包含苹果提取物并且特别是在儿童中减少食物过敏症状的营养组合物的制作方法

专利名称：包含苹果提取物并且特别是在儿童中减少食物过敏症状的营养组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含多酚的天然提取物在制备用于减少暴露于变应原的过敏患者的过敏症状的营养组合物中的用途。
背景技术：
变态反应是影响各年龄段患者的生活的最常见的健康问题。现今WHO认定变态反应性疾病是流行病。在过去几十年中变态反应的流行已经表现出增加。现代生活方式、特别是城市的生活方式与变态反应现象的高度流行和更高的严重性相关。由于已经表明“过敏表现型”或“特应性”的发展促进对于其他变应原的继发的致敏作用，儿童期、特别是幼童时期和特别对于食物变应原的变应性致敏是重要的并引起高度关注。因此，儿童期的变态反应能够是导致今后生命中多种变态反应的过敏级联反应的第一步，通常将该过程称为“特应性病程(The Atopic March)”。例如，在人类中已经证明在生命早期具有持续的食物超敏反应的儿童在以后的儿童期中患过敏性鼻炎(花粉热)或哮喘的风险显著增加(Ostblihn等人2008)。具有较轻微的食物超敏反应的儿童患呼吸性变态反应的风险也增加，但在程度上比具有持续的食物超敏反应的儿童更轻。因此，降低食物超敏反应的严重性对于延缓“特应性病程”是至关重要的。在此背景下，在儿童和婴儿期中处理过敏事件和预防变态反应是最重要的。在生命的最初几年中，婴儿的免疫系统一直活跃地发育。在该幼小的患者中影响、 预防、避免、处理、减少或调节变态反应能够影响其在今后生命中短期和长期的变应性特征。变态反应的预防能够在不同的水平上实现“一级预防”是阻止或减少患者对变应原致敏的风险的作用，其特征在于没有变应原特异性IgE抗体或降低变应原特异性IgE抗体水平。阻止或减少致敏将导致当暴露于同样的变应原时没有过敏症状或减少过敏症状。通过调节患者对一种变应原或一组变应原过敏的方式(一级预防)，也可以调节随后的变态反应。“二级预防”是调节变态反应的症状的作用，S卩，已经对1种或若干种变应原过敏的患者当再暴露于所述的变应原时变态反应的发生或强度。通过调节过敏症状的发生或强度 (二级预防)，使与变态反应有关的不适降至最低。考虑到变态反应预防的这些不同的概念，可以假设由于其内在的作用机制，某些化合物可以在这些预防的特定水平之一或两者上单独发挥作用。例如，某些化合物可以单独减少对特定变应原的过敏(一级预防)，而另外的化合物可以单独仅对二级预防有效果并降低变态反应的严重性。其他的化合物可以影响致敏和症状，因此其有效促进一级和二级预防。食物变应原是婴儿在其生命早期遭遇的第一变应原通常，不只接受母乳喂养的婴儿可能遇到乳蛋白质。乳蛋白质确实是婴儿食物过敏的最常见的原因，随后是蛋类和小麦蛋白质。通常，婴儿和幼儿的食物过敏能够通过皮肤症状(皮疹、湿疹等)和胃肠症状(腹部绞痛、疼痛、特别是腹部疼痛、呕吐)来表现。当婴儿/幼儿暴露于新的食物(例如谷物、蔬菜或水果)时，也能出现进一步的致敏和变态反应事件。多酚类是一大类具有抗氧化活性的小化合物，其通常存在于植物和水果中。黄酮类是具有共同的结构特征的多酚类的亚组，其自身能进一步分为亚组(仍基于共同的结构)，例如黄酮醇、黄烷醇、黄酮、黄烷酮和其他。苹果中所含的化合物已经被应用并已被证明对变态反应具有广泛作用已经推测黄酮类(例如槲皮素)和其他的多酚类对普遍的变态反应具有有益效果。苹果富含各种多酚类，其包括槲皮素和根皮苷。实验室动物的体内和体外实验表明某些多酚类可以通过类似于普通抗组胺剂的机制(即，对肥大细胞脱颗粒作用的抑制作用)降低变态反应。