专利名称：一种长效、稳定的动物干扰素溶液制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物制品领域，涉及一种稳定的聚乙二醇-动物干扰素长效水溶液制 剂及其制备方法。
背景技术：
干扰素(Interferon，IFN)是一类重要的细胞因子，在病毒性疾病和肿瘤的治疗 上已发挥出了巨大的临床应用价值。动物用干扰素既可以单独作为生物制剂应用于疾病的 防治，也可作为免疫佐剂增强疫苗的免疫效果。但干扰素结构不稳定，在很多缓冲体系或有 其他离子存在的情况下容易失活；干扰素相对分子量小，在体内易受肾的代谢作用，体内半 衰期短。林碧蓉等(2001)、Bailon P等(2001)和童葵塘(2005)等的研究，已经很好的利 用无毒且具有双亲性的PEG对干扰素进行修饰，获得的聚合物稳定性明显增加，体内循环 的半衰期大大延长。但用此方法获得的聚合干扰素多为粉针剂，制作成本高；且使用时需加 入注射用水，临床使用不方便。干扰素为高度折叠的蛋白质结构，对很多物理和化学因素敏 感，在制剂开发中，往往通过添加蛋白类似物、助悬剂等来稳定蛋白结构，而这些单一因素 因未系统研究，而影响了其在干扰素制剂开发中的应用。研制高抗病毒活性和高免疫调节活性的长效、稳定的溶液剂，是动物制剂专家不 断研发的重要课题。本发明通过系统研究，提供了一种稳定的缓冲体系，研制出了长效聚合 干扰素的溶液剂，此剂型在临床使用中既可以注射、也可以饮水，适用的PH值值范围广，具 有重要的应用价值。
发明内容
本申请人经过深入、细致试验，研发出了在pH值6. 0-7. 5之间稳定的聚乙二 醇_干扰素水溶液，该溶液不需要添加吐温和血清白蛋白，为临床提供了 一种稳定的适应 缓冲范围广的干扰素水溶液。本发明涉及一种动物用干扰素溶液制剂，含有聚乙二醇-干扰素聚合物、保护 剂、张力剂、PH值缓冲体系、抗菌防腐剂和足以制备上述列出组分溶液的一定数量的注射用 水。本发明中所用的干扰素，可以是动物用的任何干扰素，包括动物用干扰素α、β 和Y。本发明中采用的干扰素结合到聚乙二醇上，聚乙二醇_干扰素聚合体的形成可以 采用林碧蓉等(2001)、Bailon P等(2001)和童葵塘(2005)中公开的任何方法，聚乙二醇 的平均分子量可在300-30000道尔顿之间变化。每ml溶液含有的聚乙二醇-动物干扰素 中含有IO6-IO8IU干扰素。按照本发明，制剂中使用的保护剂为葡萄糖、果糖、甘氨酸、精氨酸、赖氨酸、甘露 醇、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖、PVPK-30中的一种或多种，各成分含量(W/V)为，葡 萄糖、果糖0. 2% -0. 8%，甘氨酸、精氨酸、赖氨酸0. 1%-1. 0%，甘露醇、山梨醇-10%，蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖0.5% -1.5%, PVPK-300. 5% -3. 0%，优选0. 3%的甘氨酸、1 % 的蔗糖和2%的PVPK-30。本发明所选用的张力剂为0. -1% (W/V)的氯化钠溶液。本发明所选用的PH值缓冲体系可以是常用的缓冲液，优选的缓冲液是磷酸盐缓 冲液，该缓冲液的PH值范围为6. 0-7. 5。本发明中的抗菌防腐剂为常用抑菌剂，如苯酚、苯甲醇等，优选苯酚，含量范围为 0. 1% -0.6% (W/V)，最优选为 0. 4% (W/V)。本溶液通过以下技术步骤获得的①先将保护剂、张力剂、PH缓冲盐用注射用水溶解，充分搅勻；②边搅拌边在上述的溶液中缓慢加入用注射用水稀释60倍后的苯酚，充分搅拌 均勻；④用0. 22 μ m滤膜过滤上述溶液后，在无菌环境中，按比例加入聚乙二醇_动物干 扰素，搅拌均勻后，用注射用水定容至所需体积，即得。本发明所述的聚乙二醇-干扰素长效溶液制剂，在2_8°C下贮藏24个月后仍然保 持着干扰素的高化学、生物学和物理学稳定性。本文在说明用于本发明制剂中的聚乙二醇_干扰素时使用的术语“高化学稳定 性”指制剂中的干扰素在2-8°C下贮藏24个月后保持至少85%，优选85% -100%化学完整 性。使用的术语“高生物学稳定性”指本发明制剂中的干扰素在2-8°C下贮藏24个月后保 持至少85%，优选90% -100%生物学活性(参见实施例2表1中的结果)，该生物学活性 根据病毒的致细胞病变效应(CPE)抑制的检测方法测定(测定方法见附件1)。本文在说明 用于本发明制剂中的聚乙二醇-干扰素时使用的术语“高物理学稳定性”指本发明制剂中 的干扰素在2-8°C下贮藏24个月后保持澄清，即没有混浊也没有可见颗粒物质(可见颗粒 直径大于60-70 μ m)。本发明的技术优势本发明所述的聚乙二醇-干扰素长效溶液制剂，不用小牛血清或白蛋白作为保护 剂，避免了这些蛋白携带病毒的潜在危险，节约了成本，利于更准确的监测产品的质量。该 溶液制剂既可以注射、也可以饮水，适用的PH值范围广。长效聚合干扰素溶液制剂在2_8°C 贮藏24个月后仍然保持着干扰素的高活性。
