专利名称：一种番石榴叶多糖的精制方法
技术领域：
本发明涉及一种番石榴叶多糖的精制方法。
背景技术：
多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖，通过糖苷键连接在一起的聚合物，该类 物质在自然界植物中尤为丰富。研究结果表明多糖在抗肿瘤、免疫调节、抗衰老、降血糖、抗 病毒等方面具有良好的活性作用。番石榴属桃金娘科，是一种适应性很强的热带果树。番石榴叶全年可以采摘，叶的 主要成分有黄酮类化合物，挥发油，植物固醇、鞣质，多糖等。研究表明番石榴叶具有极高 的药用价值，如降血糖，抗菌、抗氧化、抗诱变、止血等。目前众多研究结果表明，番石榴叶的 降血糖效果较为显著，而番石榴叶多糖是其降血糖作用主要有效成分之一。作为一种天然 的药物资源，番石榴叶在食品以及保健品行业中有着较好的开发前景。大孔树脂分离技术作为一种常见的分离方法，已经广泛用于中药和食品领域，它 具有设备简单，能耗低，适用范围广，分离效果好，污染小等特点，而其在番石榴叶多糖精制 方面的使用还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种番石榴叶多糖的精制方法，该方法高效、简便、成本 低，收率高。为达到上述目的，本发明提供的番石榴叶多糖的精制方法，包含下述步骤(1)取番石榴叶粗多糖，加水溶解后将其水溶液进行大孔树脂柱层析，上样后采用 醇_水体系洗脱并收集洗脱液中醇/水比例为0% -50%的组分，合并洗脱液，浓缩干燥得 纯化后的番石榴叶多糖；(2)将纯化后的番石榴叶多糖加水溶解，在其水溶液中加入氯仿和正丁醇，搅拌、 离心后取上清液，在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇，搅拌、离心，如此反复处理3-5 次；(3)对步骤(2)得到的番石榴叶多糖上清液进行浓缩除去有机溶剂，然后对浓缩 液进行醇沉，收集沉淀并进行洗涤和干燥后得到精制的番石榴叶多糖。在上述步骤中步骤(1)中番石榴叶粗多糖水溶液中番石榴叶粗多糖的含量是10-22g/L。步骤(1)中番石榴叶粗多糖水溶液上样前需经过滤处理。步骤⑴中大孔树脂为非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂。优选的，所述的大孔 树脂为HP-20大孔树脂。步骤(1)中水-醇体系为水-乙醇体系或水_甲醇体系，二者的体积比为 100 % -0 % (水/醇体积比)，采用梯度洗脱方法洗脱，洗脱压力为常压，洗脱速度为 5-15mL/min。
步骤(2)中水的用量为纯化后的番石榴叶多糖总重量的100-150倍。步骤(2)中氯仿的用量为纯化后的番石榴叶多糖水溶液总体积的1/6-1/4，正丁 醇的用量为氯仿用量的1/5。步骤(3)中醇沉时采用的乙醇是体积百分含量为95%的乙醇或无水乙醇，其用量 为番石榴叶多糖浓缩液总体积的4-5倍，醇沉的时间为15-20h。步骤(3)中沉淀的洗涤过程是依次采用无水乙醇和丙酮进行洗涤。本发明具有高效，简便，成本低，收率高等特点，所得的番石榴叶多糖有利于进一 步研究番石榴叶多糖在医药、食品以及保健品行业上的应用。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步说明，以下试剂和原料等如无特殊说明均为市
售商品。实施例1将100g非极性大孔树脂HP-20装填于层析柱中，将20g番石榴叶粗多糖加40mL 水溶解并稀释至1L，过滤，用恒流泵缓慢上样。上样完毕，以H20-乙醇体系洗脱，二者的体 积比为100% -0%递减，流速为lOmL/min，常压下洗脱，收集0% -50%组分，合并，浓缩干 燥即得到纯化后的番石榴叶多糖9. 5g。所得番石榴叶多糖用1L的水溶解，装于试剂瓶中。 加入250mL的氯仿和50mL的正丁醇，搅拌30min，离心，弃去下层和中间层变性蛋白，上层清 液用去离子水补足体积，继续加入第一次比例的氯仿和正丁醇，搅拌，离心，如此反复5次， 真空浓缩，除去有机溶剂，加入4倍体积量的95%乙醇，沉淀15h，5000rpm-10000rpm离心。 收集沉淀，依次用无水乙醇，丙酮洗涤沉淀，真空干燥得到精制的黄白色多糖4. 7g。实施例2将100g非极性大孔树脂HP-20装填于层析柱中，将15g番石榴叶粗多糖加30mL 水溶解，并稀释至1L，过滤，用恒流泵缓慢上样。上样完毕，以H20-乙醇体系洗脱，二者的体 积比为100% -0%递减，流速为lOmL/min，常压下洗脱，收集0% -50%组分，合并，浓缩干 燥即得到纯化后的番石榴叶多糖8. 3g。所得番石榴叶多糖用1L的水溶解，装于试剂瓶中。 加入250mL的氯仿和50mL的正丁醇，搅拌30min，离心，弃去下层和中间层变性蛋白，上层清 液用去离子水补足体积，继续加入第一次比例的氯仿和正丁醇，搅拌，离心，如此反复5次， 真空浓缩，除去有机溶剂，加入4倍体积量的95%乙醇，沉淀16h，5000rpm-10000rpm离心。 收集沉淀，依次用无水乙醇，丙酮洗涤沉淀，真空干燥得到精制的黄白色多糖4. 3g。实施例3将100g非极性大孔树脂HP-20装填于层析柱中，将22g番石榴叶粗多糖加60mL 水溶解并稀释至1L，过滤，用恒流泵缓慢上样。上样完毕，以H20-甲醇体系洗脱，二者的体 积比为100% -0%递减，流速为15mL/min，常压下洗脱，收集0% -50%组分，合并，浓缩干 燥即得到纯化后的番石榴叶多糖13. 4g。所得番石榴叶多糖用1. 8L的水溶解，装于试剂瓶 中。加入300mL的氯仿和60mL的正丁醇，搅拌30min，离心，弃去下层和中间层变性蛋白，上 层清液用去离子水补足体积，继续加入第一次比例的氯仿和正丁醇，搅拌，离心，如此反复5 次，真空浓缩，除去有机溶剂，加入5倍体积量的无水乙醇，沉淀17h，5000rpm-10000rpm离 心。收集沉淀，依次用无水乙醇，丙酮洗涤沉淀，真空干燥得到精制的黄白色多糖7. 5g。
