重组人抗人TNFα单克隆抗体的制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种单抗制剂，特别是涉及一种稳定的重组人抗人TNF a单克隆抗体 的制剂。
【背景技术】
[0002] 肿瘤坏死因子a (TNFa )是由多种类型的细胞产生的细胞因子，包括单核细胞和 巨噬细胞，最初是根据它们诱导某些小鼠肿瘤坏死的能力鉴定的。现在已经证实TNFa与 多种人类疾病相关，包括脓毒症，感染，自身免疫性疾病，移植排斥等。
[0003] 由于能够结合并中和人肿瘤坏死因子（hTNF a )从而抑制hTNF a活性，抗hTNF a 成为治疗hTNF a相关疾病的手段。早期的hTNF a为杂交瘤分泌的小鼠单克隆抗体或者用 遗传工程方法制备的嵌合抗体（抗体链的可变区是源于鼠的）或者人源化抗体（抗体链高 变区是源于鼠的），在人体内不能诱导某些人效应功能或者会引发"人抗-小鼠抗体"反应 (HAMA)。当考虑到长期施用于慢性疾病，如类风湿关节炎时，此缺陷显得更加明显。
[0004] 本说明书中提到的重组人抗人TNFa单克隆抗体指通过重组方法制备，表达，生 产或分离的人抗体。所述抗体具有源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区，其中某 些氨基酸位点可能接受了体外诱变。
[0005] 现有的人抗人TNFa单克隆抗体制剂专利：
[0006] 艾博特生物技术有限公司H ? -J ?克劳泽，L ?鲍斯特和M ?迪克斯申请了 "用于 治疗TNF-a相关病症的人抗体的制剂"（申请号为03824272. 9,授权公告号CN1688339B)。 其优点在于提供了一种制剂，使人TNFa单克隆抗体在高浓度下具有较长时间的稳定性， 但缺点在于配方复杂，缓冲体系由两种缓冲液组成，制备不方便。
【发明内容】
[0007] 本发明要解决的技术问题是提供一种重组人抗人TNFa单克隆抗体的制剂。该制 剂具有高蛋白浓度、制备简单、稳定性好等优点。
[0008] 为解决上述技术问题，本发明的重组人抗人TNF a单克隆抗体的制剂，其组成包 括：重组人抗人TNFa单克隆抗体、赋形剂、渗透压调节剂、保护剂和缓冲盐；
[0009] 其中，在所述制剂中，重组人抗人TNFa单克隆抗体的蛋白含量为1~150mg/mL ;
[0010] 赋形剂在所述制剂中的含量为〇~20%;
[0011] 渗透压调节剂在所述制剂中的含量为1~20g/L ;
[0012] 保护剂在所述制剂中的含量为0. 1~10g/L ;
[0013] 缓冲盐在所述制剂中的浓度为5~200mmol/L ;
[0014] 所述制剂的pH为4~8。
[0015] 对于上述制剂，所述重组人抗人TNFa单克隆抗体的蛋白含量优选为25~100mg/ ml〇
[0016] 所述赋形剂包括：糖类或多醇类，如包括：蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇中的一种 或多种。其中，赋形剂在制剂中的含量优选为1~10%。
[0017] 所述渗透压调节剂包括：糖类或盐类，如包括：蔗糖、甘露醇、氯化钠中的一种或 多种。其中，渗透压调节剂在所述制剂中的含量优选为2~10g/L。
[0018] 所述保护剂包括：糖类、醇类或吐温，如包括：吐温、甘露醇、蔗糖中的一种或多 种。其中，保护剂在所述制剂中的含量优选为〇. 5~2g/L。
[0019] 所述缓冲盐包括：组氨酸缓冲盐体系（如包括：组氨酸与组氨酸盐酸盐的缓冲体 系），其中，缓冲盐在所述制剂中的浓度为10~100mm〇l/L。
[0020] 所述制剂的pH优选为pH4~6。
[0021] 本发明中，蔗糖、甘露醇既可作为保护剂，又作为渗透压调节剂，还可作为赋形剂。
[0022] 另外，关于上述制剂的制备方法，可举出以下方法。
[0023] 如上述制剂的制备方法，其步骤可包括：
