作为缓解疾病的抗风湿性药(dmard)和抗癌药剂的甲氨蝶呤的持续释放制剂的制作方法

专利名称：作为缓解疾病的抗风湿性药(dmard)和抗癌药剂的甲氨蝶呤的持续释放制剂的制作方法
作为缓解疾病的抗风湿性药(DMARD)和抗癌药剂的甲氨蝶呤的持续释放制剂
相关申请
本申请要求Garcia等人于2010年5月13日提交的题为“SUSTAINED RELEASE FORMULATION OF METHOTREXATE AS A DISEASE-MODIFYING ANTIREHEUMATIC DRUG (DMARD) AND AN ANT1-CANCER AGENT (作为缓解疾病的抗风湿性药(DMARD)和抗癌药剂的甲氨蝶呤的持续释放制剂)”的美国临时专利申请系列号61/334，546的优先权，将其全部内容通过引用并入本文中，以及Garcia等人于2010年10月28日提交的题为“SUSTAINED RELEASE FORMULATION OF METHOTREXATE AS A DISEASE-MODIFYING ANTIREHEUMATIC DRUG (DMARD) AND AN ANT1-CANCER AGENT (作为缓解疾病的抗风湿性药(DMARD)和抗癌药剂的甲氨蝶呤的持续释放制剂)”的美国申请系列号12/914，944的优先权，将其全部内容通过引用并入本文中。技术领域
本申请涉及甲氨蝶呤(MTX)的多囊脂质体(MVL)制剂，其使MTX的副作用最小化同时保持或改善效力。
背景技术：
MTX是类风湿性关节炎(RA)的主要的头等缓解疾病的抗风湿性药物(疾病改变的抗风湿性药)(DMARD)，并且已证明了在其他自身免疫疾病中的效力。MTX也已经用于治疗某些癌症和癌症病症。癌症在美国是死亡的主要原因。尽管寻找用于治疗癌症的新途径的巨大努力，但是初步的治疗选项保持为单独或组合的手术、化疗和辐射疗法。
全世界超过500，000名患者是用速释型MTX制剂治疗的(Sweierkot and Szechinski, Pharmacol Reports, 58, 473-492 (2006))。因为在每一次给药后，MTX 引起显著的血浆浓度相关的副作用(恶心、呕吐、腹部不适、味觉障碍、厌食症、消化不良 、和腹泻)，所以通常每周在周六进行一次，使得患者通过工作周恢复。副作用主要是由高的Cmax引起的， Cfflax是药代动力学术语，表示药物的最大血浆浓度。在通常有效的剂量下，可达80%的患者经受这些副作用，并且可达35%的患者最终停止使用MTX，即使其在大多数患者中提供极好的效力(参见 R. J. McKendry et al. , J Rheumatol20:1850 (1993))。虽然 MTX 的许多副作用似乎是肠胃的，但它们中的一些(例如恶心和呕吐)可以是中枢神经系统(CNS)副作用，因此皮下而不是口服给药不是必然改善副作用。
在RA中使用MTX的最新建议提出MTX的口服给药应当以10_15mg/周开始，其中逐步增加可达20-30mg/周。已知高剂量的口服给药(>15mg)比皮下给予导致较低的生物利用度。这是由于在小肠内MTX的主动吸收，该过程能够在较高的剂量下饱和(Stamp et al. , Biomed Pharmacother 60 678-687(2006))。因而，非肠道给药可以用于不适当的临床反应或不耐口服给药的情况。
对于RA，MTX的效力与MTX的最大血浆浓度(Cmax)无关，但是与其在曲线下方的血浆面积(“AUC”)直接相关(Hiraga et al. ,Mod Rheumatol 14:135(2004))。MTX 的 AUC 与MTX-聚谷氨酸酯的细胞内水平良好相关，认为其中的后者提供消炎效果(Hornung et al.，J. Rheumatol, 35，1709-1715(2008))。用于MTX 的口服速释剂型的标准AUC是 2466mcg/ L-小时(Hoekstra et al. , J Rheumatol, 31645-48 (2004))。用于 MTX 的皮下速释剂型的标准AUC是3786mcg/L-小时。相同文献(Id.)
