具有改良的连接体的鹅膏毒素轭合物的制作方法

专利名称：具有改良的连接体的鹅膏毒素轭合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及肿瘤治疗。在一个方面，本发明涉及鹅膏毒素(amatoxin)与靶结合部分(target-binding moiety)例如抗体的轭合物,所述鹅膏毒素与祀结合部分通过包含脲部分的连接体连接，其用于癌症的治疗中。在另一方面，本发明还涉及包含该轭合物的药物组合物。
背景技术：
鹅膏毒素是由8个氨基酸组成的环肽。它们可从鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)蕈类分离或合成制备。鹅膏毒素特异性抑制哺乳动物细胞的DNA依赖性RNA聚合酶II并且由此还抑制受影响细胞的转录和蛋白生物合成。细胞中转录的抑制导致生长和繁殖的停止。尽管不是共价连接，但是鹅膏毒素与RNA聚合酶II之间的络合是非常紧密的(Kd =3nM)。将鹅膏毒素从酶上解 离是非常缓慢的过程，因此使得受影响的细胞不可能恢复。当转录抑制持续太久时，细胞将经历程序性细胞死亡(细胞凋亡)。已经在1981年通过用经由偶氮化与Trp (氨基酸4 ;参见图1)的吲哚环连接的连接体将抗Thyl.2抗体与α -鹅膏毒素偶联而开发了鹅膏毒素作为细胞毒素部分用于肿瘤治疗的用途(Davis & Preston, Science 1981，213，1385-1388)。专利申请EPl 859 811 Al (2007年11月28日公开)描述了一种轭合物，其中，β-鹅膏毒环肽的鹅膏毒素氨基酸I的YC原子直接(即无连接体结构)与白蛋白或单克隆抗体ΗΕΑ125、0ΚΤ3或PA-1偶联。而且，这些轭合物显示了对乳腺癌细胞(MCF-7)、伯基特淋巴瘤细胞(Raji)和T淋巴细胞(Jurkat)的增殖的抑制作用。虽然该申请中建议使用连接体，包括包含单元例如酰胺、酯、醚、醇醚、二硫化物、脲、硫脲、烃部分以及类似部分的连接体，但是并没有实际上给出这样的结构，且没有提供更多的详细内容例如在鹅膏毒素上的连接位点。已知鹅膏毒素在与大的生物分子载体例如抗体分子偶联时是相对无毒的并且它们仅在生物分子载体被切除之后才显现它们的细胞毒性。考虑到鹅膏毒素的毒性，尤其是对肝细胞的毒性，最重要的是用于靶定的肿瘤治疗的鹅膏毒素轭合物在血浆中施用之后保持高度稳定并且在靶细胞中鹅膏毒素的释放在内化之后发生。在这一背景下，轭合物稳定性的微小的改良可对用于治疗途经的鹅膏毒素轭合物的治疗窗和安全性带来显著的结果。_6] 发明目的因此，本领域中有对在血浆中稳定而尽量减小对非靶细胞的有害副作用的靶向结合部分鹅膏毒素轭合物的高度需要。

发明内容
在第一方面，本发明涉及一种轭合物，其包含经由连接体L与鹅膏毒素相连的靶结合部分，其中，所述连接体L经由下列(i)、(ii)或(iii)与鹅膏毒素连接:⑴鹅膏毒素氨基酸I的Y C原子，特别是经由酰胺键；
(ii)与鹅膏毒素氨基酸3的SC原子结合的氧原子，特别是经由酯键、醚键或氨基甲酸酯键；(iii)鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子，特别是经由与鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子结合的氧原子；在每种情况下，所述连接体L经由脲部分与靶结合部分连接。在第二方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含根据本发明的轭合物。在另一个方面，本发明涉及一种鹅膏毒素-轭合分子，其包含经由下列(i)、(ii)或(iii)与鹅膏毒素相连的连接体L:⑴鹅膏毒素氨基酸I的YC原子，特别是经由酰胺键；(ii)与鹅膏毒素氨基酸3的SC原子结合的氧原子，特别是经由酯键、醚键或氨基甲酸酯键；(iii)鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子，特别是经由与鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子结合的氧原子；在每种情况下，所述连接体L包含氨基甲酸衍生的-NH-C (O) -X，其中X是可以被靶结合部分的伯胺替代的离去基团。在再一个方面，本发明涉及合成本发明的轭合物的方法，其包括将本发明的鹅膏毒素轭合分子与包含伯氨基基团的靶结合部分反应的步骤。


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图1显示不同鹅膏毒素的结构式。黑体数字(I至8)标明形成鹅膏毒素的八个氨基酸的标准编号。还显示了氨基酸1、3和4中的原子的标准标号(分别为希腊字母α至Y、希腊字母α至δ和从I’至7’的数字。)图2显示BrdU分析中使用不同连接体部分的不同鹅膏毒环肽赫赛汀轭合物对SK0V-3细胞在孵育72小时后的细胞毒性。图3显示BrdU分析中使用不同连接体部分的不同鹅膏毒环肽赫赛汀轭合物对SK-BR-3细胞在孵育72小时后的细胞毒性。图4显示BrdU分析中使用不同连接体部分的不同鹅膏毒环肽赫赛汀轭合物对NC1-N87细胞在孵育72小时后的细胞毒性。图5显示BrdU分析中使用不同连接体部分的不同鹅膏毒环肽赫赛汀轭合物对MDA-MB231细胞在孵育72小时后的细胞毒性。图6和图7显示在血浆中孵育长达14天之后从使用不同连接体部分的不同鹅膏毒环肽赫赛汀轭合物释放的鹅膏毒环肽的量。图8显示在BrdU分析中使用不同连接体部分的不同鹅膏毒环肽赫赛汀轭合物对SK0V-3细胞在血浆孵育之前和之后的细胞毒性的比较。图9显示使用不同连接体部分的两种不同鹅膏毒环肽赫赛汀轭合物在SK0V-3异种移植模型中的体内活性的比较。