[0024] 配制所述制剂的制剂缓冲液，包括：20mM组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲液，50g/L蔗 糖、2.93g/L氯化钠，pH值5.2;
[0025] 将用超滤膜/管将已经分离纯化好的重组人抗人TNF a单克隆抗体加入至上述制 剂缓冲液中，并用上述制剂缓冲液将重组人抗人TNF a单克隆抗体浓度调整至50mg/mL;然 后，添加聚山梨酯80至其含量为lg/L;
[0026] 用0. 22ym过滤器过滤，并分装至2R西林瓶中。
[0027] 再者，本发明还提供一种重组人抗人TNFa单克隆抗体的制剂的应用，其用途是 用于制备治疗其中TNF a活性是有害的病症的药物，其中制备的药物通过液体注射形式使 用。
[0028] 本发明的制剂的实际施用量（即活性组分）依赖于许多因素，如待治疗疾病的严 重性、治疗对象的年龄和相对健康程度、所使用的抗体的效能、施用途径和形式，以及其他 因素。
[0029] 本发明的制剂，其配方简单，制备方便。同时，相比较于艾博特生物技术有限公司 H ? -J ?克劳泽，L ?鲍斯特和M ?迪克斯申请的"用于治疗TNF-a相关病症的人抗体的制 剂"专利（授权公告号CN1688339B)，本发明制剂具有更强的稳定性。
【具体实施方式】
[0030] 以下通过实施例详细说明本发明的内容，但这些实施例并不构成对本发明的限 制。
[0031] 实施例1制剂的制备
[0032] 本发明的制剂是按照以下方法制备的。
[0033] 分别按表1、2和3中所列组分含量配制溶液A、溶液B和溶液C。
[0034]表1溶液A
[0035]
[0036] 表2溶液B
[0037]
[0038] 表3溶液C
[0039]
[0040]配制好的溶液A滴加至溶液B中，一边滴加一边测量pH值，直至pH值为5. 2,命名 为溶液D。溶液C用0. 22 y m过滤器过滤至无菌无内毒素接收容器中。
[0041] 用超滤膜/管对已经分离纯化好的重组人抗人TNF a单克隆进行换液浓缩，替换 至上述缓冲液D中。用溶液D将换液浓缩后的样品稀释至重组人抗人TNF a单克隆抗体为 50mg/mL。添加溶液C至聚山梨酯80的含量为lg/1。稀释后的样品用0. 22ym过滤器过 滤，分装至2R西林瓶中，0. 8mL/管，并将其制剂样品（本发明的制剂）命名为F1。
[0042] 实施例2稳定性比较研究
[0043] 将艾博特生物技术有限公司申请的"用于治疗TNF-a相关病症的人抗体的制 剂"（授权公告号CN1688339B)所提及的制剂处方中的D2E7替换为本发明的重组人抗人 TNF a单克隆抗体（该抗体已经用超滤膜/管分离纯化好），具体组成为：50mg/ml的重组 人抗人TNFa单克隆抗体，12mg/ml的甘露糖醇，lmg/ml的失水山梨醇聚氧乙稀（20)醚油 酸酯，1. 3mg、ml的朽1檬酸，0? 3mg/ml的梓檬酸钠，1. 5mg/ml的二水合磷酸氢二钠，0? 9mg/ml 的二水合磷酸二氢钠，6. 2mg/ml的氯化钠，pH值为5. 0 ;并将该制剂样品命名为F2。
[0044] 通过振摇稳定性考察、40°C高温加速稳定性考察和2~8°C稳定性考察实验比较 本发明所述的制剂（实施例的F1)与艾博特生物技术有限公司专利中提及的制剂（F2)的 稳定性。其中，两种制剂样品的制备均采用了上海药明康德新药开发有限公司制备并提供 的重组人抗人TNF a单克隆抗体。
[0045] 表4处方2~8 °C稳定性研究结果
[0046]
[0049] 表6处方40 °C稳定性研究结果
[0050]
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[0051] 从表4和表5可以看出，FI和F2两种处方样品所有检测指标在考察条件下表 现出了相当的稳定性。从表6可以看出，在40°C加速条件下，F1处方样品在关键质量指 标SEC-HPLC纯度和CEX-HPLC纯度上表现出优于F2处方样品的稳定性。具体地，关于 SEC-HPLC纯度，考察时间为4周时，F1处方样品下降了 4. 8，F2处方样品下降了 6. 9 %;关于 CEX-HPLC纯度，考察时间为4周时，F1处方样品下降了 18. 0 %，F2处方样品下降了 21. 7 %。
