专利名称：从油橄榄果渣中提取含有山楂酸和齐墩果酸混合物的方法
技术领域：
本发明涉及一种从油橄榄果渣中提取含有山楂酸和齐墩果酸混合物的方法。
背景技术：
(Olea europaea L.)为木犀科木犀榄属阔叶植物，又名洋橄榄，是世界著名的木本油料兼果用树种，我国分布有15种，主要分布在甘肃、云南、四川、贵州等地。种植油橄榄主要是利用果实中油脂加工橄榄油，然而，油橄榄果经加工得到高营养价值的橄榄油后，果渣在我国尚未得到良好的利用，除部分被用作饲料外，产生的副产品-油橄榄果渣大部分被直接废弃。不但仅严重污染环境，也在一定程度上造成的资源的浪费。因此对油橄榄果渣进行综合开发利用，是十分必要的。油橄榄果渣由油橄榄果皮，果核及残余果肉组成，其中主要含有三萜类、黄酮类、挥发油，维生素等有效成分。本课题组前期实验研究表明三萜酸是油橄榄果渣中富含的主要有效成分，其中以山楂酸(Maslinic acid)和齐墩果酸(Oleanolic acid)含量最高。山楂酸与齐墩果酸均为五环三萜类有机弱酸，，可溶于甲醇、丙酮、氯仿，难溶于水。文献报道表明山楂酸和齐墩果酸具有抗菌消炎，降血糖血脂，抗HIV，抗肿瘤，清除自由基等多种活性作用，是重要的药品、保健品与化妆品的原料和添加剂。Martin等人研究发现从油橄榄中提取得到的山楂酸和齐墩果酸均能抑制DNA的合成并诱导恶性肿瘤1321N1星形细胞瘤的凋亡，其IC5tl值约为25 μ mol/L，在肿瘤细胞凋亡过程中，细胞凋亡的关键酶天冬氨酸蛋白酶caspase-3被激活，细胞内的活性氧大量增加(Cancer Res,2007,67(8):3741-3751)。Reyes等人对山楂酸的抗肿瘤机制也进行了研究，发现山楂酸可以强烈诱导癌细胞G0/G1周期阻滞、DNA断裂及通过p53依赖的机制激活天冬氨酸蛋白酶caspase-3，诱导细胞凋亡；然而对于非肿瘤正常细胞株IEC_6、IEC-18，山楂酸不影响其细胞周期，也不会诱导其凋亡(FEBS Lett, 2006, 580 (27):6302-6310)。王晓峰等人对小鼠体外试验发现齐墩果酸不仅可抑制肿瘤生长，还能降低不良辐射损伤即降低放疗对小鼠造血组织损伤的作用(中国中药杂志，1999,34(6):377-379)。Xu等人研究发现当山楂酸浓度为 17.9mg/mL 时对HIV-1 蛋白酶的活性抑制达到 100% (J Nat Prod，1996，59 (7):643-5)。山楂酸和齐墩果酸具有多种生理活性，但由于它们结构复杂，难以通过化学合成的方法制备，所以使得从植物中提取分离纯度高、活性强的山楂酸和齐墩果酸化合物受到越来越多的关注。美国专利报道了一种以橄榄果渣为原料制备山楂酸和齐墩果酸混合物的方法(US6740778)，利用水和有机溶剂提取山楂酸和齐墩果酸，将提取得到的浸膏经过硅胶柱层析分离得到山楂酸和齐墩果酸的粗提物，将粗提物分别用一定比例的甲醇、水混合溶剂经反相硅胶ODS柱层析，然后分别用乙酸乙酯重结晶得到山楂酸和齐墩果酸纯品。该工艺虽具有潜在的工业化价值，但由于提取工艺复杂、生产成本高，因而还没有形成商品化供应。
发明内容
针对上述现有技术中存在的缺陷和不足，本发明的目的在于提供一种从油橄榄果渣中提取含有山楂酸和齐墩果酸混合物的方法。本发明将油橄榄果渣用80_95wt %乙醇水溶液提取，提取液浓缩后再用20-70wt%乙醇水溶液重新溶解，然后经过大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用水洗涤树脂柱除去水溶性杂质，再用解吸液进行解吸，合并解吸液，回收解吸液后干燥得到含山楂酸和齐墩果酸的提取物浸膏。一种从油橄榄果渣中提取含有山楂酸和齐墩果酸混合物的方法，其特征在于该方法依次步骤为:A提取:以油橄榄果榨油后的果渣为原料，加入80_95被％乙醇水溶液回流提取，得到提取液；将提取液离心分离，上清液减压浓缩回收乙醇后用20-70wt%乙醇水溶液重新溶解，使其浓度为每升相当于油橄榄果渣0.06 0.40Kg，充分混匀，称作上样液；B大孔树脂分离纯化:上样液经过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附完毕后，树脂柱先用水洗涤以除去水溶性杂质；弃去洗涤液，然后加入解吸液进行解吸附；合并解吸液，离心后将上清液减压浓缩回收解吸液，残液浓缩后干燥，制得含有含山楂酸和齐墩果酸的提`取物浸膏。上述制备方法中，大孔吸附树脂选自苯乙烯基质交联得到的大孔吸附树脂。上述制备方法中，大孔吸附树脂柱的柱径与柱高比为1: 10 1: 15。上述制备方法中，上样液可以在大孔树脂柱上吸附一次，也可以循环吸附。上述制备方法中，大孔树脂柱吸附后解吸液为乙醇、丙酮以及乙酸乙酯中的一种。上述制备方法中，吸附流速为2 20BV/h，流出树脂柱的吸附残液可再循环吸附I 2次后弃去。本发明提取的混合物中山楂酸含量达到30%以上，齐墩果酸含量达到23%以上。本发明与已有方法技术相比，其特点在于可从油橄榄果渣中制备出含有高纯度山楂酸和齐墩果酸的提取物；生产成本低廉，试剂绿色环保，工艺路线简单，可为以油橄榄提取物为主要原料或辅助原料的药物、保健品或保健食品等功能产品的研发提供参考。提取物产品中山楂酸和齐墩果酸含量用高效液相色谱法(HPLC)测定。