具体实施例方式在下文详细描述本发明之前，应当理解的是本发明并不限于被本文描述的特定的方法、程序和试剂，因为它们可以发生变化。还应当理解的是本文所用的术语仅是为了描述特定的实施方案而并不是意欲限制本发明的范围，其仅由所附的权利要求限定。除非另外说明，本文所用的所有技术和科学术语具有与本领域中普通技术人员通常理解的相同的含义。优选地，本文所用的术语被定义为如“A multilingual glossary ofbiotechnological terms: (IUPAC Recommendations)) ,y, Leuenberger, H.G.W, Nagel, B.和Kolbl, H.eds.(1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland)中所描述的。除非背景中另外要求，整篇说明书以及其后的权利要求书中，词语“包含(comprise、comprises、comp·rising) ”将被理解为意指包含所陈述的整体或步骤或者整体或步骤的组但不包括任何其他的整体或步骤或者整体或步骤的组。本说明书文本中引用了若干文献。本文所引用的文献中的每一个(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商说明书、技术说明书、GenBank登陆号序列提交等)，无论上文或下文中，以各专利法允许的程度通过引用将全文并入本文。本文中没有内容可被解释为承认本发明无权依据发明在先而将本公开提前。现在将进一步描述本发明。在下文段落中更加详细的定义了本发明的不同方面。除非有清楚的相反说明，所定义的每个方面可与任何其他一个或多个方面组合。特别是，标示为优选或有利的任何特征可与标示为优选或有利的任何其他一个或多个特征组合。在第一个方面，本发明涉及一种轭合物，其包含经由连接体L与鹅膏毒素相连的靶结合部分，其中，所述连接体L经由下列(iv)、(V)或(vi)与鹅膏毒素连接:(iv)鹅膏毒素氨基酸I的Y C原子，特别是经由酰胺键；(V)与鹅膏毒素氨基酸3的δ C原子结合的氧原子，特别是经由酯键、醚键或氨基甲酸酯键；(vi)鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子，特别是经由与鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子结合的氧原子；在每种情况下，所述连接体L经由脲部分与靶结合部分连接。在本发明的背景下，术语“轭合物”是指包含通过共价键连接的至少两个不同分子的分子。如本文所用的，术语“靶结合部分”是指能够与靶分子或靶表位特异性结合的任何分子或分子的一部分，在本申请的背景下优选的靶结合部分是(i)抗体或其抗原结合片段；(ii)抗体样蛋白；和(iii)核酸适体。适于在本发明中使用的“靶结合部分”典型地具有40 OOODa(40kDa)或更高的分子量。如本文所用的，如果第一化合物(例如抗体)与第二化合物(例如抗原，诸如靶蛋白)具有100 μ M或更少，优选地50 μ M或更少，优选地30 μ M或更少，优选地20 μ M或更少，优选地10 μ M或更少，优选地5 μ M或更少，更优选地I μ M或更少，更优选地900ηΜ或更少，更优选地800ηΜ或更少，更优选地700ηΜ或更少，更优选地600ηΜ或更少，更优选地500ηΜ或更少，更优选地400ηΜ或更少,更优选地300ηΜ或更少,更优选地200ηΜ或更少,甚至更优选地IOOnM或更少，甚至更优选地90ηΜ或更少，甚至更优选地80ηΜ或更少，甚至更优选地70ηΜ或更少,甚至更优选地60ηΜ或更少,甚至更优选地50ηΜ或更少,甚至更优选地40ηΜ或更少，甚至更优选地30nM或更少，甚至更优选地20nM或更少以及甚至更优选地IOnM或更少的解离常数，则其被认为与所述第二化合物“特异性结合”。在本申请的背景下，术语“靶分子”和“靶表位”分别是指分别与靶结合部分特异性结合的抗原和抗原的表位。优选地，靶分子是肿瘤相关抗原，尤其是一种或多种肿瘤细胞类型的表面上以与非肿瘤细胞的表面相比增加的浓度和/或不同的空间构型存在的抗原或表位。优选地，所述抗原或表位存在于一种或多种肿瘤细胞类型的表面，但是不存在于非肿瘤细胞的表面。在特定的实施方案中，靶结合部分与HER-2/neu或上皮细胞粘附分子(EpCAM)的表位特异性结合。在其他的实施方案中，所述抗原或表位优先在参与自身免疫性疾病的细胞上表达。在特定的这些实施方案中，靶结合部分与IL-6受体(IL-6R)特异性结合。
如本文所用的，术语“抗体或其抗原结合片段”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即包含免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。还包括的是通过包括例如噬菌体展示的技术选择以与靶分子例如与靶蛋白Her-2/neu或EpCAM特异性结合的免疫球蛋白样蛋白。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)、任何类(例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或亚类的。适于在本发明中使用的“抗体和其抗体结合片段”包括但不限于多克隆的、单克隆的、单价的、双特异性的、杂合的(heteroconjugate)、多特异性的、人的,人源的(特别是CDR移植的)、去免疫的或嵌合的抗体，单链抗体(例如scFv) ,Fab片段,F(ab' ) 2片段，由Fab表达文库产生的片段，双体或四体(Holliger P.et al., 1993),纳米抗体,抗个体基因型(抗-1d)抗体(包括例如抗-1d抗体或本发明的抗体)以及上文中任一种的表位结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段是本发明的人抗原结合抗体片段并且包括但不限于Fab、Fab'和F(ab' ) 2、Fd、单链Fvs (scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fvs (dsFv)以及包含VL或VH结构域的片段。包括单链抗体的抗原结合抗体片段可以包括单独的一个或多个可变结构域或与下列中的全部或部分的组合:铰链区、CL、CH1、CH2和CH3结构域。