1,2,4-三取代哌嗪化合物在制备抗流感病毒药物中的用图
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，特别是涉及1，2，4?三取代哌嗪化合物在制备抗流感病毒药物中的用途。细胞实验证明，1，2，4?三取代哌嗪化合物对甲型流感病毒具有较强的抑制作用，其半数抑制浓度IC50为29.97μM，且1，2，4?三取代哌嗪化合物对细胞毒性低，药物使用安全性高，其细胞半数毒性浓度CC50≥400μM。因此，1，2，4?三取代哌嗪化合物在治疗甲型流感病毒感染疾病中具有广泛的应用背景，可应用于制备抗流感病毒药物。
【专利说明】
1，2,4-Ξ取代脈瞎化合物在制备抗流感病毒药物中的用途
技术领域
[0001 ]本发明属于医药技术领域，具体设及1，2，4-Ξ取代赃嗦化合物在制备抗流感病毒 药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的急性发热性呼吸道传染病，主要传播 途径是带有流感病毒的飞沫，经呼吸道进入体内，少数也可经共用手帕、毛巾等间接接触而 感染，临床典型特征为突起畏寒、高热、头痛、全身酸痛、疲弱乏力等全身中毒症状，而呼吸 道症状较轻。流感具有流行面广、传染性强、发病率高等特点，在婴幼儿、老年人、有屯、肺疾 病及其他慢性疾病患者或免疫功能低下者可并发肺炎，预后较差。
[0003] 流感病毒属正黏病毒科，是一种有包膜的RNA病毒，其包膜成分中含有血凝素化Α) 及神经氨酸酶(ΝΑ)两种类型的糖蛋白突起，运两种糖蛋白突起均具有抗原性，并有亚型特 异性。流感病毒变异的来源主要是由于ΗΑ和ΝΑ抗原结构的改变。全球每年有25万-50万人死 于流感或流感病毒感染引发的并发症。近年来，随着全球物种活动范围的加大，流感病毒的 变异性增强，人、禽、猪和(或)其他种属间流感病毒相互作用产生具有高致病性的新变种病 毒，人感染高致病性禽流感病例的发生、新发病毒的人群间高传染性及感染者的高死亡率， 曾一度引起了全球范围对流感的恐慌，严重影响了人类的日常生活和经济稳定发展。
[0004] 应对流感病毒的主要方式是疫苗和药物治疗。疫苗预防的有效性是建立在疫苗的 病毒株与正在流行的流感病毒株相似的基础上的，只对已知的流感病毒亚型有预防作用， 而对于由抗原性漂移或抗原性转换所产生的新型流感病毒保护率不高或无效，目前通过现 有手段无法预测将要流行的流感病毒株，因此疫苗对流感病毒的作用有限。因此，抗流感药 物始终是有效对抗流感、保护人类健康的第一道防线。当前许多国家应用的抗流感病毒药 物为盐酸金刚烧胺，包括金刚烧胺和金刚乙胺，可预防甲型流感病毒，但对乙型流感病毒则 无效。在甲型流感流行期间，预防性给予健康成人或儿童金刚烧胺或金刚乙胺，对于预防甲 型流感病毒具有70 % -90 %的有效率，已感染者起病后4她内给予运两种药物，也能发挥治 疗作用，可减轻病情和缩短病程。神经氨酸酶抑制剂是可用于预防流感的另一类药物，可W 在流感病毒流行期间试用于健康成人。但是目前运两类抗流感病毒药物均面临的一个共性 问题就是经常出现不同程度的耐药性。因此，寻找具有预防和治疗作用的新型抗流感病毒 药物就显得尤其重要和紧迫。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物在制备抗流感病毒药物中的用途。
[0006] 本发明所述1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物由法国己黎第屯大学合成和提供，其分子式 为C3日也2斯〇1日，分子量为627.68，具有如式（I)所示的结构：
[0007]
[000引本发明提供的1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物可单独应用于制备抗流感病毒药物，还可 W与其他具有防治流行性感冒功效的成分复配形成组合物应用于制备抗流感病毒药物。
[0009] 优选地，所述流感病毒为甲型流感病毒。
[0010] 优选地，所述抗流感病毒药物可制成任何一种适合于临床上使用的剂型，如制成 片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、针剂、粉针剂、注射液或喷雾剂等。