具体实施例方式以下通过具体实施例进一步说明本发明，但实施例仅用于说明，并不能限制本发明的范围。实施例1:称取阴干的油橄榄果渣20g，置500mL圆底烧瓶中，加入80%乙醇240mL，于水浴常压回流提取lh，倾出提取液。料渣中再加入80%乙醇200mL，常压回流提取lh，倾出提取液，料渣弃去。合并两次提取液，离心。将上清液减压浓缩至近干后，加50%乙醇水溶液溶解并定容至250mL，使其浓度为每升相当于油橄榄果渣0.08Kg,充分混匀，即得上样液。称取大孔吸附树脂7g，湿法装入内径1.0cm、柱高12cm(径高比1: 12)的玻璃柱中(1BV = 4mL)。取上样液IOOmL上柱进行吸附，以15BV/h的流速吸附I次，弃去吸附残液。向吸附后的树脂柱中加入IOBV的水进行洗漆除杂,弃去水洗漆液。然后向水洗后的树脂柱中加入12BV的95%乙醇溶液进行解吸附，收集解吸液，离心后将上清液减压浓缩回收溶剂，残液进行浓缩和喷雾干燥，制得提取物浸膏，用高效液相色谱法(HPLC)测定山楂酸含量35.4%，齐墩果酸含量27.6%。实施例2:称取阴干的油橄榄果渣lKg，放入多效提取罐中，加入95%乙醇IOL提取1.5h，倾出提取液。料渣中再加入95%乙醇8L提取1.5h，倾出提取液，料渣弃去。合并两次提取液，离心。上清液经减压浓缩回收乙醇后，加入70%乙醇定容至5L，使其浓度为每升相当于油橄榄果渣0.2Kg，充分混匀，即得上样液。称取大孔吸附树脂.8Kg，湿法装入内径5.0cm、柱高50cm (径高比1: 10)的树脂柱中(1BV = 0.98L)。取上样液4L上柱，以20BV/h的流速吸附，流出液上柱再吸附，循环吸附2次，弃去吸附残液。向吸附后的树脂柱中加入IOBV的水进行水洗除杂，弃去水洗涤液。然后向水洗后的树脂柱中加入IOBV的乙酸乙酯，以IOBV/h的流速进行解吸，解吸液回收乙酸乙酯。残液经浓缩和干燥，制得提取物浸膏，用高效液相色谱法(HPLC)测定山楂酸含量30.2%，齐墩果酸含量23.5%。实施例3:改变解吸液为丙酮，其它条件与实施例1相同，制得提取物浸膏，用高效液相色谱法(HPLC)测定山楂酸含量33.4% ，齐墩果酸含量25.5%。
权利要求
1.一种从油橄榄果渣中提取含有山楂酸和齐墩果酸混合物的方法，其特征在于该方法依次步骤为: A提取:以油橄榄果榨油后的果渣为原料，加入80-95wt %乙醇水溶液回流提取，得到提取液；将提取液离心分离，上清液减压浓缩回收乙醇后用20-70Wt%乙醇水溶液重新溶解，使其浓度为每升相当于油橄榄果渣0.06 0.40Kg，充分混匀，称作上样液； B大孔树脂分离纯化:上样液经过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附完毕后，树脂柱先用水洗涤以除去水溶性杂质；弃去洗涤液，然后加入解吸液进行解吸附；合并解吸液，离心后将上清液减压浓缩回收解吸液，残液浓缩后干燥，制得含有含山楂酸和齐墩果酸的提取物浸膏。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于大孔吸附树脂选自苯乙烯基质交联得到的大孔吸附树脂。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于大孔吸附树脂柱的柱径与柱高比为1: 10 I: 15。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于上样液可以在大孔树脂柱上吸附一次，也可以循环吸附。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于大孔树脂柱吸附后解吸液为乙醇、丙酮以及乙酸乙酯中的一种。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于吸附流速为2 20BV/h，流出树脂柱的吸附残液可再循环吸附I 2次后弃 去。
全文摘要
本发明公开了一种从油橄榄果渣中提取含有山楂酸和齐墩果酸混合物的方法。将油橄榄果渣用80-95wt％乙醇水溶液提取，提取液浓缩后再用20-70wt％乙醇水溶液重新溶解，然后经过大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用水洗涤树脂柱除去水溶性杂质，再用解吸液进行解吸，合并解吸液，回收解吸液后干燥得到含山楂酸和齐墩果酸的提取物浸膏。提取的混合物中山楂酸含量达到30％以上，齐墩果酸含量达到23％以上。
文档编号A61P3/06GK103169771SQ201110439888
公开日2013年6月26日 申请日期2011年12月23日 优先权日2011年12月23日
发明者邸多隆, 黄新异, 王着 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所