本发明还包括的是还包含一个或多个可变结构域与铰链区、CL、CH1、CH2和CH3结构域的任何组合的抗原结合片段。可用于本发明的抗体可以来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物。优选地，抗原来自于人、啮齿类动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠或兔)肩，猪，绵羊，山羊，骆骑，牛，马，驴，猫或犬来源。特别优选的是抗原是人或小鼠来源。如本文所用，“人抗体”包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，及包括从人免疫球蛋白文库或从转基因为一种或多种人免疫球蛋白且不表达内源免疫球蛋白的动物分离的抗体，例如如Kucherlapati & Jakobovits的美国专利第5，939，598号所描述的。术语“抗体样蛋白”是指已经工程化(例如通过环的诱变)以与靶分子特异性结合的蛋白。通常，这样的抗体样蛋白包含在两端与蛋白骨架连接的至少一个可变的肽环。这一双重结构限制将抗体样蛋白的结合亲和性大大增加至与抗体相当的水平。可变肽环的长度通常由10至20个氨基酸组成。骨架蛋白可以是具有良好溶解度特性的任何蛋白。优选地，骨架蛋白是小的球状蛋白。抗体样蛋白包括但不限于亲合体(affibody)、anticalin和设计的锚蛋白重复序列(综述参见Binz et al.,2005) 抗体样蛋白可来源于大的突变文库，例如从大的噬菌体表达文库淘选并且可按照类似规则的抗体的方式分离。同样，抗体样结合蛋白可以通过球状蛋白中表面暴露残基的组合诱变获得。术语“核酸适体”是指通过多轮重复的体外选择或SELEX (指数级富集的配体系统进化)而工程化以与靶分子结合的核酸分子(综述参见Brody和Gold，2000)。核酸适体可以是DNA或RNA分子。适体可含有修饰例如修饰的核苷酸诸如2’ -氟-取代的嘧啶。如本文所用的，化合物的“化学衍生物”(或简短表述为:“衍生物”)是指具有与化合物相似的化学结构但还含有至少一个化合物中不存在的化学基团和/或缺少至少一个化合物中存在的化学基团的物质。衍生物所比较的化合物被称为“母体”化合物。通常，“衍生物”可在一个或多个化学反应步骤中由母体化合物生产。如本文所用的，化合物的“类似物”与化合物结构上相关但是不相同并且表现出化合物的至少一种活性。类似物所比较的化合物被称为“母体”化合物，前文提及的活性包括但不限于:与另一种化合物的结合活性；抑制活性例如酶抑制活性；毒性作用；活化活性例如酶活化活性。不需要类似物表现出与母体化合物相同程度的这些活性。如果化合物表现出母体化合物的活性的至少1% (更优选地至少5%、更优选地至少10%、更优选地至少20%、更优选地至少30%、更优选地至少40%和更优选地至少50% )的程度的相关活性，那么化合物被认为是本申请背景下的类似物。因此，如其在本文所用的，“鹅膏毒素的类似物”是指结构上与如图1所示的α-鹅膏毒环肽(α-amanitin)、β -鹅膏毒环肽(β-amanitin)、Y -鹅膏毒环肽(Y-amanitin)、ε -鹅膏毒环肽(ε-amanitin)、鹅膏素(amanin)、三轻毒伞肽酹胺(amaninamide)、鹅膏无毒环肽(amanullin)和一轻鹅膏毒肽羧酸(amanullinic acid)结构上相关并且表现出与α -鹅膏毒环肽、β -鹅膏毒环肽、Y-鹅膏毒环肽、ε -鹅膏毒环肽、鹅膏素、三羟毒伞肽酚胺、鹅膏无毒环肽和一羟鹅膏毒肽羧酸中的至少一种相比至少1% (更优选地至 少5%、更优选地至少10%、更优选地至少20%、更优选地至少30%、更优选地至少40%以及更优选地至少50% )的抗哺乳动物RNA聚合酶II的抑制性活性。适于在本发明中使用的“鹅膏毒素的类似物”甚至可表现出比α-鹅膏毒环肽、鹅膏毒环肽、Y-鹅膏毒环肽、ε-鹅膏毒环肽、鹅膏素、三羟毒伞肽酚胺、鹅膏无毒环肽和一羟鹅膏毒肽羧酸中的任何一种更高的抗哺乳动物RNA聚合酶II的抑制性活性。抑制活性可通过测定发生50%抑制时的浓度(IC5tl值)来测量。抗哺乳动物RNA聚合酶II的抑制性活性可通过测量对细胞增殖的抑制活性来间接测量。适于测量细胞增殖的抑制的分析描述于实施例中。“半合成的类似物”是指通过使用来自天然来源的化合物(例如植物材料、细菌培养物或细胞培养物)作为起始原料的化学合成获得的类似物。通常，本发明的“半合成类似物”从自鹅膏属家族的蕈类分离的化合物起始来合成。相反，“合成类似物”是指通过从小的(通常石油化学的)结构单元的所谓全合成来合成的类似物。通常，在没有生物学过程辅助的情况下实行这一全合成。如本文所用的，“适体轭合物”是指靶结合部分毒素轭合物，其中靶结合部分是根据上文可选择的(iii)的核酸适体。在本发明的背景下“连接体”是指连接两个组成部分的分子，该组成部分的每一个与连接体的一个末端连接，所述连接体增加两个组成部分之间的距离并缓解这些组成部分之间的空间干扰，例如在本实例中靶结合部分与鹅膏毒素之间的空间干扰。在连接体不存在的情况下，鹅膏毒素与靶结合部分的直接键合减小了鹅膏毒素与RNA聚合酶II反应的能力。在特定的实施方案中，连接体具有主链上I 30个原子(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个原子)的连续
