药学上可接受的的饼，膨松剂一 般还赋予冻干组合物有益的性质，例如调节塌陷温度、提供冻融保护、在长期储存过程 中进一步增强蛋白质稳定性，等等。这些制剂还可作为张力调节剂。如本文所用，“还原糖”含有半缩醛基，能够还原金属离子或与蛋白质中的赖 氨酸或其它氨基基团共价反应，而“非还原糖”不具有还原糖的这些性质。还原糖的 实例有果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄 糖。非还原糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖和棉子糖。优选如本文所述的冻干药 物制剂在没有还原糖的情况下、或仅在非还原糖的存在下冻干。如本文所用，“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的的材料、组合物或 溶媒体，适合于对哺乳动物、优选人类施用。所述载体包括液体或固体填充剂、稀释 剂、赋形剂、溶剂或封装材料，参与将目的制剂从一个器官或身体部位运载或输送至另 一器官或身体部位。在与制剂中的其它成分相容和对个体不过度有害(例如，致命)的 意义上，每种载体必须是“可接受的”。在优选的实施方案中，所述药学上可接受的的载体由政府管理机构例如美国食品药物管理局(FDA)或欧洲药品管理局(EMEA)批准对 人施用。“预防”任何疾病或紊乱是指减小染上该疾病或紊乱的风险(即，使有可能接触 或易感疾病、但尚未经历或表现出该疾病症状的个体不呈现疾病的至少一种临床症状)。 优选地，预防是指对尚未罹患疾病或紊乱、或者尚未呈现疾病或紊乱症状的个体应用所 述化合物或组合物，例如尚无糖尿病或尚未呈现糖尿病症状的个体。在一个实施方案中，“治疗”任何疾病或紊乱是指改善个体既有的疾病或紊乱 (即，阻止或减轻疾病或至少一种其临床症状的发展)。在另一实施方案中，“治疗”是 指改善至少一种物理参数，其可以是个体难以察觉的参数。而在另一实施方案中，“治 疗”是指在物理上(例如，使可察觉的症状稳定)或在生理上(例如，使物理参数稳定) 或两者兼而有之地调节疾病。如本文所用，就治疗而言，“有效量”表示当对个体施用以治疗疾病时，足以 治疗疾病的所述促胰岛素肽缀合物的量。其中，有效量可取决于所用的促胰岛素肽、疾 病及其严重度、以及待治疗个体的年龄、体重等而变化不等。5.2药物制剂本发明提供了促胰岛素肽缀合物的药物制剂。所述制剂可适合于经胃肠外途径 施用，例如皮下、静脉内、肌肉内、经皮、动脉内或腹膜内途径，或经其它途径施用， 如口服、局部或吸入途径。所述缀合物中的所述促胰岛素肽可以是本领域技术人员已知的任何促胰岛素 肽。其可以是任何能够刺激激素胰岛素合成或表达或引起该刺激的肽。在一些实施方案 中，所述促胰岛素肽选自胰高血糖素样肽1、艾塞那肽_3和艾塞那肽-4、以及它们的 前体、衍生物或片段。在某些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽_4或衍生物。下 文详细描述了示例性的衍生物。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述 促胰岛素肽与血清白蛋白缀合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与人血清白蛋白缀 合。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽与重组人血清白蛋白缀合。所述促胰岛素肽和 促胰岛素肽缀合物在下文5.5节详细描述。预期游离白蛋白可以存在于制剂中，浓度为约80、70、60、50、40、30、25、 20、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.1、0.05 或 O.Olmg/ ml。在某些实施方案中，存在的游离白蛋白少于约80、70、60、50、40、30、20、25、 15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.1、0.05 或 0.01mg/ml。
优选地，存在的游离白蛋白少于或等于约15mg/ml，更优选存在的游离白蛋白少于或等 于lOmg/ml，最优选少于5mg/ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋 白少于或等于10mg/ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或 等于lmg/ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或等于0.5mg/ ml。在一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或等于O.lmg/ml。在 一些实施方案中，本文所述制剂中存在的游离白蛋白少于或等于0.05mg/ml。本发明制剂中促胰岛素肽缀合物的实际剂量水平可以变化，以获得活性成分对 特定个体、组合物和施用方式有效而实现所期望的治疗反应，且对个体无毒的量。所选的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所采用的本发明特定组合物的活性，施 用途径，施用时间，所采用特定化合物的排泄率，治疗持续时间，与所采用的特定组合 物组合使用的其它药物、化合物和/或材料，所治疗个体的年龄、性别、体重、病症、 综合健康和过去病史，以及医学领域公知的类似因素。 在某些实施方案中，根据本发明的制剂适合于对需要的个体皮下施用促胰岛素 肽缀合物。在一些实施方案中，对个体施用约1000 i! g至3000 u g量的促胰岛素肽缀合
物剂量(例如，1025 iig、1050 iig、1075 ug、llOOu ,g、1125 u g-、1150iig、1175ug、1200u g、1225y g、1250u g、1275 ug、1300yg、1325 ug、1350 ug、1375 ug、1400ug、1425y g、1450ug、1475 ug、1500yg、1525 ug、1550 ug、1575 ug、1600ug、1625y g、1650u g、1675 ug、1700yg、1725 ug、1750 ug、1775 ug、1800u g、1825y g、1850u g、1875 Pg、1900yg、1925 ug、1950 ug、1975 ug、2000ug、2025y g、2050u g、2075 Pg、2100yg、2125 ug、2150 ug、2175 ug、2200u g、2225y g、2250u g、2275 Pg、2300yg、2325 ug、2350 ug、2375 ug、2400ug、2425y g、2450u g、2475 Pg、2500yg、2525 ug、2550 ug、2575 ug、2600u g、2625y g、2650u g、2675 Pg、2700yg、2725 ug、2750 ug、2775 ug、2800 ii g、2825 PLg、2850 i!g、2875 u g>2900 u g、2925u g> 2950u g 或2975 ug),优选约 1000 iig 至 2750 iig(例如，1025 ug、 1050ug、 1075u g、1100 iig、1125 ug、1150ug、1175ug、1200ug、1225 ug、1250 ug、1275 ug、1300 ug、1325 ug、1350u g、1375y g、1400u g、1425 ug、1450ug、1475 ug、1500 ug、1525 ug、1550ug、1575y g、1600ug、1625 Pg、1650yg、1675 ug、1700 ug、1725 ug、1750u g、1775y g、1800u g、1825 Pg、1850yg、1875 ug、1900 ug、1925 ug、1950ug、1975^ g、2000ug、2025 ug、2050ug、2075 ug、2100 ug、2125 ug、2150u g、2175y g、2200u g、2225 Pg、2250yg、2275 ug、2300 ug、2325 ug、2350 iig、2375y g、2400ug、2425 ug、2450yg、2475 ug、2500 ug、2525 ug、2550 ii g、2575 ii g、2600u g>2625 u g、2650ug、2675P g、2700 u g或2725u g)，
更优选约 1000-2500 i!g(例如，1025 ug, 1050 u g, 1075 u g, 1100 yg、1125 iig、 1150 u g, 1175 u g> 1200 iig、1225 yg、1250 u g> 1275 u g, 1300 u g, 1325 u g, 1350 u g, 1375 iig、1400 u g> 1425 u g、1450 u g> 1475 u g, 1500 u g, 1525 u g, 1550 u g, 1575 u g> 1600 iig、1625 P g、1650 u g> 1675 u g, 1700 u g, 1725 u g, 1750 u g, 1775 iig、1800 u g> 1825 u g、1850 u g> 1875 u g, 1900 u g, 1925 u g, 1950 u g, 1975 u g> 2000 iig、2025 y g、2050 u g> 2075 u g, 2100 u g, 2125 u g, 2150 u g, 2175 iig、2200 iig、2225 u g、2250 u g> 2275 u g, 2300 u g, 2325 u g, 2350 u g、2375 u g、2400 u g、2425 u g、2450 y g 或 2475 y g)，最优选约 1000 y g 至 2000 iig(例如，1025 iig、1050 u g, 1075 u g, 1100 u g, 1125 iig、1150 iig、1175 iig、 1200 u g, 1225 u g> 1250 u g> 1275 u g> 1300 u g> 1325 u g, 1350 u g, 1375 u g, 1400 u g> 1425 iig、1450 u g> 1475 u g、1500 u g> 1525 u g> 1550 u g> 1575 u g> 1600 u g> 1625 u g> 1650 u g> 1675 P g> 1700 u g> 1725 u g> 1750 u g> 1775 u g> 1800 u g, 1825 u g, 1850 u g, 1875 u g, 1900 u g> 1925 u g> 1950 y g 或 1975 ii g)促胰 岛素肽缀合物。
在一些实施方案中，可以有效治疗本文所述特定个体的疾病或病症的促胰岛素 肽缀合物例如促胰岛素肽缀合物制剂的剂量按照每周施用方案对个体施用。从而，在某 些实施方案中，个体可以施用周总剂量的促胰岛素肽缀合物，为期数周，以实现期望的 治疗反应。在某些实施方案中，周总剂量在周内以单次施用的形式施用，即每周一次， 且周总剂量包括1000 yg或1500 yg量的促胰岛素肽缀合物。在某些实施方案中，周总 剂量每周一次施用，且剂量包括2000 u g量的促胰岛素肽缀合物。在某些实施方案中，周总剂量在周内分两次施用，即一周两次，且每次施用包 括1000 iig量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量2000 iig。在某些实施方案中，周 总剂量每周两次施用，且每次施用包括15001； g量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量 3000 ugo在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1600 yg量的促 胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3200 yg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用， 且每次施用包括1700 u g量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3400 u g。在某些实施 方案中，周总剂量每周两次施用，且第一次施用包括1500 yg量的促胰岛素肽缀合物， 而第二次施用包括2000 u g量的促胰岛素肽，总计周总剂量3500 u g。在某些实施方案 中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1750 yg量的促胰岛素肽缀合物，总计周 总剂量3500 yg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括1800 yg 量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量3600 yg。在某些实施方案中，周总剂量每周两次 施用，且每次施用包括19001； g量的促胰岛素肽缀合物，总计周总剂量38001； g。在某 些实施方案中，周总剂量每周两次施用，且每次施用包括2000 yg量的促胰岛素肽缀合 物，总计周总剂量4000 iig。在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可 以每8、9、10、11、12或13天施用一次。在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物， 例如促胰岛素肽缀合物制剂，可以每3、4、5、6、7或8天周期施用两次。在其它实施 方案中，所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可以每9、10、11、12、 13或14天周期施用两次。在一些实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物(无游离白蛋白)的浓度为 约 0.1mg/ml 至约 100mg/ml、约 O.lmg/ml 至约 75mg/ml、约 O.lmg/ml 至约 50mg/ml、 约 O.lmg/ml 至约 40mg/ml、约 O.lmg/ml 至约 30mg/ml、约 lmg/ml 至约 100mg/ml、约 5mg/ml至约50mg/ml、或约10mg/ml to 20mg/mL 在一些实施方案中，所述制剂中促 胰岛素肽缀合物的浓度高于约10mg/ml、约20mg/ml、约50mg/ml、约100mg/ml、约 200mg/mL或约500mg/ml。在一些实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度 低于约 100mg/ml、约 50mg/ml、约 40mg/ml、约 30mg/ml、约 20mg/ml、约 10mg/ml、 约5mg/ml、约lmg/ml、或约O.lmg/ml。在优选实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀 合物的浓度为约lmg/ml至约50mg/ml、约lmg/ml至约40mg/ml、约lmg/ml至约20mg/ ml、或约1至约15mg/ml。在特别优选的实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的 浓度为约lmg/ml。在其它特别优选的实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度 为约2.5mg/ml。在其它特别优选的实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度为 约5mg/ml。在其它特别优选的实施方案中，所述制剂中促胰岛素肽缀合物的浓度为约 10mg/mlo
在某些实施方案中，本文的制剂可作为单药治疗施用。换言之，可提供本文的 制剂作为活性剂的单独施用，来治疗本发明提供的一种或多种病症。本文的制剂还可以组合或包含一种或多种可用于所治疗的具体适应症的第二治 疗剂而施用，优选具有补充活性、不会不利地影响制剂中促胰岛素肽缀合物的那些第二 治疗剂。在某些实施方案中，此类第二治疗剂可以以目的用途有效的量与促胰岛素肽缀 合物一起存在。在具体实施方案中，所述第二治疗剂是抗糖尿病药，例如口服抗糖尿病 药，例如，双胍，如二甲双胍。所述药物制剂可以包含维持生理适宜pH的缓冲液。另外，缓冲液可以增强所 述制剂的等渗和化学稳定性。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约3.0至8.0。在一 些实施方案中，所述制剂的pH为约4.0至8.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约 4.0至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约6.0至8.0。在一些实施方案中，所 述制剂的pH为约6.0至9.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.0至7.0。在一 些实施方案中，所述制剂的pH为约4.5至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约 5.0至6.0。在一些实施方案中，所述制剂的pH为约5.1至6.0、约5.2至6.0、约5.3至
6.0、约5.4至6.0、约5.5至6.0、约5.6至6.0、约5.7至6.0、或约5.8至6.0。在一些实 施方案中，所述制剂的 pH 为约 3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、
4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、 5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、 7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9 或 9.0。在具 体实施方案中，所述制剂的pH为约5.0。在另一具体实施方案中，所述制剂的pH为约 7.0。pH可根据需要通过本领域已知的技术来调节。例如，可根据需要添加盐酸或氢氧 化钠以调节pH至期望的水平。本发明制剂中的有用的缓冲液包括但不限于醋酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、组 氨酸盐、三(三(羟甲基)氨基甲烷)、二乙醇胺、柠檬酸盐、其它有机酸及其混合物。 所述制剂可进一步包含任何认为适宜的反离子，例如钠或钙离子。在优选的实施方案 中，缓冲液是醋酸盐缓冲液(例如醋酸钠缓冲液)。在另一优选的实施方案中，缓冲液是 磷酸盐缓冲液(例如磷酸钠缓冲液)。缓冲液以足以维持适宜pH的量存在。在一些实施方案中，所述制剂中存在的 缓冲液约O.lmM至约lOOmM、约O.lmM至约50mM、约O.lmM至约30mM、约O.lmM 至约25mM、约O.lmM至约20mM、或约5mM至约15mM。在某些实施方案中，缓冲 液为约 5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、llmM、12mM、13mM、14mM、或 15mM。在一些实施方案中，所述缓冲液是约lOmM的醋酸钠缓冲液或磷酸钠缓冲液。所述制剂可包含张力调节剂，其帮助维持制剂的等渗性。在一些实施方案中， 所述制剂是等渗的，即该制剂具有与血浆相同或大致相同的渗透压。等渗制剂一般渗透 压为约250至350m0sm，优选约250至约330m0sm。在一些实施方案中，所述制剂是 高渗的。在一些实施方案中，所述制剂是低渗的。所述张力调节剂可以是对技术人员显而易见的任何张力调节剂，例如盐、糖、 糖醇、多元醇或氨基酸。示例性的张力调节剂包括但不限于盐，例如氯化钠、氯化钙 或氯化镁；糖或多元醇，例如乳糖、山梨糖醇、蔗糖、甘露醇、海藻糖、棉子糖、聚乙二醇、羟乙基淀粉、甘氨酸及其混合物。在一些优选的实施方案中，所述张力调节剂是 氯化钠。在其它优选的实施方案中，所述张力调节剂是山梨糖醇。在某些实施方案中， 混合的张力调节剂产生如上所述等渗的总渗透压。当制剂为冻干制剂时，优选盐或非还原糖作为张力调节剂。“非还原糖”不含 能够还原金属离子或与蛋白质中的赖氨酸及其它氨基基团共价反应的半缩醛基。非还原 糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖和棉子糖。非还原糖能够防止或降低蛋白质在冻 干和随后储存时的化学和/或物理不稳定性。所述张力调节剂在所述制剂中以维持该制剂所期望的等渗性的量存在。在一些 实施方案中，张力调节剂以约0.1%至约50% (w/v) >约0.5%至约20% (w/v) >约 至约10% (w/v) >或约4%至约6% (w/v)存在。在一些实施方案中，张力调节剂以约 5%(w/V)存在。在一些实施方案中，张力调节剂以至少ImM的浓度存在。在一些实 施方案中，张力调节剂以约ImM至约200mM、约10mM至约150mM、或约50mM至约 lOOmM存在。在一些优选的实施方案中，所述制剂包含约135mM氯化钠。在其它优选 的实施方案中，所述制剂包含约150mM氯化钠。在其它优选的实施方案中，所述制剂包 含约5%山梨糖醇(w/v)。所述制剂还可包含稳定剂，以便在储存温度波动期间稳定所述缀合物，并使产 物的降解、肽降解物和聚集最小化。本发明制剂中有用的稳定剂包括但不限于辛酸 钠、Na-N-乙酰色氨酸、H-谷氨酸、精氨酸、氮及其混合物。在优选实施方案中，稳 定剂是辛酸钠。在某些实施方案中，在所述制剂中存在的稳定剂为约O.lmM至30mM、约 0.5mM至20mM、约ImM至约15mM、或约5mM至约10mM。在某些实施方案中，在 所述制剂中存在的稳定剂为约ImM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、 9mM、10mM、llmM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、 19mM或20mM。在优选实施方案中，所述稳定剂是约5mM的辛酸钠。所述制剂还可包含表面活性剂。表面活性剂是在溶液中溶解时减小液体和固体 之间界面张力的化合物，并可以添加到制剂中以减小重构蛋白质的聚集，和/或减小重 构制剂中颗粒的形成。示例性的表面活性剂包括聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)； 泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188(普朗尼克F68)) ； Triton ；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基 硫酸钠；辛基糖酐钠；月桂基_、肉豆蔻基_、亚油基_、或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂 基-、肉豆蔻基_、亚油基_、或硬脂基-肌氨酸；亚油基_、肉豆蔻基_、或鲸蜡基-甜 菜碱；月桂酰胺丙基_、椰油酰胺丙基_、亚油酰胺丙基_、肉豆蔻酰胺丙基_、棕榈酰胺 丙基_、或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基_、棕榈酰 胺丙基_、或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油酰基牛磺酸二 钠；以及 MONAQUAT 系列(Mona Industries，Inc., Paterson, N.J.)、聚乙二醇、聚丙 烯醇、以及乙烯和丙二醇的共聚物等。表面活性剂是这样的量，其减小所配制肽或肽缀合物的聚集，和/或最小化制 剂中颗粒的形成，和/或减小吸附作用。例如，制剂中存在的表面活性剂的量可以为约 0.001-1% (w/v),优选约0.01-0.5% (w/v) o在一些实施方案中，所述制剂包含的表面 活性剂为泊洛沙姆。在一些实施方案中，所述制剂包含普朗尼克F68。在具体实施方案中，所述制剂包含约0.01% (w/v)至约(w/v)普朗尼克F68，更优选约0.1% (w/v) 普朗尼克F68。在某些实施方案中，所述制剂包含上述试剂(即促胰岛素肽缀合物、缓冲液、 张力调节剂和表面活性剂)，而不含一种或多种防腐剂，例如苄醇、苯酚、间甲酚、氯丁 醇和苄索氯铵。在其它实施方案中，制剂之中可包括防腐剂，尤其是制剂为多次制剂的 情况下。示例性的防腐剂包括但不限于间甲酚、苄醇、甲醇、乙醇、异丙醇、羟苯丁 酯、羟苯乙酯、羟苯甲酯、苯酚、甘油、木糖醇、间苯二酚、邻苯二酚、2，6-二甲基环 己醇、2-甲基-2，4-戊二醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、2-氯苯酚、苄索氯铵、硫柳汞 (水杨乙汞)、苯甲酸(羟苯丙酯)MW 180.2、苯甲酸MW 122.12、苯扎氯铵、氯丁醇、 苯甲酸钠、丙酸钠和西吡氯铵。任何这些防腐剂可作为单独的防腐剂或彼此组合而用在 本文公开的制剂之中。在优选实施方案中，使用与所述制剂的缓冲液或其它组分相容(即溶液清亮) 的防腐剂。当缓冲液是醋酸钠或磷酸钠时，相容的防腐剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、甘 油、间苯二酚、2-甲基-2，4-戊二醇、硫柳汞(水杨乙汞)、苯扎氯铵、苯甲酸钠、西 吡氯铵。所述制剂中使用的防腐剂的浓度可根据本领域技术人员的判断来确定。在一些 实施方案中，制剂之中存在约0.005-10% (w/v)、约0.1-1.0% (w/v)、或约0.3-0.7% (w/ v)的防腐剂。在一些实施方案中，制剂之中存在约0.005、0.1、0.3、0.5、0.7、或1.0% (w/v)的防腐剂。膨松剂可包含在冻干制剂之中，以利于生产基本上均一的、保持通孔结构的冻 干饼。示例性的膨松剂包括甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和山梨醇。膨松剂还可作为张力 调节剂。一种或多种其它药学上可接受的的载体、赋形剂或稳定剂，例如Remington' s Pharmaceutical Sciences第19版Genarro，A.编辑(1995)中所述的那些，可以包含在制剂
