流感病毒重配的制作方法
【专利说明】
[0001 ]本申请请求2013年6月6日提交的美国临时申请61/832,091和2013年9月26日提交 的欧洲专利申请号13179013.1的权益，运两项申请的全部内容通过引用纳入本文。
[0002] 本申请部分是在生物医学高级研究和开发机构（BARDA)授予的基金号 HHS010020100061C的政府支持下完成。政府对本发明享有某些权利。
技术领域
[0003] 本发明属于流感病毒重配领域。此外，其设及生产用于保护抵御流感病毒的疫苗。
【背景技术】
[0004] 针对流感感染的最有效保护是抗流行株的疫苗接种，且尽快生成用于疫苗生产的 流感病毒是重要的。
[0005] 野生型流感病毒通常在鸡蛋和细胞培养物内生长达到低效价。为了获得生长更好 的毒株用于疫苗生产，目前常见的做法是用快速生长的高产供体毒株重配流行疫苗株。运 可W通过W下方法完成：用所述流行流感毒株(所述疫苗毒株)和所述高产供体毒株共同感 染培养宿主，并选择含有来自所述疫苗毒株的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)区段和来自所 述供体毒株的其它病毒区段（即，编码PBl、PB2、PA、NP、Ml、M2、NSl和N?的那些）的重配病毒。 另一种方法是通过反向遗传学重配流感病毒(参见例如参考文献1和2)。
[0006] 参考文献3和4报告了与野生型病毒毒株相比，带嵌合HA区段的流感病毒在鸡蛋中 生长更快，该嵌合区段包含病毒毒株的胞外域和来自A/化erto Rico/8/34的其他结构域。 参考文献5教导了具有嵌合NA蛋白质的流感病毒，该蛋白质含有A/PR/8/34的跨膜和茎结构 域。参考文件6和7教导了重配流感病毒，其包含同时具有来自甲型流感病毒和乙型流感病 毒的结构域的嵌合HA区段。
[0007] 大多数的对嵌合HA蛋白质的研究在鸡蛋中进行并且参考文献3教导"(所述)嵌合 病毒上看到的改善可能对于鸡蛋基质是非常特异性的"。测试细胞培养物生长的研究发现 测试的病毒在细胞培养物中显示出弱的生长。因此，本领域仍然需要提供一种高产率重配 流感病毒，尤其是在细胞培养物中。
【具体实施方式】
[000引本发明提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞 质结构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5非编码 区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒 株，该第二流感病毒毒株不是A/化erto Rico/8/34、A/WSN/33或B/Lee/40。
[0009]还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结 构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中胞外域来自第一甲型流感病毒毒株，并且5 非编码 区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒 株，该第一甲型流感病毒毒株不是化或册流感病毒毒株。
[0010] 本发明还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和 胞质结构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中胞外域来自第一乙型流感病毒毒株，并且5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感 病毒毒株，该第二流感病毒毒株是乙型流感病毒毒株或甲型流感病毒毒株，该甲型流感病 毒毒株不是Hl毒株或H3毒株。嵌合血凝素区段优选包含全部来自第二流感病毒的5'-非编 码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域，因为发明人已经发现包含运种嵌合 血凝素区段的重配流感病毒在细胞培养物中获得了特别好的HA产率。
