专利名称：一种复方红景天制剂的制备方法及其抗氧化活性的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种复方红景天制剂的制备方法及其抗氧化活性。
背景技术：
红景天Iihodiola rosea是景天科多年生草木或灌木植物，生长在海拔800—— 2500米高寒无污染地带的珍稀野生植物。由于其生长环境恶劣，如缺氧、低温干燥、狂风、 受紫外线照射、昼夜温差大，因而具有很强的生命力和特殊的适应性。为亚洲地区常用传统药材，红景天主要以根和根茎入药，全株也可入药。[红景天水煎剂、红景天提取物和红景天苷有抗疲劳作用。红景天能降低心脏的负荷，改善心脏功能，可增强缺血心脏的泵血功能，加快血流，在一定程度上纠正因缺血引起的心脏血流动力学的紊乱。红景天有抗缺氧作用、降血糖作用、降血脂作用、抗衰老作用、提高免疫功能、抗肿瘤作用；红景天有抗贫血和促白细胞增生的作用，红景天有适应原样作用，能恢复运动疲劳，提高运动成绩；能改善运动员的心肺机能，显著提高运动时的最大耗氧量和分钟通气量，增加血红蛋白含量，提高比赛成绩；对肝损伤的保护作用；抗放射作用，红景天对高红症与急性高山反应具有防治功效；抗病毒作用，红景天能显著增加冷适应过程中红细胞膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性， 抗氧化作用增强；红景天能显著提高血氧水平，增强脑干网状系统的兴奋性，可以增强大脑机能，并可使其向年轻化的方向转化；红景天能健脑益智，对长期记忆力有明显提高，在疲劳情况下能减少工作差错，提高工作量，提高效率及持久力；预防高原反应，抗不良刺激。可调节中枢神经系统功能增强机体对外界刺激的抵抗力。柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzoner-ifolium ffilld.的干燥根。苦，微寒。归肝、胆经。疏散退热，舒肝，升阳。用于感冒发热，寒热往来，疟疾，胸胁胀痛，月经不调，子官脱垂，脱肛。柴胡其成分主要含柴胡皂苷，甾醇，挥发油，黄酮、多元醇、植物留醇、香豆素、脂肪油和多糖等。现代药理研究表明，柴胡具有解热、抗炎抗肝损伤、抗辐射损伤，促进免疫功能，体外有抗结核菌作用。紫球藻(Porphyridium cruentum)是属于红藻门的一种单细胞红藻，在生长过程中能大量合成胞外硫酸酯多糖、藻胆蛋白和多不饱和脂肪酸等生物活性物质。紫球藻藻红蛋白占藻胆蛋白84%，其中以B-藻红蛋白含量最多。藻红蛋白用途广泛，它既可作为天然色素应用于食品、化妆品、染料等工业，又可制成荧光试剂用于临床医学诊断和免疫化学及生物工程等领域，藻红蛋白还是一种具有开发潜力的光敏剂，用于肿瘤的光动力治疗。紫球藻的胞外硫酸化多糖抗病毒特性突出，具有抗肿瘤、抗过敏、抗氧化、降血脂、调血脂等功能。因此，综合开发紫球藻藻红蛋白、多糖和藻粉系列产品，社会经济效益明显。人体在生命活动的氧化代谢过程中会不断产生各种自由基，体内过多自由基对生物大分子造成损伤，导致细胞和组织的结构和功能减退，并对机体的衰老过程产生影响，最终导致疾病的发生。而人工合成的抗氧化剂具有一定的毒性和致癌作用。所以评价和筛选具有强抗氧化活性的天然植物已成为医学、生物学和食品科学研究的新趋势。采用典型的体外抗氧化体系，以抗坏血酸为对照，评价复方红景天制剂的抗氧化活性，为更好的开发利用复方红景天资源为抗氧化活性产品，提供理论依据。DPPH 法DPPH 为 1，1_ 二苯基 _2_ 三硝基苯胼(1，l-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2, 2-Diphenyl-l-(2,4,6-trinitrophenyl) hydrazyl) DPPH 法于 1958 年被提出，广泛用于测定食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收， 其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速定量分析。
发明内容
1. 一种具有抗氧化作用的复方红景天制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程(1)原料药的重量配比为红景天9g_12g、柴胡6g_9g、紫球藻10g_20g ；(2)将红景天和柴胡加入8-10倍量70%乙醇室温下浸提8-10h，再密封超声 30min，温度为30°C，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70%的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；(3)将⑵中的滤液合并，回收乙醇，得到红景天、柴胡提取物；(4)将紫球藻用5000r/min离心机离心lOmin，然后悬浮于pH7. 4,50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷冻离心机离心 15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；(5)将中的干燥物与(3)中的红景天、柴胡提取物混合均勻，得复方红景天制剂。2.将复方红景天制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用根据本发明，本发明中的“ ％，，是重量百分比。
具体实施例方式本发明所述的涉及一种复方红景天制剂的制备方法及其抗氧化活性包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1 1. 一种具有抗氧化作用的复方红景天制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程(1)原料药的重量配比为红景天9g、柴胡6g、紫球藻IOg ；(2)将红景天和柴胡加入8倍量70%乙醇室温下浸提8，再密封超声30min，温度为30°C，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70%的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；(3)将⑵中的滤液合并，回收乙醇，得到红景天、柴胡提取物；(4)将紫球藻用5000r/min离心机离心lOmin，然后悬浮于pH7. 4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷冻离心机离心 15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；