之中，只要它们不会显著不利地影响该制剂所期望的特性。本发明制剂的其它构成要素 可包括水，例如注射用水、植物油、增稠剂例如甲基纤维素抗吸附剂、润湿剂、抗氧化 剂包括抗坏血酸和甲硫氨酸、螯合剂如EDTA、金属配合物(例如Zn-蛋白质配合物)、 生物可降解聚合物例如聚酯、和/或成盐反粒子例如钠离子等。可接受的载体、赋形剂 或稳定剂存在的量是其在所采用的剂量和浓度下对个体无毒的量。根据本发明的最佳制剂可根据诸如制剂储存的时间长短、制剂储存和使用的条 件、施用制剂的具体个体群等因素而不同。在某些实施方案中，本文所述的制剂可包含在小瓶、瓶、管、注射器或其它容 器中用于单次或多次施用。此类容器可例如由玻璃或聚合材料如聚丙烯、聚乙烯、聚氯 乙烯或聚烯烃制成。在一些实施方案中，所述容器可包括封盖或其它封闭系统，例如橡 胶塞，其可被针头穿透以抽取单次剂量，而随针头取出后重新密封。所有此类本领域已 知的用于注射可注射液体、冻干制剂、重构的冻干制剂或重构的粉剂的容器均可被用于 本文公开的制剂和方法。在具体实施方案中，所述容器是笔式递药器械，包括单次剂量 或多次剂量。这样的笔式递药器械可以是永久性的，例如装有含单次剂量或多次剂量的 一次性内管的永久性笔，或者整个器械可以是一次性的，例如含有单次剂量或多次剂量的一次性笔。在某些实施方案中，在笔式递药器械包含多次剂量的情况下，剂量可以是 预设的，即固定的。在其它实施方案中，剂量可以是可变剂量，即由使用者拨入。在一 些实施方案中，笔式递药器械包括锁紧套口、锁紧锥口或其它针头连接接头，以帮助连 接一次性针头。在其它实施方案中，笔式递药器械包括永久的，即永久性针头。在另一 具体实施方案中，所述容器是注射器。在一些实施方案中，所述注射器包括锁紧套口、 锁紧锥口或其它针头连接接头，以帮助连接一次性针头。在其它实施方案中，所述注射 器包括永久的，即永久性针头。在一些实施方案中，所述注射器预装填有单次剂量或多 次剂量。本发明提供的制剂可以配制为多种浓度、不同药瓶大小而用于多种施用剂量。 例如，剂量可配制在0.25、0.5、1或2ml药瓶中、或任何其它大小的药瓶中、或本领域技 术人员已知的其它容器中。用于体内施用的制剂必需消毒。这可在制备制剂之前或之后通过无菌过滤膜过 滤而容易地实现。可选地，整个制剂的消毒可通过对除蛋白质之外的成分高压灭菌而实 现，例如约120°C高压灭菌约30分钟。在某些实施方案中，本发明提供了药物制剂，其包含浓度约lmg/ml至约 lOOmg/ml的白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物；缓冲液；张力调节剂；稳定 剂；表面活性剂和任选的防腐剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。在某些实施方案中，药物制剂包含或可选地由以下成分组成白蛋白和促胰岛 素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有的序列相对于天然艾塞那肽_4序列具有不超过3个 氨基酸的取代、缺失或插入，所述缀合物的浓度为约lmg/ml至约lOOmg/ml;缓冲液； 张力调节剂，其中张力调节剂的浓度为至少ImM;稳定剂；和表面活性剂，其中所述制 剂的pH为约4.0至约8.0。在某些实施方案中，艾塞那肽_4白蛋白缀合物含有与艾塞那肽-4(1-39) Lys4°-NH2羧基末端赖氨酸￡氨基上的[2-[2-[2_马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧 基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基。这样的缀合物可通过使所 述接头与白蛋白的半胱氨酸34巯基共价键合而形成。在一些实施方案中，艾塞那肽_4 白蛋白缀合物浓度为约10mg/ml至20mg/ml。在一些实施方案中，缓冲液是醋酸钠或磷 酸钠缓冲液或其混合物，pH约5.0至6.0。在一些实施方案中，张力调节剂是氯化钠或 山梨糖醇。在一些实施方案中，稳定剂是辛酸钠。在一些实施方案中，表面活性剂是普 朗尼克F68。在某些实施方案中，所述药物制剂包含或可选地由以下组成5_30mM磷酸 钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 6.5-7.5，所述缓冲液含 100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠和l_30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中， 所述制剂包含或可选地由以下组成5-30mM磷酸钠缓冲液中的lOmg/ml促胰岛素肽缀 合物，pH 6.5-7.5，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠和l_30mg/L聚 山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成lOmM磷酸钠缓 冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、l_10mM辛酸 钠和l-30mg/L聚山梨醇酯80，其中所述制剂的pH为约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、 5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由 以下组成lOmM磷酸钠缓冲液中的lOmg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含 100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠和l_30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中， 所述制剂包含或可选地由以下组成lOmM磷酸钠缓冲液中的lOmg/ml促胰岛素肽缀合 物，pH7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在优选的实施方案中，所述药物制剂包含或可选地由以下组成5_30mM磷酸 钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml艾塞那肽_4 (1_39) Lys4° ( e -AEEA-MPA) _NH2白 蛋白缀合物，pH 6.5-7.5，所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠和l_30mg/ L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成5-30mM磷 酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽-4(l-39)Lys4°( e _AEEA_MPA) _NH2白蛋白缀合物， pH6.5-7.5,所述缓冲液含100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠和l_30mg/L聚山梨醇 酯80。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成lOmM磷酸钠缓冲液 中的10mg/ml艾塞那肽_4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，所述缓冲 液含100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠和l_30mg/L聚山梨醇酯80，其中所述制剂 的 pH 为约 5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、 6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9 或 8.0。在 具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成lOmM磷酸钠缓冲液中的lOmg/ ml艾塞那肽_4(1-39)Lys40( e -AEEA-MPA)_NH2白蛋白缀合物，pH 7.0，所述缓冲液 含100-200mM氯化钠、1-lOmM辛酸钠和l_30mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方 案中，所述制剂包含或可选地由以下组成lOmM磷酸钠缓冲液中的lOmg/ml艾塞那 肽-4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含135mM氯 化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成lOmM磷酸钠缓冲液中的约lmg/ml 至约15mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠 和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成lOmM磷酸钠缓 冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml白蛋白与艾塞那肽_4或其衍生物的缀合物，pH 7.0， 所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方 案中，所述制剂由以下组成lOmM磷酸钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml艾塞那 肽-4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，pH 7.0，所述缓冲液含135mM氯 化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇酯80。在具体实施方案中，所述制剂由以下组 成lOmM磷酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽_4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白 蛋白缀合物，pH7.0，所述缓冲液含135mM氯化钠、1.6mM辛酸钠和15mg/L聚山梨醇 酯80。在某些实施方案中，所述药物制剂包含或可选地由以下组成5-30mM醋酸 钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 4.5-5.5，所述缓冲液含 l-15mM辛酸钠、0.05至0.2% (w/v)普朗尼克F68、以及100_200mM氯化钠或2_8 % (w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成5-30mM醋 酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 4.5-5.5，所述缓冲液含l_15mM辛酸 钠、0.05至0.2% (w/v)普朗尼克F68、以及100_200mM氯化钠或2-8% (w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成10mM醋酸钠缓冲液中的 10mg/ml促胰岛素肽缀合物，所述缓冲液含l_15mM辛酸钠、0.05至0.2% (w/v)普朗尼 克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8% (w/v)山梨糖醇，其中所述制剂的pH为约4.5、 4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5。在具体实施方案中，所述制剂包含 或可选地由以下组成lOmM醋酸钠缓冲液中的lOmg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 5.0，所 述缓冲液含l_15mM辛酸钠、0.05至0.2% (w/v)普朗尼克F68、以及100_200mM氯化 钠或2-8% (w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成 10mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH 5.0，所述缓冲液含150mM氯 化钠、5mM辛酸钠和0.1% (w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。在优选的实施方案中，所述药物制剂包含或可选地由以下组成5_30mM醋酸 钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml艾塞那肽_4 (1_39) Lys4° ( e -AEEA-MPA) _NH2白 蛋白缀合物，pH 4.5-5.5,所述缓冲液含l_15mM辛酸钠、0.05至0.2 % (w/v)普朗尼 克F68、以及100-200mM氯化钠或2-8% (w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述 制剂包含或可选地由以下组成5-30mM醋酸钠缓冲液中的10mg/ml艾塞那肽_4(1_39) Lys40( e -AEEA-MPA)_NH2白蛋白缀合物，pH 4.5-5.5，所述缓冲液含l_15mM辛酸钠、 0.05至0.2% (w/v)普朗尼克F68、以及100_200mM氯化钠或2_8% (w/v)山梨糖醇。在 具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成lOmM醋酸钠缓冲液中的lOmg/ ml艾塞那肽_4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2白蛋白缀合物，所述缓冲液含l_15mM 辛酸钠、0.05至0.2% (w/v)普朗尼克F68、以及100_200mM氯化钠或2-8% (w/v)山 梨糖醇，其中所述制剂的 pH 为约 4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4 或 5.5。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成lOmM醋酸钠缓冲液中 的 1 Omg/ml 艾塞那肽 _4 (1 -39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2 白蛋白缀合物，pH 5.0，所 述缓冲液含l_15mM辛酸钠、0.05至0.2% (w/v)普朗尼克F68、以及100_200mM氯化 钠或2-8% (w/v)山梨糖醇。在具体实施方案中，所述制剂包含或可选地由以下组成 lOmM醋酸钠缓冲液中的1 Omg/ml艾塞那肽_4 (1-39)Lys4° ( e -AEEA-MPA) -NH2白蛋 白缀合物，pH5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1% (w/v)普朗尼克 F68(即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成lOmM醋酸钠缓冲液中的约lmg/ml 至约15mg/ml促胰岛素肽缀合物，pH5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠 和0.1% (w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案中，所述制剂由以下 组成lOmM醋酸钠缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml白蛋白与艾塞那肽_4或其衍生 物的缀合物，pH5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1 % (w/v)普朗尼 克F68(即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成lOmM醋酸钠 缓冲液中的约lmg/ml至约15mg/ml艾塞那肽_4 (1_39) Lys4° ( e -AEEA-MPA) -NH2白蛋 白缀合物，pH5.0，所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1% (w/v)普朗尼克 F68(即，泊洛沙姆188)。在具体实施方案中，所述制剂由以下组成lOmM醋酸钠缓冲 液中的 10mg/ml 艾塞那肽 _4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2 白蛋白缀合物，pH 5.0， 所述缓冲液含150mM氯化钠、5mM辛酸钠和0.1% (w/v)普朗尼克F68(即，泊洛沙姆 188)。
本发明提供的药物制剂可以是本领域技术人员认为有用的任何形式。例如，其 可以为液体或冻干制剂的形式、单位剂型或多次剂型或其组合。因而，所述制剂包括液 体单位剂型、液体多次剂型、冻干单位剂型以及冻干多次剂型。在一些实施方案中，所述制剂是液体制剂。在其它实施方案中，所述制剂是冻 干制剂。冻干是为保存蛋白质而通常采用的技术，作用是从目的肽制品中除去水分。赋 形剂可以包含在冻干前的制剂中，以增强冷冻干燥过程期间的稳定性，和/或提高冻干 产品储存时的稳定性。参见 Pikal，M.1990, Biopharm.3 (9) 26-30 和 Arakawa 等 1991， Pharm.Res.8 (3) 285-291。冻干制剂可按照本领域技术人员的判断进行重构。在优选实施方案中，提供了 冻干制剂，当对之用例如注射用水重构时，得到本发明所述的液体制剂之一。本发明还 提供了重构促胰岛素肽缀合物冻干制剂的方法，包括提供冻干制剂，并重构冻干制剂以 形成本发明所述的促胰岛素肽缀合物制剂。在期望的阶段，一般是向个体施用肽时，可以用稀释剂重构冻干制剂，从而使 重构的制剂中的蛋白质浓度至少为1、2、3、4、5、10、20、30、40、50mg/ml。在一些 实施方案中，重构的制剂中的蛋白质浓度为约lmg/ml至约100mg/ml、约lmg/ml至约 50mg/ml、或约lmg/ml至约15mg/ml。在具体实施方案中，可以用稀释剂重构冻干制 剂，从而使重构的制剂中的蛋白质浓度为约45-55mg/ml。在优选实施方案中，可以用稀 释剂重构冻干制剂，从而使重构的制剂中的蛋白质浓度为约50mg/ml。稀释剂可以是技 术人员认为适宜的任何稀释剂，例如注射用水等等。本发明提供的药物制剂既包括单位剂型，又包括多次剂型。在一些实施方案 中，所述制剂是单位剂型。“单位剂型”是指个体单次施用量的药物制剂的包装形 式。在一些实施方案中，所述制剂是单位剂型。在某些实施方案中，单位剂型含有约 O.Ol-lOOmg、0.1-50mg、l_10mg、或l_5mg促胰岛素肽缀合物。在具体实施方案中， 单位剂型含有约1、2、3、4、5、7.5、10、20、30、40、50、75、lOOmg促胰岛素肽缀 合。这样的单位剂型可按照本领域技术人员已知的技术制备。在一些实施方案中，所述制剂为多次剂型。多次剂型可以有利于个体方便地使 用，能够完全使用药瓶内含物而减小浪费，且对于生产商而言能够显著节约成本。多 次药物制剂可盛装在多剂量容器内，例如小瓶、安瓿瓶等，其允许多次抽取部分量的制 剂。如上文详细说明的那样，多次制剂中可存在与制剂中的缓冲液相容的一种或多种防 腐剂。优选本发明的制剂是稳定的。在一些实施方案中，所述制剂在约4°C的温度下 稳定至少约 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、
20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36个月或 36 个 月以上。在其它实施方案中，所述制剂在约25°C的温度下稳定至少约1、2或3周，或 至少约 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、
21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36个月或 36 个月以 上。在其它实施方案中，所述制剂在约40°C的温度下稳定至少约1、2或3周，或至少 约 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、
22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36个月或 36 个月以上。
