专利名称：茶树菇发酵美白液的制备方法
技术领域：
本发明涉及茶树菇发酵美白液的制备方法。属生物工程技术应用领域。
背景技术：
茶树菇属担子菌纲，粪锈伞科，田菇属，又名茶菇、油茶菇、神菇。是近年来发展起 来的一种食用菌新品种。茶树菇营养丰富，蛋白质含量高，含有人体必需的氨基酸，并且有 丰富的B族维生素和钾、钠、钙、镁、铁、锌等矿质元素。中医认为该菇性平、甘温、无毒，具有 较高的药用价值，有清热、平肝、明目、健脾的功效。是一种集营养、保健、理疗于一身的绿色 食品。通过深层发酵获得发酵液再加上其他组分获得具有美白作用的发酵液是一种天然 的，没有副作用的美白护肤品的成分，现在市面上还没有产品。
发明内容
本发明的目的是提供一种茶树菇发酵美白液的制备方法。本发明的技术方案为将茶树菇子实体通过组织分离法接入固体斜面培养基上培 养，待长好后移至摇瓶种子液体培养基中培养，将培养好的种子液接入摇瓶发酵液体培养 基培养。发酵结束后，将发酵液浓缩，脱蛋白，透析后得到澄清的黄色液体。在加上其他组 分，获得具有美白作用的液体。具体来说，我们利用市售茶树菇经过组织分离法在平板上长出菌丝体。菌丝体接 入三角瓶发酵后离心，上清液经过浓缩，脱蛋白，透析后得到所需发酵液。以重量百分比计 发酵液50% -60% ；再加入VC曲酸脂5% ；透明质酸0. 1% ；蒸馏水44. 9% -34.9%。上述过程中，斜面培养基为PDA培养基，摇瓶种子培养基为PDA1L加磷酸二氢 钾lg，硫酸镁0. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，pH6. 0，发酵培养基为玉米粉2g/100mL、酵母粉 0. 3g/100mL、磷酸二氢钾 0. 2g/100mL、硫酸镁 0. 05g/100mL,培养条件为起始 pH6. 0，250mL 三角瓶装培养基100mL于25°C，150r/min，振荡培养7d，离心后上清液用Sevage法去除游 离蛋白质，蒸馏水透析去除无机盐，得到茶树菇发酵液。浓缩后取50-60g，加入VC曲酸脂 5g ；透明质酸0. lg ；蒸馏水补足100mL。滤过除菌。
具体实施例方式下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。实例一1.发酵液制备出发菌种为市售茶树菇(Agrocybe aegirit)；(1)组织分离法斜面培养基PDA培养基，含1. 5% 2. 0%琼脂，pH自然；组织分离方法将子实体外表用酒精进行表面消毒后，放入超净工作台上，用消毒 过的刀片与镊子切取菌柄与菌盖交界处组织块接入斜面培养基上，PH自然，置于25°C温度下暗培养，5d后菌丝开始萌发，每隔2d检查1次，除去污染，选择菌丝生长速度快和长势强 的试管作为纯母种；(2)摇瓶种子培养摇瓶种子培养基PDA1L加 磷酸二氢钾lg，硫酸镁0. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg， ρΗ6· 0 ；培养方法从斜面菌种中取3 4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基 中，250mL三角瓶装培养基IOOmL于25°C，150r/min，振荡培养7d ；(3)摇瓶发酵培养发酵培养基玉米粉2g/100mL、酵母粉0. 3g/100mL、磷酸二氢钾0. 2g/100mL、硫酸 镁 0.05g/100mL ；培养方法将培养好的种子以15%的接种量接入摇瓶发酵培养基中25°C，150r/ min,振荡培养7d ；(4)发酵液浓缩，脱蛋白，透析培养后离心，取上清液旋转蒸发仪浓缩后用Sevage法去除游离蛋白，即按发酵 液1/5的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡20min。蛋白质与氯 仿_正丁醇生成凝胶，4000rpm离心20min，收集上清液，反复操作8次至氯仿-正丁醇层不 浑浊为止。然后取上清液中装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中，透析48h，中间每隔 12小时换水一次，得发酵液。2.其他组分的添加及滤过除菌(1)其他组分的添加发酵液浓缩后取50_60g，加入VC曲酸脂5g ；透明质酸0. Ig ；蒸馏水补足100mL。(2)滤过除菌上述液体通过0. 22 μ m的滤膜除菌。实例二对茶树菇发酵液样品进行了氨基酸组成，单糖组成的测定，测定结果表明，所含氨 基酸中谷氨酸占18%以上，天冬氨酸占12%以上，甘氨酸占8%以上，赖氨酸占7%以上，丙 氨酸占6%以上，所含单糖以葡萄糖为主，用苯酚-硫酸法测得多糖含量为76.3%。茶树菇 发酵液的氨基酸组成及含量见表1。表1茶树菇发酵液的氨基酸组成及含量
