一种苹果果实细胞提取物的提取方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物美容领域，具体涉及一种苹果果实细胞提取物的提取方法及其在 护肤品中的应用。
【背景技术】
[0002] 苹果，醫薇科苹果亚科苹果属植物，落叶乔木，双叶子植物，原产于欧洲和中亚及 中国地区，是最常见的富含营养的水果之一。苹果的营养成份可溶性大，容易被人体吸收， 有"活水"之称，有利于溶解硫元素，使皮肤润滑柔嫩，保持弹性，而且苹果中还含有大量的 铜、楓、猛、锋、钟等微量元素，人体如缺少该些元素会导致皮肤干燥、易裂、奇痒等，最重要 的是苹果果实细胞中含有很多不确定营养价值的植物化学成分，在体外实验中，发现其该 些化学物质能够起到抗氧化、清除体内自由基成份的作用，从而保护机体的组织和细胞不 受损害，进而减缓人体衰老，增加自身抵抗力。近年来，对于苹果自身抗氧化作用和清除自 由基能力的研究不少，但是其中单就苹果果实细胞中的抗氧化及消除机体内自由基化学物 质的提取及提取物的实际应用很少。
[0003] 苹果多酷是从苹果中提取的纯天然抗氧化剂，其主要成份为类黄丽类化合物，近 年来，大量的研究显示苹果多酷具有如抗癌、抗氧化、消除体内自由基的药理功能。建立有 效的提取方法，可W促进苹果多酷的提取W及其在抗衰老美容化妆品中的应用。
[0004] 目前现有的提取苹果多酷的主要方法有；一、有机溶剂提取法，根据相似相溶原 理，选用水、己醇、己酸己醋和丙丽等萃取剂进行提取。有机溶剂萃取法工艺流程比较复杂， 容易被杂质污染，而且在回流的过程多酷类物质有可能会被空气氧化，最重要是该工艺过 程时间较长，对环境的污染比较大。二、加压溶剂提取法，采用常规溶剂对固体或半固体样 品进行萃取的样品前处理技术。本方法需要特殊的设备W获得和承受高温和高压，而且维 护成本比较高。H、微波辅助提取法中微波的发生和样品的萃取都需要在特定的微波制备 系统中进行，设备运行及维护成本较贵，而且微波的波动性对整个萃取效果的影响很大。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种苹果果实细胞提取物的提 取方法及其应用，所述方法很大程度上提高了提取效率，且所述提取物具有很强的抗氧化 作用，是理想的美容抗衰老用品。
[0006] 本发明具体的技术方案如下：
[0007] -种苹果果实细胞提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0008] (1)准备苹果果实；
[0009] (2)萃取；将苹果果实、丙丽、己醇按固液比为1 ; (30-60) ; (30-60)混合；在压强 为（-0. 5MPa)-0. 5MPa，400W-800W的条件下进行多次超声波处理；所述每次超声波处理时 间为2-lOmin，得到提取液；
[0010] (3)离也与浓缩；
[0011] (4)采用XDA-5大孔吸附树脂吸附解吸处理；
[001引 妨浓缩。
[0013] 将苹果果实、丙丽、己醇按固液比为1 ; (30-60) ; (30-60)混合，能够充分扩大苹果 粉末跟丙丽与己醇的接触面积，提高萃取率。而且从实验的结果来看，超声的时间相对现有 技术来说较短，而且不用刻意将控制温度高温有可能会让细胞完全丧失生物活性，完全释 放细胞内的其它物质，增加了引进杂质的几率，而且同时可能导致提取的多酷类的化学结 构不稳定，降低了提取率。
[0014] 本发明采用己醇和丙丽的混合溶液是因为丙丽对多酷类物质的提取效果相当好 而且对人体的毒副作用相对较小，萃取率相较于己醇等常用试剂来说高。本发明主要是 将丙丽的高萃取率和己醇的任何毒副作用的优点结合在一起，既提高了单一溶剂的萃取率 (能相对提高20% -25% )，又同时降低了丙丽本身的可能残留的毒副作用，而丙丽在后续 的树脂吸附经过再次解吸，基本已经没有任何残留，在经过实验和检测后发现，此次对人体 无毒副作用。
[0015] 本发明是利用负压（-0. 5MPa)-0. 5MPa来增加空化效果，加速细胞壁和细胞膜的 破碎，同样能达到研磨珠的效果，而且而且经过对比效果比研磨珠还要好，能提高10%~ 20%的提取率，同时，负压也不会出现使用研磨珠由此而可能带来的风险。
[0016] 优选的，步骤（1)中将所述苹果果实洗净切块，于鼓风干燥箱中风干后粉碎， 过40-80目筛；步骤（2)中所述苹果果实、丙丽、己醇的固液比为1 ;50;50,所述压强为 0.1 MPa，所述多次超声处理为在500W下进行超声波处理，每次时间间隔为0. 5-3分钟。
[0017] 优选的，步骤（2)中丙丽与己醇的用量比为1:1。
[001引优选的，步骤（3)中所述离也为将步骤（2)得到的提取液在转速为2000-500化/ min下离也10-30min ;所述浓缩为取离也后的上清液于30-6(TC条件下，用真空旋转蒸发法 在0. 08-0. 12MPa下浓缩并回收丙丽和己醇。
