一种治疗甲1型流感病毒的走马风提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药领域，具体涉及一种治疗甲1型流感病毒的走马风提取物及其制 备方法。
【背景技术】
[0002] 走马风为菊科植物六耳铃的全草或叶。全年可采。
[0003] 走马风原形态六耳铃为粗壮草本，高50-150cm。主根肥大，有多数须根。茎多分 枝，有条棱，上部被开展长柔毛和具柄腺毛，在幼枝和花序轴上的毛更密，节间长3-6cm。下 部叶有长达2-4cm，具狭翅的柄；叶片倒卵状长圆形或倒卵形，长10-30cm，宽4-6cm，先端短 尖，基部渐狭，下延成翅，下半部琴状分裂，顶裂片大，侧裂片2-3对，边缘锯齿或粗齿，下面 被疏柔毛；侧脉5-7对；中部叶无柄，长6-10cm，宽2-4cm，边缘有不规则的齿刻，有时琴状 浅裂；上部叶极小，不分裂，全缘或有齿刻。头状花序多数，排列在长圆形的大圆锥花序；花 序梗被具柄腺毛和长柔毛；总苞圆柱形或钟形；总苞圆柱形或钟形；总苞片5-6层，紫红色， 花后常反折，外层线形，背面被密短柔毛和肯柄腺毛，中层长圆状披针形，内层线形；花托蜂 窝状；花黄色；雌花多数，花冠檐部2-3齿裂；两性花花冠檐部5裂，被疏毛。瘦果圆柱形， 具棱10条，被疏毛；冠毛白色，糙毛状，不易脱落。花期10月至翌年5月。生长于园林阴湿 处，或空旷草地上。分布我国西南部及广东、广西等地。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种走马风提取物，该提取物的制备方法和液相分析方 法，含有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备抗甲1型流感病毒药物的用途。
[0005]本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006]-种走马风提取物，该提取物由以下方法制备：
[0007] (a)以重量计，每100份药材包含干燥的走马风80~90份和干燥的甘草10~20 份，混合粉碎；(b)用65~75 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液； (c)对步骤（b)浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃 取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（d)正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用20~30% 乙醇冲洗7~9个柱体积除去多糖，再用55~65%乙醇洗脱9~11个柱体积，收集55~ 65%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。
[0008] 进一步地，步骤（d)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
[0009]进一步地，步骤（b)中所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为70%。
[0010] 进一步地，步骤（d)为用正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用25%乙醇冲洗8个 柱体积除去多糖，再用60 %乙醇洗脱10个柱体积，收集60 %乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干 燥。
[0011] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同产地、批次药材制备的走马风 提取物批间差异，所述提取物的液相分析方法为：
[0012] 色谱柱：AgilentZorbaxSBC18 柱（4. 6mmX250mm，5ym);
[0013] 流动相：A为甲醇，B为0.I%磷酸水溶液；
[0014]梯度洗脱程序：0?01 ~15min，A25% ~35% ;15 ~25min，A35% ~50% ;25 ~ 32min，A50% ;32 ~35min，A50%~25% ;35 ~40min，A25%;
[0015]流动相流速：1.OmL?minS
[0016] 检测波长：255nm;
[0017] 柱温：30°C;
[0018] 进样量：10yL。
[0019] 药物制剂，含有治疗有效量的所述走马风提取物和药学上可接受的载体。
[0020] 所述的走马风提取物在制备治疗甲1型流感病毒的药物中的应用。
[0021] 所述的药物制剂在制备治疗甲1型流感病毒的药物中的应用。
[0022] 本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。
[0023] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明走马风提取物，其余为药物学上可接受 的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0024] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0025] 本发明的优点：本发明通过对走马风药材进行提取、除杂、富集处理，能得到治疗 甲1型流感病毒的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的指纹图 谱，用于控制不同产地、批次药材制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0026] 图1为走马风提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0028] 实施例1 :走马风提取物制备
[0029] 药材来源：走马风和甘草购自安徽亳州中药材市场。
[0030] 主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购 自天津波鸿树脂有限公司；甲醇为HPLC级，购于TEDIA;85%磷酸为HPLC级，购于TEDIA; 色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。
[0031] 将8. 5kg干燥的走马风和1.5kg干燥甘草混合粉碎，用70 %乙醇热回流提取 (25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液^L);对浓缩液依次用石油醚（6LX3 次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和的正丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大孔树脂 (2kg，柱体积I. 5L)富集，先用25%乙醇冲洗8个柱体积（12L)，再用60%乙醇洗脱10个柱 体积（15L)，收集60%洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得走马风提取物浸膏粉约155g。
[0032]实施例2:走马风提取物②制备（80份走马风，20份甘草）
[0033] 制备方法：将8.Okg干燥的走马风和2.Okg干燥甘草混合粉碎，用70%乙醇热回 流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液（6L);对浓缩液依次用石油醚 (6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和的正丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃 取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大 孔树脂（2kg，柱体积I. 5L)富集，先用25%乙醇冲洗8个柱体积（12L)，再用60%乙醇洗脱 10个柱体积（15L)，收集60 %洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得走马风提取物浸膏粉约155g。
[0034] 实施例3:走马风提取物③制备（90份走马风，10份甘草）
[0035] 制备方法：将9.Okg干燥的走马风和I.Okg干燥甘草混合粉碎，用70%乙醇热回 流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液（6L);对浓缩液依次用石油醚 (6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和的正丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃 取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大 孔树脂（2kg，柱体积I. 5L)富集，先用25%乙醇冲洗8个柱体积（12L)，再用60%乙醇洗脱 10个柱体积（15L)，收集60 %洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得走马风提取物浸膏粉约155g。
[0036] 实施例4:走马风提取物④制备（75份走马风，25份甘草）
[0037] 制备方法：将7. 5kg干燥的走马风和2. 5kg干燥甘草混合粉碎，用70%乙醇热回 流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液（6L);对浓缩液依次用石油醚 (6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和的正丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃 取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大 孔树脂（2kg，柱体积I. 5L)富集，先用25%乙醇冲洗8个柱体积（12L)，再用60%乙醇洗脱 10个柱体积（15L)，收集60 %洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得走马风提取物浸膏粉约155g。<