其已经特别记载于M. Kimata等人，Clin. Exp. Allergy 2000 ；30 :501-508 ；Μ. P. Nair 等人，Biochim. Biophys. Acta 2002 ；1593 :29-36 和 W. Dorsch 等人，Int. Arch. Allergy. Immunol. 1992 ；97 :1-7 中。而且 Kojima 等人，Allergology International (2000)49 :69-73记载了苹果多酚类能够对特应性皮炎有有益效果。在 Biosci. Biotechno, Biochem. 6969 (4)，829-832，2005 中，Kishi 等人描述了苹果多酚治疗雪松花粉症的效果。然而，仍然需要特异性地减少特别是幼儿和婴儿人群中的变态反应和症状。婴儿和幼儿的特定的营养需求进一步使儿童期的食源性变态反应的问题复杂化。 热量摄入、热量密度、需要的营养素的种类、蛋白质含量和蛋白质质量都是对于向婴儿和幼儿提供最合适的营养而言重要的因素。微量营养素例如维生素和矿物质的存在也是重要的，特别是当由与目标患者的年龄对应的特定的范围限定了其存在的情况下。因此，对于幼儿和婴儿，食物递送的基质本身是复杂的、但也是缺少变化的例如，尽管有潜在的变应性， 婴儿仍需要奶源蛋白质的基质中的特定的蛋白质平衡。这种多种营养素的存在能够增强食物变应原的作用。在这种复杂的基质中，不能单独诱发过敏现象的低重要性的食物变应原能够在引发变态反应中变得更强。类似地，在这种复杂的营养基质中，可以中和变应原或发挥变态反应预防作用的化合物可观察到其作用降低或消失。特别地，在例如用于婴儿或幼儿的营养组合物的复杂基质中，无法预见通常被认为具有变态反应预防作用的化合物是否仍然有效和有效程度。需要减轻具有过敏史和/或处于过敏的婴儿和幼儿人群的食物过敏症状。需要提供全营养组合物，其不仅供给各种营养素、而且降低变态反应的严重性。需要提供营养组合物，其调节患有轻度到中度的变态反应的年幼患者的变态反应，因为这些患者具有由其肠道和免疫系统的低成熟度所决定的特定的需求。也需要例如通过营养干预(例如掺入免疫系统的调节剂到常规的营养方案中)来调节不耐受严厉的药物分子的幼儿的变态性反应。需要提供在断奶时和断奶前后调节年幼患者的变态反应的营养组合物，此时肠道经历严重的改变并且引入了新的潜在变应原性固体食物，因此患者对食物变应原的致敏特别敏感。需要通过提供有效的组合物、或者可能通过减少暴露于变应原来缓解变态反应的症状，即使组合物可能不直接降低对变应原的致敏作用。需要这类组合物，其对变态反应的二级预防有积极作用、而又不必对相同变态反应的一级预防有作用。
最终，需要最适合于年幼患者的组合物，其通过减少症状能够协助减少“过敏表现型”，并因此能够在以后生命中降低对新的变应原的敏感。需要减少特应性病程。发明概述在第一方面，本发明提供全营养组合物，其用于减少由具有由食物变应原诱发的变态反应的患者、特别是婴儿和/或幼儿的食物所引起的变态反应的症状。在第二方面，本发明提供组合物，其显著地促进由食物变应原诱发的变态反应的二级预防，任选地同时不影响针对相同变应原的一级预防。在第三方面，本发明提供组合物，其富含多酚类、特别是槲皮素。在本发明的另一个方面，本发明的组合物对断奶时期的婴儿和/或幼儿特别有效。本发明进一步扩展到在今后生命中降低对其他变应原的敏感。


图1 :0VA食物过敏小鼠模型的图解。图2 在变应原激发前最后一周接受的苹果提取物的小鼠的食物过敏症状的减少。2个独立实验的结果。图3 在致敏期(一级)或在变应原激发前最后一周(二级)接受的苹果提取物(Pomactiv HFV或Diana Naturals AFP0MM9080)的小鼠的食物过敏症状的减少。图4 在激发后4小时血清中小鼠肥大细胞蛋白酶1 (MMCP-I)的中间值。图5/表1 回肠派尔集合淋巴结中的基因表达水平。图6/表2 回肠中的基因表达水平。