[0019] 优选的，所述转速为4000r/min，所述浓缩为取离也后的上清液于5(TC条件下用 真空旋转蒸发法在0. 08-0. 12MI^a下浓缩并回收丙丽。
[0020] 优选的，步骤（4)中所述XDA-5大孔吸附树脂作为吸附处理柱，所述吸附处理 柱中的抑值为4.5 ;选用质量分数为70-90 %的己醇溶液作为解吸剂，上料液流速为 0. 5-1. 5ml/min ;将已吸附饱和的树脂，选用质量分数为65% -90%的己醇，W 0. 5-2. 0ml/ min的速率和4-8BV的吸附流速进行洗脱；步骤（5)所述浓缩是在35C下进行真空浓缩，浓 缩后的上清液用滤膜过滤后再浓缩。
[0021] 本发明采用是XDA-5大孔吸附树脂；XDA-5的颗粒范围为0. 3-1. 20mm，平均孔径为 25-30, XDA-5的过滤效果佳；吸附流速为4~8BV/hr，流速较快，能缩短所需的提取时间； XDA-5本身受温度和酸度的影响不大，本发明是需要在抑=4. 5的情况下进行吸附解吸，因 此XDA-5能够更加的稳定；XDA-5能够去除部分棒曲霉素和农惨等有害物质。
[002引优选的，步骤妨所述浓缩后的上清液用0. 22 y M过滤，在冻干温度为 (-20) - (-35C )，真空度为50-200Pa，冻干时间为24-36小时进行冻干处理，即得到苹果果 实细胞提取物冻干粉。
[0023] 优选的，所述苹果果实细胞提取物为苹果多酷。
[0024] 发明人经研究发现，所述苹果果实细胞提取物具有较强的抗氧化作用，且对皮肤 无刺激，因此，本发明还提供了苹果果实细胞提取物的用途，将苹果果实细胞提取物应用在 护肤品中。
[0025] 优选的，所述护肤品为面膜、面霜、洁面乳、爽肤水、乳液、精华素、眼霜。
[0026] 优选地，所述护肤品为抗衰老护肤品。
【具体实施方式】
[0027] 下面通过具体实施例子对本发明做进一步详细阐述，W便清楚理解本发明所要保 护的技术方案。
[0028] 实施例1
[0029] 1.苹果原料的准备
[0030] 1)选取新鲜的苹果（在市场上采购即可），用自来水清洗干净后再用去离子水清 洗一遍，然后将苹果切成10X 10mm的小块。
[0031] 2)将小的苹果块放在鼓风干燥箱中风干处理locrc风干24小时，去除水分；
[0032] 3)用粉碎机将风干后的苹果块粉碎，然后用60目筛过筛。
[0033] 2.在负压条件下采用超声波辅助加有机溶剂浸提苹果提取物方法，所述苹果提取 物为苹果多酷。
[0034] 1)在室温下称取一定量的苹果粉末，W 1 ;50 ;50的比例加入质量分数为40%丙 丽溶液和75%己醇溶液作为溶剂进行溶解。
[003引 2)在反映容器中调整负压为0.1 mPa，并充分揽拌。
[003引扣在800W的（最佳为500W)超声波的条件下进行超声波处理，时间持续lOmin， 每次间隔1分钟，分2次进行超声。
[0037] 4)离也处理；将经过超声波处理过的提取液在4000r/min下离也30min。
[0038] 5)浓缩；取上清液于5(TC条件下，用真空旋转蒸发在0. 12MI^a下浓缩并回收丙丽 和己醇。
[0039] 3.用大孔树脂吸附解吸处理
[0040] 1)选用经过预处理过的XDA-5大孔吸附树脂作为苹果多酷吸附处理柱。
[0041] 2)将离也后的浓缩液用XDA-5大孔吸附树脂进行吸附处理；
[004引扣向处理溶液中加入稀肥1溶液，调节树脂处理柱中的抑值为4. 5,使环境溶液 为酸性条件。
[004引 4)选用浓度为90 %的己醇溶液作为解吸剂，控制上料液流在1.0ml/min左右，对 吸附液进行洗脱。
[0044] W将已吸附饱和的树脂，用90%的己醇，W 1.0ml/min的速率W 8BV的流速进行 洗脱。
[004引 4.真空浓缩
[0046] 1)合并含有苹果多酷的试管，在35C下真空浓缩。
[0047] 2)将得到的浓缩上清用0. 45 y M的滤膜进行过滤、浓缩。
[0048] 5.制备苹果多酷冻干粉
[0049] 1)将得到的浓缩上清用0. 22 y M过滤除菌。
[0050] 2)除菌后进行冻干处理，冻干温度为-35C，真空度为200Pa，冻干时间为36小时， 即得到苹果多酷成分冻干粉。将冻干粉分装成1ml/支。
[0051] 6.苹果多酷含量测定
[0052] 1)测定原理；多酷类化合物上有活泼的羟基，极易失去氨而被氧化，在碱性条件 下能与化lin-Ciocalteu试剂反应生成蓝色物质，此物质在765nm处有最大吸收，在一定条 件下会遵从Lamber-Beer Law定律，可W选择没食子酸（基准物质）测定苹果中多酷的相 当含量（借鉴相关GB/T8313-2008测定原理和方法）。根据此原理绘制出基准物质的标准 曲线，求出回归方程，然后吸取处理好苹果多酷样本，测定其吸光度，根据回归方程计算样 液中的苹果多酷含量。
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