专利名称：硒环肽·脂肪酸合剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种“含硒环肽、脂肪酸的合剂”药物及其制备方法，具体的说是一种具有抗肿瘤抗氧化功能的硒环肽·脂肪酸合剂及其制备方法。
背景技术：
威胁人类生命健康的重大难治性疾病是肿瘤，人类在肿瘤的治疗过程中经历了漫长的历史变迁。抗肿瘤药物是重要的治疗手段之一，随着研究的深入与科学技术的发展，抗肿瘤药物随着新靶点的发现而不断进步。 科学家对肿瘤的深入研究发现，尽管肿瘤发生和发展的原因十分复杂，但归根结底都与基因表达及基因表达产物活性异常密切相关。同时，由于基因表达异常所形成的原发和继发的肿瘤周围环境(如血管生成、免疫系统功能变化异常等)的恶化，促进肿瘤细胞恶性表观的进一步发展，并产生体内扩散和转移。而且近年来国内外的研究结果清晰地表明，表观遗传改变在肿瘤的发生和发展中具有普遍的意义。因此，针对以组蛋白去乙酰化酶(HDAC)这一类影响表观遗传的重要分子靶标开展的小分子药物研发已经成为国际肿瘤靶向治疗领域的热点之一。由于HDAC在基因表达中起着关键作用，所以，它们与许多细胞功能密切相关，包括细胞周期调控、细胞增殖、免疫调控、分化和基因程序化表达，同时有与传统化疗药物对肿瘤耐药性基因表达完全不同的调节模式等。试验表明，HDAC抑制剂能够抑制人体及动物体内的肿瘤的生长，包括肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌和淋巴瘤等。HDAC抑制剂在作用机制上既区别于传统细胞毒类药物(即在对增殖快速的肿瘤细胞杀伤的同时，也累及正常细胞的传统化疗药物)，也不同于典型的靶向药物。但是，现在的研制工作出现了新的问题(一)、现有的植物性抑制剂含量低，效果差；(二)、化学合成的抑制剂性能单一，效果差；(三)、大部分抑制剂在体内易降解、半衰期短，不稳定；(四)、对造血因子GATA-I和10的转录抑制，可引起血小板减少等不良反应；(五)、还有微量元素硒抗肿瘤功能肯定，但是硒离子在小肠的中性和偏碱性环境中沉淀，严重影响作用效果。
发明内容
本发明的目的是要提供一种抗肿瘤、抗氧化的植物性硒环肽·脂肪酸合剂。本发明的另一目的是提供该合剂的制备方法。本发明是根据中医药学对“肿瘤”及其并发的抗氧化能力降低的发病机理的认识以及治疗原则，参考现代“硒”、“环肽”、“短链脂肪酸”及“H D A C抑制剂”的药理研究成果，从我国卫生部审定的可用于保健食品的中药材中筛选出益气养阴、活血通脉、抗肿瘤，又能提高血液微循环和免疫力的药材，由人参、茜草、枸杞子、五味子、薏苡仁、茯苓、太子参、桅子及微量元素等组成原材料，用现代生物工程技术酶法或微生物发酵法提取出含硒肽及环肽、短链脂肪酸等纯天然植物HDAC抑制剂化合物，具有高效协同抗肿瘤及抗氧化而副作用不叠加的功效。硒环肽·脂肪酸合剂是具有含硒肽的全新化学结构的亚型选择性蛋白去乙酰化酶纯天然组合抑制剂，属于新型抗肿瘤作用机制的肿瘤表观遗传调控新药物，与传统的肿瘤治疗药物不同，它以癌细胞异常的表观遗传作为靶点进行饱和攻击，并通过诱导患者自身的免疫监测和免疫杀伤作用而发挥整体协同抗肿瘤作用，纯天然无化学污染。本发明的物品是由下列组分制成的(用量为重量):
人参2-15份茜草3-20份枸杞子5-25份
五味子2-10份薏苡仁7-30份茯苓5-20份
太子参8-30份桅子4-20份硒O. 000001-0. 002份.