因为口服给予的MTX被迅速吸收(tmax 1-3小时)并且迅速清除(t1/28_10小时)， 所以难以用常规剂型控制Cmax。tmax是给予药物之后达到最大血浆浓度时，即当吸收的速率等于清除的速率时的时间。伴随MTX的传统速释剂型的口腔和皮下给予的Cmax是相似的 (Hoekstra et al. , J Rheumatol, 31645-648(2004))。
重要地，已观察到保持MTX的Cmax低使得MTX的副作用的发生率降低至极低的水平。已经发现如果Cmax保持在0·16μπιΟ1/1以下，则副作用的发生率显著降低(Shoda et al. ,Mod. Rheumatol, 17:311-316，2007)。提供了 MTX低Cmax的缓释制剂除了在延长的时间内治疗有效的AUC (血浆浓度)，将提供重要益处。
本申请的实施方式提供了这些重要益处。速溶(instant) MTX MVL制剂提供了具有低Cmax的MTX和治疗有效的AUC的缓释制剂，其使副作用的发生率降低至极低的水平。
速溶MTX MVL制剂也提供了为保持MTX的效力所必需的AUC。因而，在本申请中描述的缓释MTX MVL制剂实现了为MTX起头等DMARD作用所必需的AUC，同时提供了足够低的 Cfflax以使MTX应用的副作用的发生率降低至极低水平。
特别地，本文中用于递送MTX的MVL定义为在每一个脂质体颗粒内含有多个非同心空腔的脂质体，类似于“ 泡沫状”基体。这样的颗粒与多层囊泡(MLV)，也称为多层脂质体不同，其封闭(包围，封入)同心的含水隔室。另外的独特颗粒是单层囊泡(ULV)，也称为单层脂质体，其封闭单个内部含水隔室。发明内容
本发明的实施方式提供了包括多囊脂质体(multivesicular liposomes)的制剂， 该多囊脂质体包含一定量的甲氨蝶呤，其中，对需要其的受试者给予单剂量的所述制剂导致所述甲氨蝶呤的Cmax为甲氨蝶呤的速释剂型的Cmax的5%至50%，并且其中，所述甲氨蝶呤在受试者中的持续时间为约I至约30天。在一些实施方式中，多囊脂质体进一步包括甲氨蝶呤的盐。在一些实施方式中，该盐是钠盐。在其他实施方式中，该盐是钾盐。在另外的实施方式中，该盐包含有机碱作为抗衡离子(反离子)。在一些实施方式中，甲氨蝶呤在受试者中的持续时间为约I天至约7天。
在其他实施方式中，多囊脂质体进一步包括叶酸盐(叶酸)。在一些实施方式中， 多囊脂质体进一步包括胆固醇、一种或多种磷脂或一种或多种其盐、以及一种或多种甘油三酯。在某些实施方式中，磷脂是磷酯酰胆碱、磷脂酰甘油或其盐、或这些的组合。在其他实施方式中，磷脂酰甘油是DPPG (二棕榈酰磷脂酰甘油或1，2- 二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰-消旋(rac)-(l-甘油))。在另外的实施方式中，磷酯酰胆碱是DEPC (二芥酰磷酯酰胆碱或1，2- 二芥酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(胆碱磷酸))。在其他实施方式中，多囊脂质体进一步包括DOPC (二油酰磷酯酰胆碱或1，2- 二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱)。在另一个实施方式中，甘油三酯是三油酸甘油酯(三油精)、三辛酸甘油酯、或两种的组合。在另外的实施方式中，多囊脂质体进一步包括赖氨酸。
在一些实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约I天。在其他实施方式中， 甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约2天。在另一个实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约3天。在另一个实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间是约4天。在另一个实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间是约5天。在另一个实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间是约6天。在另外的实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约7天。
在另一个实施方式中，制剂稳定至少两年。
在一些实施方式中，可以通过27-31G的针规格来递送制剂。
另一个实施方式提供了用于治疗自身免疫疾病的方法，包括对需要其的受试者给予速溶(即用，instant) MTX-MVL制剂。在一些实施方式中，该自身免疫疾病是类风湿性关节炎。在其他实施方式中，该自身免疫疾病是牛皮癣。在另外的实施方式中，该自身免疫疾病是狼疮。在另一个实施方式中，该自身免疫疾病是硬皮病。在另一个实施方式中，该自身免疫疾病是干燥综合征(斯耶格伦氏综合征，Sjogren’ s syndrome)。在其他实施方式中， 该自身免疫疾病是古德帕斯彻式综合征(Goodpasture’s syndrome)。在一些实施方式中， 该自身免疫疾病是韦格内氏肉芽肿病(Wegener’ s granulomatosis)。在另外的实施方式中，该自身免疫疾病是风湿性多肌痛。在另一个实施方式中，该自身免疫疾病是格林巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)。在另外的实施方式中，该自身免疫疾病是克罗恩病。
在一些实施方式中，多囊脂质体进一步包括甲氨蝶呤的钠或钾盐。在另外的实施方式中，多囊脂质体进一步包括赖氨酸。