[0011] 还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结 构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株，并且5'-非编码区、 3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株， 其中使用成对比对算法与SEQ ID NO: 15比对，则该区段包含W下的一个或多个：（a)对应于 核巧酸24的位置上的鸟嚷岭，和/或(b)对应于核巧酸38的位置上的腺嚷岭；和/或（C)对应 于核巧酸40的位置上的胸腺喀晚；和/或(d)应于核巧酸44的位置上的腺嚷岭；和/或（e)对 应于核巧酸53的位置上的胸腺喀晚；和/或（f)应于核巧酸63的位置上的腺嚷岭;和/或(g) 对应于核巧酸66的位置上的胸腺喀晚；和/或化)应于核巧酸69的位置上的腺嚷岭；和/或 (i)应于核巧酸75的位置上的腺嚷岭；和/或（j)对应于核巧酸78的位置上的胸腺喀晚；和/ 或化)应于核巧酸1637的位置上的腺嚷岭;和/或（1)对应于核巧酸1649的位置上的胞喀晚， 和/或(m)对应于核巧酸1655的位置上的胸腺喀晚，和/或(n)对应于核巧酸1682的位置上的 胞喀晚，和/或(O)对应于核巧酸1697的位置上的胞喀晚，和/或(P)对应于核巧酸1703的位 置上的鸟嚷岭，和/或（q)对应于核巧酸1715的位置上的胸腺喀晚，和/或(r)对应于核巧酸 1729的位置上的腺嚷岭，和/或（S)对应于核巧酸1733的位置上的胞喀晚，和/或（t)对应于 核巧酸1734的位置上的胞喀晚，和/或(U)对应于核巧酸1746的位置上的腺嚷岭，和/或(V) 对应于核巧酸1751的位置上的腺嚷岭。优选地，嵌合血凝素包含(a)至(V)的全部核巧酸。
[0012] 本发明还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和 胞质结构域的嵌合血凝素区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，其中 所述区段编码W下蛋白质：使用成对比对算法与SEQ ID NO: 63比对，则在对应于SEQ ID NO:63的氨基酸3的位置上没有丙氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:6化k对，则在 对应于SEQ ID NO:63的氨基酸4的位置上没有天冬酷胺;和/或使用成对比对算法与SEQ ID N0:63比对，则在对应于SEQ ID N0:63的氨基酸11的位置上没有丙氨酸;和/或使用成对比 对算法与SEQ ID N0:63比对，则在对应于SEQ ID N0:63的氨基酸12的位置上没有亮氨酸； 和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:63比对，则在对应于SEQ ID NO:63的氨基酸13的位 置上没有丙氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID N0:63比对，则在对应于SEQ ID N0:63 的氨基酸15的位置上没有丙氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID N0:63比对，则在对应 于SEQ ID NO:63的氨基酸16的位置上没有天冬氨酸。
[0013] 在一些方面中，该嵌合血凝素区段可编码蛋白质，所述蛋白质具有W下的一个或 多个:使用成对比对算法与SEQ ID NO:63比对，则在对应于SEQ ID NO:63的氨基酸3的位置 处具有鄉氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:63比对，则在对应于SEQ ID NO:63的 氨基酸4的位置处具有赖氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:63比对，则在对应于 SEQ ID NO :63的氨基酸11的位置处具有苏氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO :63 比对，则在对应于SEQ ID N0:63的氨基酸12的位置处具有苯丙氨酸;和/或使用成对比对算 法与SEQ ID N0:63比对，则在对应于SEQ ID N0:63的氨基酸13的位置处具有苏氨酸;和/或 使用成对比对算法与SEQ ID NO:63比对，则在对应于SEQ ID NO:63的氨基酸15的位置处具 有苏氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:63比对，则在对应于SEQ ID NO:63的氨基 酸16的位置处具有酪氨酸。优选嵌合HA区段可包括所有运些氨基酸，因为包含运种嵌合血 凝素区段的重配流感病毒在细胞培养物中有特别好的HA产率。