5.2.1药物制剂的制备本发明提供的制剂可通过对本领域技术人员显而易见的任何技术来制备。在某 些实施方案中，所述制剂可通过在适于制备制剂的条件下使所述促胰岛素肽缀合物与制 剂的其它组分接触来制备。例如，所述促胰岛素肽缀合物可与其它组分一起混合，与其 它组分一起透析，与其它组分一起渗滤，或通过对本领域技术人员显而易见的任何技术 与其它组分接触。所述促胰岛素肽缀合物可通过对本领域技术人员显而易见的任何技术 来制备。本文描述了示例性的技术。所述促胰岛素肽缀合物可按照本领域技术人员认为 适宜的任何方法来纯化。本文描述了示例性的方法。本发明制剂的促胰岛素肽缀合物可在配制成期望的制剂组合物之前，按照本领 域已知的任何纯化方法进行纯化。在一些实施方案中，所述缀合物通过疏水相互作用层 析(HIC)纯化。HIC可以是技术人员已知的任何HIC技术。在某些实施方案中，所述 缀合物可通过两次HIC纯化进行纯化，例如相继进行的两次HIC纯化。在一个实施方案中，第一次纯化步骤包括使所述促胰岛素肽缀合物与苯基琼脂 糖凝胶(即与苯基共价偶联的、基于球状琼脂糖的凝胶过滤基质)接触。在某些实施方 案中，这个步骤从游离或缀合的白蛋白物质中分离出未缀合的促胰岛素肽。在某些实施 方案中，苯基琼脂糖凝胶用含有5mM辛酸钠和5mM硫酸铵、pH 6.0的磷酸盐缓冲液平 衡。在这些条件下，未缀合的化合物能够结合苯基琼脂糖凝胶，而缀合物能够流出苯基 琼脂糖凝胶。然后可以收集缀合物作为留出级分，用于进一步的纯化。在某些实施方案中，缀合物的纯化还包括第二 HIC步骤，其中苯基琼脂糖凝胶 流出物与丁基琼脂糖凝胶(即与丁基共价偶联的、基于球状琼脂糖的凝胶过滤基质)接 触，以从未缀合的白蛋白、二聚形式的未缀合白蛋白以及残留的未缀合化合物中进一步 纯化出缀合物。在某些实施方案中，丁基琼脂糖凝胶用含有5mM辛酸钠和750mM硫酸 铵、pH 6.0或接近pH 6.0的缓冲液平衡。然后该丁基琼脂糖凝胶与上述第一纯化步骤的 苯基琼脂糖凝胶流出物接触。在某些实施方案中，可利用线性或逐步降低的盐梯度或其 组合来实现缀合物的洗脱，其中未缀合的白蛋白可用约750mM硫酸铵洗脱，二聚形式的 未缀合白蛋白可用约550mM硫酸铵洗脱，化合物-白蛋白缀合物(期望的物质)可用约 lOOmM硫酸铵洗脱，而未缀合的化合物及其它物质可用水或其等同物来洗脱。这些物 质可包括例如，二聚、三聚或多聚的白蛋白缀合物，或化合物对白蛋白的化学计量大于 11的白蛋白缀合产物。在某些实施方案中，缀合物的纯化还包括继HIC之后的洗涤和通过超滤浓缩缀 合物。在一些实施方案中，可利用无菌水、生理盐水或缓冲液来去除纯化的缀合物中的 硫酸铵和缓冲液组分。在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物可根据2006年12月22日递交的题 为 “ Process for the Production of Preformed Conjugates of Albumin andTherapeutic Agent (白
蛋白与治疗剂的预形成缀合物的生产方法)”的美国专利申请号11/645,297 (公开号 2007/0269863)中描述的纯化方法来纯化，其全文通过引用并入本文。在某些实施方案中，继纯化所述促胰岛素肽缀合物之后，所述缀合物可以通过 对技术人员显而易见的任何技术重新配制成期望的制剂组合物，例如本发明的制剂。参 见 Remington' s Pharmaceutical Sciences 第 16 版，Osol，A.编辑(1980)。例如，可通过在容器中混合组分，并加水和缓冲液至期望的体积和浓度而制备液体制剂。其它示例 性的技术包括透析、超滤、渗滤、大小排阻层析等。一般而言，缀合物可以在产生本发 明提供的制剂的条件下与制剂组分进行接触。在某些实施方案中，重新配制纯化的促胰岛素肽缀合物包括将含有从上述第二 HIC纯化步骤即在丁基琼脂糖凝胶层析之后洗脱的促胰岛素肽缀合物的级分汇集到适宜 的容器之中。汇集的物质接着可利用本领域已知的任何浓缩方法进行浓缩。在某些实 施方案中，汇集的物质可以利用超滤膜和泵系统进行浓缩，直至蛋白质浓度达到约10、 20、30、40、50、60、70、80、90、100、或大于100mg/ml。在具体实施方案中，汇集 的物质浓缩至蛋白质浓度约70mg/ml。浓缩产物可接着以至少1、2、3、4、5、6、7、 8、9、10、或大于10体积的水进行渗滤，其中含促胰岛素肽缀合物的溶液的体积保持不 变。在具体实施方案中，浓缩产物以至少10体积的水进行渗滤。在一些实施方案中， 含有促胰岛素肽缀合物的渗滤溶液可随之接触期望的制剂组合物(即混合)，以获得包含 促胰岛素肽缀合物的制剂组合物。在具体实施方案中，可制备5X浓度的期望制剂组合 物，4份含促胰岛素肽缀合物的溶液可与1份5X制剂溶液混合以获得本文所述的促胰岛 素肽缀合物制剂。在某些实施方案中，可测量所得溶液的蛋白质浓度，且蛋白质浓度可 根据需要用制剂缓冲液调整以达到在IX制剂缓冲液中促胰岛素肽缀合物的期望浓度。 在一些实施方案中，IX制剂缓冲液中促胰岛素肽缀合物的终浓度为约1、10、20、30、 40、50、60、70、80、90、100、或大于100mg/ml。在具体实施方案中，IX制剂缓冲 液中促胰岛素肽缀合物的终浓度为约10mg/ml。在另一具体实施方案中，IX制剂缓冲 液中促胰岛素肽缀合物的终浓度位约50mg/ml。在准备储存之前产物可根据本领域任何 已知的方法进一步过滤。在可选实施方案中，重新配制纯化的促胰岛素肽缀合物可包括如下步骤。以下 介绍作为举例而非限制。如上文所述，在汇集从二次HIC纯化步骤即丁基琼脂糖凝胶层 析后获得的级分、并浓缩促胰岛素肽缀合物至约70mg/ml之后，该浓缩产物可随之以至 少10体积的、含本发明期望制剂组合物的渗滤缓冲液进行渗滤，其中制剂组合物不含表 面活性剂泊洛沙姆188 (普朗尼克F68)。浓缩产物可以至少10体积的渗滤缓冲液进行渗 滤，其中含本发明促胰岛素肽缀合物的溶液的体积保持不变。在适用情况下，“5X泊 洛沙姆188溶液”包含5X浓度的表面活性剂泊洛沙姆188，例如0.5% (w/v)泊洛沙姆 188，可随之如上所述在渗滤缓冲液中制备，4份含促胰岛素肽缀合物的溶液可与1份5X 泊洛沙姆188溶液混合。可测量所得溶液的蛋白质浓度，且蛋白质浓度可根据需要用制 剂缓冲液调整以达到在1 X制剂缓冲液中促胰岛素肽缀合物的浓度约50mg/ml。在准备 储存之前产物可根据本领域任何已知的方法进一步过滤。在其它实施方案中，可通过使所述肽或肽缀合物与其它组分接触，并冻干所得 混合物来制备冻干制剂。有许多冷冻干燥仪可用于此目的，例如Hull50 (Hull，USA)或 GT20 (Leybold-Heraeus, Germany)冷冻干燥仪。冷冻干燥可通过冷冻制剂、随后在适于 初次干燥的温度使冷冻内容物中的冰升华而实现。在此条件下，产物温度低于制剂的共 熔点或塌陷温度。一般初次干燥搁板温度范围为约-30至-5°C (只要在初次干燥期间保 持冷冻)，在适宜的压力下(一般为约50至250mTOrr)进行。干燥所需的时间主要由制 剂、承装样品的容器(例如，玻璃药瓶)大小和类型以及液体体积控制，其范围可以是数小时到数天(例如，40-60小时)。二次干燥阶段可在0-40°C进行，这主要取决于容器的 类型和大小以及所采用蛋白质的类型。然而，在某些实施方案中，二次干燥步骤也许并 不必要。例如，在整个冻干除水阶段的储存温度可以是约-30至-5°C。二次干燥所需的 时间和压力将取决于例如温度和其它参数而产生适宜的冻干饼。二次干燥时间受制于期 望的产物残留含水量，一般需要至少约5小时(例如，10-15小时)。压力可以与初次干 燥步骤期间所采用的压力相同。冷冻干燥条件可以根据制剂和药瓶大小而不同。5.2.1.1所制备制剂的评价一方面，本发明提供了评价促胰岛素肽缀合物(例如根据本发明提供的方法制 备和/或配制的艾塞那肽-4(l-39)Lys4°( e _AEEA_MPA)_NH2白蛋白缀合物)样品以确 定其中一种多种物质的水平的方法。在某些实施方案中，所述方法包括确定含促胰岛 素肽缀合物(例如艾塞那肽-4(l-39)Lys4°( e _AEEA_MPA)_NH2白蛋白缀合物)的样品 中一种或多种物质的水平的数值；并将该数值与参照数值比较，由此评价所述样品。所 述参照数值可以是任何预设的数值或数值范围，例如由政府机构(如FDA)、或其它团体 (例如经批准制备促胰岛素肽缀合物的生产厂家)、或法定当局(如USP)所设置的数值。所述物质可以是本领域技术人员可以在所述样品中进行评价的任何物质。其实 例包括但不限于促胰岛素肽缀合物、未缀合的白蛋白和未缀合的促胰岛素肽、或这些 物质的任何衍生物。在某些实施方案中，未缀合的促胰岛素肽的衍生物可以是氧化的肽 (例如甲硫氨酸残基氧化)、脱氨的肽(例如天冬酰胺或谷氨酰胺残基脱氨)。在某些实 施方案中，所述物质是多个促胰岛素肽与高分子(例如白蛋白)的缀合物，例如2 1肽 对高分子，或3 1肽对高分子，或4 1肽对高分子。在优选的实施方案中，所述物质是艾塞那肽-4(1-39) Lys40( e -AEEA-MPA)_NH2 白蛋白缀合物。在优选的实施方案中，所评价的物质是未缀合的白蛋白。在优选实施方案中， 所述样品中未缀合的白蛋白的水平数值< 10 .Omg/ml。在优选的实施方案中，所评价的物质是未缀合的艾塞那肽-4(1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2。 在优选的实施方案中，未缀合的艾塞那肽_4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2 的水平数值< 25.0 u g/ml。在具体实施方案中，所评价的物质是以2 1的比例与白蛋白缀合的艾塞那 肽-4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2。在具体实施方案中，所评价的物质是以3 1的比值与白蛋白缀合的艾塞那 肽-4 (1-39) Lys40 ( e -AEEA-MPA) _NH2。任何本领域已知的方法皆可用来确定含有促胰岛素肽缀合物的样品中物质的数 值。在一些实施方案中，所述样品中未缀合的物质的水平通过凝胶电泳、液相色谱质谱 (LCMS)、疏水相互作用层析、高效液相色谱(HPLC)、反相色谱(例如反相HPLC)、圆 二色性、溶解温度、渗透压摩尔浓度或紫外吸收(例如280nm的吸光值)来确定。在某些实施方案中，疏水相互作用层析可用于检测或定量缀合物、未缀合的白 蛋白、未缀合的肽、和/或多个促胰岛素肽与高分子的缀合物。在某些实施方案中，凝胶电泳可用于检测或定量缀合物、未缀合的白蛋白、未 缀合的肽、和/或多个促胰岛素肽与高分子的缀合物。在某些实施方案中，凝胶电泳可与免疫检测组合，例如Western印迹或酶联免疫吸附试验，以利于检测。在某些实施方案中，LCMS可用于检测缀合物、未缀合的白蛋白、未缀合的 肽、和/或多个促胰岛素肽与高分子的缀合物。在某些实施方案中，反相HPLC可用于检测或定量未缀合的肽、和/或未缀合的 肽的衍生物。5.3治疗方法本发明还提供了治疗个体的可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症的方法。在某些 实施方案中，可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症是肥胖症。在某些实施方案中，可用促 胰岛素肽治疗的紊乱或病症是糖尿病。虽然不希望束缚于任何理论，但认为本发明提供 的药物制剂会通过葡萄糖依赖性、胰岛素依赖性以及胰岛素非依赖性机制使高血糖症正 常化。所述药物制剂可用作治疗II型糖尿病的主要制剂，和治疗I型糖尿病的辅助制剂。 在某些实施方案中，可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症是II型糖尿病。在一些实施方案 中，所述方法包括向个体施用治疗有效量的促胰岛素肽缀合物，例如本文所述的促胰岛 素肽缀合物制剂的步骤。在一些实施方案中，促胰岛素肽缀合物是白蛋白与艾塞那肽_4 或其衍生物的缀合物。在优选实施方案中，所述个体是人。所述药物制剂尤其适合于治疗糖尿病(既包括I型和II型)个体，因为所述肽的 作用依赖于血液的葡萄糖浓度，因而相比于现有的治疗方法，低血糖副作用的风险大大 减小。因而，在某些方面，本发明提供了治疗个体II型糖尿病的方法，包括向患有II 型糖尿病的个体施用本发明所述的制剂。在一些实施方案中，所述制剂包含白蛋白 和促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有的序列相对于天然艾塞那肽_4序列具有不 超过3个氨基酸取代、缺失或插入，所述缀合物的浓度为约lmg/ml至约lOOmg/ml;缓 冲液；张力调节剂；稳定剂；和表面活性剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。在某 些实施方案中，所述方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽缀合的艾塞 那肽_4衍生物的制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚胺基丙酰胺基(乙氧基) 乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与艾塞那 肽-4(l-39)Lys4°-NH2羧基末端赖氨酸的￡氨基共价连接。本发明的药物制剂还可用于治疗肥胖症个体。本发明的药物制剂还可用于治疗 具有可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症的个体。5.3.1 个体在本发明的某些实施方案中，所述个体是动物，例如哺乳动物，例如非人灵长 类动物。在某些实施方案中，所述个体是人。所述个体可以是雄性或雌性个体。在某 些实施方案中，所述个体是非人动物，例如牛、绵羊、山羊、马、猫或狗。在某些实施方案中，所述个体具有患上可用促胰岛素肽治疗的紊乱或病症的风 险，包括但不限于肥胖症和II型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体具有患肥胖症 的风险。在一些实施方案中，个体具有患II型糖尿病的风险。在一些实施方案中，所述个体不健康。在一些实施方案中，所述个体具有或患 有可用促胰岛素肽治疗的病症，包括但不限于肥胖症或II型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体肥胖。在一些实施方案中，所述个体是人，且体重指数(BMI)为30kg/m2或更大。在一些实施方案中，所述个体是人，且BMI为30kg/ m2至35kg/m2。在一些实施方案中，所述个体是人，且BMI为35kg/m2或更大。在一 些实施方案中，所述个体是人，且BMI为40kg/m2或更大。在一些实施方案中，所述个 体体重超过其年龄、身高和/或种族正常体重的120%。在一些实施方案中，所述个体患有II型糖尿病。在一些实施方案中，个体葡萄 糖水平异常。在具体实施方案中，所述个体的葡萄糖水平高。在一些实施方案中，所 述个体是人，且平均全血血糖水平为8mmol/L(138mg/dl)或更高，和/或平均血浆血糖 水平为9.0mmol/L(154mg/dl)或更高。在一些实施方案中，所述个体是人，且平均全血 血糖水平为8mmol/L(138mg/dl)至16mmol/L (281mg/dl)，和/或平均血浆血糖水平为 9.0mmol/L(154mg/dl)至17mmol/L(314mg/dl)。在一些实施方案中，所述个体是人， 且平均全血血糖水平高于16mmol/L (281mg/dl)，和/或平均血浆血糖水平高于17mmol/ L(314mg/dl)。在一些实施方案中，所述个体是人，且糖基化血红蛋白(HbAlc)的水平为6.5% 或更高。在一些实施方案中，所述个体是人，且HbAlc的水平为6.5%至11%。在一些 实施方案中，所述个体是人，且HbAlc水平为11%或更高。在某些实施方案中，所述个体患有促胰岛素肽例如促胰岛素肽缀合物可治疗的 疾病、紊乱或病症。例如，所述个体患有代谢综合症。根据美国国家胆固醇教育计划成 人教育组第三项报告(ATPIII)，患有代谢综合症的个体有三种或多种如下标准(1)男性 腰围大于102cm，女性腰围大于88 ； (2)血清甘油三酸酯高于1.7mm0l/l ； (3)血压高于 130/85mmHg ； (4)HDL胆固醇男性低于1.0mmol/l，而女性低于1.3mmol/l ；禾口 (5)血清 葡萄糖高于6.1mm0l/l (高于5.6_01/1可适用)。根据世界卫生组织(WHO)，患有代谢 综合症的个体具有糖尿病、或空腹血糖受损(IFG)、或糖耐量受损(IGT)、或胰岛素耐受 (通过钳夹试验评估)，此外还有至少两个如下标准(1)腰臀比男性大于0.90，或女性 大于0.85 ； (2))血清甘油三酸酯高于1.7mmol/l，或HDL胆固醇男性低于0.9mmol/l女 性低于1.0mmol/l ； (3)血压高于140/90mmHg ； (4)尿蛋白排泄率大于20mg/分钟，或 尿白蛋白肌酐比大于30mg/g。因而，如果个体满足ATPIII或WHO所定义的代谢综合症 标准，则该个体具有代谢综合症。在一些实施方案中，所述个体患有前期糖尿病(例如，糖耐量受损(IGT)或空腹 血糖受损(IFG))。在一些实施方案中，所述个体患有糖尿病，例如I型糖尿病、II型糖 尿病。在一些实施方案中，所述个体患有成人隐匿性自身免疫糖尿病(“LADA”)，也 称为成人迟发性自身免疫糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有迟发性I型糖尿病。 在一些实施方案中，所述个体患有1.5型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有有类 固醇诱发的糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有人免疫缺陷病毒(HIV)治疗诱发 的糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有与先天性或HIV相关脂肪营养不良(“脂 肪再分布综合症”)有关的糖尿病。在一些实施方案中，所述个体患有神经系统紊乱。 在一些实施方案中，所述个体胰岛素耐受。在一些实施方案中，所述个体患有无知觉低 血糖症。在一些实施方案中，所述个体患有限制性肺疾病。在一些实施方案中，所述个 体患有胃肠紊乱，例如肠易激综合症(IBS)、功能性消化不良；或与胃肠紊乱相关的疼 痛，例如与IBS和功能性消化不良相关的疼痛。在一些实施方案中，所述个体患有炎症性肠病(IBD)，例如克罗恩病和溃疡性结肠炎，或与IBD相关的疼痛。在一些实施方案 中，所述个体患有高血糖症，例如与外科手术(例如，大的外科手术，例如冠状动脉搭 桥术)相关的高血糖症，例如与针对糖尿病(例如II型糖尿病、代谢综合症)个体的外科 手术相关的高血糖症。在一些实施方案中，所述个体患有冠状动脉心力衰竭(CHF)。在 一些实施方案中，所述个体患有与0细胞功能障碍相关的紊乱、与0细胞缺失相关的紊 乱、或与0细胞数量不足相关的紊乱。在一些实施方案中，所述个体肥胖。在一些实施方案中，所述个体肥胖但既无 糖尿病也无前期糖尿病；肥胖且患有糖尿病或前期糖尿病；肥胖但未患代谢综合症；肥 胖且患有代谢综合症；超重但既无糖尿病也无前期糖尿病；超重且有糖尿病或前期糖尿 病；超重但未患代谢综合症；超重且患有代谢综合症；患有代谢综合症但无糖尿病或前 期糖尿病(取决于代谢综合症的定义)；患有代谢综合症但既不肥胖也不超重。在一些实施方案中，所述个体具有一个或多个如下特征(1)糖尿病或前期糖 尿病；(2)超重或肥胖；和(3)代谢综合症。在一些实施方案中，所述个体没用过抗糖尿病药。在一些实施方案中，所述个 体没用过其它抗糖尿病药或没用过口服抗糖尿病药(OAD)。在其它实施方案中，所述个 体之前已经用一种或多种其它抗糖尿病药例如OAD治疗过。在其它实施方案中，所述个 体之前已经用二甲双胍、磺酰脲、噻唑烷二酮或其组合治疗过。在一些实施方案中，所 述个体正用OAD治疗，即处于OAD积极治疗方案之中。在一个实施方案中，所述个体 在施用促胰岛素肽缀合物前的1周、2天或1天内已施用OAD例如二甲双胍。在具体实 施方案中，所述个体已经每日施用稳定剂量MOOOmg的二甲双胍至少3个月。示例性的 OAD在下文提供。在具体实施方案中，所述个体目前正用二甲双胍治疗，即处于二甲双胍积极治 疗方案之中。在一个实施方案中，所述个体在施用促胰岛素肽缀合物前的1周、2天或1 天内已施用二甲双胍。在具体实施方案中，所述个体已经每日施用稳定剂量MOOOmg的 二甲双胍至少3个月。在某些实施方案中，本发明的制剂可作为单一治疗施用。换言之，可提供本发 明的制剂作为单独施用的活性药剂，来治疗本发明提供的一种或多种病症。5.3.2与抗糖尿病药组合治疗在本发明提供的方法和制剂中，促胰岛素肽缀合物可与一种或多种第二治疗剂 一起使用或组合使用，以用于治疗或预防糖尿病、肥胖症、或可用促胰岛素肽例如促胰 岛素肽缀合物治疗的紊乱。在一些实施方案中，这些药剂的组合能够比任何单一治疗单 独使用产生更好的对此类疾病或紊乱的治疗效果。本发明提供的制剂能够通过本领域技术人员认为适宜的任何方式与第二治疗剂 组合。例如，所述制剂可以如本文所述施用，而第二治疗剂可按照任何方式、按照适宜 该药剂的任何时序和剂量施用。施用方法、剂量、和剂量时序落在本领域技术人员的技 术范围内，并且可基于对第二活性药剂的了解确定。在某些实施方案中，剂量和剂量时 序可由本领域技术人员针对组合治疗来调整。所述制剂和第二药剂无需一起施用。然 而，在某些实施方案中，在适宜的情况下，所述制剂和第二药剂可适当地一起施用。在 某些实施方案中，在适宜的情况下，所述制剂除了促胰岛素肽之外，还可以包含第二药剂。
在本发明提供的方法中，一种或多种治疗成分或药剂可与促胰岛素肽缀合物一 起使用。所述第二治疗剂包括抗糖尿病药，包括口服抗糖尿病药(OAD)或抗肥胖药物。
5.3.2.IOAD
可在本发明提供的组合治疗中使用的示例性OAD包括但不限于磺酰脲类，例 如甲苯磺丁脲(甲糖宁)、醋酸己脲(乙酰磺环己脲)、妥拉磺脲(甲磺氮草脲)、氯磺 丙脲(特泌胰)、格列吡嗪(瑞易宁)、格列本脲(达安疗、优降糖、达安宁)、氯磺环 己脲、格列美脲(亚莫利)或格列齐特(达美康)；双胍类，例如二甲双胍、苯乙双胍或 丁双胍；格列奈，例如唐力(那格列奈)、普瑞丁(瑞格列奈)、快如妥(米格列奈)； 美格替耐，例如瑞格列奈(普瑞丁)或那格列奈(唐力)；噻唑烷二酮类，例如罗格列酮 (文迪雅)、吡格列酮(安可妥)或曲格列酮(瑞泽林)；或α-葡萄糖苷酶抑制剂，例 如米格列醇(Glyset)或阿卡波糖(拜糖平/卡博平)。
5.3.2.2DPP IV 抑制剂
在一些实施方案中，可在本发明提供的组合治疗中使用的第二治疗剂为二肽基 肽酶IV抑制剂(DPP IV抑制剂)。DPP-IV抑制剂可以是任何呈现DPP-IV酶活抑制作用 的化合物。例如，DPP-IV抑制剂的实例描述在(i)D.J.Drucker, 2003，Exp.Opin.Invest. Drugs, 12: 87-100 ； (ii) K.Augustyns 等，2003，Exp.Opin.Ther.Patents, 13: 499-510; (iii)C.F.Deacon 等，2004，Exp.Opin.Investig.Drags, 13: 1091-1102; (iv) A.E.Weber, 2004，J.Med.Chem.，47: 4135-4141; (v) J.J.Hoist, 2004，Exp.Opin.Emerg.Drags, 9 155-166 ； (vi) Augustyns 等，2005, Expert Opinion On Therapeutic Patents, 15(10) 1387-1407 ； (viiWebokova 等，2007，Current Topics in Medicinal Chemistry 7 547-555， 每一篇的内容都整体通过弓I用并入本文。
在DPP IV抑制剂可以口服或口服施用的情况下，DPP IV抑制剂是如本文所述的 OAD。换言之，OAD可包括本文所述的一些或全部DPP IV抑制剂。
DPP-IV抑制剂的具体实例包括但不限于二肽衍生物或二肽模拟物，例如 丙氨酸吡咯烷、异亮氨酸噻唑烷、以及假底物N-缬氨酰脯氨酰、O-苯甲酰羟胺，例 如，如美国专利号 7,253,172、7,241,756, 7,238,724、7,238,720、7,236,683、7,235,538、 7,230,074, 7,230,002, 7,229,969, 7,223,573, 7,217,711, 7,208,498, 7,205,409,7,205,323, 7,183,280, 7,132,443, 7,098,239, 7,034,039, 6,861,440, 6,727,261, 6,699,871, 6,242,422,7,196,201, 7,179,809、 7,125,873, 7,084,120, 7,026,316, 6,844,316, 6,716,843, 6,573,287, 6,201,132、7,192,952, 7,169,926, 7,125,863, 7,078,397, 6,911,467, 6,849,622, 6,710,040, 6,432,969, 6,172,081,7,189,728, 7,169,806, 7,122,555, 7,078,281, 6,890,898, 6,825,169, 6,706,742, 6,395,767, 6,166,063,7,186,846, 7,166,579, 7,115,650, 7,074,794, 6,890,905, 6,812,350, 6,699,871, 6,380,398, 6,124,305,7,186,731, 7,157,490, 7,109,192、 7,060,722, 6,869,947, 6,803,357, 6,645,995, 6,319,893, 6,110,949,7,183,290、 7,144,886, 7,101,871, 7,053,055, 6,867,205, 6,800,650, 6,617,340, 6,303,661, 6,107,317、6,100,234、6,040,145、6,011,155、5,939,560、5,462,928 中所述，其每一篇内容都整体通 过引用并入本文。