在一些实施方式中，多囊脂质体进一步包括叶酸盐。在其他实施方式中，给予叶酸盐。在另外的实施方式中，给予包封在不含MTX的MVL中的叶酸盐。
还提供了一种方法，多囊脂质体进一步包括胆固醇、磷脂或一种或多种其盐、和三辛酸甘油酯。在一些实施 方式中，多囊脂质体进一步包括DOPC和三油酸甘油酯。在另外的实施方式中，多囊脂质体进一步包括DEPC。在其他实施方式中，多囊脂质体进一步包括赖氨酸。
在一些实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约I天。在其他实施方式中， 甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约2天。在另一个实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约3天。在另一个实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间是约4天。在另一个实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间是约5天。在另一个实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间是约6天。在另外的实施方式中，甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约7天。
在其他实施方式中，制剂的给予包括用在本文中描述的MTX-MVL制剂对所述受试者进行注射。在一些实施方式中，注射是皮下的。在其他实施方式中，注射是肌内的。在一些实施方式中，注射是皮内的。在另外的实施方式中，注射是瘤内的。在其他实施方式中， 注射是脊柱内的。在一个实施方式中，注射是每5至7天给予的。在另一个实施方式中，注射是一周一次给予的。
另一个实施方式提供了用于治疗癌症的方法，包括给予速溶MTX-MVL制剂，其中， 所述制剂是不多于每两天和不少于每四天给予需要其的受试者。在一些实施方式中，癌症是实体瘤癌症。在其他实施方式中，癌症是妊娠滋养细胞肿瘤、乳腺癌、头颈癌、或肺癌。在另外的实施方式中，癌症是妊娠滋养细胞肿瘤(恶性葡萄胎(chorioadenoma destruens)、绒毛膜癌、或葡萄胎(水泡状胎块，hydatidform mole))。在一些实施方式中，癌症是血生癌。在另外的实施方式中，血生癌是急性成淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、蕈样真菌病、 或骨肉瘤。
在一些实施方式中，多囊脂质体进一步包含叶酸盐。在其他实施方式中，叶酸盐是给予的。在另外的实施方式中，包封在不含MTX的MVL中的叶酸盐是给予的。
在一些实施方式中，多囊脂质体进一步包含甲氨蝶呤的钠或钾盐。在其他实施方式中，多囊脂质体进一步包含胆固醇、磷脂或其一种或多种盐、和三辛酸甘油酯。在另外的实施方式中，多囊脂质体进一步包含D0PC。在另一个实施方式中，多囊脂质体进一步包含赖氨酸。
在一些实施方式中，制剂的给予包括对所述受试者注射所述制剂。在其他实施方式中，注射是皮下的。在另一个实施方式中，每2天给予注射。
另一个实施方式提供了基本上不含环糊精化合物，并且优选不含环糊精化合物的速溶MTX-MVL制剂。


图1是示出了在皮下注射MTX对照溶液和速溶MVL MTX制剂的实施例后的血浆浓度的图。
图2是其中改变y轴的图1的变形图，其显示了在皮下注射MTX对照溶液和速溶 MVL MTX制剂的实施例后的血浆浓度。
图3是示出了制剂I的降解物随时间的百分比。
具体实施方式

本发明的实施方式提供了包含多囊脂质体的制剂，该多囊脂质体含有大量的甲氨蝶呤，其中，对需要其的受试者给予单剂量的所述制剂导致所述甲氨蝶呤的Cmax在甲氨蝶呤速释剂型的Cmax的5%至50%之间，并且其中，所述甲氨蝶呤在受试者中的持续时间为约I天至约30天。
本发明的实施方式还提供了用于治疗自身免疫疾病的方法，包括给予需要其的受试者本文中描述的制剂。
本发明的实施方式进一步提供了用于治疗癌症的方法，包括给予本文中描述的制剂，其中，所述制剂是不多于每2天和不小于每4天给予需要其的受试者的。
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然类似于本文中描述的那些方法和材料可以用于本申请的实施或试验，但是下面描述了适宜的方法和材料。在本文中提到的所有出版物、专利申请、专利和其他文献的全部内容通过引用并入本申请中。另外，材料、方法、和实例仅是示例性的，并且不是限制性的。
特别地，术语AUC是指血浆浓度对时间图的曲线下方的血浆面积；术语Cmax是药代动力学术语，并且是指药物的最大血浆浓度；术语tmax是指到达Cmax的时间；术语Cmax相关的副作用是指与血浆浓度相关的副作用，其包括但不限于，恶心、呕吐、腹部不适、味觉障碍、厌食症、消化不良、和腹泻；术语MTX是指甲氨蝶呤和其盐以及如下文讨论的溶解物；术语t1/2是血浆清除一半MTX花费的时间；术语MVL是指多囊脂质体；术语DMARD是指缓解疾病的抗风湿性药物；术语“MTX血浆水平的持续时间”是指给予到累积的血浆AUC达到在无限时间下累积的AUC的AUC的90%之间的时间；术语“速释剂型”是指剂型中没有延缓药物释放的物质；术语“休药期(药物假期，drug holiday)”是药物基本上清除患者的血楽;时给予之间的时间。术语“需要其的受试者”是指哺乳动物，并且包括人类。术语“环糊精化合物”是指选自由α、0、和Y环糊精或其衍生物组成的组中的一种或多种化合物。这些衍生物中的一种包括2-羟丙基-β-环糊精。其他衍生物包括磺丁基醚α'β-或Υ-环糊不目ο