[0014] 嵌合血凝素区段可包括W下的一个或多个:SEQ ID NO: 110的5'-NCR结构域;和/ 或SEQ ID NO: 111的CT结构域;和/或SEQ ID NO: 112的TM结构域;和/或沈Q ID NO: 113的 3'-NCR。
[0015] 本发明还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和 胞质结构域的嵌合血凝素区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，其中 该区段包括W下的一个或多个(优选全部）：位置24处的鸟嚷岭、位置38处的腺嚷岭、位置40 处的胸腺喀晚、位置53处的胸腺喀晚、位置63处的腺嚷岭、位置66处的胸腺喀晚、位置69处 的腺嚷岭、位置75处的腺嚷岭、位置78处的胸腺喀晚、位置1703处的鸟嚷岭、位置1715处的 胸腺喀晚、位置1729处的腺嚷岭、位置1733处的胞喀晚、位置1734处的胞喀晚、位置1746处 的腺嚷岭、和/或位置1751处的腺嚷岭。所有运些位置相对于在使用成对比对算法与SEQ ID NO: 15比对时沈Q ID NO: 15的相应位置。
[0016] 嵌合血凝素区段可包括W下的一个或多个:来自105p30流感病毒毒株的5'-非编 码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域，其如下文所述。优选地，嵌合血凝素 区段包含全部来自105P30流感病毒毒株的5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域 和胞质结构域，因为包含运种嵌合血凝素区段的重配流感病毒在细胞培养物中能够获得特 别好的HA产率。
[0017] 还提供了由本发明的嵌合HA区段编码的嵌合HA蛋白。
[0018] 发明人已经发现，与不包含嵌合HA区段的重配流感病毒相比，包含本发明的嵌合 HA区段的重配流感病毒可在相同时间框架和相同条件下提供高达5倍的HA产率。
[0019] 还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域的嵌 合流感病毒神经氨酸酶区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5 非编码区、3 非 编码区、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，该第二流感病 毒毒株不是A/化erto Rico/8/34或A/WSN/33。
[0020] 还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域的嵌 合流感病毒神经氨酸酶区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5 非编码区、3 非 编码区、跨膜结构域和胞质结构域来自第二流感病毒毒株，该第一和第二流感病毒毒株都 是甲型流感病毒毒株或乙型流感病毒毒株。
[0021] 本发明还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、跨膜结构域和胞质结构 域的嵌合神经氨酸酶区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5 非编码区、3 非编 码区、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，该区段包含W下 的一个或多个(优选全部）：对应于核巧酸13的位置处的腺嚷岭;和/或对应于核巧酸35的位 置处的腺嚷岭；和/或对应于核巧酸60的位置处的腺嚷岭；和/或对应于核巧酸63的位置处 的腺嚷岭;和/或对应于核巧酸65的位置处的腺嚷岭;和/或对应于核巧酸67的位置处的胞 喀晚;和/或对应于核巧酸69的位置处的腺嚷岭;和/或对应于核巧酸75的位置处的腺嚷岭； 和/或对应于核巧酸83的位置处的胸腺喀晚;和/或对应于核巧酸89的位置处的鸟嚷岭;和/ 或对应于核巧酸101的位置处的腺嚷岭;和/或对应于核巧酸107的位置处的胸腺喀晚；和/ 或对应于核巧酸110的位置处的胸腺喀晚;和/或对应于核巧酸120的位置处的鸟嚷岭;和/ 或对应于核巧酸121的位置处的胞喀晚；和/或对应于核巧酸125的位置处的胸腺喀晚；和/ 或对应于核巧酸127的位置处的胸腺喀晚。所有运些位置相对于在使用成对比对算法与SEQ ID NO: 1化k对时沈Q ID NO: 16的相应位置处。