的链，即连接体的长度被定义为由鹅膏毒素部分和靶结合部分之间的原子或键测量的最短的连接，其中连接体主链的一侧已经与鹅膏毒素反应而另一侧与靶结合部分反应。在本发明的背景下，连接体优选地是Cu-亚烷基、CV2tl-杂亚烷基、C2_20-亚烯基、C2_2(l-杂亚烯基、c2_20-亚炔基、c2_2(l-杂亚炔基、环亚烷基、杂环亚烷基、亚芳基、杂亚芳基、亚芳烷基或杂亚芳烷基基团，任选地被取代。连接体可含有一个或多个结构单元例如甲酰胺、酯、醚、硫醚、二硫化物、脲、硫脲、烃部分以及类似部分。连接体还可含有这些结构单元中的两个或多个的组合。这些结构单元 中的每一个可在连接体中存在不止一次例如两次、三次、四次、五次或六次。在某些实施方案中，连接体可包含二硫键。应当理解的是连接体必须在单个步骤或两个或更多个后续步骤中与鹅膏毒素和靶结合部分连接。为了这一目的，连接体将带有两个基团，优选地在近端和远端，其可(i)与有待连接的组成部分中的一个中存在的基团优选地鹅膏毒素或靶结合肽上的活化基团形成共价键或(ii)其被活化或可以被活化以与鹅膏毒素上的基团形成共价键。相应地，优选的是化学基团位于连接体的远端和近端，其可以是该偶联反应的结果，例如酯、醚、氨基甲酸酯、肽键等。在本发明的背景下，术语“鹅膏毒素”包括如从鹅膏属分离的并且在Wieland，T.和 Faulstich H.(Wieland T, Faulstich H., CRC Crit Rev Biochem.1978 Dec ；5 (3):185-260)中描述的由8个氨基酸组成的所有环肽，并且还包括其所有化学衍生物；另外其所有的半合成类似物；另外其根据天然化合物(环形，8个氨基酸)的基本结构从结构单元建造的所有的合成类似物；另外的含有代替羟基化氨基酸的非羟基化氨基酸的所有合成或半合成的类似物，另外的所有合成和半合成的类似物(其中硫醚硫氧化物部分被硫化物、砜或者被不同于硫的原子例如在鹅膏毒环肽的卡巴类似物(carba-analogue)中的碳原子代替，在每个实例中任何这样的衍生物或类似物通过抑制哺乳动物RNA聚合酶II而在功能上起作用。功能上，鹅膏毒素被定义为抑制哺乳动物RNA聚合酶II的肽或缩肽。优选的鹅膏毒素是具有能够与上文所定义的连接体分子或靶结合部分发生反应的官能团(例如羧基、氨基、羟基、硫醇或巯基捕获基团)的那些。特别适于本发明的轭合物的鹅膏毒素是如图1所示的α -鹅膏毒环肽、β -鹅膏毒环肽、Y -鹅膏毒环肽、ε -鹅膏毒环肽、鹅膏素、三羟毒伞肽酚胺、鹅膏无毒环肽和一羟鹅膏毒肽羧酸以及其盐、化学衍生物、半合成类似物和合成类似物。在本发明中使用的特别优选的鹅膏毒素是α-鹅膏毒环肽、鹅膏毒环肽和三羟毒伞肽酚胺。在本发明的背景下，术语“经由脲部分与靶结合部分连接”是指连接体与靶结合部分之间的连接，其中靶结合部分经由NH-C(O)-NH-基团直接与连接体连接。在本发明的特定的实施方案中，轭合物具有选自下列结构中的一种结构:鹅膏毒素-YC (O) -NH-L-NH-C (O) -NH-靶结合部分；鹅膏毒素-δC-O-C (O) -L-NH-C (O) -NH-靶结合部分；鹅膏毒素-δ C-O-L-NH-C (O) -NH-靶结合部分；鹅膏毒素-δC-O-C (O) -NH-L-NH-C (O) -NH-靶结合部分；和鹅膏毒素-6! C-O-L-NH-C (O) -NH-靶结合部分。
在本发明的特定的实施方案中，所述靶结合部分经由所述靶结合部分上存在的氨基基团与连接体L连接，其中所述氨基基团形成所述脲部分的一部分。在本发明的特定的实施方案中，鹅膏毒素选自α-鹅膏毒环肽、鹅膏毒环肽、Y -鹅膏毒环肽、ε -鹅膏毒环肽、鹅膏素、三羟毒伞肽酚胺、鹅膏无毒环肽或一羟鹅膏毒肽羧酸或选自其盐或类似物。在本发明的特定的实施方案中，连接体L包含一个或多个基团，具体地一个、两个或三个基团，其选自下列:亚烷基、亚烯基、亚炔基、环亚烷基、杂亚烷基、杂亚烯基、杂亚炔基、杂环亚烷基、亚芳基、杂亚芳基、亚芳烷基和杂亚芳烷基基团，其中每种基团任选地被独立地取代。术语“亚烷基”是指具有I至20个碳原子的二价直链饱和烃基团，包括具有从I至10个碳原子的基团。在某些实施方案中，亚烷基基团可以是低级亚烷基基团。术语“低级亚烷基”是指具有I至6个碳原子、在某些实施方案中I至5或I至4个碳原子的亚烷基基团。亚烷基基团的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2-CH2-)、亚正丙基、亚正丁基、亚正戊基和亚正己基。术语“亚烯基”是指具有2至20个碳原子的二价直链基团，其中碳碳键中的至少一个是双键而其他的键可以是单键或另外的双键。本文中，术语“亚炔基”是指具有2至20个碳原子的基团，其中碳碳键中的至少一个是三键，而其他的键可以是单键、双键或另外的三键。亚烯基基团的实例包括亚乙烯基(-CH = CH-)、1-亚丙烯基、2-亚丙烯基、1-亚丁烯基、2-亚丁烯基、3-亚丁烯基以及类似物。亚炔基的实例包括亚乙炔基、1-亚丙炔基、2-亚丙块基等等。如本文所用的，“环亚烷基”意指作为任何稳定的单环或多环系统的一部分的二价环，其中该环具有3 12碳原子但是没有杂原子，并且其中该环是充分饱和的，而术语“环亚烯基”意指作为任何稳定的单环或多环系统的一部分的二价环，其中该环具有3 13碳原子但是没有杂原子，并且其中该环是至少部分不饱和的(但是不包括任何亚芳基环)。环亚烷基的实例包括但不限于环亚丙基、环亚丁基、环亚戊基、环亚己基和环亚庚基。环亚烯基的实例包括但不限于环亚戊烯基和环亚己烯基。如本文所用的，术语“杂环亚烷基”和“杂环亚烯基”意指作为任何稳定的单环或多环系统的一部分的二价环，其中该环具有3 12碳原子，并且其中该环由碳原子和至少一个杂原子、具体地独立地选自由N、O和S组成的组的至少一个杂原子组成，其中，杂环亚烷基是指充分饱和的环，杂环亚烯基是指至少部分不饱和的环(但是不包括任何亚芳基或杂亚芳基环)。术语“亚芳基”意指作为任何稳定的单环或多环系统的一部分的二价环，其中该环或环系统具有3 12碳原子但是没有杂原子，该环或环系统由如“4η+2” π电子规则定义的芳香族部分组成，包括亚戍烯基。如本文所用的，术语“杂亚芳基”是指作为任何稳定的单环或多环系统的一部分的二价环，其中该环或环系统具有3 12碳原子，该环或环系统由如“4η+2”π电子规则定义的芳香族部分组成并且含有碳原子和一个或多个氮、硫和/或氧杂原子。在本发明的背景下 ，术语“取代的”意指连接体的主链中存在的一个或多个氢被来自所标示的一个或多个基团的选择取代，只要不超过所标示的原子的正常效价或被取代的基团的合适的原子的效价并且取代产生稳定的化合物。如本文所定义的，术语“任选地取代”意指连接体是未取代的或被如本文所定义的一个或多个取代基取代的。当取代基是酮类(或氧杂即=O)基团、硫代或亚氨基基团或类似基团时，连接体主链原子上的两个氢被代替。