自身免疫疾病起因于身体对通常存在于身体中的物质和组织过于活跃的免疫应答。免疫系统误将身体的某部分作为病原体并攻击它。这可以局限于某些器官或涉及不同位置的特定组织。典型地，自身免疫疾病的治疗与降低免疫应答的免疫抑制药物治疗一起进行。如在本文中使用的术语“自身免疫疾病”包括，但不限于，克罗恩病、皮肌炎、I型糖尿病、古德帕斯彻氏综合征、格雷夫斯病、格林巴利综合征、桥本病、特发性血小板减少性紫癜、狼疮、混和结缔组织紊乱、重症肌无力、发作性睡病、寻常型天疱疮、恶性贫血、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬变、牛皮癣、类风湿性关节炎、干燥综合征、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、 脉管炎、和韦格内氏肉芽肿病。
本申请的一个实施方式提供了包含MTX和其盐的MTX MVL制剂以治疗自身免疫疾病，尤其是RA和牛皮癣。速溶MTX MVL制剂具有通常在MTX的速释剂型Cmax的5%至50%之间的MTX的Cmax。在速释剂型中，MTX具有很高的和很早的Cmax，然后在24小时内迅速下降至低于定量极限(“L0Q”)。如上文讨论的，速溶(即用)MTX MVL制剂的给予保持MTX的Cmax 较低，其使MTX应用的副作用的发生率降低至极低水平。对于治疗自身免疫疾病，优选Cmax 保持为O. 16 μ mo I/L或低于O. 16 μ mol/L。本申请的速溶MTX MVL制剂提供了在MTX的治疗浓度下持续的AUC，其中持续时间为约I天至约30天。优选地，持续时间为约I至约7 天。对于自身免疫疾病的治疗，持续时间优选为I至5天。
MTX也已经用于治疗某些癌症和癌症病症。速溶MTX MVL制剂可以用于治疗实体瘤癌症。如在本文中讨论的 ，这些癌症包括，但不限于，某些类型的妊娠滋养细胞肿瘤，包括恶性葡萄胎、绒毛膜癌、和葡萄胎，以及乳腺癌、头颈癌、和肺癌。速溶MTX MVL制剂也可以用于治疗血生癌。如在本文中讨论的，这些癌症包括，但不限于，急性成淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、蕈状真菌病、和骨肉瘤。速溶MTX MVL制剂也可以用于直接递送至肿瘤(例如，脊柱内递送至脑脊髓液或通过瘤内递送)。在一些实施方式中，本实施方式的制剂和方法涉及通过鞘内注射来治疗脑膜白血病。
如上文讨论的，对于自身免疫疾病的治疗，本申请的MTX MVL制剂具有在MTX的速释剂型的Cmax的5%至50%之间的血浆Cmax。对于癌症的系统治疗，相对于自身免疫疾病通常使用显著较高的Cmax。但是，相对于给予相同剂量的MTX，用MTX速释剂型给予，通过降低 Cmax可以实现降低的副作用。对于癌症的系统治疗，本申请的MTX MVL制剂还提供了持续暴露在MTX的治疗AUC下，其中持续时间为约I至约30天。在一些实施方式中，持续时间为约I至约7天。可以局部治疗一些癌症。例如，使用lmg/mL的溶液，每2-5天用鞘内注射剂量为12mg/平方米(最大为15mg)的MTX来治疗脑膜白血病。另一个实例将是可以接受瘤内注射的一种或多种肿瘤。在这些局部疗法中，血浆浓度是无关的。相反，局部浓度是重要的。速溶MVL MTX制剂在这些局部治疗中是有用的，由于其提供持续局部水平的药物。 这提供了必要的效力并且降低注射的次数，因而提供了患者和监护人便利。
对于自身免疫疾病，除了提供Cmax为MTX的速释剂型的血浆Cmax的5%至50%之间的MTX MVL制剂，出乎意料地，在相同的MTX剂量下，速溶MTX MVL制剂比速释剂型提供相同的或更好的效力。MTX的效力与MTX的Cmax无关而与AUC直接相关。因此，本申请的MVL 制剂具有相当于或好于如上文描述的MTX的速释剂型的AUC。优选地，速溶MTX MVL制剂提供与MTX的皮下速释剂型相同的AUC。如果降低的副作用允许较高的剂量，则AUC可以更大。此外，速溶制剂和使用该制剂治疗的方法可以基本上不含(没有)环糊精，并且优选不含环糊精。出乎意料地，在没有使用环糊精化合物的情况下，速溶制剂和方法已实现了本文中描述的有利效果。例如，在MTX没有与环糊精化合物复合的情况下，速溶制剂和方法实现了长的持续时间。
此外，速溶制剂和使用该制剂治疗的方法可以基本上不含环糊精，并且优选不含环糊精。Kim 等人(Cancer Chemother. Pharmacol. 33:303-306 (1994);美国专利第 5，759，573号)之前已经报道了在皮下给予啮齿动物后，MTX从含有MTX与羟丙基-β -环糊精复合的MVL制剂中的释放。该包含复合物(inclusion complex)的形成导致释放速率的降低(参见col. 4:27-34 ；col. 5:14-19)。出乎意料地，在没有使用环糊精化合物的情况下， 速溶制剂和方法已实现了在本文中描述的有利效果。例如，在MTX没有与环糊精化合物复合的情况下，速溶制剂和方法达到了长的持续时间。
甲氡蝶呤
本发明的实施方式使用了包封在MVL中的MTX和其盐、水合物、和溶解物，无论是结晶的或无定形的。这样的盐包括钠、钾、赖氨酸、精氨酸、和其他药用单或二价碱性加成盐。术语“MTX”包括如在本文中使用的任意和所有这样的形式。在不需要MTX与环糊精或其衍生物复 合的情况下，速溶MTX MVL制剂和方法显示了它们期望的性质。
多囊脂质体
本发明实施方式的制剂采用MTX包封的多囊脂质体(MTX-MVL)，其包封并提供上述MTX的调节的和持续的释放。通过以下方法制备MVL。