[0022] 本发明还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、跨膜结构域和胞质结构 域的嵌合神经氨酸酶区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5 非编码区、3 非编 码区、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，其中所述区段编 码W下蛋白质：使用成对比对算法与SEQ ID N0:64比对，则在对应于SEQ ID N0:64的氨基 酸14的位置上没有半脫氨酸；和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:64比对，则在对应于 SEQ ID NO:64的氨基酸15的位置上没有亮氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:64 比对，则在对应于SEQ ID NO:64的氨基酸16的位置上没有鄉氨酸;和/或使用成对比对算法 与SEQ ID N0:64比对，则在对应于SEQ ID N0:64的氨基酸17的位置上没有鄉氨酸;和/或使 用成对比对算法与SEQ ID N0:64比对，则在对应于SEQ ID N0:64的氨基酸19的位置上没有 亮氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID N0:64比对，则在对应于SEQ ID N0:64的氨基酸 23的位置上没有异亮氨酸；和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:64比对，则在对应于SEQ ID NO:64的氨基酸34的位置上没有异亮氨酸。
[0023] 在一些方面中，该嵌合神经氨酸酶区段可编码蛋白质，其包含W下的一个或多个： 使用成对比对算法与SEQ ID NO:64比对，则在对应于SEQ ID NO:64的氨基酸14的位置处具 有丝氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:64比对，则在对应于SEQ ID NO:64的氨基 酸15的位置处具有异亮氨酸；和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:64比对，则在对应于 SEQ ID NO:64的氨基酸16的位置处具有丙氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:64 比对，则在对应于SEQ ID N0:64的氨基酸17的位置处具有异亮氨酸;和/或使用成对比对算 法与SEQ ID N0:64比对，则在对应于SEQ ID N0:64的氨基酸19的位置处具有异亮氨酸;和/ 或使用成对比对算法与SEQ ID NO:64比对，则在对应于SEQ ID NO:64的氨基酸23的位置处 具有甲硫氨酸;和/或使用成对比对算法与SEQ ID NO:64比对，则在对应于SEQ ID NO:64的 氨基酸34的位置处具有丙氨酸。优选嵌合NA区段可包括所有运些氨基酸，因为包含运种嵌 合血凝素区段的重配流感病毒在细胞培养中有特别好的HA产率。
[0024] 嵌合神经氨酸酶区段可包括W下的一个或多个:SEQ ID NO: 110的5'-NCR结构域； 和/或沈Q ID NO: 111的CT结构域；和/或沈Q ID NO: 112的TM结构域；和/或沈Q ID NO: 113 的3'-NCR。
[0025] 本发明还提供了具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、跨膜结构域和胞质结构 域的嵌合神经氨酸酶区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5 非编码区、3 非编 码区、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，所述区段包含W 下的一个或多个(优选全部）：位置13处的腺嚷岭、位置35处的腺嚷岭、位置63处的腺嚷岭、 位置65处的腺嚷岭、位置67处的胞喀晚、位置69处的腺嚷岭、位置75处的腺嚷岭、位置83处 的胸腺喀晚、位置89处的鸟嚷岭、位置110处的腺嚷岭、位置107处的胸腺喀晚、位置110处的 胸腺喀晚、位置120处的鸟嚷岭、位置121处的胞喀晚、位置125处的胸腺喀晚、位置1385处的 胞喀晚、位置1386处的胸腺喀晚、位置1387处的胞喀晚、和/或位置1392处的鸟嚷岭。所有运 些位置相对于在使用成对比对算法与SEQ ID NO: 1化k对时SEQ ID NO: 16的相应位置处。
