一种中药组合物在制备治疗乙型流感的药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种中药组合物在制备治疗乙型流感的药物中的应用。该中药组合物是由连翘、金银花、麻黄、苦杏仁等药味组成，实验证实可有效对抗乙型流感病毒，并且该中药组合物对乙型流感病毒的作用显著优于其它病毒。
【专利说明】一种中药组合物在制备治疗乙型流感的药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，涉及一种中药组合物在制备治疗乙型流感的药物中的应用，属中药应用领域。
【背景技术】
[0002]乙型流感是由乙型流感病毒引起的流行性感冒，也是一种传染性强、传播速度快的疾病。特点是起病急骤，畏寒、发热，体温在数小时至24小时内升达高峰，胃肠道症状较其他类型流感多见。其主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播。冬春季节流行为主，可引起局部爆发流行。
[0003]达菲一直被认为对甲型和乙型流感具有类似的疗效。研究人员指出，试管检测则显示，抑制乙型流感病毒增殖所需的达菲药物浓度是抑制甲型流感病毒的约250倍。
中国专利03143211.5公开了该中药组合物具有抗病毒的作用，可应用于流行性感冒，但该专利未提及该中药组合物对于乙型流感的作用。
[0004]本发明是在第03143211.5号的基础上进行的改进发明，在此全文引用该专利文件记载的内容。
【发明内容】
[0005]本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，涉及一种中药组合物在制备治疗乙型流感的药物中的应用。
[0006]本发明所述中药可以被有相同或相似功效的中药代替，并且这些药材均可按照《全国中药炮制规范》或《中药大辞典》进行炮制。
[0007]本发明目的是提供一种中药组合物在制备治疗治疗乙型流感的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成:
连翘200-300，金银花200-300，板蓝根200-300，大黄40-60，广藿香60-100，绵马贯众200-300,红景天60-100，薄荷脑5-9，麻黄60-100，苦杏仁60-100，鱼腥草200-300，甘草60-100，石膏 200-300。
[0008]优选地，该中药组合物由如下重量份的原料药制成:
连翘200，金银花300，板蓝根200，大黄60，广藿香60，绵马贯众300，红景天60，薄荷脑9，麻黄60，苦杏仁100，鱼腥草200，甘草100，石膏200。
[0009]或:
连翘300，金银花200，板蓝根300，大黄40，广藿香100，绵马贯众200，红景天60，薄荷脑5,麻黄100，苦杏仁60,鱼腥草300,甘草60,石骨300。
[0010]或:
连翘255，金银花255，板蓝根255，大黄51，广藿香85，绵马贯众255，红景天85，薄荷脑7.5,麻黄85，苦杏仁85,鱼腥草255,甘草85,石骨255。
[0011]优先地，所述中药组合物所用原料药中，麻黄可以为蜜麻黄，苦杏仁可以为炒苦杏仁。
[0012]本发明还提供了所述中药组合物的活性成分由以下步骤制成:
(1)按照原料药重量比例称取中药材，净选；
(2)广藿香碎断，加5-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残洛弃去，滤液备用；
(3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1_3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤(2)广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5)将步骤(4)所得所得清膏与步骤(3)所得醇提液合并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
步骤(5)所得干膏粉、步骤(2 )所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分。
[0013]本发明药物的剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓
剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。
[0014]为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如:填充齐?、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括:硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括:糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括:甜味剂及各种香精；防腐剂包括:尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括:PEG6000，PEG4000，虫蜡等(范碧亭《中药药剂学》，上海科学出版社.1997年12月第I版.各剂型记载的辅料)。
[0015]其中胶囊剂的制备方法，是由以下步骤制成:
(1)按照原料药重量比例称取中药材，净选；
(2)广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残洛弃去，滤液备用；
(3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1_3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤(2)广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5)将步骤(4)所得所得清膏与步骤(3)所得醇提液合并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；(6)将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7)将薄荷脑、步骤(2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装入胶囊，即得。
[0016]其中颗粒剂的制备方法，是由以下步骤制成:
(1)按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2)广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残洛弃去，滤液备用；