由两种不混溶相，即脂质相和第一含水相来形成含有MTX的“油包水”型乳液。脂质相是由挥发性有机溶剂中的至少一种两亲性脂质和至少一种中性脂质组成的。术语“两亲性脂质”指的是具有亲水“头部”基团和疏水“尾部”基团的分子，并且可以具有形成膜的能力。如在本文中使用的，两亲性脂质包括具有净负电荷、净正电荷、和两性离子脂质(在它们的等电点没有净电荷)的那些。术语“中性脂质”指的是本身不具有形成囊泡的能力，并缺乏带电荷的或亲水“头部”基团的油或脂肪。中性脂质的实例包括，但不限于，甘油酯、乙二醇酯、生育酚酯、缺乏带电荷的或亲水“头部”基团的固醇酯、以及烷烃和鲨烯。
两亲性脂质选自在同一分子中具有疏水区和亲水区的各种脂质。适宜的两亲性脂质是两性离子磷脂，包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、溶血磷酯酰胆碱、和溶磷脂酰胆碱。也适宜的是阴离子两亲性磷脂，如磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、 和心磷脂。也适宜的是阳离子两亲性脂质，如酰基三甲铵丙烷、二酰基二甲铵丙烷、硬脂酰胺、等等。优选的两亲性脂质包括二油酰磷酯酰胆碱(D0PC)、二芥酰磷酯酰胆碱(DEPC)JP 二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)。用于治疗诸如类风湿性关节炎的自身免疫疾病以及癌症的速溶MTX MVL的两亲性脂质的某些实施方式包括与DPPG结合的DOPC和DEPC。
适宜的中性脂质是甘油三酯、丙二醇酯、乙二醇酯、和鲨烯。在速溶制剂和方法中有用的甘油三酯的实例是三油酸甘油酯(T0)、三棕榈油甘油酯、三肉豆蘧酸甘油酯、三亚油酸甘油酯、三丁酸甘油酯、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯、和三癸酸甘油酯。在本申请中有用的甘油三酯中的脂肪链可以是完全相同的、或不是完全相同的(混和链甘油三酯)，包括完全不同的。丙二醇酯均可以是辛酸和癸酸的混和二酯。特别地，中性脂质，例如，三油酸甘油酯可以增加至约O. 01%至约20%的百分比范围以便降低Cmax，但仍然保持这些制剂提供的优势，特别是在自身免疫疾病的治疗中。特别地，考虑到摩尔比，三油酸甘油酯的百分比范围是速溶制剂中使用的诸如三辛酸甘油酯的中性脂质的约1%至2%。另外，胆固醇或植物固醇包含在速溶MVL中。
许多类型的挥发性有机溶剂可以用于本申请中，包括醚、酯、卤代醚、烃、卤代烃、 或氟利昂。例如，二乙醚、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、和它们的任何组合适合用于制备该制剂。
可选地，但是高度期望地，其他组分包含在脂质相中。这些之中是抗氧化剂、抗菌性防腐剂、胆固醇或植物固醇。
第一含水相包括MTX、碱、和渗透剂(例如氯化钠、蔗糖、葡萄糖、果糖或它们的混合物)。脂质相和第一含水相通过机械搅动来混和，如通过使用旋转或振动刀、摇动、通过挡板结构或多孔管挤压、或通 过超声以产生油包水乳液。因而，本申请的MTX是在MVL生产的第一步中直接包入的。
然后通过上述方法使油包水乳液分散到第二含水相中，以形成悬浮在第二含水相中的溶剂小球，形成水包油包水乳液。术语“溶剂小球”指的是有机溶剂的微观球形小液滴， 其中悬浮有水溶液的多个更小的液滴。因此，所得的溶剂小球含有多个含水小液滴，其中溶解有MTX。第二含水相可以含有另外的组分，如葡萄糖、蔗糖、和/或赖氨酸。
然后从小球中去除挥发性有机溶剂，例如通过表面蒸发该悬浮液。当溶剂基本或完全蒸发时，形成了 MVL。可以用于蒸发的气体包括氮、氩、氦、氧、氢、和二氧化碳。可替换地，可以通过喷射、旋转蒸发、透析过滤、或借助于溶剂选择性膜来去除挥发性溶剂。
在一些实施方式中，速溶MTX MVL制剂中脂质的范围可以如下胆固醇可以从约5 至约80mM ;磷脂酰胆碱可以从约5至约50mM ;三辛酸甘油酯可以从约5至约80mM ;三油酸甘油酯可以从约O至约SmM ;以及磷脂酰甘油可以从约O至约15mM。如使用其他带电荷的脂质，DPPG是可选的。对于癌症的治疗，优选比RA更长的持续时间。这可以通过增加甘油三酯的量、通过增加长链与短链甘油三酯的比率、通过使用较长链的磷脂酰胆碱或通过增加胆固醇浓度来实现。
制备速溶MVL制剂的方法也可以在Hartouian等人的美国公开号2007-0235889、 和Hartouian等人的W099/25319 (PCT/US98/24261)中找到，将其全部内容通过引用并入本申请中。
叶酸盐(叶酸)
在另外的实施方式中，叶酸、亚叶酸(甲酰四氢叶酸)、任一种的活性对映体、或它们的盐(统称为叶酸盐)可以与MTX组合使用，以降低与MTX相关的副作用，尤其是考虑到胃肠道、肝脏、和血细胞(Prey and Paul1Brit J. Dermatol.，160:622-628 (2009))。叶酸盐的剂量和给药频率可以从约I至约27. 5mg/周改变(Oritz et al.，J. Rheumatol, 25 (1998) 36-43))。典型的剂量可以为约2. 5至约5mg/周或约I至约2mg/天 (Hoekstra et al. , Ann Rheum Dis,62:423-426 (2003))。
速溶MTX-MVL制剂可以使用叶酸盐以降低Cmax相关的副作用，如使用MVL的持续释放性能的恶心和呕吐，以及可以通过叶酸盐减少的副作用。叶酸盐可以包含在速溶制剂中，例如，以一种或多种以下方式。首先，叶酸盐可以在外部溶液中(非包入的)。第二，叶酸可以包含在与MTX相同的第一水溶液中，因而，在给予后将以与MTX大致相同的速率释放。 第三，叶酸盐和MTX可以配制在异囊脂质体中(参见Kim,美国专利号5，422，120, 1995年6 月6日))。第四，叶酸盐和MTX可以包含在MVL颗粒的单独群体中。最后，可以以任意上述的组合包含叶酸盐和MTX。