更多DPP-IV抑制剂的实例可见美国专利申请公开号20070172525、 20070185061、 2007016750、 20070149451、 20070142383、 20070142436、 20070123579、 20070112059, 20070105890, 20070098781, 20070093492, 20070082932, 20070082908, 20070072810, 20070072804, 20070072803, 20070060547, 20070049619, 20070049596, 20070021477, 20060293297, 20060281796, 20060281727, 20060276487, 20060276410, 20060270722, 20060270701, 20060270679,20060264457, 20060264433、 20060264401、 20060264400, 20060258646、 20060258621, 20060247226, 20060229286, 20060217428, 20060211682, 20060205711, 20060205675, 20060173056, 20060154866, 20060142585, 20060135767, 20060135561, 20060135512, 20060116393, 20060111336, 20060111428, 20060079541, 20060074058, 20060074087, 200600691 16, 20060058323, 20060052382, 20060046978, 20060040963, 20060039974, 20060014953, 20060014764, 20060004074, 20050059724, 20050059716, 20050043292, 20050038020, 20050032804, 20050272765, 20050272652, 20050261271, 20050260732, 20050260712, 20050245538, 20050234235, 20050233978, 20050234108, 20050222242, 20050222222, 20050222140, 20050215784, 20050215603, 20050209249, 20050209159, 20050203095, 20050203031, 20050203027, 20050192324, 20050187227, 20050176771, 20050171093, 20050164989, 20050143377, 20050143405, 20050137224, 20050131019, 20050130985, 20050130981, 20050113310, 20050107390, 20050107309, 20050096348, 20050090539, 20050075330, 20050070719, 20050070706, 20050070535, 20050070531, 20050070530, 20050065148, 20050065145, 20050065144, 20050043299, 20050043292, 20050032804, 20050026921, 20050004205, 20050004117, 20050032804, 20040259903, 20040259902, 20040259883, 20040259870, 20040259843, 20040254226, 20050254167, 20040242898, 20040242636, 20040242568, 20040242566, 20040236102, 20040235752, 20040229926, 20040229848, 20040229820, 20040209891, 20040186153, 20040180925, 20040176428, 20040176406, 20040171555, 20040171848, 20040167341, 20040167133, 20040152745, 20040147434, 20040138215, 20040138214, 20040121964, 20040116328, 20040110817, 20040106656, 20040106802, 20040106655, 20040097510, 20040087587, 20040082570, 20040082497, 20040077645, 20040072892, 20040063935, 20040034014, 20030232788, 20030225102, 20030216450, 20030216382, 20030199528, 20030195188, 20030166578, 20030162820, 20030149071, 20030134 802, 20030130281, 20030130199, 20030125304, 20030119750, 200301 19738, 20030105077, 20030100563, 20030092630, 20030087950, 20030078247, 20030060494, 20020198242, 20020198205, 20020183367, 20020165164, 20020161001, 20020110560, 20020103384, 20030096857、 20020071838、 20020065239、 20020061839、 20020049164, 20020019411、20020006899、20010020006,其中每一篇的内容都整体通过引用并入本文。
而更多DPP-IV抑制剂的实例可见申请公开号WO 07/054577、W007/053865、 WO 05/116029、WO 05/087235、WO 05/082348、WO 05/082849、WO 05/079795、 WO 05/075426、WO 05/072530、WO 05/063750、W005/058849、WO 05/049022、 WO 05/047297、WO 05/044195、WO 05/042488、WO 05/042003、WO 05/040095、 WO 05/037828、WO 05/037779、W005/034940、WO 05/033099、WO 05/032590、 WO 05/030751、WO 05/030127、WO 05/026148、WO 05/025554、WO 05/023762、 WO 05/020920、WO 05/19168、WO 05/12312、WO 05/12308、WO 05/12249、 WO 05/11581、WO 05/09956、WO 05/03135、WO 05/00848、WO 05/00846、WO 04/112701、 WO 04/111051、WO 04/111041、WO 04/110436、WO 04/110375、 WO 04/108730、W004/104216、WO 04/104215、WO 04/103993、WO 04/103276、 WO 04/99134, WO 04/96806, WO 04/92128, WO 04/87650, WO 04/87053, WO 04/85661, WO 04/85378, WO 04/76434, WO 04/76433, WO 04/71454, WO 04/69162, WO 4/67509, WO 04/64778, WO 04/58266, WO 04/52362, WO 04/52850, WO 04/50022, WO 4/50658, WO 04/48379, WO 04/46106, WO 04/43940, WO 04/41820, WO 04/41795, WO 4/37169, WO 04/37181, WO 04/33455, WO 04/32836, WO 04/20407, WO 04/18469, WO 04/18468, WO 04/18467, WO 04/14860, WO 04/09544, WO 04/07468, WO 04/07446, WO 04/04661、WO 04/00327、WO 03/106456、WO 03/104229、WO 03/101958、 WO 03/101448, WO 03/99279, WO 03/95425, WO 03/84940, WO 03/82817, WO 03/80633, WO 03/74500, WO 03/72556, WO 03/72528, WO 03/68757, WO 03/68748, WO 03/57666, WO 03/57144, WO 03/55881, WO 03/45228, WO 03/40174, WO 03/38123, WO 03/37327, WO 03/35067, WO 03/35057, WO 03/24965, WO 03/24942, WO 03/22871, WO 03/15775, WO 03/04498, WO 03/04496, WO 03/02530, WO 03/02596, WO 03/02595, WO 03/02593, WO 03/02553, WO 03/02531, WO 03/00181, WO 03/00180, WO 03/00250, WO 02/83109, WO 02/83128, WO 02/76450, WO 02/68420, WO 02/62764, WO 02/55088, WO 02/51836, WO 02/38541, WO 02/34900, WO 02/30891, WO 02/30890, WO 02/14271, WO 02/02560, WO 01/97808, WO 01/96295, WO 01/81337、WO 01/81304、WO 01/68603、WO 01/55105、WO 01/52825、 WO 01/34594, WO 00/71135, WO 00/69868, WO 00/56297, WO 00/56296, WO 00/34241, WO 00/23421, WO 00/10549, WO 99/67278, WO 99/62914, WO 99/61431, WO 99/56753, WO 99/25719, WO 99/16864, WO 98/50066, WO 98/50046、WO 98/19998、WO 98/18763、WO 97/40832、WO 95/29691、WO 95/15309、WO 93/10127、WO 93/08259、WO 91/16339、EP 1517907、EP 1513808、 EP1492777、 EP 1490335、 EP 1489088、 EP 1480961、 EP 1476435、 EP 1476429、 EP 1469873、 EP 1465891、 EP 1463727、 EP 1461337、 EP 1450794、 EP 1446116、 EP 1442049、 EP 1441719、 EP 1426366、 EP 1412357、 EP1406873、 EP 1406872、 EP 1406622、 EP 1404675、 EP 1399420、 EP 1399471、 EP 1399470、 EP 1399469、EP 1399433、 EP 1399154、 EP 1385508、 EP 1377288、 EP 1355886、 EP 1354882、 EP 1338592、EP 1333025、EP 1304327、EP 1301 187、EP 1296974、EP 1280797、 EP 1282600、EP 1261586、EP 1258476、EP 12541 13、EP 1248604、EP 1245568、 EP 1215207、 EP 1228061、 EP 1137635、 EP 1123272、 EP 1104293、 EP 1082314、 EP 1050540、EP 1043328、EP 0995440、EP 0980249、EP 0975359、EP 0731789、 EP 0641347、EP 0610317、EP 0528858、CA2466870、CA2433090、CA2339537、CA 2289125、CA 2289124、CA 2123128、DD 296075、DE 19834591、DE19828113、DE 19823831、DE 19616486、DE 10333935、DE 10327439、DE10256264、DE 10251927、 DE 10238477、DE 10238470、DE 10238243、DE10143840、FR 2824825、FR 2822826、 JP2005507261 ; JP 2005505531、JP2005502624、JP 2005500321、JP 2005500308、 JP2005023038、 JP 2004536115、 JP 2004535445、 JP 2004535433、 JP 2004534836、 JP 2004534815, JP2004532220, JP 2004530729, JP 2004525929, JP 2004525179, JP 2004522786、 JP 2004521149、 JP 2004503531, JP 2004315496, JP 2004244412, JP2004043429、 JP 2004035574、 JP 2004026820、 JP 2004026678、 JP 2004002368、 JP 2004002367, JP 2003535898, JP 2003535034, JP 2003531204, JP200353119U JP 2003531118、 JP 2003524591, JP 2003520849, JP 2003327532, JP 2003300977, JP 2003238566、 JP 2002531547、 JP 2002527504、 JP200251740U JP 2002516318、 JP 2002363157、 JP 2002356472、 JP 2002356471、 JP 2002265439、 JP 2001510442、 JP 200051 1559、 JP 2000327689、 JP2000191616、 JP 1998182613、 JP 1998081666、 JP 1997509921、JP 1995501078、JP 1993508624,其中每一篇的内容都整体通过参考引入本 文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是分子量小于1000、700或500道尔顿的小
分子，例如除核酸、蛋白质或肽之外的有机分子。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是β-氨基酸衍生物，例如3(R)_氨 基-1-[3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢[1，2，4]三唑并[4，3-a_]吡嗪 _7_ 基]-4-(2， 4，5-三氟苯基)丁-1-酮(MK-0431 ；捷诺维)或其药物盐、水合物或多晶型，这些被详 细描述在美国专利号 6,699,871、EP 1412357、WO 03/04498 和 US 2003100563 中，每一 篇的内容都被整体通过引用并入本文。在一些实施方案中，DPP-IV抑制剂是西格列汀。 西格列汀被描述为口服活性的选择性DPP-IV抑制剂，最近在美国和欧洲被批准用于单独 地或联合二甲双胍或磺酰脲或PPAR Y激动剂治疗糖尿病。参见美国专利号6,699,871， Kim等，2005，J.Med.Chem.48 141-151，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂 是氰基吡咯烷，例如(1-[[3-羟基-1-金 刚烷基)氨基[乙酰基]-2_氰基-(S)-吡咯烷(LAF237或维达列汀)、1_[2_[5_氰基吡 啶-2-基)氨基]乙氨基]乙酰基-2-氰基-(S)-吡咯烷(NVP-DPP728)、或(1S，3S， 5S) -2-[2 (S)-氨基-2- (3-羟基金刚烷-1-基)乙酰基]-2_氮杂双环[-3.1.0]己烷-3-腈 (沙克列汀或BMS-47718)，这详细公开在例如美国专利号6,617,340、6,432,969、 6,395,767、6,166,063、6,124,305、6,110,949、6,011,155、6,107,317、WO 98/19998 和 JP 2000511559、WO 00/34241、EP 1137635 及 JP 2002531547 中，每一篇的内容都整体通过 引用并入本文。
在一些实施方案中，DPP-IV抑制剂是维达列汀。在一些实施方案中，DPP-IV 抑制剂是NVP-DPP728。维达列汀和NVP-DPP728被描述为口服活性的选择性DPP-IV抑 制剂。参见 Villhauer 等，2002，J Med Chem45 2362-2365，Villhauer 等，2003，JMed Chem 46 2774-2789，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。维达列汀(LAF 237)目 前正在美国进行III期临床试验。其在欧洲已批准联合二甲双胍或磺酰脲或噻唑烷二酮使 用。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是沙克列汀。沙克列汀目前在美国和欧洲处于III期临床试验，用于治疗II型糖尿病。参见Augeri等，2005，J.Med.Chem.48 (5) 5025-5037，其内容整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是3-(L-异亮氨酰)噻唑烷(异亮氨酸噻 唑烷或PSN-9301)。异亮氨酸噻唑烷可见于JP 2001510442、WO 97/40832、美国专利 号6,303,661以及DE 19616486，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。异亮氨酸噻唑 烷被描述为口服活性的选择性DPP-IV抑制剂。参见Pederson等，1998，Diabetes 47 1253-1258 ； Epstein 等，2007，Curr.Opion.Inyestig.Drags, 8(4) 331-337，每一篇的内 容都整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SYR-322 (阿格列汀)或SYR-472，例如 描述在美国专利号7,169,926和7,034,039中，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是缬氨酸吡咯烷，例如公开在Deacon等， Diabetes(1998)47 764769中，其整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是[1_[2 (S)-氨基-3-甲基丁酰基]吡咯 烷-2 (R)-基]硼酸(PT-100)。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是β-苯乙胺，例如公开在Nordhoff等， 2006，Bioorganic Medical Chemistry Letters 16 1744-1748 中，其整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是PT-630 (DB-160)，例如公开在申请公开 号WO 06/034435中，其整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ABT-341，例如公开在Pei等，J.Med. Chem.2006年11月2日；49(22) 6439-42中，其整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ABT-279，例如公开在Madar等，J.Med. Chem.2006年10月19日；49(21) 6416-20中，其整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是BI-1356/利拉利汀(Ondero)，例如公开 在申请公开号WO 04/18468中，其整体通过引用并入本文。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SYR-619。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GSK-823093。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是PSN 9301。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是TA-6666。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是CR-14023。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是CR-14025。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是CR-14240。