示例性的取代基包括例如烷基、链烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、芳酰基、杂芳酰基、羧基、烷氧基、芳氧基、酰氧基、芳酰氧基、杂芳酰氧基、烧氧基擬基、齒素、(硫代)酷、氛基、憐酸基、氣基、亚氣基、(硫代)酸氣基、疏基、烷基巯基、酰基巯基、磺酰基、硫酸盐、磺酸盐、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、叠氮基、齒代烷基(包括全氣烧基(例如二氣甲基))、齒代烧氧基、烧基硫烧基(alkylsulfanyl)、烧基亚磺酰基、烧基磺酰基、烧基磺酰基氨基、芳基砜氨基(arylsulfonoamino)、磷酰基、磷酸盐、碳憐酸盐、勝、烧基竣基、烧基竣基酸胺、氧杂、轻基、疏基、氣基(任选被例如烧基、芳基、或杂芳基单-或二取代)、亚氨基、甲酰胺、甲氨酰(任选由烷基、芳基、或杂芳基单-或二取代)、脉基、氣基横酸基、酸基氣基、芳酸基氣基、(硫代)服基、(芳基硫代)服基、烧基(硫代)脲基、环烷基(硫代)脲基、芳氧基、芳烷氧基、或-O(CH2)n-0H、-0(CH2)n-NH2、-O(CH2)nC00H、- (CH2) nC00H、-C (0) 0 (CH2) nR、- (CH2) nN ⑶ C (0) OR 或 N (R) S (0) 2R，其中 n 是 1-4 而 R 独立地选自氧、_烧基、_稀基、_块基、_环烧基、-环稀基、_(c_连接的杂环烧基)、-(c-连接的杂环烯基)、_芳基和-杂芳基，允许具有多种程度的取代。本领域技术人员应当理解的是如果适合那么取代基例如杂环烷基、芳基、杂芳基、烷基等或功能基团例如-OH、-NHR等自身可被取代。本领域技术人员还应当理解的是，适合时取代的部分本身可被取代。 在本发明的特 定的实施方案中，连接体L，特别是第9页第3段或第16页第3段中所不的连接体L,包含选自下列的m基团:亚烧基、亚稀基、亚块基、环亚烧基、杂亚烧基、杂亚烯基、杂亚炔基、杂环亚烷基、亚芳基、杂亚芳基、亚芳烷基以及杂亚芳烷基基团，其中，每个基团可任选地被独立地取代，连接体还包含独立选自下列部分中的一种的η部分:二硫化物(-S-S-)、醚(-0-)、硫醚(-S-)、胺(-ΝΗ-)、酯(_0_C( = O) -或-C( = O) -O-)、甲酰胺(-NH-C ( = O)-或-C ( = O) -NH-)、氨基甲酸酯(-NH-C ( = O) -O-或-0-C ( = O) -NH-)和脲部分(_NH_C( = 0)-ΝΗ-)，其中m = n+1。在特定的实施方案中，m是2且η是I或者m是3且η是2。在特定的实施方案中，连接体包含2或3个未取代的亚烷基基团以及I或2个分别连接未取代的亚烷基基团的二硫化物、醚、硫醚、胺、酯、甲酰胺、氨基甲酸酯或脲部分。在特定的实施方案中，连接体L，特别是如第9页第3段中所示的连接体L是独立地选自C、O、N和S的2 20个原子的直链，特别是2 16个原子、更特别是5 14个原子以及甚至更特别是6 12个原子。在特定的实施方案中，直链中至少60%的原子是C原子。在特定的实施方案中，直链中的原子通过单键连接。在特定的实施方案中，直链中的C原子独立地是任选取代的亚甲基基团(-CH2-)的一部分。在这样特定的实施方案中，任选的取代基独立地选自卤素和CV6-烷基，特别是甲基。在特定的实施方案中，连接体L，特别是如第9页第3段或第16页第3段中所示的连接体L选自下列连接体的组:鹅膏毒素侧:_ (CH2) 2-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 3-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 4-靶结合部分侧
鹅膏毒素侧:-(CH2) 5-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 6_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 7_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2)8-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 9-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 10-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) n-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 12-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 16-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 2-S-S- (CH2) 2_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 3-S-S- (CH2) 2_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 2-S-S- (CH2) 3_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 3-S-S- (CH2) 3-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2)4-S-S-(CH2) 4_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 2-CMe2-S-S- (CH2) 2_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 2-S-S-CMe2- (CH2) 2_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 2-0- (CH2) 2-靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_ (CH2) 2-0- (CH2) 2-0- (CH2) 2_靶结合部分侧鹅膏毒素侧:_(CH2) 2-0- (CH2) 2-0- (CH2) 2_0_ (CH2) 2_ 靶结合部分侧鹅骨毒素侧:-(CH2)2_0_ (CH2) 2_0_ (CH2) 2_0_ (CH2) 2_0_ (CH2) 2_ 祀结合部分侧在本发明的特定的实施方案中，所述靶结合部分与肿瘤细胞上存在的表位特异性