[0011] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于本发明首次公开1，2,4-Ξ取代赃嗦化合 物在制备抗流感病毒药物中的用途。细胞实验证明，1，2，4-Ξ取代赃嗦化合物对甲型流感 病毒具有较强的抑制作用，其半数抑制浓度IC50为29.97μΜ，且1，2，4-Ξ取代赃嗦化合物对 细胞毒性低，药物使用安全性高，其细胞半数毒性浓度CC5〇>400μΜ，因此，1，2，4-Ξ取代赃 嗦化合物在治疗甲型流感病毒感染疾病中具有广泛的的应用背景，可应用于制备抗流感病 毒药物。
【具体实施方式】
[0012] W下通过具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
[0013] 本发明实施例中，所述MDCK细胞(犬肾细胞)为暨南大学暨南生物医药基地自存的 细胞;所述流感病毒为Inf luenza A/PR/8化1Ν1)，为暨南大学暨南生物医药基地自存的甲 型流感病毒，将其接种于10日龄鸡胚尿囊腔内，接种量为2(K)yL，35°C培养2天后回收尿囊 液，于-80°C保存备用，病毒半数组织培养感染剂量(TCIDso) = 10-5;所述1，2，4-立取代赃嗦 化合物由法国己黎第屯大学合成和提供，1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物粉末经二甲基亚讽 (DMS0)(购自Sigma公司）充分溶解后-20°C保存备用。
[0014] 实施例1 1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物细胞毒性测定
[001引将细胞密度为1.2Xl05cells/mL的MDCK细胞接种于96孔板中，每孔100化，在含体 积百分比浓度为10% (v/v)的胎牛血清（购自广州百旺生物科技有限公司）的DMEM培养基 (品牌为gibco,购自英潍捷基贸易有限公司）中培养24h后，吸取除去培养基，将1，2,4-Ξ取 代赃嗦化合物用不含血清的DMEM培养基W2倍比做系列稀释(400μΜ-6.25μΜ)后按稀释顺序 接种于96孔板中的MDCK细胞上，每孔10化L，每个浓度平行设置3个实验复孔，同时设细胞对 照组。在37°C，5%C02培养箱中培养4她后用ΜΤΤ法进行检测，在570皿波长下测吸光度0D值， 将药物实验组与细胞对照组的0D值相比计算细胞存活率，根据Reed-Muench法计算细胞半 数毒性浓度CC50。重复4次实验，取平均值。
[0016] 实验结果:细胞对照组细胞在显微镜下观察，细胞贴壁紧密、形态良好。根据MTT结 果，采用Reed-Muench法计算1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物的细胞半数毒性浓度(Χ5〇>400ιχΜ。
[0017]实施例2 1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物抗流感病毒活性的CPE观察
[001引将细胞密度为1.2X105cells/mL的MDCK细胞接种于96孔板中，每孔lOOyL，在含体 积百分比浓度为10 % (v/v)的胎牛血清的培养基中培养2地后，吸取除去培养基，将1， 2.4- Ξ取代赃嗦化合物用不含血清的DMEM培养基W2倍比做系列稀释(200μΜ-6.25μΜ)后按 稀释顺序接种于96孔板中的MDCK细胞上，每孔10化L，每个浓度平行设置3个实验复孔，加药 完毕后每孔加100TCID50的流感病毒1(Κ)化作为1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物药物实验组，同时 设细胞对照组（即正常对照组）和病毒对照组。将阳性对照药利己韦林（粉末批号 is2013081301，购自广州爱纯医药科技有限公司，经DMS0充分溶解后使用）用不含血清的 DMEM培养基W2倍比做系列稀释(200μΜ-6.25μΜ)后按稀释顺序接种于96孔板中的MDCK细胞 上，每孔l(K)yL，每个浓度平行设置3个实验复孔，加药完毕后每孔加100TCI化0的流感病毒 100化作为阳性对照药利己韦林药物实验组。在37°C，5 %C02培养箱中培养4她后，观察1，2， 4-Ξ取代赃嗦化合物和利己韦林的抗病毒活性，并与正常对照组和病毒对照组比较，观察 并记录细胞病变(CPE)情况。实验结果见表1。