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(5)将中的干燥物与(3)中的红景天、柴胡提取物混合均勻，得复方红景天制剂。2.将复方红景天制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用实施例2 1. 一种具有抗氧化作用的复方红景天制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程(1)原料药的重量配比为红景天12g、柴胡9g、紫球藻20g ；(2)将红景天和柴胡加入10倍量70%乙醇室温下浸提10h，再密封超声30min，温度为30°C，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70%的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；(3)将⑵中的滤液合并，回收乙醇，得到红景天、柴胡提取物；(4)将紫球藻用5000r/min离心机离心lOmin，然后悬浮于ρΗ7· 4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷冻离心机离心 15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；(5)将中的干燥物与(3)中的红景天、柴胡提取物混合均勻，得复方红景天制剂。2.将复方红景天制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用一种复方红景天制剂的的抗氧化试验1复方红景天制剂对DPPH清除率的测定1.1 DPPH溶液的制备精密称定DPPH样品0. Olg,加入无水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液， 浓度为 0. (Mmg/ml。1. 2样品溶液的制备精密称取复方红景天制剂0. 4g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，再加入蒸馏水定容至50ml，得到样品母溶液，浓度为8mg/ml， 备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为0. 003125,0. 00625,0. 0125,0. 025,0. 05， 0. 1,0. 2,0. 4ml的样品母液，用蒸馏水定容于IOml容量瓶中得到浓度为0. 0025,0. 005， 0. 01，0. 02，0. 04，0. 08，0. 16，0. 32mg/ml 的样品溶液。1. 3样品对DPPH的清除作用准确移取不同浓度的样品溶液分别与DPPH溶液和无水乙醇溶液等体积混合于不同试管中，摇勻，在黑暗中放置30min，在515nm下测定其吸光度值分别为AjPAj。另取蒸馏水与DPPH溶液等体积混合于试管中，测得吸光度值为A。其中以蒸馏水和无水乙醇混合为空白对照试验。并按下面公式计算清除率。清除率=(A-Ai+AJ)/AX100%2复方红景天制剂对羟自由基清除率的测定2. 1样品溶液的制备精密称取复方红景天制剂0. 25g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到样品母溶液，备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为 5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，40 μ 1，80 μ 1，160 μ 1，320 μ 1，640 μ 1 的样品母液，用蒸馏水定容于IOml容量瓶中得到浓度为0. 0025,0. 005,0.01,0. 02,0. 04,0. 08， 0. 16，0. 32mg/ml的样品溶液。2. 2试剂的制备称取0. 2032g甲基紫用去离子水定容于IOOml容量瓶中，备用。用盐酸调Tris缓冲溶液PH为5，备用。取30%的H2A溶液1. OmL，用去离子水定容于IOOmL容量瓶中，备用。 称取0. 0695gFeS04 · 7H20用水定容于50mL容量瓶中，备用(现用现配)。2.3羟自由基· OH的产生及测定取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，按顺序放入IOmL的刻度管中。并
用去离子水定容至刻度，摇勻静置三十分钟，记为A578。取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，Fe2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按顺序放入IOmL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇勻静置三十分钟，记为A00取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，不同浓度梯度的待测液2mL，Fe2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按顺序放入IOmL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇勻静置三十分钟。平行三次，记为As。以去离子水做空白实验，用721紫外分光光度计在578的波长下测定其吸光度。2. 4羟自由基· OH清除率的计算利用公式清除率<% = (As-A0)/(A578-A0) X100%,得出样品提取液对羟自由基的清除率。
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3复方红景天制剂的抗氧化结果
3. 1复方红景天制剂对DPPH和羟自由基的清除率
见表1。
表1复方红景天制剂对DPPH和羟自由基的清除率结果
权利要求
1.一种具有抗氧化作用的复方红景天制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程(1)原料药的重量配比为红景天9g-12g、柴胡6g-9g、紫球藻10g-20g；(2)将红景天和柴胡加入8-10倍量70%乙醇室温下浸提8-10h，再密封超声30min，温度为30°C，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70%的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；(3)将O)中的滤液合并，回收乙醇，得到红景天、柴胡提取物；(4)将紫球藻用5000r/min离心机离心lOmin，然后悬浮于pH7.4,50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎k，间隔k，20次，用lOOOOr/min高速冷冻离心机离心15min， 得上清液，冷冻干燥，得干燥物；(5)将中的干燥物与(3)中的红景天、柴胡提取物混合均勻，得复方红景天制剂。
2.如权利要求1中所述的一种复方红景天制剂的用途，其特征在于制备抗氧化作用药物中的应用。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种复方红景天制剂的制备方法及其抗氧化活性。将红景天、柴胡加入70％乙醇室温下浸提，再超声30min，温度为30℃，功率为80W，过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；将滤液合并，回收乙醇，得到红景天、柴胡提取物；将紫球藻用5000r/min离心机离心10min，然后悬浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，用高速冷冻离心机离心，得上清液，冷冻干燥，得干燥物，将此干燥物与红景天、柴胡提取物混合均匀，得复方红景天制剂。本发明产品具有抗氧化作用。
文档编号A61P39/06GK102512484SQ20121000995
公开日2012年6月27日 申请日期2012年1月1日 优先权日2012年1月1日
发明者侯欣池, 张崇禧, 张成城, 郑友兰 申请人:山东大学威海分校