发明详述在本说明书中，下列的术语具有以下的含义“全营养组合物”，出于本文的目的，全营养组合物是包含大量的(通常50%或更多)对于特定的年龄所建议的主要营养素的组合物。当使用足够提供对于特定的年龄所建议的热量摄入量的量时，通常大量并且按比例地提供该主要营养素，例如到达对于特定的年龄所建议的特定营养素剂量的50%或更多。全营养组合物通常包含符合对于特定的年龄的一般建议的均衡比例的蛋白质源、脂质源、碳水化合物源。其通常也包括微量营养素(例如维生素和矿物质)以及必需氨基酸源和必需脂肪酸源。然而可以理解，全营养组合物可以不含有满足婴儿或幼儿的所有营养需求的所有特定的营养素、也可以不含有所有的建议的量。全营养组合物不包括仅包含苹果提取物或主要包含苹果提取物的组合物。“变态反应的症状”通常包括由变应原诱发的症状。该症状包括皮肤表现(皮肤发红、皮疹、搔痒、皮炎、湿疹)、眼部表现(眼睛的搔痒和流泪)、肠胃表现(充血、腹痛、痉挛、 呕吐腹泻)、呼吸系统表现(鼻子发痒、鼻充血、鼻炎、哮喘)和严重情况下的全身表现(眩晕、精神错乱、过敏症)。“变态反应的一级预防”是指为了避免或降低过敏的(免疫学的)致敏性的全部措施，例如阻止或减少特异性IgE抗体。“变态反应的二级预防”是指阻止致敏的个体的变态反应性疾病/过敏症状的发展。
“断奶期”是婴儿适应从纯液体营养到固体或半固体食物、适应从准单一食物类型 (通常是母乳或婴儿配方食品)到各种食物的时期。“致敏”是指变应原特异性IgE抗体的诱导/发展。“儿童/幼儿/婴儿/小儿”由于儿童或婴儿特别受食物过敏影响，本发明的组合物非限制性地用于儿童和/或婴儿。根据关于婴儿配方食品和后续配方食品的2006年12 月 22 日的 European Commission Directive2006/141/EC 的第二条中的定义，“婴儿”是年龄在12个月以下的儿童，幼儿是年龄在1和3岁之间的儿童。术语“儿童”包含1-14岁的年龄组。小儿可以等同于婴儿和/或幼儿。发明人已经证明了当向致敏的年幼哺乳动物提供包含苹果提取物的全营养组合物时能够缓解变态反应和症状。这定义了对变态反应的二级预防的正面作用。令人惊讶地，该作用并不伴随年幼哺乳动物对变应原的致敏的降低(即，证明没有变态反应的一级预防)。组合物的作用本发明涉及包含多酚类的苹果提取物在制备减少具有由食物变应原诱发的变态反应的患者中由食物引起的变态反应的症状的全营养组合物中的用途。发明人已经证明， 在接受含有苹果提取物的营养组合物的小鼠的组中苹果提取物能够减少食物过敏的症状。 这在致敏后诱发变态反应(激发)时可以证明。当人(通常是婴儿/幼儿)天然地对食物变应原敏感时，该模型模拟人的食物过敏。因此，苹果提取物表现出保护效应。不被理论约束的情况下，认为苹果提取物的多酚类与全营养组合物(特别是脂肪或蛋白质组分)相互作用从而提供增强的作用。在本发明的一个实施方案中，组合物的作用是更特别地对变态反应的二级预防的作用。如较低的变态反应临床评分所示，在小鼠模型中，变态反应的症状确实被显著诱导。 通常，症状能够包括全部或一部分公认的变态反应症状。在本发明的一个实施方案中，症状包括腹泻、皮肤刺激或呼吸系统症状或其组合。在本发明的一个实施方案中，症状伴随着生化调节物，例如类胰蛋白酶、糜蛋白酶、组胺、白三烯的释放。但在本发明的一个实施方案中，组合物对患者的对变应原的致敏没有作用。实际上通过包含苹果提取物的组合物似乎不能实现一级预防。患者仍然对食物变应原敏感，但是当再暴露于致敏变应原时发生较少的变态反应的症状。不受理论限制下，认为作用没有降低天然免疫防御(这对患者有正面作用)、而仅仅减少变态反应的症状的表达。在一个实施方案中，组合物减少在今后生命中对其他变应原的致敏。认为组合物促进(或者至少不阻断)自然的免疫成熟过程，因此其能够对降低对相同变应原或对不同变应原的致敏具有长期作用(在今后生命中致敏的减少)。