彡口口 在本发明的特定的实施方案中，所述靶结合部分与Her-2/neu的表位或上皮细胞粘附分子(EpCAM)特异性结合。在本发明的特定的实施方案中，所述靶结合部分选自由下列组成的组:抗体或其抗原结合片段、抗体样蛋白和核酸适体。在本发明的特定的实施方案中，抗体或其抗原结合片段选自双体、四体、纳米抗体、嵌合抗体、去免疫抗体、人源化抗体或人抗体。在本发明的特定的实施方案中，所述抗原结合片段选自由Fab、F(ab' )2、Fd、Fv、单链Fv和二硫键连接的Fvs (dsFv)组成的组。在本发明的特定的实施方案中，抗体是赫赛汀或HEA125或者包含赫赛汀或HEA125的抗原结合片段的抗体片段。在本发明的特定的实施方案中，不止一个鹅膏毒素分子与一个靶结合部分偶联。每个轭合物中鹅膏毒素数目的增加也会增加毒性。因此，在特定的实施方案中，靶结合部分与鹅膏毒素的比例为I个靶结合部分比2 15个鹅膏毒素分子，具体地为2、3、4、5、6、7、8、
9、10、11、12、13、14或15个。为了计算抗体二聚体例如IgG时中的比例，二聚体被认为是一个革El结合部分。在本发明的特定的实施方案中，轭合物被用作药物。
在本发明的特定的实施方案中，轭合物被用于在患者中治疗癌症，其中癌症选自由胰腺癌、胆管癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、胃癌、肾癌、恶性黑色素瘤、白血病和恶性淋巴瘤组成的组。如本文所用的，“患者”意指可从使用本文描述的靶结合部分毒素轭合物的治疗中受益的任何哺乳动物或鸟类。优选地，“患者”选自由实验动物(例如小鼠或大鼠)、家畜动物(包括如豚鼠、兔、鸡、猪、绵羊、山羊、骆驼、牛、马、驴、猫或犬)或灵长类包括人组成的组。特别优选的是“患者”是人。如本文所用的,疾病或病症的“治疗(treat、treatingtreatment) ”意指完成下列中的一项或多项:(a)降低病症的严重度；(b)限制或预防所治疗的一种或多种病症的特征症状的发展；(C)阻止所治疗的一种或多种病症的特征症状的恶化；(d)限制或预防之前曾患有一种或多种病症的患者的一种或多种病症的复发；和(e)限制或预防之前曾具有一种或多种病症症状的患者中症状的复发。如本文所用的，治疗可包括向患者施用根据本发明的轭合物或药物组合物，其中“施用”包括体内施用以及直接离体施用于组织例如静脉移植。在特定的实施方案中，使用治疗有效量的本发明的轭合物。“治疗有效量”是足以达到预期目的的治疗剂的量。给定的治疗剂的有效量会随着不同因素例如所述剂的性质、施用途径、接受所述治疗剂的动物的大小和物种以及施用目的而发生变化。每个个体病例的有效量可由本领域技术人员根据本领域中已经确立的方法和经验来确定。在第 二方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含根据本发明的轭合物，其还包含一种或多种药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、崩解齐U、吸附剂和/或防腐剂。“药学上可接受的”意指由联邦或州政府的管理结构批准或列在美国药典或其他公认的药典中用于动物并且更具体地在人中使用的。在特定的实施方案中，药物组合物以系统施用的药物的形式使用。这包括胃肠外的，其除了其他之外还包括注射剂和输注剂。注射剂可配制为一次用量针剂的形式或所谓的随时可用的注射剂(例如随时可用的注射器或一次用注射器)并且以及除此之外用于多次回收的穿刺瓶中。注射剂的施用可以是皮下注射(s.C.)、肌注(1.m.)、静注(1.v.)或皮内注射(1.e.)的形式。特别是，生产分别适合晶体悬浮液、溶液、纳米颗粒或胶体分散系统例如水溶胶的注射制剂是可能的。注射制剂还可被生产为浓缩物，其可用含水等张稀释剂溶解或分散。也可以等张溶液、脂肪乳液、脂质体制剂和微乳液的形式制备输注剂。与注射剂相似，输注制剂也可以用于稀释的浓缩物的形式制备。注射制剂在住院病人和流动病人治疗中都还可以恒定输注的形式使用，例如通过微型泵。可以向胃肠外药物制剂中加入例如白蛋白、血浆、膨胀剂、表面活性物质、有机稀释剂、影响PH值的物质、络合物质或聚合物质尤其是影响本发明的靶结合部分毒素轭合物对蛋白或聚合物的吸附的物质，或者它们也可以为了减少本发明的靶结合部分毒素轭合物对材料像注射工具或封装材料(例如塑料或者玻璃的)的吸附而加入。本发明的靶结合部分毒素轭合物可在胃肠外制剂中与微载体或纳米颗粒结合像例如与基于聚(甲基)丙烯酸酯、聚乳酸酯、聚乙醇酸酯、聚氨基酸或聚醚氨酯的精细分散的颗粒结合。胃肠外制剂可以被修饰为贮藏制剂，例如基于“多个单元原则”(如果本发明的靶结合部分毒素轭合物在药物中被分别精细分散、分散或悬浮的形式或作为晶体的悬浮液引入)或者基于“单个单位原则”(如果本发明的靶结合部分毒素轭合物被包封在制剂例如随后被植入的片剂或棒中)。这些单个单位和多个单位制剂形式的植入体或贮藏药物经常由所谓的生物可降解的聚合物像例如乳酸和乙醇酸的聚酯、聚醚聚氨酯、聚氨基酸、聚(甲基)丙烯酸酯或多糖组成。