【主权项】
1. 一种重组人抗人TNF a单克隆抗体的制剂，其特征在于，其组成包括：重组人抗人 TNFa单克隆抗体、赋形剂、渗透压调节剂、保护剂和缓冲盐； 其中，在所述制剂中，重组人抗人TNFa单克隆抗体的蛋白含量为1~150mg/mL ; 赋形剂在所述制剂中的含量为〇~20% ; 渗透压调节剂在所述制剂中的含量为1~20g/L ; 保护剂在所述制剂中的含量为〇. 1~l〇g/L ; 缓冲盐在所述制剂中的浓度为5~200mmol/L ; 所述制剂的pH为4~8。2. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于：所述重组人抗人TNF a单克隆抗体的蛋白 含量为25~lOOmg/ml ; 所述赋形剂包括：糖类或多醇类； 所述渗透压调节剂包括：糖类或盐类； 所述保护剂包括：糖类、醇类或吐温。3. 如权利要求2所述的制剂，其特征在于：所述赋形剂包括：蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山 梨醇中的一种或多种；其中，赋形剂在制剂中的含量为1~10% ; 所述渗透压调节剂包括：蔗糖、甘露醇、氯化钠中的一种或多种；其中，渗透压调节剂 在所述制剂中的含量为2~10g/L ; 所述保护剂包括：吐温、甘露醇、蔗糖中的一种或多种；其中，保护剂在所述制剂中的 含量为〇. 5~2g/L。4. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于：所述缓冲盐包括：组氨酸缓冲盐体系； 其中，缓冲盐在所述制剂中的浓度为10~lOOmmol/L ; 所述制剂的pH为pH4~6。5. 如权利要求4所述的制剂，其特征在于：所述组氨酸缓冲盐体系包括：组氨酸与组氨 酸盐酸盐的缓冲体系。6. -种如权利要求1所述的制剂的制备方法，其特征在于，其步骤包括： 配制所述制剂的制剂缓冲液，包括20mM组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲液，50g/L蔗糖、 2.93g/L 氯化钠，pH 值 5.2 ; 将重组人抗人TNF a单克隆抗体加入至上述制剂缓冲液中，并用上述制剂缓冲液将重 组人抗人了即€1单克隆抗体浓度调整至5〇1^/1111^然后，添加聚山梨酯80至其含量为4/1; 用0. 22 y m过滤器过滤，并分装至2R西林瓶中。7. -种如权利要求1所述的制剂的应用，其特征在于：所述制剂用于制备治疗其中 TNFa活性是有害的病症的药物。
【专利摘要】本发明公开了一种重组人抗人TNFα单克隆抗体的制剂，其组成包括：重组人抗人TNFα单克隆抗体、赋形剂、渗透压调节剂、保护剂和缓冲盐；其中，在所述制剂中，重组人抗人TNFα单克隆抗体的蛋白含量为1～150mg/mL；赋形剂在所述制剂中的含量为0～20％；渗透压调节剂在所述制剂中的含量为1～20g/L；保护剂在所述制剂中的含量为0.1～10g/L；缓冲盐在所述制剂中的浓度为5～200mmol/L；所述制剂的pH为4～8。该制剂具有高蛋白浓度、制备简单、稳定性好等优点。<pb pnum="1" />
【IPC分类】A61P37/06, A61K9/08, A61K39/395, A61P31/00
【公开号】CN105012949
【申请号】CN201410173934
【发明人】罗建军, 韩建峰, 周伟昌, 陈智胜
【申请人】上海药明康德新药开发有限公司, 无锡药明康德生物技术股份有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月28日