仅通过减少变态反应的症状(二级预防)，可假设本发明的组合物能够允许发生自然的免疫成熟并且具有长期的有益效果。本发明的组合物在本发明的一个实施方案中，组合物包含富含多酚类的苹果提取物。与粗苹果提取物(未浓缩)相比，苹果提取物确实富含多酚类。在一个实施方案中，浓缩因子是至少 1. 5、至少2或至少5。苹果提取物充分浓缩(富含多酚类)从而使抗过敏作用得到发展和发挥对于组合物的作用看起来是至关重要的。通过阻断来自效应细胞如肥大细胞的变态反应调节物的释放能够调节该作用(类似于抗组胺药的作用)。不受理论限制，也认为苹果提取物中大量存在的某些化合物能够结合蛋白质变应原并且掩蔽其被宿主免疫系统识别的形式。不能排除苹果提取物(可能是活性多酚类)与组合物的特定蛋白质(组合物中存在的蛋白质-特别是奶源蛋白质)发生反应从而形成复合物并掩蔽潜在的变应原。在本发明的一个实施方案中，组合物包含0. 01% w/w-3% w/w的苹果提取物。在一个实施方案中，组合物包含0. (w/w)-l% (w/w)的苹果提取物或0.4% (w/w)-0.6% (w/w)。虽然存在足量的苹果提取物对诱发预期效应是至关重要的，但太高的苹果提取物的量通过消极地影响组合物(营养素失衡)而具有负面作用。这意味着，与过多蛋白质复合能够改变组合物的生物可利用的蛋白质的含量。在本发明的一个实施方案中，苹果提取物是以“Pomactiv HFV”为名称由Val de Vire Bioactives (Conde sur Vire，法国)销售的蛋白质提取物。在一个实施方案中，苹果提取物类似于或衍生自所述的Pomactiv HFV并且具有相似的作用。在本发明的一个实施方案中，组合物包含槲皮素。槲皮素可以包含于苹果提取物之中，特别是苹果提取物的多酚组分之中。特别地，槲皮素能够结合/复合全营养组合物的蛋白质(其包括组合物中所含的变应原性蛋白质)，并且该复合通过使变应原与免疫系统隔离而能够有助于抗过敏作用。在本发明的一个实施方案中，组合物包含水解的或部分水解的蛋白质。因为与完整的蛋白质相比，水解的蛋白质更容易消化并且具有降低的变应原性，所以基于(部分)水解的蛋白质的营养组合物特别适合于婴儿/幼儿的免疫系统和胃肠道。而且，能够假设水解的蛋白质能够非常有效地被苹果提取物的多酚类结合-例如由于其相对大小。这可以诱发变应原的掩蔽效应改进，因此其可以进一步降低组合物的变应原性。这代表了最适合于食物过敏的婴儿/幼儿的免疫系统和胃肠道的组合物。在该实例中，苹果提取物与水解的蛋白质的结合与本发明的相关度最高。在一个实施方案中，水解的蛋白质是从乳清蛋白和/或酪蛋白水解的蛋白质。在一个实施方案中，水解的蛋白质来自于胰蛋白酶和/或糜蛋白酶对蛋白质(特别是乳清蛋白)的作用。在一个实施方案中，水解的蛋白质包含大豆蛋白和/或卵蛋白。在一个实施方案中，水解的蛋白质来自于例如Protan^x 和/或Flavourzyme (Novozyme，丹麦) 的蛋白酶的作用。在一个实施方案中，组合物的蛋白质(优选水解的蛋白质)包含谷物蛋白或卵蛋白。在一个实施方案中，水解的蛋白质来自于Alcalase的作用。本发明的组合物能够包含2种或多种所述的蛋白质源的混合物。目标人群本发明的组合物最适合针对相对年幼的患者，但不能排除对成年人的效果。实际上优选患者足够年幼以致于仍然经历其免疫系统和其胃肠道的成熟期。在这些患者中，组合物的效果能够更强或更快。在一个实施方案中，组合物是婴儿配方食品、后续(follow up)配方食品、成长乳、婴儿谷物和/或幼儿食品。后续配方食品通常被认为是用于生命的最初6个月之后的婴儿的组合物。成长乳通常被认为是用于蹒跚学步的小孩和/或年龄在 1或2至6岁或者2或3至5岁的儿童的组合物。成长乳通常是基于牛奶的组合物。优选地，组合物针对婴儿或者幼儿或者6岁以下、出生至3岁、或出生至断奶的儿童。