[0019] 表1 1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物和利己韦林的CPE观察
[0020]
[0021] 注:与正常对照组相比，"-":细胞无病变；"+":细胞病变率〇-24%;"++":细胞病变 率25-49% :细胞病变率50-74% ;''++++":细胞病变率75-100%。
[0022] 实验结果：显微镜下观察，正常对照组细胞贴壁致密、形态良好，流感病毒在MDCK 中的CPEW折光性增强、坏死、破碎为主要特征。药物实验组各组细胞，按照药物稀释梯度， 梯度规律出现CPE，且由表1结果可知C阳随1，2，4-Ξ取代赃嗦化合物浓度减少而逐渐加重。 同时，通过对比1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物与利己韦林的抗病毒活性，可W发现1，2,4-Ξ取 代赃嗦化合物与利己韦林相比，1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物抗病毒活性更好，对宿主细胞的 活性更低。
[0023] 实施例3 1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物抗流感病毒活性测定
[0024] 将细胞密度为1.2X105cells/mL的MDCK细胞接种于96孔板中，每孔10化L，在含体 积百分比浓度为10% (v/v)的胎牛血清的培养基中培养2地后，吸取除去培养基，将1， 2.4- Ξ取代赃嗦化合物用不含血清的DMEM培养基W2倍比做系列稀释(200μΜ-6.25μΜ)后按 稀释顺序接种于96孔板中的MDCK细胞上，每孔50yL，每个浓度平行设置3个实验复孔，加药 完毕后每孔加100TCID50的流感病毒50化作为1，2，4-Ξ取代赃嗦化合物药物试验组，同时 设细胞对照组、病毒对照组和阳性对照组，阳性对照药为利己韦林。在37°C，5%C〇2培养箱 中培养72h后用MTT法进行检测，在570nm波长下测吸光度OD值，计算药物抗病毒有效率 化R)，计算公式为邸％ =(药物处理组平均OD值-病毒对照组平均OD值)/(细胞对照组平均 OD值-病毒对照组平均OD值）X 100%，根据Reed-Muench法计算药物对流感病毒致C阳产生 50 %抑制的浓度，即半数抑制浓度IC5Q，重复4次实验，取平均值，并按照公式TI = CCsq/ICso 计算药物治疗指数ΤΙ。
[002引实验结果:根据ΜΤΤ结果，采用Reed-Muench法计算1，2，4-立取代赃嗦化合物的半 数抑制浓度IC50为29.97μΜ，治疗指数TI > 13.34。
[00%]结论：1，2,4-Ξ取代赃嗦化合物对甲型流感病毒具有较强的抑制作用，且药物使 用安全性高，因此1，2，4-Ξ取代赃嗦化合物在治疗甲型流感病毒感染疾病中具有广泛的的 应用背景，可应用于制备抗流感病毒药物。
[0027] W上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于运些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，还可W做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的 保护犯i围。
【主权项】
1.1，2,4-三取代哌嗪化合物在制备抗流感病毒药物中的用途，其特征在于，所述1，2， 4_三取代哌嗪化合物具有如式(I)所示的结构：2. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述流感病毒为甲型流感病毒。3. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗流感病毒药物制成片剂、胶囊剂、颗粒 剂、散剂或口服液。4. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗流感病毒药物制成针剂、粉针剂、注射 液或喷雾剂。
【文档编号】A61K31/495GK105920004SQ201610351594
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月24日
【发明人】刘忠, 张卓, 王飞, 王一飞, 董长治
【申请人】暨南大学