在某些实施 方案中，DPP-IV抑制剂是CR-13651。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是NNC-72-2138。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是NN-7201。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是PHX-1149。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是PHX-1004。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SNT-189379。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GRC-8087。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SK-0403。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GSK-825964。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是TS-021。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GRC-8200。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是GRC-8116。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是FE107542。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是MP-513。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是BI356。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ALS 2-0426。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ABT279。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是TS-201。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是KRP-104。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是R1579。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是LY2463665。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是ARI-2243。在某些实施方案中，DPP-IV抑制剂是SSR-162369。5.3.2.3其它第二治疗剂在一些实施方案中，所述第二治疗剂是胰岛素受体激动剂。在一些实施方案 中，所述胰岛素受体激动剂是人胰岛素或胰岛素类似物；基础胰岛素，例如来得时(甘 精胰岛素)、诺和平(地特胰岛素)、NN540U NN-344、Albulin-G ；或速效胰岛素，例 如诺和锐(门冬胰岛素)、优泌乐(赖脯胰岛素)、艾倍得(格鲁胰岛素)。在一些实施方案中，所述第二治疗剂是胰淀素受体激动剂，例如西米林 (Symlin)(普兰林肽)。在一些实施方案中，所述第二治疗剂是葡萄糖依赖性促胰岛素肽/抑胃 肽(GIP)类似物；胰高血糖素受体(GCGR)拮抗剂，例如BAY-27-9955、Cpd G或 ISIS-325，568 ；糖皮质激素受体(GCCR)拮抗剂，例如ISIS-377，131 ；铬、钒盐或 衍生物；11 β-羟基类固醇脱氢酶(ΙΙβ-HSDl和lli3_HSD2)脱氢酶和还原酶抑制 剂，例如BVT-3498;蛋白酪氨酸磷酸酶lb(PTP lb)抑制剂；葡萄糖转运蛋白(GLUT) 及同工酶(GLUT1、GLUT4)抑制剂；钠-葡萄糖协同转运蛋白及同工型(SGLT1、 SGLT2)抑制剂，例如达格列嗪、舍格列净和AVE-2268 ；去乙酰化酶(SIRT)及同工 型激动剂(SIRTl)，例如白藜芦醇、SRT-501 ； PPAR γ/δ激动剂；PPAR α/γ激动 齐[J，例如 tesaglitasar、muraglitazar、naveglitazar ；果糖 _1，6-二 磷酸酶(FBPase)抑制剂，例如CS-917、MB-7803 ；葡萄糖依赖性促胰岛素受体(GDIR，G蛋白偶联受 体119，即GPR-119)激动剂，例如ADP-668 ； G蛋白偶联受体GPR-40、GPR-120, GPR-109A(HM-74A)激动剂促成的葡萄糖依赖性胰岛素分泌；成纤维细胞生长因子 (FGF)及同工型(FGF-21)类似物；早老蛋白相关扁菱形蛋白样蛋白质(PSARL)拮抗 齐U，例如CXS-203;肝胰岛素致敏物质(HISS)、骨形态发生蛋白_9 (BMP-9)；骨钙 素；内脂素(烟酰胺磷酸核糖转移酶，Nampt)；选择性PPARy调节剂(SPPARM)， 例如metaglidasen、MBX-2044 ；葡糖激酶(GK)激活剂，例如RO-28-1675 ；糖原磷 酸酶(GP)抑制剂，例如PSN-357; β细胞生长因子，例如胰岛新生基因相关蛋白 (INGAP) ； CD-3 拮抗剂例如 teplizumab，GAD65 拮抗剂例如 Diamyd、DiaPep277,白 介素-1抑制剂(IL-I)例如XOMA-052，jun N_末端激酶(JNK)抑制剂，耐受原例如 NBI-6024、TRX4。在一些实施方案中，所述第二治疗剂是抗肥胖药。在一些实施方案中，所述 抗肥胖药是大麻素1受体(CBlR)反向激动剂和拮抗剂，例如Acomplia/ZimultK利莫那 班)、诺美婷(西布曲明)、或赛尼可(奥利司他)。在一些实施方案中，第二治疗剂是胃肠激素类似物。在一些实施方案中，所述 胃肠激素类似物是胰高血糖素样肽-2 (GLP-2)类似物，例如Gattex (tedughitide)；肽YY 类似物，例如PYY(l-36)、PYY(3-36)；胰多肽(PP)类似物；或 胃泌素类似物。5.3.3诜择个体讲行治疗—方面，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进 行治疗的方法，包括鉴别已经用抗糖尿病药治疗过的个体。使用任何本领域已知的抗糖 尿病药的之前治疗皆可作为基础来识别个体以用促胰岛素肽缀合物(例如本文描述的促 胰岛素肽缀合物)治疗。示例性的抗糖尿病药在上文提供。在一些实施方案中，所述抗 糖尿病药是口服抗糖尿病药(OAD)。在一些实施方案中，如果所述个体在之前未用抗糖 尿病药例如OAD治疗过，则鉴别该个体以进行治疗。在其它实施方案中，如果所述个体 在之前已经用抗糖尿病药例如OAD治疗过，则鉴别该个体以进行治疗。可以根据本领域 技术人员的判断来确定所述个体是否之前已用抗糖尿病药例如OAD治疗过。在某些实施 方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的 方法，包括鉴别因其它抗糖尿病药从而经历过低血糖的个体。在某些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合 物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别经历过之前治疗和经历过增重或不期望的体重增加 的个体。在某些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合 物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经用第二活性药剂(例如OAD，例如磺酰 脲、二甲双胍或噻唑烷二酮)治疗过的个体，所述方法可以进一步包括确定施用所述抗 糖尿病药是否产生了期望的治疗结果，例如，通过本领域技术人员确定，可接受地控制 了个体葡萄糖水平。可接受的血糖控制可显示为但不限于全血血糖下降、血浆血糖下 降、组织间液葡萄糖(IG)下降，和/或HbAlc水平下降。在一些实施方案中，本发明提 供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之 前已经施用过抗糖尿病药例如OAD，例如导致可接受地控制了个体葡萄糖水平的个体。在具体实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂 进行治疗的方法，包括鉴别之前已经施用过抗糖尿病药例如OAD，但没有导致可接受地 控制个体葡萄糖水平的个体。前述方法可以进一步包括向鉴别的个体施用所述促胰岛素 肽缀合物或制剂。

在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合 物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别在首次施用所述促胰岛素肽缀合物之前已经施用过 抗糖尿病药例如OAD的个体。在具体实施方案中，OAD是二甲双胍。在一些实施方 案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方 法，包括鉴别在不超过30、25、20、15、10或5天之前(自鉴别时间起衡量)已经施用 过其它抗糖尿病药例如OAD的个体，所述方法进一步包括在施用所述其它抗糖尿病药 的30、25、20、15、10或5天之内施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。在具体实施方 案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方 法，包括鉴别未施用过有效量的其它抗糖尿病药例如OAD的个体，然后在首次施用所述 促胰岛素肽缀合物之时(例如，在同一小时或同一天内)施用其它抗糖尿病药。在其它 实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治 疗的方法，包括鉴别未施用过有效量的其它抗糖尿病药例如OAD的个体，然后向个体首 次施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。另一方面，本发明提供了治疗具有前期糖尿病，例如糖耐量受损(IGT)或空腹 血糖受损(IFG)的个体的方法，包括向所述个体施用治疗前期糖尿病有效量的促胰岛素 肽缀合物，例如本文所述的促胰岛素肽缀合物制剂。在一些实施方案中，所述促胰岛素 肽缀合物是与白蛋白缀合的艾塞那肽-4(1-39)Lys4°( ε _AEEA_MPA)-NH2。在一些实施 方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的 方法，包括鉴别具有IFG和/或IGT的个体。在一些实施方案中，所述方法包括鉴别经 本领域技术人员诊断具有IFG的个体。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用 本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别空腹血浆葡萄糖水平 > 100mg/dl(5.6mmol/l)但< 126mg/dl(7.0mmol/l)的个体。在其它实施方案中，本发 明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴 别经本领域技术人员诊断具有IGT的个体。在一些实施方案中，所述方法包括鉴别2小 时口服糖耐量试验水平> 140mg/dl(7.8mmol/l)但< 200mg/dl(ll.lmmol/l)的个体。前 述方法可以进一步包括向鉴别的个体施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。另一方面，本发明提供了治疗肥胖但既无糖尿病也无前期糖尿病的个体的方 法，包括向所述个体施用治疗肥胖症有效量的促胰岛素肽缀合物，例如本文所述的促胰 岛素肽缀合物制剂。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物是与白蛋白缀合的艾塞 那肽-4 (1-39)Lys40 ( ε -AEEA-MPA) _ΝΗ2。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体 以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别肥胖但既无糖尿 病也无前期糖尿病的个体用胰岛素肽缀合物治疗，其中所述方法包括鉴别之前已经用抗 肥胖药治疗过的个体。用本领域已知的任何抗肥胖药的治疗皆可作为基础来选择个体以 用促胰岛素肽缀合物(例如本文描述的促胰岛素肽缀合物)进行治疗。在一些实施方案 中，所述抗肥胖药是奥利司他。在一些实施方案中，所述抗肥胖药是西布曲明。在其它实施方案中，所述抗肥胖药是利拉鲁肽(NN2211)。利拉鲁肽(NN2211)是GLP-I类似 物，其结构为 Arg (34) Lys (26) - (N- ε - ( γ -Glu (N- α -十六酰氯))-GLP-l (7-36) _NH2。 在一些实施方案中，如果个体未用利拉鲁肽治疗过，则选择该个体进行治疗。在其它实 施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗 的方法，包括鉴别已经用利拉鲁肽治疗过的个体。上述方法可以进一步包括向所鉴别的 个体施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。在某些实施方案中，在个体之前已经用利拉鲁肽治疗过的情况下，本发明提供 了选择个体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前 已经用利拉鲁肽治疗过并产生了期望的治疗结果，例如，本领域技术人员确定，减重达 个体基础体重的5%以上的个体。在一些实施方案中，本发明提供了选择个体以用本发明 提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经用利拉鲁肽治疗过 并导致减重达个体基础体重的5%以上的个体。在具体实施方案中，本发明提供了选择个 体以用本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂进行治疗的方法，包括鉴别之前已经用利 拉鲁肽治疗过但未导致减重达个体基础体重的5%以上的个体。前述方法可以进一步包括 向所鉴别的个体施用所述促胰岛素肽缀合物或制剂。5.3.4神经系统紊乱的治疗本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可作为镇静剂使用。在本发明的一个方 面，提供了使患有引起中枢或外周神经系统活跃性增加的异常的哺乳动物个体镇静的方 法。所述方法包括向所述个体施用包含足以对该个体产生镇静或抗焦虑作用的量的 本发 明所述促胰岛素肽缀合物的药物制剂。所述药物制剂可以脑室内、口服、皮下、肌肉内 或静脉内施用。此类方法可用于治疗或改善神经系统病症，例如焦虑、运动紊乱、敌 对、精神错乱、惊厥、恐怖袭击、癔病和睡眠失调。在相关的方面，本发明涵盖增加哺乳动物个体的活跃性的方法，包括向所述个 体施用包含足以对该个体产生活跃作用的量的本发明所述促胰岛素肽缀合物的药物制 齐U。优选地，所述个体患有引起中枢或外周神经系统活跃性下降的病症。所述药物制剂 可用于治疗促胰岛素肽相关疾病或病症。在某些实施方案中，所述药物制剂可用于治疗 或改善抑郁症、分裂情感性障碍、睡眠呼吸中止、注意力缺陷综合症伴有注意力差、记 忆丧失、健忘和猝睡症，这仅仅是列举若干唤醒中枢神经系统可能对其有利的病症。本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂还可用于诱发唤醒以治疗或缓解抑郁 症、分裂情感性障碍、睡眠呼吸中止、注意力缺陷综合症伴有注意力差、记忆丧失、健 忘和猝睡症。治疗的疗效可以借助个体采访，通过心理/神经测试评估其病症，或与这 些病症相关的症状的缓解来进行监测。例如，猝睡症的治疗可通过监测猝睡的发作发生 来评估。作为另一个实例，修饰的ITP对于个体注意力集中能力或记忆能力的作用，可 利用本领域技术人员公知的任何多种诊断试验来测试。5.3.5术后治疗本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用于术后治疗。个体在进行手术前约 1-16小时、进行手术期间、以及手术之后不超过约5天的时期需要包含本发明所述缀合 的促胰岛素肽的药物制剂。所述药物制剂在手术开始之前约16小时至约1小时施用。手术之后至施用本发明所用化合物以便减小代谢效应和胰岛素耐受的时间长度取决于许多因素。这些因素一 般是本领域普通医师已知的，并且最重要的是在手术之前的准备阶段所述个体是否空腹 或被提供了葡萄糖输液或饮料，或一些其它形式的物质。其它重要的因素包括该个体的 性别、体重和年龄、无力调节血糖的严重程度、无力调节血糖的潜在原因、手术所致创 伤的预期严重程度、施用途径和生物利用度、体内的滞留、剂型、以及所施用化合物的 效力。开始施用本发明所用的修饰的促胰岛素肽的优选时间段是手术开始前约1小时至 约10小时。开始施用的最优选的时间阶段是手术开始前2小时至8小时。一种特定类型的手术，即择期腹部手术之后的胰岛素耐受在术后第一天最为突 出，持续至少5天，并且可能需要长达3周才恢复正常。因而，术后个体可能在手术创 伤之后的一段时间内需要施用本发明的药物制剂，这将取决于本领域普通医师所理解和 确定的因素。这些因素中包括在手术之后所述个体是否空腹或被提供了葡萄糖输液或饮 料，或一些其它形式的物质，还有(但并非限制)，所述个体的性别、体重和年龄、任何 无力调节血糖的严重程度、任何无力调节血糖的潜在原因、手术所致创伤的实际严重程 度、施用途径和生物利用度、体内的滞留、剂型、以及所施用化合物的效力。施用本发 明所用化合物的优选持续时间不超过术后5天。 5.3.6胰岛素耐警治疗本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用来治疗胰岛素耐受，这独立于其在 术后治疗中的用途。胰岛素耐受可以因胰岛素与细胞表面受体的结合下降所致，或因细 胞内代谢的改变所致。第一类特征在于胰岛素敏感性下降，一般可通过增加胰岛素浓度 而纠正。第二类特征在于胰岛素反应性下降，不能通过大量胰岛素克服。创伤后的胰岛 素耐受可通过与胰岛素耐受程度成比例剂量的胰岛素而纠正，因而显然是因胰岛素敏感 性下降所致。5.3.7治疗糖尿病或肥胖症而减少恶心本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用于治疗促胰岛素肽相关疾病或病 症，同时减少恶心的副作用，例如2006年11月9日递交的、题为“Methodof Treatment ofDiabetes and/ro Obesity with Reduced Nausea Effect (治疗糖尿病和 / 或肥胖症并减少恶 心副作用的方法)”的美国专利申请号11/595,576(公开号2007/0207958)中所述，其整 体通过引用并入本文。5.3.8其它病症本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用于改变有此需要的个体的纤连蛋白 浓度。本发明提供了降低有此需要的个体的纤连蛋白浓度的方法，所述方法包括向该个 体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低该个体的纤连蛋白浓 度。本发明提供了降低纤连蛋白水平升高的个体的纤连蛋白浓度的方法，所述方法包括 向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低该个体的纤连 蛋白浓度。本发明提供了改善有此需要的个体的心血管风险特征的方法，包括向该个体 施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，并测量该个体纤连蛋白浓度的下 降，从而改善该个体的心血管风险特征。本发明提供了改善纤连蛋白水平升高的个体的 心血管风险特征的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或 制剂，并测量该个体纤连蛋白浓度的下降，由此改善该个体的心血管风险特征。本发明提供了治疗有此需要的个体的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素 肽缀合物或制剂，而降低该个体的纤连蛋白浓度。本发明提供了治疗纤连蛋白水平升高 的个体的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低个体的纤连蛋白浓度。本发明提供的促胰岛素肽缀合物和制剂可用于改变有此需要的个体的脂蛋白颗 粒大小或亚类组成。本发明提供了使有此需要的个体的大LDL、大HDL、总HDL或任 意组合的所述脂蛋白的浓度增加的方法，包括向所述个体施用有效量的本发明提供的促 胰岛素肽缀合物或制剂，由此增加所述个体的大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所 述脂蛋白的浓度。本发明提供了使大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白 的浓度下降的个体的大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度增加的方 法，包括向所述个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而增加该 个体大LDL、大HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度。本发明提供了使有此 需要的个体的小LDL、极小LDL、总LDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度降低的方法， 包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低小LDL的 浓度。本发明提供了使小LDL、极小LDL、总LDL或任意组合的所述脂蛋白的水平升 高的个体的小LDL、极小LDL、总LDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度降低的方法，包 括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而降低小LDL的浓 度。本发明提供了改善有此需要的个体的心血管风险特征的方法，包括向该个体施用有 效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，并测量大LDL、大HDL、总HDL或任意 组合的所述脂蛋白的浓度的增加，从而改善该个体的心血管风险特征。本发明提供了改 善大LDL、大HDL、总HDL或其任意组合的水平下降的个体的心血管风险特征的方法， 包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，并测量大LDL、大 HDL、总HDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度的增加，从而改善该个体的心血管风险特 征。本发明提供了治疗小LDL、极小LDL或总LDL或任意组合的所述脂蛋白的水平升 高的个体的方法，包括向该个体施用有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂， 由此降低所述个体小LDL、极小LDL、总LDL或任意组合的所述脂蛋白的浓度。本发 明提供了使有此需要的个体LDL或HDL平均颗粒大小增加的方法，包括向所述个体施用 有效量的本发明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而增加所述个体LDL或HDL的颗粒 大小。本发明提供了使小LDL水平升高、HDL大水平下降、总HDL水平下降或其任意 组合的个体的LDL或HDL平均颗粒大小增加的方法，包括向所述个体施用有效量的本发 明提供的促胰岛素肽缀合物或制剂，从而增加所述个体LDL或HDL的颗粒大小。5.3.9施用剂量和频率所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂，可以按照本领域技术人 员认为适宜的任何技术施用。例如，所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制 齐IJ，可通过任何如下方式施用(a)肠道，例如口服(经口)、直肠(例如，栓剂或灌肠 剂的形式)、饲管(例如，胃管、十二指肠管、胃造口管)；(b)胃肠外，例如皮下、静 脉内、肌肉内、皮内(进入皮肤本身)、经皮(透过皮肤例如完整皮肤扩散)、动脉内、 腹膜内、心脏内(进入心脏)施用、骨内(进入骨髓)施用、鞘内(进入椎管)、经粘膜 (透过粘膜扩散，例如吹药(鼻吸)、经鼻(例如鼻内)、舌下(舌头下面)、口颊(经面颊)、阴道、吸入(例如，肺部施用)；(C)表面；(d)硬膜外腔(注射或输注到硬膜外腔 中)；和(e)玻璃体。