专利名称：动物用转移因子可溶性粉制备方法
技术领域：
本发明涉及生物制剂技术领域，尤其是动物用转移因子可溶性粉的制备方法。
背景技术：
转移因子(Transter lector)，是人或动物致敏白细胞释放的多种因子中一种，能够转移致敏信息物质。转移因子具可透析性，能与抗原结合而本身却无抗原性的低分子物质。研究表明，转移因子能将抗原性及其敏锐的特异性转移给免疫反应阴性的受者，使受者产生迟发型超敏反应能力。国内外近30多年来，转移因子注射剂、胶囊剂、口服溶液剂在人用药品方面已被广泛应用于先天或后天免疫功能低下，细菌、病毒和霉菌等细胞内感染性疾病，慢性乙型肝炎、支气管哮喘以及肿瘤等治疗，其疗效非常显著。转移因子在动物用药品方面的应用，有转移因子口服溶液和注射剂，但口服溶液在生物活性保持和产品稳定性上有缺陷；而注射给药方式费时费力，且容易引起家禽的应激反应，故不适应规模化养殖业发展的需要。
发明内容
本发明针对不足，提出一种动物用转移因子的新剂型——可溶性粉的制备方法， 具备可溶性粉的优越性，能满足产品质量稳定，便于贮藏和应用等要求。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案一种动物用转移因子可溶性粉的制备方法，包括以下步骤①、取动物脾脏，按重量比1 3 1 3加入水，胶体磨勻浆破碎，得勻浆液；②、冷冻步骤①的勻浆液，于30 40°C融化，并保温1 2h，调pH值至4.0 4.5 ； 离心分离，得滤液；③、超滤步骤②的滤液，调pH值6.0 7.5 ；加重量含量为 10%的赋形剂， 搅拌溶解，冷冻干燥；粉碎得干粉。优选的，步骤①中动物脾脏为新鲜、去除脂肪和结缔组织的动物脾脏。优选的，步骤②中冷冻为-10°C以下冷冻10小时以上。优选的，步骤②中离心分离为3500 4000rpm转速下离心9 lOmin。优选的，步骤③中超滤在用5 50KD分子量的超滤机中进行的。优选的，步骤③中赋形剂选自甘露醇、甘氨酸和蔗糖中的一种或多种。优选的，步骤③中冷冻干燥至水分为5%以下。优选的，步骤③中粉碎为在30°C以下进行的。优选的，步骤③中粉碎为粒径小于80目。与现有技术相比，本发明动物用转移因子可溶性粉剂是采用健康动物的脾脏为原料，经特定工艺提取、分离纯化、浓缩等工艺后，加适宜的赋形剂，经真空冷冻干燥制成。通过低温反复冻融法从脾脏中提取转移因子活性物质，提供一种生产量大，生产成本较低，产品生物活性高且稳定、高分子量物质明显减少的兽用转移因子可溶性粉剂的制备方法。
本发明得到的产品具有安全有效、无毒性、无抗原性和质量可控等特点，同时给药十分方便，产品质量稳定，贮藏过程中生物活性和含量保持良好，运输也十分方便。有望建立起一种标准疗法来针对一些目前无法防治或现有疗法有毒性的疾病。根据现有文献报道称疫苗与转移因子联合应用时，可进一步增强特异性免疫和非特异性免疫效果，这种类似 “协同效应”的作用效果将使本发明产品在兽医临床上的应用前景更加广泛。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。实施例1从猪脾脏中提取转移因子的工艺流程1、清洗勻浆取健康猪的脾脏，去除脾脏上脂肪及结蒂组织，用纯化水反复冲洗至出水近无色， 将洗净的猪脾按重量比1 1加入纯化水，分次倒入胶体磨中进行勻浆破碎，收集勻浆液。2、提取把勻浆液倒入容器中，-13°C冷冻15小时，取出，置于30°C融化，并保温Ih后，调节pH至4. 5。将调节好pH值的提取液在3500rpm转速下离心lOmin，离心后上清用300目滤布过滤，收集滤液。3、超滤取滤液，用5KD分子量超滤机进行超滤，调节pH至7. 5。4、真空冻干加10%甘露醇，搅拌溶解后，真空冷冻干燥至水分3%。5、粉碎将冷冻干燥后干粉，经低温粉碎机在下粉碎至80目，收集粉碎干粉。实施例2从牛脾脏中提取转移因子的工艺流程1、清洗勻浆取健康牛的脾脏，去除脾脏上脂肪及结蒂组织，用纯化水反复冲洗至出水近无色， 将洗净的牛脾按重量比1 3加入纯化水，分次倒入胶体磨中进行勻浆破碎，收集勻浆液。2、提取把勻浆液倒入容器中，_14°C以下冷冻12小时，取出，置于40°C融化，并保温Ih后， 调节pH至4. O。将调节好pH值的提取液在4000rpm转速下离心8min，离心后上清用300 目滤布过滤，收集滤液。3、超滤取滤液，用50KD分子量超滤机进行超滤，调节pH至6. O。4、真空冻干加的甘氨酸和蔗糖(重量比1 2)，搅拌溶解后，真空冷冻干燥至水分4%。5、粉碎将冷冻干燥后干粉，经低温粉碎机在25°C下粉碎至70目，收集粉碎干粉。