在第四种情况下，这些单独的群体(populations)可以具有提供基本相同的释放速率的相同脂质组合物，或它们可以具有提供不同释放速率的不同脂质组合物，以便优化叶酸盐的副作用、不足的效果。单独的群体可以在一个容器、单独的容器、或两个腔室容器中结合，以恰好在给予之前或在给予期间混合两者。在两个单独容器的情况下，在相同或不同的时间下给予两者。
给予的方法
基于包括治疗诸如RA的自身免疫疾病的系统使用，可以每周通过注射给予上文讨论的MTX制剂，更特别地，通过皮下、皮内、或肌内注射。在癌症的治疗中，也可以局部(例如，脊柱内或瘤内)递送它们。对于RA，当其适于本申请的组合物时，术语“治疗有效的”意味着存在于MVL内的第一含水相中的MTX以足以达到MTX的有效AUC的方式释放，这样的 AUC水平为约1000-5000mcg/L-小时。更高的水平将用于癌症的系统治疗。当局部递送用于治疗癌症时，可以显著降低递送的量。将依赖于诸如年龄、性别、全身状态等的患者因素来 改变精确的剂量。本领域的技术人员可以容易考虑到这些因素，并且在没有采取过度实验的情况下，使用它们以建立有效的治疗浓度。
为了治疗自身免疫疾病，优选速溶MTX MVL制剂将是每周I次皮下注射的。在一个实施例中，MTX的持续时间是约I至约5天。因而，速溶MTX MVL制剂提供约2天的药物假期。该假期降低了与MTX相关的副作用。
对于治疗癌症，将不多于每2天注射速溶MTX MVL制剂，并且在另一个实施方式中，每7天皮下注射。将重复治疗几个疗程。为了降低由于在癌症中使用大剂量的副作用， 也可以给予患者“甲酸四氢叶酸援救(leucovorin rescue)” (Link MP, Goorin AM, Miser AW, et al. ;N. Eng. J. of Med. 1986; 314 (No. 25) : 1600-1606)，或允许治疗之间 7-10 天的休眠期。然而，由于随着MVL的低Cmax释放曲线，将减少对甲酰四氢叶酸或休眠期的需要。
对于治疗癌症，在成年人类中，对于使100mg/kg的体重转化为37mg/m2的体表面积，给出了 1:30的人类剂型指导比率。实际上取决于年龄和体型，该转化系数在1:20和 1:40之间变化。
对于治疗诸如RA的自身免疫疾病，新患者将接受一定剂量的速溶MTX MVL制剂， 其具有2-5mg总量的MTX，其中滴定为2-5mg/周至可达25_35mg/周。这样的给予用于在几个小时至几天的时间内，例如，可达约5天的时间内提供MTX的递送。这样的MTX MVL 制剂，相对于速释型可注射或口服制剂，降低了如上文列举的副作用，保持了皮下注射速释MTX制剂的AUC，并且相对目前的速释口服MTX给予提高了 Cmax,如由美国风湿病学会评分系统(American College of Rheumatology scoring system)判断的具有相等的或更好的效力。参见 Felson et al. , Arthritis &Rheumatism, Vol. 38, No. 6, June 1995。
对于治疗癌症，以与自身免疫疾病相同的方式给予MVL包封的MTX制剂，但是使用较高的剂量。再次，基于在癌症治疗中的系统使用，可以每周通过注射给予上文中讨论的 MTX制剂，更特别地，通过皮下、皮内、或肌内注射。也可以局部(例如，脊柱内或瘤内)递送它们。
非限制性公开和通过参考的结合
虽然已经根据某些实施方式特别地描述了某些治疗剂、组合物和方法，但是以下实施例仅用于说明本发明的组合物和方法，而不用于对其进行限制。在本申请中列举的每一篇参考文献等的全部内容通过引用并入本文中。
实施例
以类似于Kim等人报道的方式制备速溶MVL MTX制剂(Biochim Biophys Acta, 728 (1983) 339-348)。含有MTX、氢氧化钠和蔗糖的水溶液是用含有DOPC或DEPC、 DPPG、三辛酸甘油酯和/或三油酸甘油酯、和胆固醇的氯仿溶液乳化的，产生了油包水(W/ 0)乳液。然后在含有赖氨酸和蔗糖的第二水溶液中将W/0乳液乳化以产生W/0/W乳液。然后在37° C下在氮流下搅拌W/0/W乳液以通过蒸发除去氯仿。将得到的颗粒离心，并且用生理盐水置换上清液。洗涤后，将颗粒稀释到生理盐水中以获得约50%的堆积颗粒体积(PPV) 的产物。PPV是MVL颗粒占总制剂体积的分数。
在下表I中列出了用于通过上述方法制备四种制剂的溶液的组成。得到的颗粒具有13-15微米的中间粒径(median diameters)和约25mg/mL的效能。
如在下表I中使用的粒度分布，d10是指10%以下的颗粒具有在表中确定的直径。 d50是指50%以下的颗粒 具有在表中确定的直径。d9(l是指90%以下的颗粒具有在表中确定的直径。“范围(跨度，span)”是通过d1(l减去d9(l并用d5(l除以该结果计算的。
如在表I中使用的，“游离％ (%Free)”是指在MVL之外的MTX的百分数，并且PPV 是指堆积颗粒体积。
表I
组分制剂I制剂2制剂3制剂4第一水溶液MTX (mg/mL)61.7561.7561.7561.75NaOH (mM)286.6286.6286.6286.6蔗糖(mg/mL)24.424.424.424.4pH7.427.427.427.42摩尔渗透压浓度 (mOsm)304304304304脂质组成三辛酸甘油酯(mM)40.040.040.020.0胆固醇(mM)40.040.040.020.0DPPG-Na+ (mM)5.65.65.62.8DEPC (mM)0.026.40.00.0DOPC (mM)26.40.026.413.2 三油酸甘油酯(mM)0.00.00.80.0第二水溶液赖氨酸(mM)20202020右旋糖，H2O (mM)n/an/an/an/a蔗糖8.6%8.6%8.6%8.6%pH10.1510.1510.1510.15摩尔渗透压浓度 (mOsm)300300300300粒度分布dlO6.86.76.87.3d5013.413.713.114.7d9025.727.325.331.8范围1.4051.5001.4061.672分析结果总效能(mg/mL)24.824.024.626.8游离％0.2%0.2%0.2%0.9%PPV%53%52%57%54%