每次施用的所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂， 可以快速浓注或输注。在优选实施方案中，皮下施用促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素 肽缀合物制剂。在具体实施方案中，用针头，例如25号针头、26号针头、27号针头、 28号针头、29号针头、30号针头、31号针头、32号针或33号针头或更高规格的针头， 皮下施用促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。 所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂的施用剂量和频率可以由 本领域技术人员来确定。有效治疗紊乱或病症的促胰岛素肽缀合物的量会随着紊乱或 病症的性质和严重程度、以及施用活性成分的途径而不同。频率和剂量也会根据每个个 体特异的因素而不同，取决于紊乱或病症的严重程度，施用途径，以及个体的年龄、体 重、反应和过去的病史。有效剂量可根据由体外或动物模型测试系统获得的剂量反应曲 线而外推得到。所述促胰岛素肽缀合物的示例性剂量包括每千克个体或样品体重毫克或微克量 的促胰岛素肽缀合物(例如，约lmg/kg至约50mg/kg，例如约10mg/kg至约30mg/kg)。在一些实施方案中，按照周施用方案在几周的时间内施用对特定个体可以有效 实现所期望的治疗反应的剂量的所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。 在一些实施方案中，可以每周一次施用促所述胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物 制剂(例如，作为单次剂量)。在一些实施方案中，可以每周两次施用所述促胰岛素肽缀 合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂(例如，作为两次相同或不同的剂量)。在其它实施方 案中，可以每2、3、4、5或6天施用一次所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合 物制剂。在其它实施方案中，可以每8、9、10、11、12或13天施用一次所述促胰岛素 肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。在其它实施方案中，可以每3、4、5、6、7或8 天的时间施用两次所述促胰岛素肽缀合物，例如促胰岛素肽缀合物制剂。在其它实施方 案中，可以每9、10、11、12、13或14天的时间施用两次所述促胰岛素肽缀合物，例如 促胰岛素肽缀合物制剂。在一些实施方案中，所述剂量每周施用一次或两次，且该剂量所含的促胰岛素 肽缀合物的量为约 IOOOyg 至 3000yg(例如，1025 μ g、1050 μ g、1075 μ g、1100 μ g、 1125 μ g> 1150 μ g> 1175 μ g> 1200 μ g> 1225 μ g> 1250 μ g> 1275 μ g> 1300 μ g> 1325 μ g> 1350 μ g> 1375 μ g> HOO μg、1425 μ g> 1450 μ g> 1475 μ g> 1500 μ g> 1525 μ g> 1550 μ g> 1575 μ g> 1600 μg、1625 μ g> 1650 μg、1675 μg、1700 μ g> 1725 μ g> 1750 μ g> 1775 μ g> 1800 μg、1825 μ g> 1850 μg、1875 μ g> 1900 μg、 1925 μ g> 1950 μ g> 1975 μ g> 2000 μ g、2025 μg、2050 μ g、2075 μg、2100 μ g> 2125 μ g> 2150 μ g> 2175 μ g> 2200 μg、2225 μ g、2250 μg、2275 μ g、2300 μg、 2325 μ g、2350 μg、2375 μg、2400 μ g、2425 μg、2450 μ g、2475 μg、2500 μ g、 2525 μg、2550 μ g、2575 μ g、2600 μg、2625 μ g、2650 μg、2675 μ g、2700 μg、 2725 μ g、2750 μg、2775 μg、2800 μ g、2825 μg、2850 μ g、2875 μg、2900 μ g、 2925 μ g、2950 μ g 或 2975 μ g)，优选约 1000 μ g 至 2750 μ g (例如，1025 μ g、1050 μ g、 1075 μ g> 1100 μ g> 1125 μ g> 1150 μ g> 1175 μ g> 1200 μ g> 1225 μ g> 1250 μ g> 1275 μ g> 1300 μ g> 1325 μ g> 1350 μg、1375 μg、1400 μ g> 1425 μg、1450 μ g>1475 μ g、1500 μ g、1525 μ g、1550 μ g、1575 μ g、1600 μ g、1625 μ g、1650 μ g、 1675 μ g> 1700 μ g> 1725 μ g> 1750 μg、1775 μ g. 1800 μ g> 1825 μg、1850 μ g> 1875 μ g, 1900 μ g> 1925 μ g, 1950 μ g, 1975 μ g. 2000 μg、2025 μ g、2050 μg、 2075 μ g> 2100 μ g> 2125 μ g> 2150 μ g> 2175 μ g> 2200 μ g、2225 μg、2250 μ g、 2275 μg、2300 μ g、2325 μg、2350 μ g、2375 μ g、2400 μg、2425 μ g、2450 μg、 2475 μ g、2500 μg、2525 μ g、2550 μg、2575 μg、2600 μ g、2625 μg、2650 μ g、 2675 μ g、2700pg 或 2725yg)，更优选约 1000 至 2500 μ g (例如，1025 μ g、1050 μ g、 1075 μ g> 1100 μ g> 1125 μ g> 1150 μ g> 1175 μ g, 1200 μ g> 1225 μ g> 1250 μg、 1275 μ g> 1300 μ g> 1325 μ g> 1350 μg、1375 μg、1400 μ g> 1425 μg、1450 μ g> 1475 μ g> 1500 μ g> 1525 μ g> 1550 μ g> 1575 μ g. 1600 μg、1625 μ g> 1650 μg、 1675 μ g> 1700 μ g> 1725 μ g> 1750 μg、1775 μg、1800 μ g> 1825 μg、1850 μ g> 1875 μ g、1900 μ g、1925 μ g、1950 μ g、1975 μ g、2000 μ g、2025 μ g、2050 μ g、 2075 μ g> 2100 μ g> 2125 μ g> 2150 μ g> 2175 μ g> 2200 μ g、2225 μg、2250 μ g、 2275 μg、2300 μg、2325 μg、2350 μg、2375 μg、2400 μg、2425 μ g、2450 μg 或 2475 μ g),最优选约 IOOOyg 至 2000yg(例如，1025 μ g, 1050 μ g> 1075 μ g, 1100 μ g> 1125 μ g> 1150 μ g> 1175 μ g> 1200 μ g, 1225 μ g> 1250 μ g> 1275 μg、 1300 μ g> 1325 μ g> 1350 μ g> 1375 μ g> 1100 μ g. 1425 μ g> 1450 μ g> 1475 μ g> 1500 μ g> 1525 μ g> 1550 μ g> 1575 μ g> 1600 μ g. 1625 μ g> 1650 μ g> 1675 μg、 1700 μ g> 1725 μ g> 1750 μ g> 1775 μ g> 1800 μg、1825 μ g> 1850 μg、1875 μ g> 1900 μ g, 1925 μ g, 1950yg或1975yg)的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案 中，该剂量所含促胰岛素肽的量是1000 μ g至2000 μ g。在一些实施方案中，该剂量所含 促胰岛素肽的量是1500 μ g至2000 μ g。 在某些实施方 案中，周总剂量在所述周内施用一次，即每周一次，且周总剂量 含IOOOyg或1500yg量的所述促胰岛素肽缀合物。在某些实施方案中，周总剂量每周 施用一次，且该剂量含2000 μ g量的所述促胰岛素肽缀合物。在某些实施方案中，周总 剂量在所述周内施用两次，即每周两次，且每次施用含IOOOyg量的所述促胰岛素肽缀 合物，相当于周总剂量为2000 μ g。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次 施用含1500 μ g量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3000 μ g。在某些实施方 案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含1600 μ g量的所述促胰岛素肽缀合物，相 当于周总剂量为3200 μ g。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含 1700 μ g量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3400 μ g。在某些实施方案中周 总剂量每周施用两次，其中第一次施用含1500 μ g量的所述促胰岛素肽缀合物，而第二 次施用含2000 μ g量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3500 μ g。在某些实施 方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含1750 μ g量的所述促胰岛素肽缀合物， 相当于周总剂量为3500 μ g。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含 ISOOyg量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量为3600 μ g。在某些实施方案中， 周总剂量每周施用两次，且每次施用含1900 μ g量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周 总剂量为3800 μ g。在某些实施方案中，周总剂量每周施用两次，且每次施用含2000 μ g 量的所述促胰岛素肽缀合物，相当于周总剂量4000 μ g。
在某些实施方案中，本发明所述的这些剂量或其它示例性剂量可以提供在递药 装置中，以方便对个体施用所述剂量。可以使用本领域已知的任何递药装置。在具体 实施方案中，递药装置是构造用于皮下递药的注射器，例如0.3、0.5、1、2、3或大于 3ml、具有25、26、27、28、29、30、31、32、33或大于33号针头的注射器。不同的治疗 有效量的所述促胰岛素肽缀合物可以应用于不同的紊乱和病症，本 领域普通技术人员将会容易地知晓这一点。在某些实施方案中，可以重复施用本发明提供的促胰岛素肽缀合物，例如所述 促胰岛素肽缀合物制剂，且施用可以相隔至少12小时、1天、36小时、2天、60小时、3 天、84小时、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15 天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、4周、6周、2月、75天、3月或6月。
在某些实施方案中，相隔3或4天、1周或2周重复施用所述促胰岛素肽缀合物，例如促 胰岛素肽缀合物制剂。在某些实施方案中，可以实施所述方法，且所述制剂可以作为一次剂量单次给 予或长期给予。长期表示本发明的制剂对给定个体不止一次地施用。例如，长期施用可 以基于每周、每两周、每月或更高频率或更低频率对个体施用多次剂量的制剂，这对本 领域技术人员是显而易见的。如果根据本领域技术人员判断是合适的，长期施用可持续 数周、数月或数年。此外，如果根据本领域技术人员判断，某些剂量显示出不可接受的 耐受特征，例如次数频繁或严重的恶性和呕吐，则技术人员可减小剂量以减轻这样的特 征。例如，本文所述的剂量可以从1500 μ g的剂量减至IOOOyg的剂量，或者2000 μ g 的剂量可以减至1500 μ g的剂量。在重复施用期间施用的所述促胰岛素肽缀合物的剂量可以保持不变，或者可以 有所不同，例如相对于之前施用的所述促胰岛素肽缀合物剂量增加或减少。在某些实 施方案中，在重复施用期间施用的所述促胰岛素肽缀合物的剂量保持不变。因而，在 一些实施方案中，向个体施用1500 μ g周剂量的所述促胰岛素肽缀合物，且基于每周按 1500 μ g/周重复施用。在其它实施方案中，向个体施用3000 μ g周剂量的所述促胰岛素 肽缀合物，分两次1500 μ g的剂量递药，且基于每周按3000 μ g所述促胰岛素肽缀合物/ 周的周总剂量重复每周施用两次。在一些实施方案中，向个体施用2000 μ g剂量的所述 促胰岛素肽缀合物，且基于每周按2000 μ g/周重复施用。在其它实施方案中，向个体施 用4000 μ g周剂量的所述促胰岛素肽缀合物，分两次2000 μ g的剂量递药，且且基于每周 按4000yg促胰岛素肽缀合物/周的周总剂量重复每周施用两次。在一些实施方案中，向 个体施用3000 μ g剂量的所述促胰岛素肽缀合物，且基于每周按3000 μ g/周重复施用。在其它实施方案中，在重复施用期间增加向个体施用的所述促胰岛素肽缀合 物、例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量。例如，在具体实施方案中，第一时间阶段 向个体施用1500 μ g初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着第二时间阶段向个体 施用2000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一时间阶段是 1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，第一时间阶段是4周，即剂量 的增加始于第5周施用开始之际。在一些实施方案中，第二时间阶段是1、2、3、4、5、 6、7、8或更多周。在具体实施方案中，长期施用周剂量(即，第二时间阶段是如本文所 述的长期施用)。在另一实施方案中，向个体施用1500 μ g初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期4周，紧接着长期施用(始于第5周)2000 μ g周总剂量的所述促胰岛素 肽缀合物。在具体实施方案中，以所述次序按如下步骤施用所述促胰岛素肽缀合物，例如 所述促胰岛素肽缀合物制剂剂量(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用一次1.5mg 所述促胰岛素肽缀合物；和(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用一次2.0mg所述促 胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一持续时间阶段4周。在一些实施方案中，第 二持续时间阶段8周。在另一实施方案中，在向个体施用的所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛 素肽缀合物制剂的剂量在重复施用期间增加的情况下，在第一时间阶段以两次1500yg 的剂量递送，向个体施用3000 μ g初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第二 时间阶段以两次2000 μ g的剂量递送施用4000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在 一些实施方案中，第一时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案 中，第一时间阶段是4周，即剂量增加始于第5周施用开始之际。在一些实施方案中， 第二时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，长期施用周剂 量(即，第二时间阶段是如本文所述的长期施用)。在另一实施方案中，以两次1500yg 的剂量递送，向个体施用3000 μ g初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期4周，紧 接着以两次2000 μ g的剂量递送长期施用(始于第5周)4000 μ g周总剂量的所述促胰岛 素肽缀合物。在具体实施方案中，以所述次序按如下步骤向个体施用所述促胰岛素肽缀合 物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用 二次1.5mg所述促胰岛素肽缀合物；和(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用 二次 2.0mg所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一持续时间阶段4周。在一些实 施方案中，第二持续时间阶段8周。在另一实施方案中，在向个体施用的所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰 岛素肽缀合物制剂的剂量在重复施用期间增加的情况下，在第一时间阶段向个体施用 1500 μ g初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第二时间阶段施用2000 μ g周总 剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第三时间阶段施用3000 μ g周总剂量的所述促胰 岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多 周，第二时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，第一时间 阶段4周，第二时间阶段4周，即剂量的增加始于第5周和第9周施用开始之际。在具 体实施方案中，第一时间阶段2周，第二时间阶段2周，即剂量的增加始于第3周和第5 周施用开始之际。在一些实施方案中，第三时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更 多周。在具体实施方案中，长期施用周剂量(即，第三时间阶段是如本文所述的长期施 用)。在另一实施方案中，向个体施用1500 μ g初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物， 为期4周，紧接着施用(始于第5周)2000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期 4周，紧接着长期施用(始于第9周)3000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在另 一实施方案中，向个体施用1500 μ g初始周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期2周， 紧接着施用(始于第3周)2000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，为期2周，紧接 着长期施用(始于第5周)3000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。
在具体实施方案中，以所述次序按如下步骤向个体施用所述促胰岛素肽缀合 物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的剂量(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施 用一次1.5mg所述促胰岛素肽缀合物；(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用一次 2.0mg所述促胰岛素肽缀合物；和(c)第三持续时间阶段向所述个体每周施用一次3.0mg 所述促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一持续时间阶段4周。在一些实施方案 中，第二持续时间阶段8周。
在其它实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂 的剂量在重复施用期间降低。例如，在具体实施方案中，在第一时间阶段向所述个体每 周施用二次1500 μ g，计3000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物，接着在第二时间阶 段施用2000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合物。在另一具体实施方案中，在第一时 间阶段向所述个体每周施用二次1500 μ g，计3000 μ g周总剂量的所述促胰岛素肽缀合 物，接着在第二时间阶段向所述个体每周施用二次1000 μ g，计2000 μ g周总剂量的所述 促胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，第一时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更 多周。在具体实施方案中，第一时间阶段4周。在一些实施方案中，第二时间阶段是1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。在具体实施方案中，长期施用周剂量(即，第二时 间阶段是如本文所述的长期施用)。
本文所述的有效量的所述促胰岛素肽缀合物将提供治疗益处而不会产生大的毒 性。
所述促胰岛素肽缀合物的毒性可通过细胞培养或试验动物的标准药学方法来确 定，例如，通过测定LD50 (50%群体的致死剂量)或LD100 (100%群体的致死剂量)来 确定。毒性效应和治疗效应的剂量之比为治疗指数。优选治疗指数高的化合物。从这 些细胞培养测定和动物研究获得的数据可用于配制人用无毒的剂量范围。本文所述化合 物的剂量优选在循环浓度范围之内，包括很少或没有毒性的有效剂量。剂量可以取决 于所采用的剂型和所利用的施用途径而在此范围内变化。确切的剂型、施用途径和剂 量可由每个医师考虑个体的病症来选择(参见Fingl等，1996 The Pharmacological Basis ofTherapeutics,第 9 版，第 2 章第 29 页，Elliot M.Ross)。
5.3.9.1组合治疗的施用途径和剂量
所述促胰岛素肽缀合物，例如本文所述的促胰岛素肽缀合物制剂，以及一种或 多种第二治疗剂可以基本上在相同的时间即同时施用，例如在同一小时或同一天内等施 用；或在不同的时间交错施用，即相继地在施用另一抗糖尿病药之前或之后施用，例如 在不同天、不同周等施用。因此本方法应理解为包括所有这样的同时或非同时治疗。 在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物制剂在施用其它第二治疗剂的0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或超过 18 小时之内施 用。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物制剂在施用其它第二治疗剂的1、2、3、 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或超过14天之内施用。在一些实施方案中，所 述促胰岛素肽缀合物制剂在施用第二治疗剂的1、2、3、4、5或超过5周之内施用。
