专利名称：氯霉素在制备治疗恶性浆细胞疾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种化合物的新用途，特别涉及氯霉素在制备治疗恶性浆细胞疾病，特别是多发性骨髓瘤药物中的应用。
背景技术：
恶性浆细胞病是以多发性骨髓瘤为主的，包括多发性骨髓瘤、孤立性骨髓瘤、髓外骨髓瘤(髓外浆细胞病)、原发性巨球蛋白血症、重链病及原发性淀粉样变等不同临床分型的浆细胞病。其发病共性均为恶性浆细胞异常增殖及分泌异常免疫球蛋白或免疫球蛋白片段，导致多种多样的临床表现和临床分型。恶性浆细胞病发展和复发的最根本原因是恶性浆细胞的存在，即骨髓瘤细胞存在。多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是最常见的恶性衆细胞克隆性疾病，临床常表现为贫血、肾功能不全及骨损害。在美国，MM发病率已经超越急性白血病，在血液肿瘤中居第二位，仅次于恶性淋巴瘤。在我国，随着医务人员对该病认识及检测手段的提高，临床上已经发现越来越多的MM患者。因此，MM已经是我国最常见的恶性血液肿瘤之一。目前除了除了以长春碱、烷化剂、糖皮质激素组成为主的常规化疗方案外，可以联合新药蛋白酶体抑制剂(硼替咗米)、血管生成抑制剂(沙利度胺、雷那度胺)、免疫抑制剂(雷帕霉素(rapamycin)及其类似物)等药物，以及联合骨髓移植等治疗，取得令人鼓舞的效果，但仍然是一种不可治愈的疾病，有部分患者治疗效果不佳，绝大部分患者最终会复发。因此其是一种严重危害人民身体健康的血液恶性肿瘤。对于多发性骨髓瘤治疗，虽然目前取得了世人瞩目的效果，但仍然是一种不可治愈的疾病，需要寻找新的治疗药物，旨改善患者生存，延长生命，甚至达到疾病的治愈。另夕卜，对于目前多发性骨髓瘤患者治疗而言，除了马法兰、强的松、沙利度胺、雷那度胺、雷帕霉素等少部分药物可以口服，家庭维持治疗很不方便，并且目前治疗药物价格昂贵，给患者家庭及社会带来严重的经济负担。因此，有必要改善目前多发性骨髓瘤治疗现状。氯霉素是一种广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起作用。氯霉素在体内会引致致命的再生不良性贫血。现在，医疗上主要使用氯霉素的外用制剂，如医治细菌性结膜炎的眼药水或药膏。
发明内容
本发明的目的在于提供氯霉素在制备治疗恶性浆细胞疾病，特别是多发性骨髓瘤药物中的应用。本发明人通过实验证明，氯霉素作用于骨髓瘤细胞，其抑制肿瘤细胞增殖有剂量及时间依赖性，即随着药物剂量增加或者药物作用时间延长，抑制肿瘤细胞增殖的作用越明显，其48小时半数致死量为142. 45 μ g/ml (RPMI8266)。实验数据表明氯霉素能够抑制肿瘤细胞生长，导致肿瘤细胞凋亡。
图I是氯霉素作用于骨髓瘤细胞的剂量和时间依赖的实验结果 图2 :是氯霉素抑制肿瘤细胞集落形成的实验结果 图3是氯霉素剂量与骨髓瘤细胞早期凋亡和晚期凋亡率的实验结果图。图4 :氯霉素抑制原代恶性浆细胞细胞活性的实验结果图。
具体实施例方式下面结合实验，进一步说明本发明。骨髓瘤细胞培养试验 骨髓瘤细胞株RPMI8266及U266细胞于含10%胎牛血清RPMI1640完全培养基中，铺板于96孔板中(细胞量1 X IO4个/孔)，在37°C饱和湿度、5% CO2条件下孵育，分别加入不同剂量氯霉素治疗，为剂量依赖性细胞毒实验，终浓度分别为50 μ g/ml、100 μ g/ml、200 μ g/ml, 300 μ g/ml, 400 μ g/ml,其中以加和不加溶媒乙醇为对照，同时以健康成人外周血单个核细胞作为对照；以氯霉素终浓度为100μ g/ml，作用于肿瘤细胞12小时、24小时、36小时、48小时、72小时，即为时间依赖性细胞毒实验。磁珠分选原代恶性浆细胞以同样的方法行药物浓度依赖性细胞毒实验，但肿瘤细胞的量为IXIO5/个孔