在配制胃肠外制剂的本发明的药物组合物期间加入的佐剂和载体优选无菌水(经灭菌的水)，影响PH值的物质像例如有机或无机酸或碱以及其盐，调节pH值的缓冲物质，用于等张化的物质像例如氯化钠、碳酸氢钠、葡萄糖和果糖，英文分别为tensid和surfactant的表面活性剂以及乳化剂像例如聚氧乙烯山梨糖醇的脂肪酸偏酯(例如Tween )或者例如聚氧乙烯的脂肪酸酯(例如Cremophor _ ),脂肪油像例如花生油、豆油或蓖麻油，脂肪酸的合成酯像例如油酸乙酯、豆蘧酸异丙酯和中性油(例如Miglyol )以及聚合性佐剂像例如明胶、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮，增加有机溶剂溶解度的添加剂像例如丙二醇、乙醇、N, N-二甲基乙酰胺、丙二醇或络合物形成物质像例如柠檬酸酯和脲，防腐剂像例如苯甲酸羟丙基酯和甲酯，苯甲醇，抗氧化剂像例如亚硫酸钠和稳定剂像例如EDTA。当在优选的实施方案中将本发明的药物组合物配制为悬浮液时，加入防止本发明的靶结合部分毒素轭合物沉淀的增稠剂或确保沉淀物重悬性的表面活性剂和聚电解质和/或络合物形成剂像例如EDTA。也可获得活性成分与多种 聚合物的络合物。这样的聚合物的实例是聚乙二醇、聚苯乙烯、羧甲基纤维素、Pluronics .或聚乙二醇山梨糖醇脂肪酸酯。本发明的靶结合部分毒素轭合物也可以包含化合物(例如使用环糊精的)的形式掺入液体制剂中。在特定的实施方案中，分散剂可作为另外的佐剂加入。为了生产冷冻干燥制剂，可使用支架剂(scaffolding agent),像甘露醇、葡聚糖、鹿糖、人血白蛋白、乳糖、PVP或明胶的变体。在另一方面中，本发明涉及在有需要的患者中治疗胰腺癌、胆管癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、胃癌、肾癌、恶性黑色素瘤、白血病或恶性淋巴瘤的方法，包括向所述患者施用有效量的本发明的轭合物或药物组合物。在另一个方面，本发明涉及作为本发明的轭合物合成的中间体的鹅膏毒素轭合分子，其中，所述鹅膏毒素轭合分子包含经由下列(i)、( )或(iii)与鹅膏毒素连接的连接体L:(i)鹅膏毒素氨基酸I的YC原子，特别是经由酰胺键；(ii)与鹅膏毒素氨基酸3的SC原子结合的氧原子，特别是经由酯键、醚键或氨基甲酸酯键；(iii)鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子，特别是经由与鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子结合的氧原子；在每种情况下，所述连接体L包含氨基甲酸衍生的-NH-C (O) -X，其中X是可以被靶结合部分的伯胺替代的离去基团。在一个实施方案中，鹅膏毒素轭合分子具有选自下列结构中的一个结构:⑴鹅膏毒素-YC (O) -NH-L-NH-C (O) -X ；(ii)鹅膏毒素-δ C-O-C(O)-L-NH-C(O)-X ；
(iii)鹅膏毒素-δ C-O-L-NH-C(O)-X ；(iv)鹅膏毒素-δ C-O-C (O) -NH-L-NH-C (O) -X ;和(V)鹅膏毒素-6' C-O-L-NH-C (O)-X。在某些实施方案中，鹅膏毒素选自α-鹅膏毒环肽、β-鹅膏毒环肽、Υ-鹅膏毒环肽、ε -鹅膏毒环肽、鹅膏素、三羟毒伞肽酚胺、鹅膏无毒环肽或一羟鹅膏毒肽羧酸或者选自其盐或类似物。在某些实施方案中，所述连接体L是亚烷基、杂亚烷基、亚烯基、杂亚烯基、亚炔基、杂亚炔基、环亚烷基、杂环亚烷基、亚芳基、杂亚芳基、亚芳烷基或杂亚芳烷基基团，其任选地被取代。在某些实施方案中，所述连接体L包含选自下列部分中的一个的部分:二硫化物、醚、胺、酯、甲酰胺、氨基甲酸酯和脲部分。在某些实施方案中，官能团X选自:-叔丁氧基、-玻拍酸氧基、_1-0_玻拍酸氧基-3-磺酸酯(磺基-NHS)、-O- (4-硝基苯氧基)、-O- (3-硝基苯氧基)、-O- (2，4- 二硝基苯氧基)、-O-(2,4-_■氣-6-硝基苯氧基)、-五氣苯氧基、-五氣苯氧基、-O-(2,4,5-二氣苯氧基)、-O-(3，4- 二氢-3-羟基-4-氧杂-1，2，3-苯并三嗪_3_基)、_0_(内-1-羟基-5-降冰片烯-2，3- 二甲酰亚胺-1-基)、-1-苯二酰亚氨氧基、-1-苯并三唑氧基、-1-(7-氮杂苯并三唑基)氧基、)和-N-咪唑基。在再一个方面，本发明涉及合成本发明的鹅膏毒素的方法，其包括将本发明的鹅膏毒素轭合分子与包含伯氨基基团的靶结合部分反应的步骤。实施例

在下文中，通过非限制性实例更加详细地解释了本发明:实施例1α -鹅膏毒环肽赫赛汀抗体轭合物Her-DSC-30.0134的合成1.16’ -NH-boc-(6-氨基己基)-α-鹅膏毒环肽HDP 30.0132的合成
HO^OH
ho^S'η §χ°γ ^^ΒΓ Ηο^γ、'、 η 9
。Y
hoο0 ho
NH2NH2
α-鹅膏毒环肽HDP 30.0132在氩气和室温下，将30.0Omg (32.6 μ mol)的真空干燥的α -鹅膏毒环肽溶解于900 μ I无水二甲基亚砜(DMSO)中。加入叔丁酸钾3.66mg(32.6 μ mol)和
73.18mg(261.2 μ mol，8当量)NH-Boc-氨基己基溴化物(Fluka 89171)。室温6小时后，用50 μ I溶于DMSO的0.33Μ乙酸溶液将反应混合物酸化至pH = 5。在真空中蒸发挥发性物质并且将剩余物溶解于1000 μ I甲醇并用20ml乙醚稀释。收集沉淀物并且溶于1000 μ I甲醇中。将溶液用1000 μ I水稀释并用LaPr印-HPLC进行纯化:(柱:Kromasil 100-C18, 250mm x 20mm，10 μ m，采用甲醇/水(0.05% TFA)，流速:26ml/min,于 λ = 295nm 检测)。溶剂A:95%水:5%甲醇:0.05%三氟乙酸溶剂B:10%水:90%甲醇:0.05%三氟乙酸梯度:0 5min 100% A ;5 20min 0% A ；20 40min 0% A收集具有19.Smin保留时间的馏分并蒸发溶剂。得到15.9mg(43%产率)的粉末。MS:1119 (M+H+) ；1141(M+Na+)1.2 6’ -(-6-氨基己基)-α-鹅膏毒环肽HDP 30.0134的合成
权利要求