在一个实施方案中，组合物是初始(starter)或后续婴儿配方食品。优选地，营养组合物包含大量喂养幼儿的主要必需营养素。在一个实施方案中，营养组合物是用于1-4岁婴儿/幼儿的婴儿谷物组合物。组合物能够更特别地在断奶期和/或之后达12个月使用。断奶期对本发明确实重要，因为在断奶期婴儿接触各种食物、同时经历其免疫系统和其胃肠道的快速成熟。因此，在这一时期变态反应的有效控制是特别重要的。在一个实施方案中，本发明的营养组合物是针对和特别为1至3岁蹒跚学步的儿童或者3至6岁儿童配制的成长乳。组合物基于牛奶并且可以含有益生菌和/或益生元。 组合物能够是1至6岁的继续方案的一部分，并且能够在1至3岁和随后3至6岁时期施用。可以不必每天施用，但施用可以是足够规律的(例如至少每月或每周一次)从而诱导预期效果。通过在免疫系统成熟的关键时期发挥作用和通过长期施用，组合物的效果更显
-frh-
者O在一个实施方案中，在早婴儿期(前6个月)和/或6个月至1岁和晚婴儿期(例如1至4岁或2至6岁)都施用组合物。可以不必每天施用，但施用可以是足够规律的(例如至少每月或每周一次)从而诱导预期效果。长时间地(若干年)、但相对不频繁(每周一次、每月1至4次)地连续施用可以通过在免疫系统成熟的关键期发挥作用而提高可见的效果。至于本发明的组合物的应用，儿童、小儿或婴儿能够是过敏的儿童。过敏的儿童是那些已经经历至少一次对食物变应原的变态反应(轻度、中度或重度)的儿童、小儿或婴儿。在本发明的一个实施方案中，儿童、小儿或婴儿已经表明对食物变应原有严重的变态反应和/或已经经历多于一次的中度或重度的食物过敏。本发明所包括的食物变应原能够包括所有类型的天然存在或通常在食物、特别是幼儿(例如婴儿、小儿、儿童)的食物中存在的变应原。实验结果人和啮齿动物细胞的体外研究已经表明抗氧化物可以调节肥大细胞功能。由于水果和蔬菜富含抗氧化物，所以我们探寻用水果提取物能否影响食物过敏的症状。特别地，我们测试了在小鼠食物过敏模型中食用苹果提取物Pomactiv HFV的效果(OVA食物过敏小鼠模型，如图1所示)。在激发之后，用苹果提取物处理的小鼠发展的临床症状比致敏的未处理的动物 (阳性对照)轻。这些结果由图2和3中所示的实验结果说明图2表示2个独立的用10只动物/组进行的探索实验的结果。所测量的产出(过敏分数)表明与阳性对照相比，已经接受苹果提取物的小鼠的变态反应分数的降低的阳性趋势(分别为P = 0. 08,0. 06)。图3表示在相同的模型中统计学功效实验(η = 15/组)的结果。证实了在激发前最后一周期间接受苹果提取物(二级预防)的组中降低变态反应评分的作用，并且是在统计学上显著的(图3 ;p = 0. 014，组苹果提取物Pomactiv HFV，二级)。在致敏期用相同的苹果提取物处理的组(组苹果提取物Pomactiv HFV，一级)没有表现出在激发后症状减少。同样地，用不同的苹果提取物处理的组在激发后症状没有减少(图3，组Diana Naturals AFP0MM9080)。除了临床分数，测定了小鼠肥大细胞蛋白酶I(MMCP-I)的血清浓度水平，作为用变应原激发的肠肥大细胞活化的量度。与未处理的对照动物相比，食用苹果提取物 Pomactiv HFV显著降低MMCP-1血清水平(图4)。通过实时定量PCR(qRT-PCR_参见以下方法)测量与变态反应相关的各种基因在肠内的表达水平。对阳性对照组、阴性对照组和在激发前最后一周接受苹果提取物 (Pomactiv HFV)的组(二级预防)在来自2个不同部位的组织(回肠派尔集合淋巴结和回肠)上测量基因表达。