[0026] 嵌合神经氨酸酶区段可包括W下的一个或多个:来自105p30流感病毒毒株的5'-非编码区、3'-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域，其如下文所述。优选地，嵌合血凝素区 段包含全部来自105p30流感病毒毒株的5 非编码区、3 非编码区、跨膜结构域和胞质结 构域，因为包含运种嵌合神经氨酸酶区段的重配流感病毒在细胞培养物中能够获得特别好 的HA产率。
[0027] 还提供了由本发明的嵌合NA区段编码的嵌合NA蛋白。
[00%]发明人已经发现，与不包含嵌合NA区段的重配流感病毒相比，包含本发明的嵌合 NA区段的重配流感病毒可在相同时间段和相同条件下提供高达2倍的HA产率。
[0029] 本发明提供重配流感病毒，其包含本发明的嵌合HA和/或NA区段。优选地，重配流 感病毒包含本发明的嵌合HA和嵌合NA区段，因为发明人已经发现运类重配流感病毒比仅包 含嵌合HA或嵌合NA区段的重配流感病毒生长更快并获得更好的HA产率。
[0030] 本发明还提供了重配流感病毒，所述病毒包含：
[0031] (a)具有胞外域、5'-非编码区、3'-非编码区、信号肤、跨膜结构域和胞质结构域的 嵌合血凝素蛋白，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5 非编码区、3 非编码区、信号 肤、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株;和/或具有胞外域、 5'-非编码区、3'-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合神经氨酸酶蛋白，其中胞外域 来自第一流感病毒毒株并且非编码区、胞质结构域和跨膜结构域中的一个或多个来自第二 流感病毒毒株;和
[0032] (b) W下的一种或多种：
[0033] i.来自巧巾或更多种不同供体毒株的主链区段
[0034] ii.来自2种或更多种供体毒株的主链区段，其中PBl和PB2区段来自相同供体毒 株；
[0035] iii.来自巧巾或更多种供体毒株的主链区段，其中各供体链提供超过一个主链区 段；
[0036] iv.来自巧巾或更多种供体毒株的主链区段，其中PBl区段不来自A/Texas/1/77流 感毒株；
[0037] V.来自2种或更多种供体毒株的主链区段，其中至少PA、NP或M区段不来自A/ Puerto Rico/8/34;
[0038] Vi.来自巧巾或更多种供体毒株的主链区段，其中HA区段和PBl区段来自具有相同 流感病毒HA亚型的不同甲型流感毒株。
[0039] 运些重配流感病毒是特别有用的，因为本发明的发明人已发现包含来自两种或更 多种流感供体毒株的主链区段的流感病毒相较于包含来自相同供体毒株的全部主链区段 的重配甲型流感病毒能在培养宿主内更快生长。具体而言，本发明人已发现包含来自两种 高产供体毒株的主链区段的流感病毒产出的带有祀标疫苗相关HA/NA基因的重配株能够比 用所述两种原始供体毒株中任一种所制得重配株更高产。第一和第二流感病毒毒株优选都 是甲型流感病毒毒株或乙型流感病毒毒株。
[0040] 本发明还提供一种制备重配流感病毒的方法，该方法包括W下步骤：（a)用本发明 的重配流感病毒或本发明的方法产生的重配流感病毒感染培养宿主；（b)培养来自步骤(a) 的宿主W产生病毒;和任选地(C)纯化步骤(b)中得到的病毒。
[0041] 重配流感病毒可配制成疫苗。本发明因此提供一种制备疫苗的方法，该方法包括 W下步骤：（a)通过本发明的方法制备重配流感病毒和(b)从该病毒制备疫苗。还提供了一 种从本发明的重配流感病毒制备疫苗的方法。
[0042] 还提供了包含一种或多种编码本发明的重配流感病毒的VRNA的表达构建体的表 达系统。
[0043] 嵌合HA和NA区段
[0044] 本发明提供嵌合HA和NA区段。
[0045] 结构上，流感HA区段由5'-和3'-非编码区（NCR)组成，该非编码区侧接HA区段的信 号肤(SP)、跨膜(TM)、胞质结构域(CT)和胞外域(参见图4A)dHA胞外域是流感病毒疫苗中最 重要的流感病毒抗原，而末端结构域(NCR、SP、TM和CT)的抗原重要性低得多。流感病毒NA区 段也含有末端结构域，其为5和3 '-NCR、CT结构域和TM结构域，W及胞外域，但是NA不含信 号肤(参见图4C)。末端结构域的抗原重要性比NA胞外域低得多。