制剂I的最终组成将具有大致如在下表中给出的最终组成。
表权利要求
1.一种包含多囊脂质体的制剂，所述多囊脂质体含有一定量的甲氨蝶呤，其中，将单剂量的所述制剂给予需要其的受试者导致所述甲氨蝶呤的Cmax为甲氨蝶呤的速释剂型的Cmax的5%至50%，并且其中，所述甲氨蝶呤在所述受试者中的持续时间为约I天至约30天。
2.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述多囊脂质体还包含甲氨蝶呤的盐。
3.根据权利要求2所述的制剂，其中，所述盐是钠盐。
4.根据权利要求2所述的制剂，其中，所述盐是钾盐。
5.根据权利要求2所述的制剂，其中，所述盐包含有机碱作为抗衡离子。
6.根据权利要求1所述的制剂，其中，甲氨蝶呤在所述受试者中的持续时间为约I天至约7天。
7.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述多囊脂质体还包含叶酸盐。
8.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述多囊脂质体还包括胆固醇、一种或多种磷脂或其一种或多种盐、和一种或多种甘油三酯。
9.根据权利要求8所述的制剂，其中，所述磷脂是磷酯酰胆碱、磷脂酰甘油或其盐、或它们的组合。
10.根据权利要求9所述的制剂，其中，所述磷脂酰甘油是DPPG(二棕榈酰磷脂酰甘油或1，2- 二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰-消旋-(1-甘油))。
11.根据权利要求9所述的制剂，其中，所述磷酯酰胆碱是DEPC(二芥酰基磷脂酰胆碱或1，2- 二芥酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱))。
12.根据权利要求9所述的制剂，其中，所述多囊脂质体还包含DOPC(二油酰磷脂酰胆碱或1，2- 二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱)。
13.根据权利要求8所述的制剂，其中，所述甘油三酯是三油酸甘油酯、三辛酸甘油酯、或两者的组合。
14.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述多囊脂质体还包含赖氨酸。
15.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约I天。
16.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约2天。
17.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约3天。
18.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约4天。
19.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约5天。
20.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约6天。
21.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约7天。
22.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述制剂稳定至少两年。
23.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述制剂可以通过27-31G规格的针递送。
24.一种用于治疗自身免疫疾病的方法，包括将权利要求1至23所述的制剂给予需要其的受试者。
25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为类风湿性关节炎。
26.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为牛皮癣。
27.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为狼疮。
28.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为硬皮病。
29.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为干燥综合征。
30.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为古德帕斯彻氏综合征。
31.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为韦格内氏肉芽肿病。
32.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为风湿性多肌痛。
33.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为格林巴利综合征。
34.根据权利要求24所述的方法，其中，所述自身免疫疾病为克罗恩病。