CCK-8方法测定细胞增殖试验
根据活细胞可以代谢试剂CCK-8为甲瓒的原理(此物质在450nm处吸光度最大)，活细胞数与吸光度成正比。CCK8 (20 μ I/孔)在37°C饱和湿度、5%C02孵箱中培养2 — 4 h，用酶标仪检测波长450 nm时的吸光度(A)值，参比波长为630 nm，结果取均值。算肿瘤细胞抑制指数(PI)。PI 二 I —A贫盤空Z A对照孔。实验结果如图I所示。实验结果提示氯霉素作用于骨髓瘤细胞，其抑制肿瘤细胞增殖有剂量及时间依赖性，即随着药物剂量增加或者药物作用时间延长，抑制肿瘤细胞增殖的作用越明显，其48小时半数致死量分别为142. 45 μ g/ml (RPMI8266)。克隆(集落)形成抑制实验同样以剂量依赖性实验观察药物都肿瘤细胞克隆形成的影响。集落培养体系为含O. 9 %甲基纤维素RPMI1640培养液，终浓度30%的胎牛血清(FCS)、2 mmol/L L-谷氨酰胺、20 μ g/ml双抗。于35_mm2培养皿集落培养体系中，每组设重复4个培养皿(肿瘤细胞，10，000/皿)。氯霉素终浓度分别为O μ g/ml、25 μ g/ml、50 μ g/ml，100 μ g/ml, 200 μ g/ml, 300 μ g/ml,并以溶媒 Alcohol 作为对照。在 37°C饱和湿度、5%C02孵箱中培养3周，然后将培养容器置于倒置显微镜下计数，观察集落形成。大于40个细胞者为一个集落。流式细胞仪测定肿瘤细胞凋亡，实验如图3所示。测定结果提示药物剂量越大，肿瘤细胞早期凋亡及晚期凋亡率越来越高。参照上述骨髓瘤细胞培养试验和细胞增殖试验的操作，验证氯霉素对不同患者原代恶性浆细胞活性的抑制作用，试验结果如图4所述。由图4可知，氯霉素可以很好的抑制恶性浆细胞的细胞活性。恶性浆细胞的细胞活性与氯霉素的用量成反比。综上所述，可知，氯霉素可以很好地治疗恶性浆细胞疾病，特别是多发性骨髓瘤。氯霉素价格极其低廉，即可静脉用药，也可以口服用药，特别适用于维持治疗。氯霉素本身对革兰氏阳性菌，包括大部份的抗药性金黄色葡萄球菌、革兰氏阴性菌及 厌氧性生物具有很好的抗性，这使得其特别适用于肿瘤合并细菌感染的治疗。
权利要求
1.氯霉素在制备治疗恶性浆细胞疾病药物中的应用。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于恶性浆细胞疾病为多发性骨髓瘤。
全文摘要
本发明公开了氯霉素在制备治疗恶性浆细胞疾病，特别是多发性骨髓瘤药物中的应用。本发明人通过实验证明，氯霉素作用于骨髓瘤细胞，其抑制肿瘤细胞增殖有剂量及时间依赖性，即随着药物剂量增加或者药物作用时间延长，抑制肿瘤细胞增殖的作用越明显，其48小时半数致死量为142.45μg/ml(RPMI8266)、315.22μg/ml(U266)。实验数据表明氯霉素能够抑制肿瘤细胞生长，导致肿瘤细胞凋亡。
文档编号A61K31/7072GK102697797SQ20121015338
公开日2012年10月3日 申请日期2012年5月16日 优先权日2012年5月16日
发明者田发青 申请人:田发青