本发明物品的最佳重量配比是
人参5份菌草10份枸杞子11份
五味子4份薏该仁15份获茶8份
太子参12份桅子5份硒O. 0000029份·
本发明物品上述配方中可添加其它微量元素，如添加锌、铬等，生成多肽金属螯合物，来提高功能效果。将上述各组分组成本发明物品的生产方法是以上述配方药材为原料，采用常规制药加工方法可生产出含硒肽、脂肪酸中成药合剂，采用制备肽的常规方法能生产出含硒肽合剂。现重点说明选用微生物发酵法制备肽、脂肪酸化合物。具体方法有两种(一)、将上述配方药材混合粉碎，用水煎提取方法得到水煎药液(预处理)，加入肽菌株，或综合酶进行微生物发酵培养，调PH值，加热灭酶，冷却，过滤纯化，既得，再按常规方法制成药物剂型。(二)、(I)将人参、茜草、五味子、茯苓、太子参按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I. 5小时，滤过醇提液备用，药渣分别保存；(2)将枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的药渣，进行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小时处理，药液过滤；(3)把醇提药液、水提药液混合后接入微生物蛋白酶(谷草杆菌)，在温度25-28° C、PH6. 5— 7、搅拌条件下进行酶解3-5小时，利用提取的植物体内已有的小肽，在植物环化酶的作用下，选择性的形成环肽，灭酶；(4)将上述药液浓缩，调ph值7-10，在温度20-42° C、每分钟搅拌60-80次的条件下进行厌氧发酵生产短链脂肪酸，时间7-30天；(5)冷却，过滤纯化，按上述配方比例加硒粉混悬液，强力搅拌2小时，产生含硒肽，再按常规方法制成药物剂型，既得硒环肽·脂肪酸合剂。本发明抗肿瘤原理是通过下列机制(一)由环肽、短链脂肪酸组合成HDAC抑制剂靶向作用，直接杀伤肿瘤细胞；(二)含硒肽协同杀伤肿瘤细胞；(三)提升免疫力及抗氧化能力，抑制肿瘤细胞生存；(四)截断肿瘤区的血液供应，阻止肿瘤继续扩大；(五)分化，能是一部分肿瘤细胞转化为非肿瘤细胞。本发明的主要特点是(一)配方中石竹科、茜草科、五味子科、五加科药材含环肽量高，环肽生产量多；(二)合剂含有黏附剂(多糖)、果胶、脂肪酸、氨基酸衍生物、植物多糖、多元醇等，均为肽吸收促进剂、修饰剂和稳定剂，所以本发明性能较稳定，对人体更安全，药理活性更强；(三)活性肽结合硒离子(含硒肽)，由小肠肠壁细胞吸收后再释放进入血液，从而避免了硒离子在小肠的中性和偏碱性环境中沉淀，提高抗肿瘤的协同效果；(四)所含的中药及多肽具有活化血小板间黏附作用。为了证实本发明对抗肿瘤及抗氧化抗缺氧作用的效果，我们分别做了以下试验。(一)抗肿瘤药效学试验
(I)、药物来源与配制硒环肽 脂肪酸合剂，20毫升口服液，按生药I :1提取。用前以蒸馏水配制成试验所需浓度的混悬液。(2)、试验动物试验采用体重18_22g昆明小鼠，雌雄兼用，但每批试验性别相同，由中国医学科学院动物中心提供。(3)、试验方法取生长良好的小鼠可移植肿瘤Lewis肺癌、肝癌H22及肉瘤S180，按抗癌药药效学实验技术要求常规接种小鼠，于接种后24小时分组给药。试验共分五组， 每组10只鼠，设对照组，环磷酰胺阳性药组(常规方法)，硒环肽·脂肪酸合剂I. 25,2. 5、
3.75g/kg三剂量组。环磷酰胺60mg/kg腹腔注射一次,硒环肽·脂肪酸合剂灌胃给药连续9次。停药后24小时处死动物，剥瘤称重，计算抑瘤率，并进行统计学处理。(4)、试验结果
I、对小鼠Lewis肺癌的疗效试验
三批试验结果，硒环肽 脂肪酸合剂I. 25g/kg组的抑瘤率分别为31. 0%、26. 3%,25. 2%(P < O. OUp < O. 05,P < O. 05)；2. 5g/kg组的抑瘤率分别为 36. 3%、31· 6%,41. 0%(p < O. 01、P < O. 01、P < O. 001) ；3. 75g/kg 组的抑瘤率分别为 51. 0%、38· 3%,41. 2% (p < O. 001、p
<O. OUp < O. 001)。2、硒环肽·脂肪酸合剂对小鼠肝癌H22的疗效试验
三批试验结果，I. 25g/kg 组的抑率分别为 16. 7%,36. 1%、23· 9% (p < O. 05、p < O. 001、P < O. 01) ；2. 5g/kg 组的抑瘤率分别为 22. 5%,35. 6%,22. 4%( p < O. 05、p < O. 001、p
<O. 05) ；3. 75g/kg 组的抑瘤率分别为 29. 6%,41. 4%,34. 2%( p < O. 01、p < O. 001、p