(3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤(2)广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5)将步骤(4)所得所得清膏与步骤(3)所得醇提液合并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6)将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7)将薄荷脑、步骤(2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装袋，即得。
[0017]优选的颗粒剂的制备方法为:
(1)按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2)广藿香碎断，加6倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次
1.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇,滤液备用；
(4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小时，第二次I小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤(2)广藿香提油后的水滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加95%乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏滤液；
(5)将步骤(4)所得清膏滤液与步骤(3)所得醇提液合并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.25-1.35的稠膏，备用；
(6)将步骤(5)所得稠膏加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7)将薄荷脑、步骤(2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装袋，即得。
[0018]本发明药物的其他剂型按比例称取原料药后，采用常规的制备方法制备，例如，范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第I版)记载的制备工艺，制成药剂学可接受的常规剂型。
[0019]为证实本发明药物组合物治疗乙型流感的作用效果，用按实施例1制得的胶囊剂(以下称本发明药物)，进行了如下实验:
实验例1:本发明药物对于乙型流感病毒的抑制作用材料与试剂
(1)病毒株:乙型流感病毒株、副流感病毒I型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)、腺病毒7型(ADV7)、单纯疱疹病毒I型(HSV-1)。
[0020](2)细胞:MDCK 细胞、1fep-2 细胞。
[0021](3)待检样品:本发明药物为石家庄以岭药业股份有限公司提供。
[0022]实验方法 药物的细胞毒性测定
(1)药物对MDCK细胞毒性测定
采用微量细胞培养法，单层MDCK细胞培养于96孔板中，使用细胞维持液2倍梯度稀释本发明药物母液(11.48 mg/ml)，加入细胞培养孔中，每个稀释度4孔，每孔100 μ I。37°C5% C02条件下培养3~4天，观察结果，以不出现细胞病变(CPE)的药物最小稀释度为药物的无毒限量(TDtl),根据Reed-Muench法计算药物的半数中毒浓度(TD5Q)。
[0023](2)药物对Hep-2细胞毒性测定
按常规实验操作，将瓶中Hep-2细胞消化下来，接种于96孔细胞培养板中，置37°C 5%C02培养箱中培养2天，长成单层细胞后，进行试验:将培养板中的培养液倒掉，加入维持液IOOml/孔，再将各药液加入第一行3孔，每孔100ml，混匀再下移IOOml/孔，如此反复直至第7行，弃去IOOml/孔，留第8行不加药作正常细胞对照，最后各孔补液IOOml，使每孔培养液总量为200ml。将培养板置37°C 5% C02培养箱中培养3 — 4天，观察结果，以不出现细胞病变(CPE)的药物最小稀释度为药物的无毒限量(TDtl),根据Reed-Muench法计算药物的半数中毒浓度(TD50 )。
[0024]各病毒滴度(TCID50)的测定
(I)将瓶中MDCK细胞接种于96孔细胞培养板中，置37°C 5% C02培养箱中培养2天，长成单层细胞后，进行乙型流感病毒株病毒毒力滴定试验，测定出乙型流感病毒株病毒的滴度(TCID5tl )。
[0025](2)按常规实验操作，将瓶中!fep-2细胞消化，接种于96孔细胞培养板中，置37°C5% C02培养箱中培养2天，长成单层细胞后，进行HVJ、RSV、ADV3、ADV7、HSV-1病毒毒力滴定试验，测定出各病毒的滴度(TCID5tlX
[0026]本发明药物抗病毒作用评价
(I) MDCK单层细胞，每孔加入100 μ I各稀释度药物和乙型流感病毒株50 μ I病毒液(100 TCID5tl),吸附I小时倾出，补加维持液100 μ I。同时设乙型流感病毒株病毒对照和细胞对照。37°C 5% CO2温箱培养，4~5天观察结果，病毒对照孔CPE达到4+终止实验。
[0027](2)!fep-2细胞，每孔分别加入100 μ I各稀释度药物和HVJ、RSV、ADV3、ADV7、HSV_1病毒株50 μ I病毒液(100 TCID50)，吸附1小时倾出，补加维持液100μl。同时分别设HVJ、RSV、ADV3、ADV7、HSV-1病毒对照和细胞对照。37°C 5% C02温箱培养，4~5天观察结果，病毒对照孔CPE达到4+终止实验。
[0028](3)细胞病变程度的判断:
“一”:细胞生长正常，无病变出现；
“I”:细胞病变约占整个单层细胞的〈25% ；
“2”:细胞病变约占整个单层细胞的25%~50% ；“3”:细胞病变约占整个单层细胞的50%~75% ；
“4”:细胞病变约占整个单层细胞的75%~100%。
[0029](4)根据Reed-Muench法计算药物的半数有效浓度(IC5tl)，治疗指数(TI) = TD50/IC5tl，每个实验重复3次，采用SPSS for Windows软件对不同药物的TI值进行统计学分析。
[0030]试验结果
(O本发明药物对MDCK细胞最大无毒浓度(TDtl)为0.72mg/ml，半数中毒浓度(TD5tl)为1.02mg/ml。对Hep-2细胞最大无毒浓度(TDtl)为1.56 mg/ml,半数中毒浓度(TD5tl)为
2.24mg/ml。
[0031](2)各病毒的TCID5tl如表I所示:
表I病毒感染，滴定结果_
【权利要求】