图5(表1)和图6(表幻阐明了所得的结果接受苹果提取物 Pomactiv HFV的组表现出各种基因的降低的表达，其包括回肠派尔集合淋巴结中的细胞因子白细胞介素(IL)-5、IL-13、IL-10、干扰素(IFN)-Y和趋化因子CCLll (嗜酸细胞活化趋化因子)和回肠中的细胞因子IL-13、IL-10、IL-12、IFN- γ、趋化因子CCLll (嗜酸细胞活化趋化因子)和转录因子GATA-3。已经被证明降低表达的基因是通常被认为是已知驱动变态反应发生的T辅助细胞2表现型的标记物(IL-5，IL-13，CCLl 1，GATA-3)。因此，实验证明通过在致敏的动物接受苹果提取物(二级预防)时减少相关基因的表达从而下调免疫应答。认为其有助于所测试的苹果提取物在减少过敏症状(二级预防)中的抗过敏作用。结论这些数据表明致敏的动物食用富含多酚类的苹果提取物(Pomactiv HFV)导致减少暴露于致敏变应原时的过敏症状。症状的减少伴随着降低的MMCP-I的血清浓度水平和降低的肠内与变态反应相关的关键基因的表达，这表明免疫系统的成员(例如肥大细胞) 的调节有助于保护效应。分析方法OVA食物过敏小鼠模型在7周内，每周为间隔通过口服(用管饲针)20mg来自Fluka(BuchsJSfi)的卵白蛋白(OVA)+IOyg/小鼠的来自LuBioscience (Lucerne，瑞士)的霍乱毒素(用作佐剂)使6周龄的成年普通BALB/c小鼠过敏。在最后一次致敏后一周，用IOOmg OVA进行口服激发。在实验全程，用掺入食物(Kliba 3200,Kliba Nafag KaiseraugstJi^i)的来自 Val de Vire Bioactives (Val de Vire Bioactives-BP2_50890 Conde sur Vire,法国， 目录号“Pomactiv HFV")的苹果提取物HFV或者来自Diana Naturals (Antrain，法国) 的AFP0MM9080(1% w/w)进行营养干预；作为致敏期间的一级预防或致敏期结束时开始的二级预防(图1)。在激发后15分钟，分别观察小鼠30分钟。记录临床症状并如下进行量化(过敏分数)0 无症状，低于4次搔抓；1 :4-10次在鼻和头周围搔抓，无腹泻；2 多于10 次搔抓或直立的毛发和不动或软便；3 腹泻或呼吸吃力或紫绀；4 腹泻并且针刺后不动、 直立的毛发、呼吸吃力或紫绀；5:过敏反应。在激发后4个小时，处死小鼠(颈脱位法)，取血和采集最后一厘米的回肠和1个位于相同区域的派尔集合淋巴结，冷冻在液氮中。血清MMCP-I 根据制造商的说明，通过购自Moredun kientific (Midlothian，苏格兰)的 ELISA来定量小鼠血清中的鼠肥大细胞蛋白酶I(MMCP-I)。通过用多项式标准曲线转化OD 值(pg/ml)来得到MMCP-I浓度。肠内基因表汰的低密度阵列分析RNA提取和定量使用购自Promega (Dubendorf,瑞士)的SV总RNA分离系统试剂盒，根据制造商的方法，提取来自回肠和派尔集合淋巴结的总核糖核酸(RNA)。使用!Iomega (DUbendorf，瑞士)提供的定量-IT Ribogreen试剂盒，根据制造商的方法，定量RNA。逆转录通过使用来自Applied Biosystems (Foster City USA)的 Multiscribe 逆转录酶试剂盒，在ι μ g总RNA上进行逆转录。总RNA与50 μ 1的终体积中的50 μ M的随机六聚体、 0. 5mM 的 dNTPs、20U 的 RNase 抑制剂(Applied Biosystems)、62· 5U 的 Multiscribe 逆转录酶、IX RT缓冲剂和5. 5mM的MgC12进行混合。用以下循环程序在T3PCR仪(Biometra， Giittingen，德国)上进行逆转录在25°C ΙΟ分钟、在48°C 30分钟、在95°C 5分钟，在4°C 结束。