[0046] 本领域技术人员可容易确定在给定HA和NA区段内的末端结构域的序列。此外，SEQ ID NO: 105-109和SEQ ID NO: 114-118分别给出了105p30和PR8X的HA末端结构域的序列。 沈Q ID NO: 110-114和SEQ ID NO: 119-122分别给出了105p30和PR8X的末端结构域的序列。 使用运一序列信息，本领域技术人员可能在其他HA和NA序列中发现相应结构域。
[0047] 本发明的嵌合HA区段包含来自疫苗毒株的胞外域和来自第二流感病毒的一个或 多个末端结构域。疫苗毒株可W是任意流感病毒毒株并且限定为提供HA胞外域的流感病毒 毒株。第二流感病毒毒株不同于疫苗毒株。疫苗毒株和第二流感病毒毒株优选都是甲型流 感病毒毒株或乙型流感病毒毒株。
[0048] 本发明的嵌合NA区段包含来自第一流感病毒毒株的胞外域和来自第二流感病毒 的一个或多个末端结构域。"第二流感病毒毒株"不同于"第一流感病毒毒株"。第一和第二 流感病毒毒株优选都是甲型流感病毒毒株或乙型流感病毒毒株。
[0049] 嵌合HA和NA区段优选包含全部来自第二流感病毒毒株的末端结构域，因为发明人 已经发现包含运类嵌合HA和/或NA蛋白的重配流感病毒可在细胞培养物中生长得特别好。 [(K)加]。第二重配流感毒株"可W是甲型流感病毒HA亚型化、肥、册、H4、册、H6、H7、册、朋、 H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16或H17。其也可含有甲型流感病毒NA亚型N1、N2、N3、M、N5、 N6、N7、N8或N9。优选第二流感病毒是Hl流感病毒，因为发明人已经发现含有运类嵌合HA和/ 或NA区段的重配流感病毒在细胞培养物中生长特别好。最优选地，第二流感病毒毒株是 105p30或PR8-X，如下所述。
[0051 ]在嵌合HA区段包含一个或多个来自105p30的末端结构域的情况中，5'-NCR结构域 可具有SEQ ID NO: 105的序列；和/或沈Q ID NO: 106的SP;和/或沈Q ID NO: 107的TM结构 域;和/或SEQ ID NO: 108的CT结构域;和/或沈Q ID NO: 109的3'-NCR。优选地，嵌合HA区段 含有全部运些序列。
[0052] 在嵌合NA区段包括一个或多个来自105p30的末端结构域的情况中，5'-NCR结构域 可具有沈Q ID NO: 110的序列；和/或沈Q ID N0:71的CT结构域；和/或沈Q ID NO: 112的TM 结构域;和/或SEQ ID NO: 113的3'-NCR。优选地，嵌合NA区段含有全部运些序列。
[0053] 在嵌合HA区段包含一个或多个来自PR8-X的末端结构域的情况中，5'-NCR结构域 可具有SEQ ID NO: 114的序列；和/或沈Q ID NO: 115的SP;和/或沈Q ID NO: 116的TM结构 域;和/或SEQ ID NO: 117的CT结构域；和/或沈Q ID NO: 118的3'-NCR。优选地，嵌合HA区段 含有全部运些序列。
[0054] 在嵌合NA区段包括一个或多个来自PR8-X的末端结构域的情况中，5'-NCR结构域 可具有SEQ ID NO: 119的序列；和/或SEQ ID NO: 120的CT结构域;和/或沈Q ID NO: 121的TM 结构域;和/或SEQ ID NO: 122的3'-NCR。优选地，嵌合NA区段含有全部运些序列。
[0055] 第二流感病毒毒株可W是乙型流感病毒毒株。
[0056] 胞外域和一个或多个末端结构域可全部来自甲型流感病毒或乙型流感病毒。也可 能具有来自甲型流感病毒的胞外域和来自乙型流感病毒的一个或多个末端结构域，反之亦 然。最优选嵌合HA或嵌合NA区段中的所有区段都来自甲型流感病毒毒株或乙型流感病毒毒 株。
[0057] 在一些实施方式中，本发明的嵌合HA区段编码蛋白质，其不具有在与SEQ ID N0:7 比对时对应于氨基酸545的位置上的酪氨酸。
[0化引重配病毒
[0059] 本发明提供重配流感病毒，其包含本发明的嵌合HA和/或NA区段。重配流感病毒包 含来自疫苗毒株的HA胞外域。疫苗毒株可W是任意流感病毒毒株并且定义为提供HA胞外域 的流感病毒毒株，不管嵌合HA区段中是否包含HA胞外域。NA区段的胞外域(在嵌合或非嵌合 NA区段中）可来