专利名称：诱导使药用植物圆锥铁线莲中次生代谢产物种类和含量增加的方法
技术领域：
本发明涉及一种诱导使药用植物圆锥铁线莲中次生代谢产物种类和含量增加的
方法。
背景技术：
近年来随着我国中药产业的持续发展，中药材需求量明显增加。如何提高药材质 量，合理利用药用植物资源，关系到中药产业的可持续发展，也成为一项急需进行深入研究 的课题。自然界丰富的植物资源蕴涵着数量可观的次生代谢产物(多为活性成分)，为了 开发这些宝贵的活性成分资源，除了从植物材料进行提取和进行化学合成以外，利用生物 技术生产有用的活性成分，也是解决中药资源短缺的有效方法之一。紫外辐射对农作物植 物抗毒素(黄酮和萜类等)研究，已经广泛开展。研究表明紫外诱导能够使苯丙素衍生物 (黄酮、香豆素和木脂素)和萜类等活性成分在植物体内显著增加。紫外诱导技术应用于提 高中药和天然药物活性成分的含量，有非常好的发展前景。 圆锥铁线莲(Clematis terniflora DC.)系毛茛科(Ra皿nculaceae)铁线莲属 (Clematis)植物，用于治疗扁桃体炎、咽喉炎以及风湿和类风湿性关节炎等，在日本做为中 药威灵仙替代品使用，其地上部分在浙江北部地区广泛用于呼吸系统和泌尿系统炎症、肿 瘤的治疗，特别是对慢性咽炎和慢性前列腺炎疗效甚佳；其地上部分的药理研究证明，黄酮 及木脂素类成分具有显著的生理活性。次生代谢产物在圆锥铁线莲体内含量都非常低、种 类少，影响其活性。新类型次生代谢产物的诱导产生及原有次生代谢产物含量的提高，则能 够使铁线莲的抗肿瘤、治疗前列腺炎的生理活性加强。圆锥铁线莲的这些特性激发了我们 应用紫外诱导方法来提高药材质量的兴趣。本发明提高一种诱导圆锥铁线莲产生新的次生 代谢产物及提高其总黄酮和木脂素含量的方法。通过对诱导前后铁线莲提取物的HPLC分 析我们发现，采用本方法，相同的色谱分析条件下，诱导后的铁线莲HPLC图谱较诱导前的 图谱新增加若干色谱峰，说明采用本方法诱导线莲产生了新的次生代谢产物；通过分析提 取的光谱图可以发现，表现为黄酮和木脂素类的色谱峰面积，诱导后也较诱导前有不同程 度的增加，说明采用本方法诱导铁线莲，其中的黄酮和木脂素的含量有所增加。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种诱导使药用植物圆锥铁线莲中次 生代谢产物种类和含量增加的方法。 诱导使药用植物圆锥铁线莲中次生代谢产物种类和含量增加的方法是新鲜采摘 的圆锥铁线莲茎叶洗净后在紫外光下照射，紫外光为UVA波段、UVB波段或UVC波段中的一 种和多种组合；紫外光照射强度20 1000w，紫外光照射时间0. 5 48小时，照射过程中 保持空气湿度在10 100%，照射后圆锥铁线莲茎叶阴干或烘干，烘干温度30 60°C。
所述的紫外光照射的强度优选为20 100W。所述的紫外光优选为UVA波段或UVB波段中的一种和多种组合。所述的照射过程中保持空气湿度优选为50 95%。所述的紫 外光照射时间优选为0. 5 6小时。 采用本方法，可诱导圆锥铁线莲产生不少于1个新类型的化合物，并使其黄酮和 木脂素的含量分别比诱导前增加不少于5% (见图1)
附图是紫外诱导前后圆锥铁线莲地上部分总黄酮和木脂素HPLC指纹图谱比较； 注下面为诱导前圆锥铁线莲HPLC分析图谱，上面为诱导后圆锥铁线莲HPLC分析图谱。从 图中可以发现，诱导后谱图中在54min-59min时间段有4个新的色谱峰，此外，上面色谱峰 面积普遍较下面图谱峰面积大。
具体实施方式
实施例1 新鲜采摘的铁线莲茎叶给予20W的UVA紫外光照射，照射时间为0. 5小时，照射时 保持空气湿度在10%。照射后的铁线莲茎叶阴干。阴干后的铁线莲茎叶经HPLC分析，与没 有照射的铁线莲茎叶相比，新增色谱峰1个，经分离鉴定为酰胺类成分，黄酮类化合物经峰 面积对比，含量增加5%，木脂素类成分经峰面积对比含量增加5%。
实施例2 新鲜采摘的铁线莲茎叶给予1000W的UVB紫外光照射48小时，照射时保持空气湿 度在90% 。照射后的铁线莲茎叶6(TC烘干，烘干后的铁线莲茎叶经HPLC分析，与没有照射 的铁线莲茎叶相比，新增色谱峰6个，经分离鉴定分别为酰胺类成分、黄酮类成分、木脂素 类成分，黄酮类化合物经峰面积对比，含量增加90 % ，木脂素类成分经峰面积对比含量增加 90%。 实施例3 新鲜采摘的铁线莲给予200W的UVC紫外光照射24小时，照射时保持空气湿度在 50%。照射后的铁线莲茎叶5(TC烘干，烘干后的铁线莲茎叶经经HPLC分析，与没有照射 的铁线莲茎叶相比，新增色谱峰2个，经分离鉴定为黄酮类成分，黄酮类化合物经峰面积对 比，含量增加20%，木脂素类成分经峰面积对比含量增加20%。
