一种促进成骨细胞骨形成的红景天提取物的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种促进成骨细胞骨形成的红景天提取物及其提取方法。该提取方法为：将干燥的红景天用纯净水煎煮提取，提取液浓缩后用有机溶剂萃取，浓缩成膏状，膏状提取物再用打孔吸附树脂分离，即可得到本发明的红景天提取物。本发明的红景天提取物具有很好的促进成骨细胞骨形成的作用，并来源于天然药物，副作用少，使用安全，提取方法简单，易于工业化生产。
【专利说明】—种促进成骨细胞骨形成的红景天提取物
【技术领域】
[0001]本发明涉及红景天提取物，尤其是涉及促进成骨细胞骨形成的红景天提取物。
【背景技术】
[0002]随着世界人口老龄化日趋明显，骨质疏松症的发病率逐年升高，由骨质疏松症所致的骨痛和骨折直接影响了中老年人的生存质量，已经成为严峻的社会问题。人体的骨骼通过不断的骨生成和骨吸收，一直在进行着改造，这种改造叫骨改造。在骨改造的过程中，有骨生成作用的成骨细胞和骨破坏作用的破骨细胞起重要的作用。两种细胞相互协调，骨形成和骨吸收处于一种动态平衡，维持骨质的不断更新。在年轻时骨生成和骨吸收保持着良好的平衡，但随着年龄的增长，由于各种原因该平衡倾向于骨吸收，长时间持续该状态的话会使得骨组织变脆，导致发生骨质疏松症、骨折等各种骨疾病。
[0003]针对骨质疏松症的发病机理，目前主要有两种治疗骨质疏松症的方案:抑制破骨细胞的形成和骨吸收活性，还有一个是促进成骨细胞的形成和骨形成活性。目前，对于骨质疏松症的治疗，目前已开发出多种药物，但大部分药物为针对于破骨细胞，而针对于成骨细胞的药物很少见，而且开发出的药物大部分为合成药物，价格昂贵，长期服用引起多种副作用，因而使用上都有一定的局限性。比起合成新药，天然药物成分具有安全，价廉的优点。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种来源于天然药物的，具有促进成骨细胞骨形成的植物性药物。
[0005]为了实现本发明的目的，本发明采用以红景天为天然药物资源，通过多种溶剂提取法和分离方法以及在提取`、分离过程中紧密配合得到的提取物或组分对成骨细胞形成的作用的实验，最终得到具有显著促进成骨细胞骨形成的红景天提取物。
[0006]具有促进成骨细胞骨形成的红景天提取物的提取方法为如下:
[0007]①将红景天挑选去杂后，清洗，切成5_20mm的小块，浸泡，加入3-10倍纯净水煎煮1-3次,过滤,合并滤液；
[0008]②步骤①的滤液浓缩成一半，然后用有机溶剂萃取，萃取液浓缩，得浸膏I ;
[0009]③将浸膏I用大孔树脂柱精制，用水-乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得浸膏II ;
[0010]④将浸膏II冷冻干燥，得粉末状红景天提取物。
[0011]本发明的优选技术方案中，在步骤②所述的有机溶剂为含有1-6个碳原子的醇，烷或酯类。
[0012]本发明的另一优选技术方案中，步骤③所述的水-乙醇溶液洗脱顺序依次为:水，20-40%乙醇，40-60%乙醇洗脱，100%乙醇洗脱。
[0013]红景天(Rhodiola rosea L.)为我国传统中药,分布于我国广泛地区和地域,其资源很丰富。红景天具有滋补强壮药，消除疲劳，抵御寒冷的作用。现代药理研究表明，红景天主要含有红景天甙、35种微量元素，18种氨基酸，维生素A、D、E和抗衰老活性超氧化物，其营养成分齐全且配伍合理，具有抗疲劳，加强记忆力和注意力等多种功效。
[0014]本发明的红景天提取物具有很好的促进成骨细胞骨形成的作用，并来源于天然药物，副作用少，使用安全。
[0015]本发明的红景天提取物，提取方法简单，易于工业化生产。
【具体实施方式】
[0016]下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0017]实施例1
[0018]1.红景天提取物的提取
[0019]①将红景天挑选去杂后，清洗，切成5-20_的小块，浸泡，加入5倍纯净水煎煮2次，每次1.5小时，过滤，合并滤液；
[0020]②步骤①的滤液浓缩成一半，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇萃取，其中将收集正丁醇萃取液，浓缩，得浸膏I;
[0021]③将浸膏I用大孔树脂柱精制，先用水洗，然后依次用25%乙醇，50%乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液，减压浓缩，得浸膏II ；
[0022]④将浸膏II冷冻干燥，得粉末状红景天提取物。
`[0023]2.红景天提取物对成骨细胞形成的作用
[0024]成骨细胞的形成体系:采用小鼠颅骨细胞MC3T3-E1细胞在维生素D3和BMP-2的存在下，在a -MEM培养液中培养3周左右，用von-kossa钙化染色法测定成骨细胞的钙化程度，即成骨细胞的骨形成能力。
[0025]将红景天提取物溶于a -MEM培养液中，配制成一定浓度，然后加入到MC3T3-E1细胞的成骨细胞形成体系中，在5% 二氧化碳、37°C的细胞培养箱中培养21天，用von-kossa钙化染色法进行染色，在显微镜下数染成黑色团块的钙化结节的个数，结果见表1.[0026]表1.红景天提取物对成骨细胞骨形成的影响
____?丐化结节数促进率(％)
红景天 I ug/ml25115.5
[0027]提取物3 ug/ml__Z7__28^_
__10 ug/ml 301__42_
—对照组I 212I
[0028]表1的试验中:MC3T3_E1细胞以IX IO5/孔的浓度接种于24孔板，维生素D3和BMP-2的存在下的a -MEM培养液中培养21日。
[0029]表中红景天提取物的浓度为在细胞培养液中的最终浓度，每个浓度设3个孔，钙化结节数为3个孔的平均数。
[0030]表中对照组为在红景天提取物浓度为10ug/ml时使用的溶剂，作为溶剂对照。
[0031]表中促进率为相对于对照组计算的红景天提取物对成骨细胞钙化结节形成的促进率。
[0032]表1的结果可知，红景天提取物显著促进成骨细胞的骨形成能力，随着浓度的增加其促进率也增加。`
【权利要求】
1.一种促进成骨细胞骨形成的红景天提取物，其特征在于用如下方法制备得到: ①将红景天挑选去杂后，清洗，切成5-20mm的小块，浸泡，加入3-10倍纯净水煎煮1_3次,过滤,合并滤液； ②步骤①的滤液浓缩成一半，然后用有机溶剂萃取，萃取液浓缩，得浸膏I; ③将浸膏I用大孔树脂柱精制，用水-乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得浸膏II； ④将浸膏II冷冻干燥，得粉末状红景天提取物。
2.根据权利要求1所述的红景天提取物，其特征在于在步骤②所述的有机溶剂为含有1-6个碳原子的醇，烷或酯类。
3.根据权利要求1所述的红景天提取物，其特征在于步骤③所述的水-乙醇溶液洗脱顺序依次为:水,20-40%乙醇，40-`60%乙醇洗脱，100%乙醇洗脱。
【文档编号】A61P19/10GK103816206SQ201210466159
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2012年11月16日 优先权日:2012年11月16日
【发明者】邢秋苓 申请人:邢秋苓