在一些实施方案中，在本发明提供的组合治疗中，按照本发明提供的施用方 案，例如间隔5、6、7、8或9天，或间隔12、13、14、15或16天，通过皮下注射向个 体施用促胰岛素肽缀合物制剂。取决于待治疗的疾病和个体的病症，具体的一种或多种第二治疗剂可以通过口服、胃肠外(例如，肌肉内、腹膜内、静脉内、动脉内、脑室 内(ICV)、枕大池注射或输注、皮下注射、或植入)、吸入喷雾、经鼻、阴道、直肠、舌 下、或表面施用途径而施用，并且可以单独或一起配制成含适宜各施用途径的无毒药学 上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的适宜剂量单位制剂。当具体的第二治疗剂和所述促 胰岛素肽缀合物分开施用时，它们可以通过不同的途径施用。
所述制剂可以在本领域技术人员认为适宜的任何注射部位施用。在某些实施方 案中，所述制剂在腹部、大腿或手臂处施用。
所述制剂可以在本领域技术人员认为适宜的任何时间施用。在某些实施方案 中，所述制剂在早上、餐前、或晚上睡前、或其组合方式来施用。
不过，应当理解，任何特定个体的具体剂量水平和施用频率可变化，这取决于 多种因素，包括年龄、体重、整体健康、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率、药物 组合、具体并且的严重程度以及进行治疗的宿主。
在个体响应本发明提供的组合治疗中的一种或多种药剂而经历不良事件的情况 下，例如，恶性、呕吐、注射相关的皮肤反应、低血糖即血糖水平60mg/dL(3.3mmol/L) 伴有低血糖临床迹象，或任何其它体质症状或迹象，例如极端和快速的减重，可以根据 本领域技术人员的判断来减小或调整一种或多种所述药剂的具体剂量水平和施用频率。
在本发明提供的组合治疗的具体实施方案中，个体接受所述促胰岛素肽缀合物 和一种OAD，例如双胍，例如二甲双胍。在另一具体实施方案中，个体接受所述促胰岛 素肽缀合物和两种OAD，例如双胍(例如二甲双胍)、磺酰脲或噻唑烷二酮，以及第二 OAD。
5.4试剂盒
在另一实施方案中，本发明提供了可用于例如实施本文所述的治疗方法的试 剂盒，其包含本发明的促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂。例如， 本发明提供了用于在有此需要的个体中治疗II型糖尿病的试剂盒。试剂盒包含在配发 给本领域技术人员的包装之中的所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物 制剂。所述试剂盒可以包括标签，或标记有关使用本发明所述促胰岛素肽缀合物的说 明，例如施用所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂以治疗个体的说 明书，所述个体患有(或经历着)例如前期糖尿病(例如，糖耐量受损(IGT)或空腹血 糖受损(IFG))；糖尿病，例如I型糖尿病或II型糖尿病；成人隐匿性自身免疫糖尿病 (“LADA”)，也称为成人迟发性自身免疫糖尿病；迟发性I型糖尿病和1.5型糖尿病； 类固醇诱发的糖尿病；人免疫缺陷病毒(HIV)治疗诱发的糖尿病；先天性或HIV相关脂 肪营养不良个体的糖尿病发展(“脂肪再分布综合症”)；肥胖症(即，BMI为301cg/m2 或更大)；超重(即，BMI为25kg/m2至30kg/m2)；代谢综合症(X综合症)；神经系 统紊乱；外科手术；胰岛素耐受；无知觉低血糖症；限制性肺疾病；胃肠紊乱，例如肠 易激综合症(IBS)、功能性消化不良；与胃肠紊乱相关的疼痛，例如与IBS和功能性消化 不良相关的疼痛；炎症性肠病(IBD)，例如克罗恩病和溃疡性结肠炎；与IBD相关的疼 痛；高血糖症，例如与外科手术(例如，大的外科手术，例如冠状动脉搭桥术)相关的高 血糖症，例如与针对糖尿病(例如II型糖尿病、代谢综合症)个体的外科手术相关的高血 糖症；冠状动脉心力衰竭(CHF)；与β细胞功能障碍相关的紊乱；与β细胞缺失相关的紊乱；与β细胞数量不足相关的紊乱；以及其它可用所述促胰岛素肽或促胰岛素肽缀 合物治疗的病症。
试剂盒可以包括标签，或标记有关使用本发明所述促胰岛素肽缀合物的说明， 例如施用所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂以促进减重、刺激胰 岛素合成和释放、增强脂肪、肌肉或肝组织对胰岛素摄入的敏感性、刺激葡萄糖吸收、 减缓(例如，降低速率)消化过程如胃排空、阻断或抑制胰高血糖素分泌、促进β细 胞功能、增殖和/或活性、恢复糖尿病个体的一期胰岛素释放、减少食物摄入、减小食 欲、预防或防护肝病，例如与肥胖症、糖尿病或高血糖症(例如，非酒精性脂肪性肝病 (NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH))相关的肝病的说明书。
标签上的说明可进一步包括如本发明所述促胰岛素肽缀合物储存条件的说明。
在某些实施方案中，所述试剂盒可以包括一个或多个容器，例如瓶、小瓶、安 瓿、预填充式容器，例如预填充式注射器或预填充式注射笔，微芯片(例如，用于控制 释放其内含物的微芯片)或试管，其含有单位剂量或多次剂量的所述促胰岛素肽缀合 物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂。所述剂型可以作为液体或冻干制剂盛装。包含冻 干剂型的试剂盒可进一步包括一个或多个的其它容器，其含有用于重构冻干制剂的稀释 剂，从而使重构制剂中的蛋白质，即所述促胰岛素肽缀合物的浓度至少为1、2、3、4、 5、10、20、30、40、50mg/ml,例如约 lmg/ml 至约 100mg/ml，更优选约 lmg/ml 至约 50mg/ml，最优选约 lmg/ml 至约 15mg/ml。
所述试剂盒可进一步包括一种或多种可用于实施本发明所述的治疗方法其它组 件，包括但不限于缓冲液、过滤器、针头、注射器以及带有使用说明的包装插页。在 具体实施方案中，所述试剂盒包括针头，例如25号针头、沈号针头、27号针头、观号针 头、四号针头、30号针头、31号针头、32号针或33号针头或更高规格的针头，用于例 如向个体皮下施用所述促胰岛素肽缀合物制剂。在某些实施方案中，所述试剂盒可包括 用于安全处理施用所述促胰岛素肽缀合物制剂的工具的组件，例如盛装用过的注射器和 针头的利器容器。
在优选的实施方案中，所述试剂盒包括一个或多个预装了第一剂量所述促胰岛 素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的注射器，和一个或多个预装了第二更高 剂量所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素肽缀合物制剂的注射器，用于例如在本 发明所述施用方案的过程中向个体施用递增的剂量。在具体实施方案中，所述试剂盒包 括1、2、3、4、5、6、7、8或超过8个预装第一剂量所述促胰岛素肽缀合物，例如所述 促胰岛素肽缀合物制剂的注射器。在另一具体实施方案中，所述试剂盒包括1、2、3、 4、5、6、7、8或超过8个预装第二更高剂量所述促胰岛素肽缀合物，例如所述促胰岛素 肽缀合物制剂的注射器。
在一些实施方案中，预装了第一剂量的注射器包含约IOOOyg量的所述促胰岛 素肽缀合物。在一些实施方案中，预装了第一剂量的注射器包含约1500 μ g量的所述促 胰岛素肽缀合物。在一些实施方案中，预装了第二更高剂量的注射器包含约2000yg量 的所述促胰岛素肽缀合物。
在其它实施方案中，试所述剂盒包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过 10个空注射器，和1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过10个小瓶，其中每个小瓶含有1剂、2剂、3剂、4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂或超过10剂促胰岛素肽 缀合物制剂。在其它实施方案中，所述试剂盒包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或 超过10个预装有1剂、2剂、3剂、4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂或超过10剂所述促胰岛素肽缀合物制剂的注射器。在一些实施方案中，注射器包括锁紧套口、锁 紧锥口或其它针头连接接头，以方便一次性针头的连接。在其它实施方案中，注射器包 括永久的，即永久性针头。
在具体实施方案中，所述试剂盒包括笔式递药器械，和1、2、3、4、5、6、7、 8、9、10或超过10个可替换性内管，其中可替换性内管包含即预装有1剂、2剂、3剂、 4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂或超过10剂所述促胰岛素肽缀合物制剂。在 某些实施方案中，在笔式递药器械包含多次剂量的情况下，该剂量可以是预设的，即固 定的。在其它实施方案中，所述剂量可以是灵活剂量，即由使用者装入。在具体实施 方案中，所述试剂盒包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过10个预装有1剂、2剂、3剂、4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂或超过10剂所述促胰岛素肽缀 合物制剂的笔式递药器械。在一些实施方案中，笔式递药器械包括锁紧套口、锁紧锥口 或其它针头连接接头，以方便一次性针头的连接。在具体实施方案中，所述试剂盒包括 一次性笔式递药器械。在其它实施方案中，笔式递药器械包括永久的，即永久性针头。 在一些实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物制剂包含IOmM醋酸钠缓冲液中的IOmg/ ml艾塞那肽-4 (1-39)Lys40( ε -AEEA-MPA) -NH2白蛋白缀合物，ρΗ为5.0，所述缓冲 液含5mM辛酸钠、0.1% (w/v)普朗尼克F68和150mM氯化钠。在其它实施方案中， 所述促胰岛素肽缀合物制剂包含IOmM磷酸钠缓冲液中的lOmg/ml艾塞那肽-4(1-39) Lys40( ε -AEEA-MPA)-NH2白蛋白缀合物，ρΗ为7.0，所述缓冲液含1.6mM辛酸钠、 15mg/L聚山梨醇酯80和135mM氯化钠。
5.5促胰岛素肽綴合物
本发明涉及包含所述促胰岛素肽缀合物的药物制剂。可用的促胰岛素肽包括但 不限于GLP-1、艾塞那肽-3和艾塞那肽-4、以及它们的前体、衍生物和片段。此类 促胰岛素肽包括美国专利号 6,514,500 ； 6,821,949 ； 6,887,849 ； 6,849,714 ； 6,329,336 ； 6,924,264 ； WO 03/103572和6,593,295中公开的那些，每一篇的内容都整体通过引用并 入本文。
在优选的实施方案中，所述促胰岛素肽是C末端氨基化物(CO-NH2)。
在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是GLP-I。在一些实施方案中，所述促胰 岛素肽是GLP-I衍生物。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽_3。在一些 实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-3衍生物。在一些实施方案中，所述促胰岛素 肽是艾塞那肽-4。在一些实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-4衍生物。在一些 实施方案中，所述促胰岛素肽是艾塞那肽-4 (1-39)-NH2。在一些实施方案中，所述促胰 岛素肽是艾塞那肽-4 (1-39) Lys4tl-NH2。
在优选的实施方案中，所述促胰岛素肽缀合物是艾塞那肽-4(1-39) Lys4ci( ε -AEEA-MPA)-NH2 白蛋白缀合物。
5.5.1GLP-1 及其衍生物
激素胰高血糖素可以根据任何本领域技术人员已知的方法来合成。在一些实施方案中，其作为高分子量前体分子合成，随之蛋白水解成3种肽胰高血糖 素、GLP-1、和胰高血糖素样肽2(GLP_2)。GLP-I的未加工形式具有37个氨基 酸， 如 SEQ ID NO 1 (HDEFERHAEG TFTSDVSSYL EGQAAKEFIAWLVKGRG)所 示。未加工形式的GLP-I基本上不能介导胰岛素生物合成诱导。不过，未加工形式 的GLP-I肽天然转化成SEQ ID NO: 2所示的31个氨基酸长的肽(7_37肽)，其具 有 GLP-1( “GLP-I (7-37)“)的氨基酸 7-37 (HAEGTFTSDVSSYL EGQAAKEFIA WLVKGRG)。GLP-I (7-37)还可以进行其它加工，通过蛋白水解除去C-末端甘氨 酸，从产生GLP-I (7-36)，其还主要以C-末端残基精氨酸氨基化为精氨酰胺的形式 GLP-I (7-36)氨基化物存在。这种加工发生在肠内，胰腺中发生程度要小得多，产生 GLP-I (7-37)具有促胰岛素活性的多肽。
如果一种化合物能够刺激胰岛素激素的合成或表达或引起该刺激，则认为该化 合物具有“促胰岛素活性”。GLP-I (7-37)和GLP-I (7-36)的激素活性似乎对胰腺β 细胞特异，其似乎在此处诱导胰岛素的生物合成。胰高血糖素样肽激素可用于研究成人 发作型糖尿病的致病机理，这是一种以高血糖为特征、其中胰岛素分泌动力学异常的病 症。而且，胰高血糖素样肽可用于这种疾病的治疗和处理，以及高血糖症的治疗和处 理。
可以从人GLP-I确定的氨基酸序列中选择肽部分(片段)。可互换使用的术语 “肽片段”和“肽部分”旨在包括可来自天然存在氨基酸序列的合成及天然存在的氨基酸序列。
GLP-I的氨基酸序列已经由若干研究人员报道过。参见Lopez，L.C.等，1983， Proc.Natl.Acad.Sci, USA 80 5485-5489 ； Bell, G.I.等，1983，Nature302 716-718 ； Heinrich, G.等，1984，Endocrinol. 115 2176-2181。前原高血糖素(preprogluciigon) mRNA的结构及其对应的氨基酸序列是公知的。已经表征了前体基因产物，即前高血 糖素(progluoigan)向胰高血糖素和两种促胰岛素肽的蛋白水解加工。如本文所用， GLP-I (1-37)的概念是指具有1 (N-末端)至37 (C_末端)所有氨基酸的GLP-I多肽。 与此类似，GLP-I (7-37)是指具有7 (N-末端)至37 (C_末端)所有氨基酸的GLP-I多 肽。与此类似，GLP-I (7-36)是指具有1 (N-末端)至36 (C-末端)所有氨基酸的GLP-I 多肽。
在一个实施方案中，GLP-I (7-36)及其肽片段通过如下文所述的常规方法合 成，例如通过众所周知的固相肽合成法，如Merrifield，J.M.，1962，Chem.Soc.85 2149,以及 Stewart 禾口 Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Freeman, San Francisco, 1969，27-66页所述，每一篇的内容都整体通过引用并入本文。不过，也有可能利用例如 蛋白水解酶通过使天然存在的氨基酸序列片段化而获得前胰高血糖素多肽或GLP-I的片 段。此外，有可能通过应用重组DNA技术而获得前胰高血糖素多肽或GLP-I的期望片 段，iQ Maniatis, Τ.等，Molecular Biology A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982中所公开的那样，其整体通过引用并入本文。
可用于本文所述方法的肽包括衍生自GLP-I的那些肽，例如GLP-I (1-37)和 GLP-I (7-36)。如果肽能够通过使天然存在的序列片段化、或能够基于对天然存在氨基 酸序列或编码此序列的基因材料(DNA或RNA)的序列了解而合成，则认为该肽“可衍生自天然存在的氨基酸序列”。
同样有用的是被认为是GLP-I衍生物”的那些分子，例如GLP-I (1-37)，尤其 是GLP-I (7-36)。此类“衍生物”具有如下特征(1)其与GLP-I或GLP-I类似大小 的片段享有基本的同源性；( 其能够作为促胰岛素激素发挥作用；和C3)应用本发明提 供的至少一种测定法，所述衍生物的促胰岛素活性至少为GLP-I促胰岛素活性的1%、 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 100%或大于 100%。
如果GLP-I衍生物的氨基酸序列与GLP-I (1-37)享有至少80%、更优选至少 90%,最优选至少95%的同一性，则认为该衍生物与GLP-I享有“基本的同源性”。在 此上下文中，同一性百分比表示在对序列进行比对，并且如果必要引入空位以获得最大 序列同源性百分比之后，候选序列中与肽中的对应氨基酸残基完全相同(即，比对中给 定位置上的氨基酸残基是相同的残基)或相似(即，比对中给定位置上的氨基酸取代是保 守取代，如上文所讨论的那样)的氨基酸残基百分比。在某些实施方案中，GLP-I衍生 物以其与天然存在GLP-I序列的序列同一性百分比或序列相似性百分比进行表征。序列 同源性，包括序列同一性和相似性百分比，利用本领域公知的序列比对技术来确定，优 选利用经设计用于此目的的计算机算法，使用所述计算机算法或含所述算法的软件包的 默认参数。
可用的衍生物还包括GLP-I片段，其除了含有基本上同源于天然存在GLP-I肽 的序列之外，还可以在其氨基和/或其羧基末端、或在所述序列内部含有一个或多个其 它氨基酸。因而，可用的衍生物包括可以含有天然存在GLP-I序列中可能不存在的一个 或多个氨基酸的GLP-I多肽片段，条件是此类多肽的促胰岛素活性至少为GLP-I促胰岛 素活性的1%、5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 100%或大于100%。其它氨基酸可以是 D-氨基酸或L-氨基酸或其组合。
可用的GLP-I片段还包括那些虽然含有基本上与天然存在GLP-I肽的序列同 源，但是在其氨基和/或其羧基末端缺少天然GLP-I肽中的一个或多个其它氨基酸。因 而，可用的GLP-I多肽片段可以缺少天然存在GLP-I序列中正常存在的一个或多个氨 基酸，条件是此类多肽的促胰岛素活性至少为GLP-I促胰岛素活性的1%、5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 100%或大于100%。在某些实施方案中，所述多肽片段缺少天然存 在GLP-I序列中正常存在的一个氨基酸。在一些实施方案中，所述多肽片段缺少天然存 在GLP-I序列中正常存在的两个氨基酸。在一些实施方案中，多所述肽片段缺少天然存 在GLP-I序列中正常存在的三个氨基酸。在一些实施方案中，所述多肽片段缺少天然存 在GLP-I序列中正常存在的四个氨基酸。
同样有用的是上述片段的明显或细微变体，其具有序列中的氨基酸取代(因而 具有不同于天然序列的氨基酸序列)，条件是此类变体的促胰岛素活性与上述GLP-I衍 生物基本上完全相同。明显或细微取代的实例包括用一个碱性残基取代另一个(即Arg 取代Lys)，用一个疏水残基取代另一个(即Leu取代lie)，或用一个芳族残基取代另一个 (即Phe取代Tyr)，等等。
除了那些具有促胰岛素活性的GLP-I衍生物，刺激细胞吸收葡萄糖但不刺激胰 岛素表达或分泌的GLP-I衍生物也可用于本发明所述的方法。此类GLP-I衍生物在美国 专利号5,574,008中公开，其整体通过引用并入本文。
能够在本文所述方法中使用的刺激细胞吸收葡萄糖但不刺激胰岛素表达或分泌 的GLP-I衍生物包括
H2N-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa -Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 3)；
H2N-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val -Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 4)；
H2N-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu -Val-Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 5)；
H2N-Asp-Va 卜 Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp -Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 6)；
H2N-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala -Trp-Leu-Va卜Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 7)；
H2N-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile -Ala-Trp-Leu-Va卜Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 8)；
H2N-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Ph e-Ile-Ala-Trp-Leu-Va卜Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 9)；
N-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-VaHkrler-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Gl u-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Va卜Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ IDNO 10)；
H2N-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Ly s-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 11)；
H2N-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Va 卜 Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Al a-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ ID NO 12)；
H2N-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Al a-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ IDNO 13)；
H2N-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gl n-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Va卜Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQ IDNO 14) ； and
H2N-His-D-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Va卜Xaa-Gly-Arg-R2 (SEQID NO : 15).