1.一种轭合物，其包含经由连接体L与鹅膏毒素连接的靶结合部分，其中，所述连接体L经由下列(i)、(ii)或(iii)与所述鹅膏毒素连接: (i)鹅膏毒素氨基酸I的Y C原子，特别是经由酰胺键； ( )与鹅膏毒素氨基酸3的SC原子结合的氧原子，特别是经由酯键、醚键或氨基甲酸酯键； (iii)鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子，特别是经由与鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子结合的氧原子； 在每种情况下，所述连接体L经由脲部分与所述靶结合部分连接。
2.根据权利要求1所述的轭合物，其中，所述轭合物具有选自下列结构中的一种的结构: (i)鹅膏毒素-YC (O) -NH-L-NH-C (O) -NH-靶结合部分； (ii)鹅膏毒素-SC-O-C(O) -L-NH-C(O) -NH-靶结合部分； (iii)鹅膏毒素-SC-O-L-NH-C(O) -NH-靶结合部分； (iv)鹅膏毒素-δC-O-C (O) -NH-L-NH-C (O) -NH-靶结合部分；和 (V)鹅膏毒素_6’ C-O-L-NH-C (O)-NH-靶结合部分。
3.根据权利要求1或2所述的轭合物，其中，所述靶结合部分经由存在于所述靶结合部分上的氨基基团与所述连 接体L连接，其中所述氨基基团形成所述脲部分的一部分。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的轭合物，其中所述鹅膏毒素选自α-鹅膏毒环肽、鹅膏毒环肽、Y-鹅膏毒环肽、ε-鹅膏毒环肽、鹅膏素、三羟毒伞肽酚胺、鹅膏无毒环肽或一羟鹅膏毒肽羧酸或者其盐或类似物。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的轭合物，其中，所述连接体L是亚烷基、杂亚烷基、亚烯基、杂亚烯基、亚炔基、杂亚炔基、环亚烷基、杂环亚烷基、亚芳基、杂亚芳基、亚芳烷基或杂亚芳烷基基团，其任选地被取代。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的轭合物，其中，所述连接体L包含选自下列部分中的一个部分:二硫化物、醚、胺、酯、甲酰胺、氨基甲酸酯和脲部分。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的轭合物，其中，所述靶结合部分与存在于癌细胞上的表位特异性结合，特别是其中所述靶结合部分与上皮细胞粘附分子(EpCAM)的表位特异性结合。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的轭合物，其中，所述靶结合部分选自由下列(i)、(ii)和(iii)组成的组: (i)抗体或其抗原结合片段； ( )抗体样蛋白； (iii)核酸适体。
9.根据权利要求8所述的轭合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段选自双体、四体、纳米抗体、嵌合抗体、去免疫抗体、人源化抗体或人抗体
10.根据权利要求8或9所述的靶结合部分毒素轭合物，其中，所述抗原结合片段选自由Fab、F(ab' )2、Fd、Fv、单链Fv和二硫键连接的Fvs (dsFv)组成的组。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的轭合物，其用作药物。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的轭合物，其用于在患者中治疗癌症，其中所述癌症选自由胰腺癌、胆管癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、胃癌、肾癌、恶性黑色素瘤、白血病和恶性淋巴瘤组成的组。
13.一种药物组合物，其包含权利要求1至10中任一项所述的轭合物，并且包含一种或多种药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、崩解剂、吸附剂和/或防腐剂。
14.一种鹅膏毒素轭合分子，其包含经由下列或(iii)与鹅膏毒素连接的连接体L: (i)鹅膏毒素氨基酸I的Y C原子，特别是经由酰胺键； ( )与鹅膏毒素氨基酸3的SC原子结合的氧原子，特别是经由酯键、醚键或氨基甲酸酯键； (iii)鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子，特别是经由与鹅膏毒素氨基酸4的6' C原子结合的氧原子； 在每种情况下，所述连接体L包含氨基甲酸衍生的-NH-C(O)-X，其中，X是可以被靶结合部分的伯胺替代的离去基团。
15.根据权利要求14所述的鹅膏毒素轭合分子，其中，所述X选自:_叔丁氧基、-琥珀酰氧基、-1-0-琥珀酰氧基-3-磺酸酯(磺基-NHS)、-O- (4-硝基苯氧基)、-O- (3-硝基苯氧基)、_0- (2,4- _■硝基苯氧基)、-O- (2,4- _■氣-6-硝基苯氧基)、-五氣苯氧基、-五氣苯氧基、_0-(2,4, 5-二氣苯氧基)、-O-(3,4- _■氧-3-轻基-4-氧杂_1，2,3-苯并二嗪-3-基)、-0-(内-1-羟基-5-降冰片烯-2，3- 二甲酰亚胺-1-基)、-1-苯二酰亚氨氧基、-1-苯并三唑氧基、-1-(7-氮杂苯并三唑基)氧基、)和-N-咪唑基。
16.合成权利要求1至12中任一项所述的轭合物的方法，其包括将权利要求14或15所述的鹅膏毒素轭合分子与包含伯氨基基团的靶结合部分反应的步骤。
全文摘要
本发明涉及肿瘤治疗。在一个方面，本发明涉及鹅膏毒素与靶结合部分例如抗体的轭合物，所述鹅膏毒素与靶结合部分通过包含脲部分的连接体连接，其用于癌症的治疗中。在另一方面，本发明还涉及包含该轭合物的药物组合物。
文档编号A61K47/48GK103153345SQ201180047591
公开日2013年6月12日 申请日期2011年9月29日 优先权日2010年9月30日
发明者扬·安德尔, 维尔纳·西蒙, 克里斯托夫·米勒 申请人:海德堡医药有限责任公司