1.一种中药组合物在制备治疗乙型流感的药物中的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成: 连翘200-300，金银花200-300，板蓝根200-300，大黄40-60，广藿香60-100，绵马贯众200-300,红景天60-100，薄荷脑5-9，麻黄60-100，苦杏仁60-100，鱼腥草200-300，甘草60-100，石膏 200-300。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成: 连翘200，金银花300，板蓝根200，大黄60，广藿香60，绵马贯众300，红景天60，薄荷脑9，麻黄60，苦杏仁100，鱼腥草200，甘草100，石膏200。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成: 连翘300，金银花200，板蓝根300，大黄40，广藿香100，绵马贯众200，红景天60，薄荷脑5,麻黄100，苦杏仁60,鱼腥草300,甘草60,石骨300。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于由下列重量份的原料药制成: 连翘255，金银花255，板蓝根255，大黄51，广藿香85，绵马贯众255，红景天85，薄荷脑7.5,麻黄85，苦杏仁85,鱼腥草255,甘草85,石骨255。
5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物的活性成分由以下步骤制成: (1)按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2)广藿香碎断，加5-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残洛弃去，滤液备 用； (3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1_3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤(2)广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用； (5)将步骤(4)所得所得清膏与步骤(3)所得醇提液合并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； 步骤(5)所得干膏粉、步骤(2)所得挥发油与薄荷脑共同构成该中药组合物的活性成分。
6.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述药物剂型为胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述胶囊剂是由以下步骤制成: (1)按照原料药重量比例称取中药材，净选； (2)广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残洛弃去，滤液备用； (3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1_3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤(2)广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用； (5)将步骤(4)所得所得清膏与步骤(3)所得醇提液合并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； (6)将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒； (7)将薄荷脑、步骤(2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装入胶囊，即得。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述颗粒剂是由以下步骤制成: (1)按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断； (2)广藿香碎断，加5-8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残洛弃去，滤液备用； (3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1_3小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用； (4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤(2)广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调解至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用； (5)将步骤(4)所得所得清膏与步骤(3)所得醇提液合并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用； (6)将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒； (7)将薄荷脑、步骤(2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装袋，即得。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述颗粒剂是由以下步骤制成: (1)按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断； (2)广藿香碎断，加6倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用； (3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇,滤液备用； (4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小时，第二次I小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤(2)广藿香提油后的水滤液合并，浓缩成在60°C时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加95%乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏滤液； (5)将步骤(4)所得清膏滤液与步骤(3)所得醇提液合并，浓缩至在60°C时测定相对密度为1.25-1.35的稠膏，备用； (6)将步骤(5)所得稠膏加入适当药学上可接受的辅料制粒； (7)将薄荷脑、步骤(2)所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，密闭，混匀，装袋，即得。
【文档编号】A61P31/16GK103446314SQ201210178604
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2012年6月2日 优先权日:2012年6月2日
【发明者】张会欣, 王宏涛, 秦拢, 李向军 申请人:北京以岭药业有限公司