这些肽是C-末端GLP-I片段，它们不具有促胰岛素活性，但仍然可用于治疗糖 尿病和高血压病症，如美国专利号5,574,008中所述，其整体通过引用并入本文。
能够用于本发明所述制剂和方法的其它GLP-I衍生物包括GLP-I/艾塞那肽_4 杂合肽，其含有与艾塞那肽-4的9个C-末端氨基酸融合的GLP-I (7-36)，其序列为 HAEG TFTSDVSSYL EGQAAKEFIA WLVKGRPSSGAPPPS (SEQ ID NO 28)。
同样可用于本发明所述制剂和方法的是含有以下融合蛋白分子的GLP-I衍生 物[Gly8]GLP-l (7-36) -[Gly8]GLP-l (7-36)-人血清白蛋白(albiglutide)，如美国专利号 7,141,547中所述，其整体通过引用并入本文。
能够用于本发明所述制剂和方法的其它GLP-I衍生物包括如下GLP-I 融合蛋白分子GLP-I (7-36)-人血清白蛋白；人血清白蛋白-GLP-I (7-36)； [Gly8]GLP-l(7-36)-人血清白蛋白；人血清白蛋白-[Gly8]GLP_l (7_36)；GLP-I (7-36) -GLP-I (7-36)-人血清白蛋白；GLP-I (9-36)-人血清白蛋白；和[Gly8] GLP-I (7-36)-GLP-I (7-36)-人血清白蛋白，如美国专利号7,141,547中所述，其整体通 过引用并入本文。
能够用于本发明所述制剂和方法的其它GLP-I衍生物包括GLP-I/艾塞那肽_4/ 人血清白蛋白杂合多肽，其含有[Gly8][Glu22]GLP-l (7-36)，与艾塞那肽_4(1_39)的8个 C-末端氨基酸融合，与接头序列融合，与人血清白蛋白融合，具有序列
HGEGTFTSDV SSYLEEQAAK EFIAWLVKGR GSSGAPPPSG
GGGGSGGGGS GGGGSDAHKS EVAHRFKDLG EENFKALVLIAFAQYLQQCP
FEDHVKLVNE VTEFAKTCVA DESAENCDKS LHTLFGDKLC TVATLRETYG
EMADCCAKQE PERNECFLQH KDDNPNLPRL VRPEVDVMCT AFHDNEETFL
KKYLYEIARR HPYFYAPELL FFAKRYKAAF TECCQAADKA ACLLPKLDEL
RDEGKASSAK QRLKCASLQK FGERAFKAWA VARLSQRFPK AEFAEVSKLV
TDLTKVHTEC CHGDLLECAD DRADLAKYIC ENQDSISSKL KECCEKPLLE
KSHCIAEVEN DEMPADLPSL AADFVESKDV CKNYAEAKDV FLGMFLYEYA
RRHPDYSVVL LLRLAKTYET TLEKCCAAAD PHECYAKVFD EFKPLVEEPQ
NLIKQNCELF EQLGEYKFQN ALLVRYTKKV PQVSTPTLVE VSRNLGKVGS
KCCKHPEAKR MPCAEDYLSV VLNQLCVLHE KTPVSDRVTK CCTESLVNRR
PCFSALEVDE TYVPKEFNAE TFTFHADICT LSEKERQIKK QTALVELVKH
KPKATKEQLK AVMDDFAAFV EKCCKADDKE TCFAEEGKKL VAASQAALGL
(SEQ ID NO 29)，如美国专利号7,271,149中所述，其整体通过引用并入本文
5.5.2艾塞那肽-3和艾塞那肽_4以及衍生物
艾塞那肽-3和艾塞那肽-4是39个氨基酸的肽(残基2和3不同)，其与GLP-1 大约53%同源，能用作促胰岛素药。
艾塞那肽-3的氨基酸序列是
HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG PSSGAPPPS (SEQ ID NO 16)，
艾塞那肽-4的氨基酸序列是
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS (SEQ ID NO 17)。
同样可用于本发明所述制剂的是艾塞那肽-4的促胰岛素片段， 其含有氨基酸序列艾塞那肽-4 (1-3 DdesGlu17Tyr32 (SEQ ID NO: 18) HGEGTFTSDLSKQMEEAVRLFIEWLKNGGPY 和艾塞那肽 _4 (1-30) Tyr31 (SEQ ID NO W)HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGY。
同样有用的是天然艾塞那肽-4的的抑制性片段，含有氨基酸序列艾塞那 肽-4 (9-39) (SEQ ID NO 20) DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS。
其它示例性促胰岛素肽如EQ ID NO 21-27所示。
权利要求
1.一种药物制剂，其包含白蛋白与促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有相 对于天然艾塞那肽-4序列具有不超过3个氨基酸取代、缺失或插入的序列，所述缀合物 浓度约为lmg/ml至约lOOmg/ml ；缓冲液；张力调节剂，其中该张力调节剂浓度至少为 ImM；稳定剂；和表面活性剂，其中所述制剂的pH为约4至约8。
2.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物含有与[2-[2-[2_马来酰亚胺丙酰 胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接头与所述 肽的赖氨酸的ε氨基共价连接。
3.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物如下
4.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述赖氨酸已经被添加至天然艾塞那肽_4序 列中。
5.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述赖氨酸已经被添加至天然艾塞那肽_4序 列的羧基末端。
6.如权利要求1-5中任一项所述的药物制剂，其中所述白蛋白是人血清白蛋白。
7.如权利要求1-5中任一项所述的药物制剂，其中所述白蛋白是重组血清白蛋白。
8.如权利要求1-5中任一项所述的药物制剂，其中所述白蛋白是重组人血清白蛋白。
9.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物含有与[2-[2-[2_马来酰亚胺基丙 酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所 述接头与艾塞那肽_4 (1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接。
10.如权利要求1-8中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物是纯化的。
11.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约lmg/ml 至约 50mg/ml。
12.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约lmg/ml 至约 15mg/ml。
13.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约lmg/ml 至约 10mg/ml。
14.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约1Omg/ml 。
15.如权利要求1-10中任一项所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为约20mg/ml 。
16.如权利要求1-15中任一项所述的药物制剂，其中pH在约5至约7之间。
17.如权利要求1-15中任一项所述的药物制剂，其中pH约5.0。
18.如权利要求1-15中任一项所述的药物制剂，其中pH约7.0。
19.如权利要求1-18中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液是醋酸缓冲液。
20.如权利要求19所述的药物制剂，其中所述醋酸缓冲液是醋酸钠缓冲液，且其中 pH约4.0至约6.0。
21.如权利要求1-18中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液是磷酸缓冲液。
22.如权利要求21所述的药物制剂，其中所述磷酸缓冲液是磷酸钠缓冲液，且其中 pH约6.0至约8.0。
23.如权利要求1-22中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液浓度ImM至约 20mM。
24.如权利要求1-22中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液的浓度为5mM至约 15mMo
25.如权利要求1-22中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液的浓度为约lOmM。
26.如权利要求1-25中任一项所述的药物制剂，其中所述张力调节剂是氯化钠。
27.如权利要求26所述的药物制剂，其中氯化钠的浓度为约135mM至约155mM。
28.如权利要求26所述的药物制剂，其中氯化钠的浓度为约135mM。
29.如权利要求26所述的药物制剂，其中氯化钠的浓度为约150mM。
30.如权利要求1-25中任一项所述的药物制剂，其中所述张力调节剂是山梨糖醇。
31.如权利要求30所述的药物制剂，其中山梨糖醇约5%(w/v)。
32.如权利要求1-31中任一项所述的药物制剂，其中所述稳定剂是辛酸钠。
33.如权利要求32所述的药物制剂，其中辛酸钠的浓度为约5mM。
34.如权利要求1-33中任一项所述的药物制剂，其中所述表面活性剂是普朗尼克F68。
35.如权利要求34所述的药物制剂，其中普朗尼克F68约0.1%(w/v)。
36.如权利要求1-35中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂还包含防腐剂。
37.如权利要求36所述的药物制剂，其中所述防腐剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、甘 油、间苯二酚、2-甲基-2，4-戊二醇、硫柳汞(水杨乙汞)、苯扎氯铵和苯甲酸钠。
38.如权利要求1-37中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂为单位剂型。
39.如权利要求1-37中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂为多次剂型。
40.如权利要求1-39中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂为液体剂型。
41.如权利要求1-39中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂为冻干剂型。
42.如权利要求1-41中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂适合于胃肠外施用。
43.如权利要求42所述的药物制剂，其所述中药物制剂适合于皮下、静脉内、肌肉 内、经皮、动脉内、腹膜内、肺部或口服施用。
44.如权利要求42所述的药物制剂，其中所述药物制剂适合于皮下施用。
45.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为lOmg/ml，所述缓冲液 是浓度为IOmM的醋酸钠，所述张力调节剂是浓度为150mM的氯化钠，所述稳定剂是浓 度为5mM的辛酸钠，所述表面活性剂是浓度为0.1% (w/v)的普朗尼克F68，且其中所述 制剂的pH为约5.0。
46.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述缀合物的浓度为lOmg/ml，所述缓冲液是浓度为IOmM的磷酸钠，所述张力调节剂是浓度为135mM的氯化钠，所述稳定剂是浓 度为SmM的辛酸钠，所述表面活性剂是浓度为15mg/L的聚山梨醇酯80，且其中所述制 剂的pH为约7.0。
47.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用药物 制剂，所述药物制剂包含白蛋白与促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素肽含有相对于 天然艾塞那肽-4序列具有不超过3个氨基酸取代、缺失或插入的序列，所述缀合物的浓 度为约lmg/ml至约lOOmg/ml;缓冲液；张力调节剂；稳定剂；和表面活性剂，其中所 述制剂的pH为约4至约8。
48.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用如权 利要求1-45、81或82中任一项所述的药物制剂。
49.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用如权 利要求46或权利要求83所述的药物制剂。
50.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用约1.0-4.0mg 所述缀合物。
51.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用约1.5-2.0mg 所述缀合物。
52.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用约3.0-4.0mg 所述缀合物。
53.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用一次1.5mg 所述缀合物。
54.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用一次2.0mg 所述缀合物。
55.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用一次3.0mg 所述缀合物。
56.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其包括向所述个体每周施用两次1.5mg 所述缀合物。
57.如权利要求47-49中任一项所述的方法，该方法按下述顺序包括以下步骤(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合物；和(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用一次2.0mg所述缀合物。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述第一持续时间阶段为4周，其中所述第二持 续时间阶段为8周。
59.如权利要求47-49中任一项所述的方法，该方法按下述顺序包括以下步骤(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用二次1.5mg所述缀合物；和(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用二次2.0mg所述缀合物。
60.如权利要求59所述的方法，其中所述第一持续时间阶段为4周。
61.如权利要求47-49中任一项所述的方法，该方法按下述顺序包括以下步骤(a)第一持续时间阶段向所述个体每周施用一次1.5mg缀合物；(b)第二持续时间阶段向所述个体每周施用一次2.0mg缀合物；和(C)第三持续时间阶段向所述个体每周施用一次3.0mg缀合物。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述第一持续时间阶段为4周，其中所述第二持 续时间阶段为4周。
63.如权利要求61所述的方法，其中所述第一持续时间阶段为2周，其中所述第二持 续时间阶段为2周。
64.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚 胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯 基，所述接头与艾塞那肽-4(l-39)Lys40-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中 向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合的艾塞那肽_4衍生物。
65.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚 胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯 基，所述接头与艾塞那肽_4 (1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中 向所述个体每周施用二次1.5mg所述缀合的艾塞那肽_4衍生物。
66.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚 胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯 基，所述接头与艾塞那肽_4 (1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中 向所述个体每周施用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽_4衍生物。
67.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚 胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯 基，所述接头与艾塞那肽_4 (1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中 向所述个体每周施用二次2.0mg所述缀合的艾塞那肽_4衍生物。
68.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚 胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯 基，所述接头与艾塞那肽_4 (1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中 向所述个体每周施用一次3.0mg所述缀合的艾塞那肽_4衍生物。
69.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚 胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯 基，所述接头与艾塞那肽_4 (1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中 向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周施 用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽_4衍生物。
70.治疗个体II型糖尿病的方法，包括向具有II型糖尿病的个体施用包含促胰岛素肽 缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚胺基丙酰胺 基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯基，所述接 头与艾塞那肽-4(1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中向所述个体每周施用二次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周施用一次2.0mg 所述缀合的艾塞那肽_4衍生物。
71.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰 亚胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34 巯基，所述接头与艾塞那肽_4 (1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其 中向所述个体每周施用二次1.5mg缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周两次 2.0mg所述缀合的艾塞那肽_4衍生物。
72.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚 胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯 基，所述接头与艾塞那肽_4 (1-39)Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中 向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周施 用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期4周，接着每周施用一次3.0mg所述 缀合的艾塞那肽-4衍生物。
73.一种治疗个体II型糖尿病的方法，该方法包括向具有II型糖尿病的个体施用包含 促胰岛素肽缀合的艾塞那肽_4衍生物的药物制剂，所述衍生物含有与[2-[2-[2_马来酰亚 胺基丙酰胺基(乙氧基)乙氧基]乙酸接头共价连接的重组人血清白蛋白半胱氨酸34巯 基，所述接头与艾塞那肽_4 (1-39) Lys4tl-NH2羧基末端赖氨酸的ε氨基共价连接，其中 向所述个体每周施用一次1.5mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期2周，接着每周施 用一次2.0mg所述缀合的艾塞那肽-4衍生物，为期2周，接着每周施用一次3.0mg所述 缀合的艾塞那肽-4衍生物。
74.—种治疗个体II型糖尿病的试剂盒，该试剂盒包括一个或多个含有如权利要求 1-46或81-83中任一项所述的药物制剂的容器。
75.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述一个或多个容器各自含有所述药物制剂的 单位剂型。
76.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述药物制剂是冻干的。
77.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述冻干的药物制剂通过在非还原糖的存在下 冻干而制备。
78.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述非还原糖是蔗糖或海藻糖。
79.如权利要求76所述的试剂盒，其还包括一个或多个含有用于重构所述冻干药物制 剂的无菌稀释剂的容器。
80.如权利要求47-73中任一项所述的方法，其中所述个体每天使用MOOOmg稳定剂 量的二甲双胍至少3个月。
81.—种由以下成分组成的药物制剂白蛋白与促胰岛素肽的缀合物，所述促胰岛素 肽含有相对于天然艾塞那肽-4序列具有不超过3个氨基酸取代、缺失或插入的序列，所 述缀合物的浓度为约lmg/ml至约lOOmg/ml;缓冲液；张力调节剂；稳定剂；和表面活 性剂，其中所述制剂的pH为约4.0至约8.0。
82.—种由以下成分组成的药物制剂(a)具有下式的缀合物
83. 一种由以下成分组成的药物制剂 (a)具有下式的缀合物
84.如权利要求47-49、64-73或81-83中任一项所述的方法，其中所述白蛋白是人血清白蛋白。
85.如权利要求47-49、64-73或81-83中任一项所述的方法，其中所述个体是人。His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gtn-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Vaj-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Tfp-Leu-Lys-Asn-Giy-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser
全文摘要
本发明提供了包含促胰岛素肽缀合物特别是白蛋白与艾塞那肽-4或其衍生物的缀合物的药物制剂，及其施用方法。本发明还提供了通过施用本文所述的药物制剂来治疗糖尿病和促胰岛素肽相关疾病或病症的方法。
文档编号A61K47/48GK102026666SQ200880126594
公开日2011年4月20日 申请日期2008年12月11日 优先权日2007年12月11日
发明者吉恩-菲利普·埃斯特拉迪耶, 奥马尔·库雷希, 托马斯·R·乌利希, 拜恩·赛昂·常, 玛吉·王, 马里夫·卡里尔 申请人:康久化学生物技术公司