35.根据权利要求24所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含甲氨蝶呤的钠盐或钾盐。
36.根据权利要求24所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含叶酸盐。
37.根据权利要求24所述的方法，还包括给予叶酸盐。
38.根据权利要求24所述的方法，还包括给予包封在不包含MTX的MVL中的叶酸盐。
39.根据权利要求24所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含赖氨酸。
40.根据权利要求24所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含胆固醇、磷脂或其一种或多种盐、和三辛酸甘油酯。
41.根据权利要求35所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含DOPC和三油酸甘油酯。
42.根据权利要求35所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含DEPC。
43.根据权利要求35所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含赖氨酸。
44.根据权利要求24所述的方法，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约I天。
45.根据权利要求24所述的方法，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约2天。
46.根据权利要求24所述的方法，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约3天。
47.根据权利要求24所述的方法，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约4天。
48.根据权利要求24所述的方法，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约5天。
49.根据权利要求24所述的方法，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约6天。
50.根据权利要求24所述的方法，其中，所述甲氨蝶呤血浆水平的持续时间为约7天。
51.根据权利要求24所述的方法，其中，所述制剂的给予包括用所述制剂对所述受试者进行注射。
52.根据权利要求51所述的方法，其中，所述注射是皮下的。
53.根据权利要求51所述的方法，其中，所述注射是肌内的。
54.根据权利要求51所述的方法，其中，所述注射是皮内的。
55.根据权利要求51所述的方法，其中，所述注射是瘤内的。
56.根据权利要求51所述的方法，其中，所述注射是脊柱内的。
57.根据权利要求51所述的方法，其中，每5至7天给予所述注射。
58.根据权利要求57所述的方法，其中，每周一次给予所述注射。
59.一种用于治疗癌症的方法，包括给予权利要求1至23所述的制剂，其中，所述制剂不多于每2天和不少于每4天给予需要其的受试者。
60.根据权利要求59所述的方法，其中，所述癌症是实体瘤癌症。
61.根据权利要求60所述的方法，其中，所述癌症是妊娠滋养细胞肿瘤、乳腺癌、头颈癌、或肺癌。
62.根据权利要求61所述的方法，其中，所述妊娠滋养细胞肿瘤是恶性葡萄胎、绒毛膜癌、或葡萄胎。
63.根据权利要求62所述的方法，其中，所述癌症是血生癌。
64.根据权利要求62所述的方法，其中，所述血生癌是急性成淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、蕈样真菌病、或骨肉瘤。
65.根据权利要求59所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含甲氨蝶呤的钠盐或钾盐。
66.根据权利要求59所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含胆固醇、磷脂或其一种或多种盐、和三辛酸甘油酯。
67.根据权利要求65所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含DOPC。
68.根据权利要求59所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含叶酸盐。
69.根据权利要求59所述的方法，还包括给予叶酸盐。
70.根据权利要求59所述的方法，还包括给予包封在不包含MTX的MVL中的叶酸盐。
71.根据权利要求65所述的方法，其中，所述多囊脂质体还包含赖氨酸。
72.根据权利要求59所述的方法，其中，所述制剂的给予包括用所述制剂对所述受试者进行注射。
73.根据权利要求72所述的方法，其中，所述注射是皮下的。
74.根据权利要求73所述的方法，其中，每2天给予所述注射。
全文摘要
公开了包含多囊脂质体和MTX的制剂，给予该制剂导致MTX的Cmax为MTX的速释剂型的Cmax的5%至50%，该制剂的持续时间持续约1至约30天。也公开了通过给予MTX的这些制剂来治疗自身免疫疾病和癌症的方法。
文档编号A61K31/519GK103002877SQ201180023882
公开日2013年3月27日 申请日期2011年5月12日 优先权日2010年5月13日
发明者路易·丹尼尔·加西亚, 洛伊斯·吉布森, 威廉·兰伯特, 本杰明李, 朱良金 申请人:帕西拉制药有限公司