实施例4 新鲜采摘的铁线莲茎叶给予40W的UVA紫外光照射6小时，照射时保持空气湿度 在50% ，照射后的铁线莲茎叶3(TC烘干，烘干后的铁线莲茎叶经经HPLC分析，与没有照射 的铁线莲茎叶相比，新增色谱峰5个，经分离鉴定分别为酰胺类成分、黄酮类成分、木脂素 类成分，黄酮类化合物经峰面积对比，含量增加35% ，木脂素类成分经峰面积对比含量增加 50%。 实施例5 新鲜采摘的铁线莲茎叶给予40W的UVA加上100W的UVB紫外光共同照射3小时， 照射时保持空气湿度在40X，照射后的铁线莲茎叶6(TC烘干，烘干后的铁线莲茎叶经HPLC 分析，与没有照射的铁线莲茎叶相比，新增色谱峰3个，经分离鉴定为木脂素类成分，黄酮 类化合物经峰面积对比，含量增加73%，木脂素类成分经峰面积对比含量增加20%。
实施例6 新鲜采摘的铁线莲茎叶给予40W的UVA紫外光照射2小时，再经100W的UVB紫外 光照射3小时，照射时保持空气湿度在70% ，照射后的铁线莲茎叶4(TC烘干，烘干后的铁线 莲茎叶经HPLC分析，与没有照射的铁线莲茎叶相比，新增色谱峰10个，经分离鉴定分别为 酰胺类成分、黄酮类成分类成分，黄酮类化合物经峰面积对比，含量增加45%，木脂素类成 分经峰面积对比含量增加54%。
实施例7 新鲜采摘的铁线莲茎叶给予80W的UVA紫外光照射1小时，再经100W的UVC紫外 光照射2小时，照射时保持空气湿度在60% ，照射后的铁线莲茎叶6(TC烘干，烘干后的铁线 莲茎叶经HPLC分析，与没有照射的铁线莲茎叶相比，新增色谱峰6个，经分离鉴定分别为酰 胺类成分、黄酮类成分、木脂素类成分，黄酮类化合物经峰面积对比，含量增加33%，木脂素 类成分经峰面积对比含量增加21%。
实施例8 新鲜采摘的铁线莲茎叶给予100W的UVB紫外光照射2小时，再经40W的UVA紫外 光照射1小时，再经80W的UVC紫外光照射1小时，照射时保持空气湿度在60% ，照射后的 铁线莲茎叶6(TC烘干，烘干后的铁线莲茎叶经HPLC分析，与没有照射的铁线莲茎叶相比， 新增色谱峰3个，经分离鉴定为酰胺类成分，黄酮类化合物经峰面积对比，含量增加80%， 木脂素类成分经峰面积对比含量增加80%。
权利要求
一种诱导使药用植物圆锥铁线莲中次生代谢产物种类和含量增加的方法，其特征在于新鲜采摘的圆锥铁线莲茎叶洗净后在紫外光下照射，紫外光为UVA波段、UVB波段或UVC波段中的一种和多种组合；紫外光照射强度20～1000w，紫外光照射时间0.5～48小时，照射过程中保持空气湿度在10～100％，照射后圆锥铁线莲茎叶阴干或烘干，烘干温度30～60℃。
2. 根据权利要求1所述的一种诱导使药用植物圆锥铁线莲中次生代谢产物种类和含 量增加的方法，其特征在于所述的紫外光照射的强度为20 100W。
3. 根据权利要求1所述的一种诱导使药用植物圆锥铁线莲中次生代谢产物种类和含 量增加的方法，其特征在于所述的紫外光为UVA波段或UVB波段中的一种和多种组合。
4. 根据权利要求1所述的一种诱导使药用植物圆锥铁线莲中次生代谢产物种类和含 量增加的方法，其特征在于所述的照射过程中保持空气湿度在50 95%。
5. 根据权利要求1所述的一种诱导使药用植物圆锥铁线莲中次生代谢产物种类和含 量增加的方法，其特征在于所述的紫外光照射时间为0. 5 6小时。
全文摘要
本发明公开了一种诱导药用植物圆锥铁线莲产生新的次生代谢产物及提高代谢产物含量的方法。新鲜采摘的圆锥铁线莲茎叶洗净后在紫外光下照射，紫外光为UVA波段、UVB波段或UVC波段中的一种和多种组合；紫外光照射强度20～1000w，紫外光照射时间0.5～48小时，照射过程中保持空气湿度在10～100％，照射后的圆锥铁线莲茎叶阴干或烘干，烘干温度30～60℃。经照射后的圆锥铁线莲茎叶可诱导产生新类型的此生代谢产物，如酰胺类；也可使原有次生代谢产物如木质素、黄酮等含量显著提高。圆锥铁线莲具有多种生理活性，如抗肿瘤、治疗前列腺炎。新类型次生代谢产物的诱导产生及原有次生代谢产物含量的提高，均可使铁线莲的抗肿瘤、治疗前列腺炎的生理活性加强。
文档编号A61K135/00GK101732434SQ20091015411
公开日2010年6月16日 申请日期2009年11月5日 优先权日2009年11月5日
发明者付红伟, 孙铭遥, 崔磊, 张琳, 田景奎, 谷希达, 陈润泽 申请人:浙江大学