专利名称：红景天苷抗休克的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药红景天有效成分红景天苷在抗休克方面的新用途。
背景技术：
休克是机体在严重失血失液、感染、创伤等强烈致病因素作用下，有效循环血量急剧减少，组织血液灌流严重不足，导致各种重要生命器官和细胞功能代谢障碍和结构损害的全身性病理过程。休克是临床上较为常见的一个急症，虽然发病原因多和发病机制复杂， 但微循环障碍是多型休克发生的共同基础。在休克发生发展过程中，机体产生一系列的病理生理改变，主要有心收缩力降低、微循环血量减少、血流分布异常、供氧量降低、造成明显的缺血-再灌注损伤、炎症介质泛滥等，在这一病理过程中它们相互转化、互为因果，导致机体能量生成障碍，组织缺血、缺氧，神经体液机制激活，机体代谢和功能发生多方面紊乱， 最终可能导致全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍(MODS)，甚至死亡。红景天系景天科红景天属(Rhodiola. L)植物，为多年生草本或亚灌木植物，主要分布在北半球的喜马拉雅山区、亚洲西北部和北美洲，海拔在1600 4000m。全世界有红景天植物96种，我国有73种，主要分布在西南、西北、华中、华北及东北，尤以云南、四川及西藏高寒地区种类最多。红景天主要以根和茎入药，主要有红景天苷，含有人体需要的27 种氨基酸，其中有7种是人体不能合成又必需的氨基酸，还含有具有生物活性的铁、锌、钼、 钛、锰等21种微量元素，其中含有黄酮类化合物，叶茎中含有生物碱。前苏联研究发现，红景天具有“反压力”作用及刺激神经系统、降低忧郁症状、消除疲劳及预防高原反应等，能改善患者因工作能力下降、睡眠障碍、食欲不振、躁动不安、高血压、头痛等症状。现代研究发现红景天具有多种药效功能，主要表现在抗缺氧、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、改善心脑功能等多方面药理作用。红景天苷(salidroside)，是从红景天中提取的化合物，是红景天的主要成分，具有红景天的药理作用。现有研究发现，红景天苷对缺血-再灌注损伤有一定的保护作用；具有明显的清除自由基的作用；降低再灌注心肌组织中一氧化氮(NO)等的含量；降低血乳酸的含量和舒张血管作用等。本发明涉及分红景天苷在抗休克方面的作用和功效，尚未见相关报道。
发明内容
本发明提供了红景天苷抗休克的一系列生物学实验研究，为开拓红景天抗休克的新用途提供了依据。具体生物学实验研究结论包括以下四方面1.红景天苷对内毒素休克小鼠的影响红景天苷对LPS和D-GalN诱导内毒素休克小鼠具有一定的保护作用；红景天苷可以降低内毒素休克小鼠的血管通透性、肺组织含水量和肺系数，对内毒素休克具有显著的保护作用。2.红景天苷对创伤性休克小鼠有明显的保护作用。3.红景天苷可以抑制失血性休克大鼠缺血_再灌注产生的自由基损伤，抑制细胞因子的释放，对失血性休克大鼠有明显的保护作用。4.红景天苷对LPS刺激小鼠巨噬细胞产生的自由基和NO有抑制作用。下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。发明效果本发明的优点和积极效果在于，通过生物学研究发现，红景天苷对实验性休克具有一定的保护作用，其作用机制可能与抑制炎症反应，减轻自由基所致细胞损伤，降低血管通透性等功能有关，提示其具有开发新的抗休克药物的前景。实施方式以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明，但不以任何方式限制本发明。<实施例1>红景天苷药液的配置名称注射用红景天苷提供单位南京济众医药科技有限公司红景天苷溶于0. 9%生理盐水配制成 4. 8mg · ι Γ\2. 4mg · πιΓ\ . 2mg · πιΓ1。<实施例2>红景天苷对内毒素休克小鼠的影响1.红景天苷对内毒素休克小鼠的保护作用1. 1试验方法1. 1. 1试验分组与造模取健康昆明种小鼠60只，雌雄各半，禁食12h，自由饮水。按体重随机分为6组， 每组10只，分别为对照组、模型组、地塞米松组、红景天苷高、中、低剂量组。地塞米松组 (1. 