LDA 在 Applied Biosytems 网站(http://www3.appliedbiosystems.com/index.htm) 上在线设计低密度阵列分析。根据制造商的方法在定量ABI-Prism 7900HT上进行加载、运行和分析。用3个看家基因(β -肌动蛋白、GAPDH和HPRT)的平均值使定量结果标准化。基于所获得的循环阈(Ct)值，用ACt测量每一个基因的相对的和标准化的mRNA表达。通过 3个看家基因的Ct平均值校正每一个基因的Ct值。用公式-2- Δ Ct XK将结果计算为相对表达，K是IO6系数。倍数增加结果表达标准化为以阴性组的表达水平为基准。
权利要求
1.包含多酚类的苹果提取物在制备减少具有由食物变应原引发的变态反应的患者中由食物引起的变态反应的症状的全营养组合物中的用途。
2.权利要求1的用途，其中所述的组合物提供对由所述的食物变应原引发的变态反应的显著的二级预防。
3.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物对于所述患者对所述变应原的致敏无效。
4.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的苹果提取物富含多酚类，与粗苹果提取物相比乘以至少1.5的因数。
5.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物包含0.1 % w/w到1 % w/w的所述的苹果提取物。
6.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物包含槲皮素。
7.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物包含水解的蛋白质。
8.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物减少以后生命中对其他变应原的过敏。
9.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的苹果提取物是来自Valde Vire Bioactives (Conde sur Vire,法国)的 Pomactiv HFV0
10.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的症状是腹泻、皮肤刺激或呼吸系统或其组合。
11.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物包含谷物蛋白。
12.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物是婴儿配方食品、后续配方食品、成长乳、婴儿谷物或幼儿食品。
13.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物是用于1-4岁婴儿的婴儿谷物组合物。
14.上述权利要求任意一项的用途，其中在断奶期和/或随后多达12个月期间向婴儿提供所述的组合物。
15.上述权利要求任意一项的用途，其中所述的患者是6岁以下、优选出生至3岁的婴儿或幼儿。
16.上述权利要求任意一项的用途，其中所述症状伴随着生化调节物例如类胰蛋白酶、 糜蛋白酶、组胺、白三烯的释放。
全文摘要
提供了包含多酚类的全营养组合物，其用于减少幼儿或婴儿的由食物变应原引起的变态反应的症状。优选地，组合物调节变态反应的二级预防、同时不显著影响一级预防。组合物包含苹果提取物。
文档编号A61P37/08GK102413718SQ201080018316
公开日2012年4月11日 申请日期2010年4月23日 优先权日2009年4月28日
发明者A·梅赛尼尔, A·齐歇尔, S·霍尔沃特 申请人:雀巢产品技术援助有限公司