具体实施例方式结合以下实施例可以观察到本发明的有益性质，这些实施例是说明性的，不会对 本发明构成限制。实施例1、一种长效、稳定的动物干扰素(聚乙二醇-鸡α干扰素)溶液制剂的制 备除非另外说明，所述样品包含组分每L用量a.聚乙二醇-鸡α干扰素1*107IUb.氯化钠6gc.磷酸氢二钠4g
d．磷酸二氢钾o．2g
e．甘氨酸3g
f．蔗糖log
g．山梨醇50g
h．PVPK一3020g
i．苯酚4ml
i．注射用水加至lL
溶液的配制方法是
①先将PVPK-30~百注射用水溶解，充分搅匀，液体澄清、透明、稳定后进行下一步；
②边搅拌边在PVPK-30的溶液中缓慢加入氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、甘氨酸、蔗糖、山梨醇，得一混合均一的溶液；
⑧用注射用水稀释苯酚60倍后，加入上述混合溶液中，充分搅拌均匀；
④用o．22 u m滤膜过滤除菌后，在无菌环境中，按比例加入聚乙二醇一鸡。干扰素，搅拌均匀后，用注射用水定容至所需体积，即得。
实施例2、长效、稳定的鸡。干扰素溶液稳定性考察评价方法和稳定性考察结果
除非有另外说明，否则都采用以下的步骤进行稳定性评价。将实施例l中的样品分别置于温度为4℃±2℃的冰箱、温度为25℃工F2Z和湿度为60％±5％的恒温恒湿箱中。稳定性考察过程中测量所述组合物的外观性状、干扰素活性，并与初始配制组合物进行比较。采用“细胞病变作用抑制生物学实验一一CPE”方法检测干扰素活性，具体方法见附件l。
实施例l中的组合物在4℃±2℃的冰箱条件下放置24个月后，与初始配制样品无外观性状上、活性上的明显差异，之E 25 4℃±2℃和湿度为60％±5％条件下放置6个月内，制剂没有明显外观性状和活性上的变化。因此制剂在4℃条件下放置24月是稳定的。具体活性测定结果见下表l所示。
表l实施例l中鸡。干扰素稳定性考察数据
权利要求
1.一种长效、稳定的动物干扰素溶液制剂，其特征在于该溶液包含聚乙二醇-动物干 扰素聚合物、保护剂、张力剂、PH值缓冲体系、抗菌防腐剂和足以制备上述列出组分的溶液 的一定数量的注射用水。
2.根据权利要求1所述的溶液，其特征在于所述组合物包含的聚乙二醇_动物干扰素 聚合物，可以是动物用的任何干扰素，包括动物用干扰素α、β和Y。
3.根据权利要求2所述的溶液，其特征在于所述每ml溶液含有的聚乙二醇-动物干扰 素中含有IO6-IO8IU干扰素。
4.根据权利要求1所述的溶液，其特征在于所述溶液中使用的保护剂为葡萄糖、果糖、 甘氨酸、精氨酸、赖氨酸、甘露醇、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖、PVPK-30中的一种或 多种。
5.根据权利要求4所述的溶液，其特征在于所选保护剂的含量(W/V)为，葡萄糖、果糖 0. 2% -0. 8%，甘氨酸、精氨酸、赖氨酸0. 1%-1. 0%，甘露醇、山梨醇-10%，蔗糖、乳糖、 海藻糖、麦芽糖0. 5% -1. 5%,PVPK-300. 5%-3. 0%，优选0. 3%的甘氨酸、1 %的蔗糖和2% 的 PVPK-30。
6.根据权利要求1所述的溶液，其特征在于所选用的张力剂为0.1%-1%(W/V)的氯 化钠。
7.根据权利要求1所述的溶液，其特征在于，所选用的PH缓冲体系可以是常用的缓冲 液，优选的缓冲液是磷酸盐缓冲液，该缓冲液的PH值范围为6. 0-7. 5。
8.根据权利要求1所述的溶液，其特征在于，所选用的抗菌防腐剂为常用抑菌剂，如苯 酚、苯甲醇等，优选苯酚，含量范围为0. 1% -0. 6%，优选为0. 4% (W/V)。
9.根据权利要求1所述的一种长效、稳定的动物干扰素溶液制剂，其制备方法是通过 下述技术步骤实现的①先将保护剂、张力剂、PH值缓冲盐用注射用水溶解，充分搅勻；②边搅拌边在上述的溶液中缓慢加入用注射用水稀释60倍后的苯酚，充分搅拌均勻；④用0. 22 μ m滤膜过滤上述溶液后，在无菌环境中，按比例加入聚乙二醇_动物干扰素，搅拌均勻后，用注射用水定容至所需体积，即得。
全文摘要
本发明涉及一种长效、稳定的动物干扰素溶液制剂及其制备方法。该水溶液包含具有动物干扰素生理活性的多肽和非多肽组分，pH值范围在6.0-7.5之间。通过本发明制作的聚乙二醇-动物干扰素水溶液制剂稳定，具有相对较高的生物学抗病毒活性和热稳定性。
文档编号A61P31/12GK102000324SQ20091007031
公开日2011年4月6日 申请日期2009年9月1日 优先权日2009年9月1日
发明者刘桂兰 申请人:天津瑞普生物技术股份有限公司