3mg · kg—1)、红景天苷高、中、低剂量组(48mg · kg-\24mg · kg-\l2mg · kg-1)在造模前 30min分别尾静脉给药，对照组尾静脉给予等量的生理盐水。模型组腹腔注射D-氨基半乳糖(600mg · kg-1)，5min 后腹腔注射脂多糖(0. 5mg · kg-1)。1. 1. 2指标测量腹腔注射D-GalN和LPS形成内毒素休克模型4h后，小鼠眼眶取血，放置IOmin后 3500r · min-1离心15min，分离血清冷冻保存，按试剂盒说明测定血清中的S0D、MDA、N0和乳酸的含量。小鼠取血后处死，取左肺上叶在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸试干， 称重，剪碎，加入组织重量9倍的0. 9%冷生理盐水制成10%组织勻浆，2000r · min-1离心 lOmin，取组织上清液，根据NO的试剂盒说明操作，计算出组织中NO的含量。1.1.3统计方法所有数据进行统计学分析，以均数士标准差(1±幻表示，各组数据使用单因素方差分析，用t检验进行组间均数的比较。1. 2试验结果1. 2. 1红景天苷对内毒素休克小鼠氧化损伤的影响由表1.可见D-GalN和LPS造模后，模型组血清中SOD活性显著降低(P < 0. Olvs 对照组)，而MDA含量显著增高(P < 0. Olvs对照组)，说明用D-GalN和LPS造模4h后已经造成明显的过氧化损伤。地塞米松能显著升高内毒素休克小鼠血清中SOD活性(P <0. Olvs 模型组)，降低血清MDA含量(P < 0. Olvs模型组)；红景天苷(48mg · kg-\24mg · kg—1、 12mg -kg"1)可以提高内毒素休克小鼠血清中SOD活性(P < 0. ΟΙ,Ρ < 0. 05vs模型组)，显著降低血清中MDA含量(P < 0. OLP < 0. 05vs模型组)，提示红景天苷可以抑制过氧化损伤。表1.红景天苷对内毒素休克小鼠血清中SOD，MDA, NO和乳酸含量的影响(JTi1S, η = 10)
^ij Ml SODΜ 5Α NOWm
“mg-kg"1U-ml"1ωηοΙ-ηιΓ1μηιο - "1mmol-L"1
Χ Μ74. 7 + 11. 54.2 + 1. 123. 1 + 2. 77. 3 + 1.4 模型49.8±10·5δ6. 4±1.1δ29.0±3. 8δ11.0±1.6δ 地塞米松 1.376.9±13. 5"4.4±1.1"23. 7士3.9. 士 1.4* 红景天苷 4882.2±11.1"4.4士 1.0"22·0±2.8"7.8±1.广 2464. 5±9.4.6±1.(Γ24.6±3.6*8.1 ±1.7" _12_61.8±9. 3*4. 7±0.9"26.0±4. 08. 4士 1.7"ΔΡ < 0. Olvs 对照组，**Ρ < 0. 01，*Ρ < 0. 05vs 模型组，#P < 0. 05vs 红景天苷 (48mg. kg—1)
1. 2. 2红景天苷对内毒素休克小鼠血清中乳酸和NO的影响(见
图1)D-GalN和LPS造模4h后，模型组血清中乳酸和NO的含量显著升高(P <0.0Ivs对照组)，提示内毒素休克小鼠缺氧和组织器官衰竭。预先30min给予红景天苷GSmgAg—1、 24mg .kg-^Umg .kg—1)可以显著减低小鼠血清中乳酸和NO的含量(P < 0. 01，P < 0. 05vs 模型组)；地塞米松也能显著降低血清中乳酸和NO的含量(P < 0. Olvs模型组)。1. 2. 3红景天苷对内毒素休克小鼠肺组织NO含量的影响(见图2)由表2可见D-GalN和LPS造模4h后，模型组肺组织NO的含量显著升高(P < 0. Olvs对照组)，提示内毒素休克小鼠肺脏中有炎症介质释放。预先30min给予红景天苷(48mg · kg-\24mg · kg-\l2mg · kg—1)、地塞米松，可以显著降低因内毒素诱导小鼠肺脏产生NO的含量(P < 0. 01，P < 0. 05vs模型组)。表2.红景天苷对内毒素休克小鼠肺组织NO含量(μ mol · Γ1)的影响(f Μ，η =10)
组别dose (mg-kg1)NO(pmol.L-1)
MM57. 2±9. 3
模型79. 5±8. 6Δ地塞米松1.359.9 ±9.2"
红景天苷4859. 2 ±9.