权利要求
一种具有美白作用的茶树菇发酵液，其特征在于外观为淡黄色液体，是茶树菇通过深层发酵获得的发酵液经过浓缩，脱蛋白，透析后再加入VC曲酸脂，透明质酸和蒸馏水，滤过除菌后制得。其中发酵液所含氨基酸中谷氨酸占18％以上，天冬氨酸占12％以上，甘氨酸占8％以上，赖氨酸占7％以上，丙氨酸占6％以上。
2.权利要求1所述的美白液的制备方法，该方法由下列步骤组成(1)菌种培养出发菌种为市售茶树菇(Agrocybe aegirit)；①组织分离法斜面培养基PDA培养基，含1.5% 2.0%琼脂，pH自然；组织分离方法将子实体外表用酒精进行表面消毒后，放入超净工作台上，用消毒过的 刀片与镊子切取菌柄与菌盖交界处组织块接入斜面培养基上，PH自然，置于25°C温度下暗 培养，5d后菌丝开始萌发，每隔2d检查1次，除去污染，选择菌丝生长速度快和长势强的试 管作为纯母种；②摇瓶种子培养摇瓶种子培养基PDA1L加磷酸二氢钾lg，硫酸镁0. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，pH6. 0 ；培养方法从斜面菌种中取3 4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中， 250mL三角瓶装培养基100mL于25°C，150r/min，振荡培养7d ；③摇瓶发酵培养发酵培养基玉米粉2g/100mL、酵母粉0. 3g/100mL、磷酸二氢钾0. 2g/100mL、硫酸镁 0.05g/100mL ；培养方法将培养好的种子以15%的接种量接入摇瓶发酵培养基中25°C，150r/min， 振荡培养7d ；(2)发酵液浓缩，脱蛋白，透析培养后离心，取上清液旋转蒸发仪浓缩后用Sevage法去除游离蛋白，然后取上清液透析；(3)其他组分的添加及滤过除菌①其他组分的添加发酵液浓缩后加入VC曲酸脂；透明质酸；蒸馏水；②滤过除菌上述液体通过0. 22 y m的滤膜除菌。
3.如权利要求2所述的美白液的制备方法，其特征在于所述用Sevage法去除游离蛋 白，是按发酵液1/5的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡20min。 蛋白质与氯仿_正丁醇生成凝胶，4000rpm离心20min，收集上清液，反复操作8次至氯 仿-正丁醇层不浑浊为止。
4.如权利要求2所述的美白液的制备方法，其特征在于所述的透析是指将去除游离蛋 白质的发酵液装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中，透析48h，中间每隔12小时换水 一次。
5.如权利要求2所述的美白液的制备方法，其特征在于所述的其他组分的添加为取浓 缩后的发酵液50-60g，加入VC曲酸脂5g ；透明质酸0. lg ；蒸馏水补足100mL。
全文摘要
本发明属生物工程技术应用领域，具体涉及茶树菇发酵美白液的制备方法。该茶树菇发酵液为黄色液体，是茶树菇深层发酵后的液体经过浓缩，脱蛋白，透析得到的。该发酵液所含氨基酸中谷氨酸占18％以上，天冬氨酸占12％以上，甘氨酸占8％以上，赖氨酸占7％以上，丙氨酸占6％以上。除了发酵液组分外，包括其他组分VC曲酸脂，透明质酸。具有美白活性，可应用于制备具有美白作用的化妆品。
文档编号A61K8/44GK101856320SQ20101019544
公开日2010年10月13日 申请日期2010年6月9日 优先权日2010年6月9日
发明者曹光群, 程建青, 邓超, 陈敬华 申请人:江南大学