<O. 001)。3、硒环肽 脂肪酸合剂对小鼠肉瘤S180的疗效试验三批试验结果，硒环肽 月旨肪酸合剂I. 25g/kg组的抑瘤率分别为33. 7%,24. 1%、29· 7%( p均〈O. 05) ；2. 5g/kg组的抑瘤率分别为 35. 2%,32. 7%、21· 8%( p 均〈O. 05) ；3. 75g/kg 组的抑瘤率分别为 45. 9%,40. 6%、33. 6%( ρ〈0· 05、P < O. 01、ρ〈0· 05)。(5)、试验结论硒环肽·脂肪酸合剂I. 25,2. 5,3. 75g/kg三剂量组对小鼠肉瘤S180有明显抑瘤作用，对小鼠Lewis肺癌、肝癌H22均表现了明显抑瘤作用，且呈剂量关系。其中对小鼠Lewis肺癌疗效更明显，硒环肽 脂肪酸合剂大剂量4. 74g/kg组平均抑瘤率达63. 8%。(二)抗氧化试验
硒环肽 脂肪酸合剂有总黄酮中药成分，具有抗氧化功效。对此我们进行了试验。方法如下以硒环肽·脂肪酸合剂(20毫升口服液一I 1原药材提取)、给以老龄BAL B/C小鼠灌胃45 d后测定与抗氧化延缓衰老有关的生化指标。结果硒环肽 脂肪酸合剂能使肝超氧化物歧化酶(S0D)活性显著增强；全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px)和过氧化氢酶(CAT)活性显著提高。结论硒环肽 脂肪酸合剂具有较明显的抗氧化作用。实施例按下述配方比称取原料
人参5份菌草10份枸杞子11份五味子4份薏该仁15份获茶8份
太子参12份桅子5份硒O. 0000029份。
实施例生产方法
(I)将人参、茜草、五味子、茯苓、太子参按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I. 5小时，滤过醇提液备用，药渣分别保存；(2)将枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的药渣，进行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小时处理，药液过滤；(3)把醇提药液、水提药液混合后接入微生物蛋白酶(谷草杆菌)，在温度25-28° C、PH6. 5—7、搅拌200rpm条件下进行酶解4小时，产生环肽，灭酶；(4)将上述药液浓缩，调ph值7-10，在温度40° C、每分钟搅拌80次的条件下进行厌氧发酵产酸(短链脂肪酸)，时
间10天；(5)过滤纯化，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度(药材水为1:0. 86)，再按上述配方比例加硒粉混悬液，强力搅拌2小时，产生含硒肽，及时灌装扎封，105° C流通蒸汽灭菌30分钟，既得硒环肽·脂肪酸合剂。
权利要求
1.一种抗肿瘤抗氧化的硒环肽·脂肪酸合剂，其特征在于它是由下述重量配比的原料和方法制成的合剂 人参2-15份茜草3-20份枸杞子5-25份 五味子2-10份薏苡仁7-30份茯苓5-20份 太子参8-30份桅子4-20份硒O. 000001-0. 002份 将上述配比的原料混合后粉碎制成粗粉，用常规提取方法得到水煎药液，加入酶进行微生物发酵培养，调PH值，加热灭酶，冷却，过滤纯化，既得，再按常规方法制成药物剂型。
2.根据权利要求I所述的合剂，其特征在于所说的制备方法包括以下步骤(I)将人参、茜草、五味子、茯苓、太子参按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I.5小时，滤过醇提液备用，药渣分别保存；(2)将枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的药渣，进行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小时处理，药液过滤；(3)把醇提药液、水提药液混合后接入微生物蛋白酶，在温度25-28° C、pH6. 5— 7、搅拌条件下进行酶解3-5小时，产生肽，灭酶；(4)将上述药液浓缩，调ph值7-10，在温度20-42° C、每分钟搅拌60-80次的条件下进行厌氧发酵生产短链脂肪酸，时间7-30天；(5)冷却，过滤纯化，按上述配方比例加硒，再按常规方法制成药物剂型，既得硒环肽·脂肪酸合剂。
3.根据权利要求I或2所述的合剂，其特征在于所说的合剂可加工成保健食品。
全文摘要
“硒环肽·脂肪酸合剂”是以中药人参、茜草、枸杞子、五味子、薏苡仁、茯苓、太子参、栀子、硒等为基原，利用现代微生物发酵技术制备的，具有全新化学结构的组蛋白去乙酰化酶纯天然增效性组合抑制剂，包括含硒肽、环肽、短链脂肪酸等组合化合物，属于新型抗肿瘤作用机制的肿瘤表观遗传调控药物，与传统的肿瘤治疗药物不同，它以癌细胞异常的表观遗传作为靶点进行饱和攻击，并通过诱导患者自身的免疫监测和免疫杀伤作用而发挥整体协同抗肿瘤作用，并且抗氧化，纯天然无化学污染。
文档编号A61K36/8994GK102772696SQ20121018833
公开日2012年11月14日 申请日期2012年6月9日 优先权日2012年6月9日
发明者杨京润, 杨吉星 申请人:北京港生药业科技有限公司