24 61.6±10.9“ _12_69. 5±7. TΔΡ < 0. Olvs control, **P < 0. 01，*P < 0. 05vs model2.红景天苷对内毒素休克小鼠血管通透性的影响2. 1试验方法2. 1. 1试验分组与造模取健康昆明种小鼠60只，雌雄各半，按体重随机分为6组，每组10只，分别为对照组、模型组、地塞米松组、红景天苷高、中、低剂量组。地塞米松组(l^mg·!^-1)、红景天苷高、中、低剂量组(48mg · kg-\24mg · kg^.^mg · kg—1)在造模前30min分别尾静脉给药，对照组尾静脉给予等量的生理盐水。模型组腹腔注射D-氨基半乳糖(600mg · kg"1)，5min后腹腔注射脂多糖(O. 5mg · kg-1)。2. 1. 2指标测量
2. 1. 2. 1内毒素休克小鼠血管通透性的变化用伊文思蓝(EB)法测定脏器血管通透性。建立内毒素休克模型3. 5h后，小鼠尾静脉注射的伊文思蓝(30mg · kg—1)，30min后放血处死，取小鼠部分肺脏、心脏、肝脏、肾脏、小肠，用生理盐水冲洗表面的血迹和残存的伊文思蓝，剪去周边的组织，滤纸吸干表面的水分后称湿重，剪碎，将组织浸泡于N，N-二甲基甲酰胺中(甲酰胺用量20ml/100g)，置 45°C恒温水浴锅中温育72h，取出组织，3000r · mirT1离心30min，取上清液，用分光光度计 λ 620nm进行比色，根据标准曲线计算每克组织中EB含量，反应各组织血管通透性。2. 1. 2. 2内毒素休克小鼠肺系数和组织含水量的变化另取取健康昆明种小鼠60只，雌雄各半，分组和建立模型同上。小鼠取血后处死， 取全肺，用冷生理盐水冲洗干净，滤纸拭干，称重，计算肺系数(lung index)；取右肺称湿重，置于80°C烘箱72h以上至重量稳定，称量肺脏干重，计算肺组织含水量。肺系数=全肺重(g)/体重(g)肺组织含水量=(肺湿重_肺干重)/肺湿重X 100 %2. 1. 3统计方法所有数据进行统计学分析，以均数士标准差(表示，各组数据使用单因素方差分析，用t检验进行组间均数的比较，P < 0. 05为差异有显著性，P < 0. 01为差异有非常
显著性。2. 2试验结果2. 2. 1红景天苷对内毒素休克小鼠毛细血管通透性的变化2. 2. 1. IEB含量-吸光度标准曲线(如图3)根据EB 含量与 OD 值，回归方程 Y = 3. 1938-0. 0504，R2 = 0. 99372. 2. 1. 2红景天苷对内毒素休克小鼠心脏、肾脏、肝脏EB含量的影响由表4.可见，建立内毒素休克模型4h后，心脏、肾脏和肝脏内EB含量明显增加 (P < 0. Olvs对照组)，预先给予地塞米松、红景天苷(48mg · kg"\24mg · kg-\l2mg · kg-1) 可以显著降低内毒素休克小鼠心脏(P <0.05，P <0. Olvs模型组)、肾脏(P <0.05，P <0. Olvs模型组)和肝脏EB (P <0. Olvs模型组)的含量。其中与地塞米松组比较，红景天苷高剂量能显著降低内毒素休克小鼠心脏和肾脏中的EB含量(P < 0. 05，P < 0. Olvs地塞米松组)。表4.红景天苷对内毒素休克小鼠心脏、肾脏、肝脏EB含量的影响(Z蟎η = 10)
权利要求
1.红景天苷在制备抗休克药物中的应用。
2.含红景天苷为活性成分的药物组合在制备抗休克药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及红景天植物的有效成分红景天苷抗休克的新用途。整体动物和分子细胞水平的相关实验研究表明，红景天苷实验性休克具有一定的保护作用，其作用机制可能与抑制炎症反应，减轻自由基所致细胞损伤，降低血管通透性等功能有关，因而红景天苷具有开发成为一种抗休克药物的应用前景。
文档编号A61P9/00GK102247388SQ20101017338
公开日2011年11月23日 申请日期2010年5月17日 优先权日2010年5月17日
发明者李建宏, 韩晶 申请人:南京济众医药科技有限公司