实施例4将100g非极性大孔树脂HP-20装填于层析柱中，将18. 5g番石榴叶粗多糖加50 毫升水溶解稀释至1L，过滤，用恒流泵缓慢上样。上样完毕，以H20-甲醇体系洗脱，二者的 体积比为100 % -0 %递减，流速为lOmL/min，常压下洗脱，收集0 % _50 %组分，合并，浓缩干 燥即得到纯化后的番石榴叶多糖11. 2g。所得番石榴叶多糖用1. 2L的水溶解，装于试剂瓶 中。加入200mL的氯仿和40mL的正丁醇，搅拌30min，离心，弃去下层和中间层变性蛋白，上 层清液用去离子水补足体积，继续加入第一次比例的氯仿和正丁醇，搅拌，离心，如此反复5 次，真空浓缩，除去有机溶剂，加入4. 5倍量的95%乙醇，沉淀19h，5000rpm-10000rpm离心。 收集沉淀，依次用无水乙醇，丙酮洗涤沉淀，真空干燥得到精制的黄白色多糖5. 4g。以上列举的具体实施例是对本发明进行的说明。需要指出的是，以上实施例只用 于对本发明作进一步说明，不代表本发明的保护范围，其他人根据本发明的提示做出的非 本质的修改和调整，仍属于本发明的保护范围。
权利要求
一种番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于包含下述步骤(1)取番石榴叶粗多糖，加水溶解后将其水溶液进行大孔树脂柱层析，上样后采用醇 水体系洗脱并收集洗脱液中醇/水比例为0％ 50％的组分，合并洗脱液，浓缩干燥得纯化后的番石榴叶多糖；(2)将纯化后的番石榴叶多糖加水溶解，在其水溶液中加入氯仿和正丁醇，搅拌、离心后取上清液，在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇，搅拌、离心，如此反复处理3 5次；(3)对步骤(2)得到的番石榴叶多糖上清液进行浓缩除去有机溶剂，然后对浓缩液进行醇沉，收集沉淀并进行洗涤和干燥后得到精制的番石榴叶多糖。
2.根据权利要求1所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于步骤(1)中所述的 番石榴叶粗多糖水溶液中番石榴叶粗多糖的含量是10-22g/L。
3.根据权利要求1所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于步骤(1)中所述的 番石榴叶粗多糖水溶液上样前需经过滤处理。
4.根据权利要求1所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于步骤(1)中所述的 大孔树脂为非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂。
5.根据权利要求4所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于所述的大孔树脂为 HP-20大孔树脂。
6.根据权利要求1所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于步骤(1)中所述的 水-醇体系为水-乙醇体系或水-甲醇体系，二者的体积比为0-100%，采用梯度洗脱方法 洗脱，洗脱压力为常压，洗脱速度为5-15mL/min。
7.根据权利要求1所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于步骤(2)中所述的 水的用量为纯化后的番石榴叶多糖总重量的100-150倍。
8.根据权利要求1所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于步骤(2)中所述的 氯仿的用量为纯化后的番石榴叶多糖水溶液总体积的1/6-1/4，正丁醇的用量为氯仿用量 的 1/5。
9.根据权利要求1所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于步骤(3)中醇沉时 采用的乙醇是体积百分含量为95%的乙醇或无水乙醇，其用量为番石榴叶多糖浓缩液总体 积的4-5倍，醇沉的时间为15-20h。
10.根据权利要求1所述的番石榴叶多糖的精制方法，其特征在于步骤(3)中所述的 沉淀的洗涤过程是依次采用无水乙醇和丙酮进行洗涤。
全文摘要
一种番石榴叶多糖的精制方法，含下述步骤(1)取番石榴叶粗多糖，加水溶解后将其水溶液进行大孔树脂柱层析，上样后采用水-醇体系洗脱并收集洗脱液中醇/水比例为0％-50％的组分，合并洗脱液，浓缩干燥得纯化后番石榴叶多糖；(2)将纯化后番石榴叶多糖加水溶解，在其水溶液中加入氯仿和正丁醇，搅拌、离心后取上清液，在上清液中再次加入水、氯仿和正丁醇，搅拌、离心，如此反复处理3-5次；(3)对番石榴叶多糖上清液进行浓缩除去有机溶剂，然后对浓缩液进行醇沉，收集沉淀并进行洗涤和干燥后得到精制的番石榴叶多糖。本发明具有高效，简便，成本低，收率高等特点，所得番石榴叶多糖有利于进一步研究其在医药、食品及保健品行业上的应用。
文档编号A61P3/10GK101899121SQ20101023325
公开日2010年12月1日 申请日期2010年7月21日 优先权日2010年7月21日
发明者李春荣, 杜阳吉, 王三永 申请人:广东省食品工业研究所