实施例3从羊脾脏中提取转移因子的工艺流程1、清洗勻浆取健康羊的脾脏，去除脾脏上脂肪及结蒂组织，用纯化水反复冲洗至出水近无色， 将洗净的羊脾按重量比3 1加入纯化水，分次倒入胶体磨中进行勻浆破碎，收集勻浆液。2、提取把勻浆液倒入容器中，_15°C下冷冻13小时，取出，置于36°C融化，并保温Ih后，调节pH至4. 3。将调节好pH值的提取液在3700rpm转速下离心9min，离心后上清用300目滤布过滤，收集滤液。3、超滤 取滤液，用25KD分子量超滤机进行超滤，调节pH至6. 5之间。4、真空冻干加5 %甘露醇、甘氨酸和蔗糖(三者为等重混合)，搅拌溶解后，真空冷冻干燥至水分3%。5、粉碎将冷冻干燥后干粉，经低温粉碎机在20°C下粉碎至60目，收集粉碎干粉。以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
权利要求
1.一种动物用转移因子可溶性粉的制备方法，包括以下步骤①、取动物脾脏，按重量比1 3 1 3加入水，胶体磨勻浆破碎，得勻浆液；②、冷冻步骤①的勻浆液，于30 40°C融化，并保温1 池，调pH值至4.0 4. 5 ；离心分离，得滤液；③、超滤步骤②的滤液，调pH值6.0 7. 5 ；加重量含量为1 % 10 %的赋形剂，搅拌溶解，冷冻干燥；粉碎得干粉。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤①中动物脾脏为新鲜、去除脂肪和结缔组织的动物脾脏。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤②中冷冻为-10°C以下冷冻10小时以上。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤②中离心分离为3500 4000rpm 转速下离心9 lOmin。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤③中超滤在用5 50KD分子量的超滤机中进行的。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤③中赋形剂选自甘露醇、甘氨酸和蔗糖中的一种或多种。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤③中冷冻干燥至水分为5%以下。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤③中粉碎为在30°C以下进行的。
9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤③中粉碎为粒径小于80目。
全文摘要
本发明公开了一种动物用转移因子可溶性粉的制备方法，包括以下步骤①取动物脾脏，按重量比1～3∶1～3加入水，胶体磨匀浆破碎，得匀浆液；②冷冻步骤①的匀浆液，于30～40℃融化，并保温1～2h，调pH值至4.0～4.5；离心分离，得滤液；③超滤步骤②的滤液，调pH值6.0～7.5；加重量含量为1％～10％的赋形剂，搅拌溶解，冷冻干燥；粉碎得干粉。本发明采用健康动物的脾脏为原料，经特定工艺提取、分离纯化、浓缩等工艺后，加适宜的赋形剂，经真空冷冻干燥制成。通过低温反复冻融法从脾脏中提取转移因子活性物质，提供一种生产量大，生产成本较低，产品生物活性高且稳定、高分子量物质明显减少的兽用转移因子可溶性粉剂的制备方法。
文档编号A61K9/14GK102357102SQ20111029859
公开日2012年2月22日 申请日期2011年9月30日 优先权日2011年9月30日
发明者刘显东, 周天琼, 周正兵, 贾代宏 申请人:浙江华尔成生物药业股份有限公司