风轮菜活血化瘀有效部位中得到的1个新的异戊烯基萘醌及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及的是从风轮菜活血化瘀有效部位中分离得到的1个结构新颖的异戊烯基萘醌。用水对风轮菜干燥地上部分进行提取，提取物经大孔树脂纯化富集后，得到50-95％乙醇洗脱物，再经碱提酸沉法富集，精制后即得到本发明中的风轮菜有效部位。采用各种柱色谱等分离技术从该风轮菜有效部位中分离得到1个新的异戊烯基萘醌。应用现代波谱技术(IR，UV，MS，1D，2D-NMR)鉴定分离所得的化合物，并命名为2，2-dimethyl-3，10-dihydroxy-3，4，4a，10b-tetrahydro-5H-naphtho[1，2-b]-pyran-6-one(1)。其特征是该化合物为结构新颖的萘醌和/或异戊烯的聚合物。
【专利说明】风轮菜活血化瘀有效部位中得到的1个新的异戊烯基萘醌及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及通过植物化学提取分离手段从唇形科风轮菜属植物风轮菜(Clinopodium chinense (Benth.) 0.Kuntze.)活血化瘀有效部位分离得到I个新的异戍烯基萘醌，在该有效部位活血化瘀活性、新化合物的结构、制备方法及其在制备心血管治疗药物中的应用等方面申请专利保护。
【背景技术】:[0002]风轮菜(Clinopodiumchinense (Benth.) 0.Kuntze.)为唇形科风轮菜属植物。该属植物全球约有20余种,主要分布于欧洲、中亚及亚洲东部,在我国有11个种,5个变种和I个变型。风轮菜在我国主要分布于山东、浙江、江苏、安徽、福建、台湾、湖南、湖北、广东、广西及云南东北部。风轮菜性凉，味苦辛，有疏风清热，解毒消肿之功。治感冒、中暑、过敏性皮炎、肠炎、痢疾、血尿等症。首载于《救荒本草》(1406)草部，在我国有悠久的民间药用历史。现已被《中华人民共和国药典》收载，主要用于治疗各种出血症。风轮菜中主要的化学成分为黄酮类和三萜皂苷类。现代药理学研究表明，三萜皂苷是风轮菜止血的主要活性成分。而本课题组的前期研究发现，该风轮菜的有效部位具有活血化瘀，治疗心血管疾病的作用。因此风轮菜止血加活血的双向作用，可以达到止血而不留淤的效果，在治疗和/或预防心血管疾病方面具有良好的研究开发前景。
[0003]本发明所涉及的是从风轮菜活血化瘀有效部位中得到的I个新的异戊烯基萘醌:2,2-dimethyl_3,10-d1-hydroxy-3,4,4a,10b-tetrahydro-5H-naphtho[I，2-b]-pyran-6-one(l)。迄今为止，以上研究成果尚未有专利或文献报道。
[0004]本发明的有益效果和意义在于:充分利用风轮菜药用植物资源，深入研究开发，寻找具有独特化学结构，活血化瘀活性较强且毒副作用小的化合物，以期发现可用于临床的活血化瘀药物。
【发明内容】
[0005]本实验室利用现代分离技术和结构测定手段对唇形科风轮菜属植物风轮菜活血化瘀有效部位进行化学成分研究过程中，从中分离得到I个新的异戊烯基萘醌衍生物:2, 2-dimethyl_3,10-dihydroxy-3,4,4a,10b-tetrahydro-5H-naphtho[I，2-b] -pyran-6-one (I) ?此化合物为萘醌和/或异戍烯聚合物。通过对该风轮菜有效部位进行体外活血化瘀的药效学研究试验，发现该有效部位具有明显的活血化瘀活性。迄今为止，以上研究成果尚未有专利或文献报道。
[0006]本发明还提供制备这个新化合物的方法。
[0007]本发明的技术方案据此包含以下步骤:
[0008]取风轮菜的干燥地上部分，净选、切段，用水进行提取。提取液经浓缩干燥后得的提取物，经大孔树脂层析，以乙醇-水(0%-95%)为洗脱剂，得到50-95%洗脱物，经碱提酸沉法富集，精制后得到风轮菜总黄酮。风轮菜总黄酮利用硅胶柱色谱进行粗分离，以氯仿-甲醇不同比例的混合溶剂进行梯度洗脱，其中氯仿:甲醇(97: 3)洗脱所得流分12-48经反相ODS柱色谱分离，以甲醇-水梯度洗脱，其中甲醇:水(40: 60)洗脱部分经Sephadex LH-20凝胶柱分离，以甲醇洗脱，收集流分3经反相高压制备液相色谱制备(MeOH: H2O = 39: 61，210nm，2ml/min)，得到化合物 I (15mg)。其结构见图1。
[0009]化合物1:白色针状结晶(甲醇)。HRES1-MS在285.1098处给出分子离子峰[M+Na]+，显示其分子量为262，推测分子式为C15H18O4，不饱和度为7。IR光谱显示该化合物中存在羟基(3446cm O ,苯环(1602cm 丨、1588cm 丨)，，擬基(1680cm1),甲基(1370cm1)。从1H-NMR (600MHz, CD3OD)谱可观察到3个邻位偶合的芳香氢信号δ Η7.41 (1Η，d，J = 7.8Hz，H-7), 7.29 (1H, t，J = 7.8Hz, H_8)，7.11 (1H, d, J = 7.8Hz, H_9)，2 个甲基信号 1.17 (3H,s，2-CH3)，1.09(3H，s，2' -CH3)及一些脂肪链氢信号，5.14(1H，d，J = 5.4Hz, H_10b)，
3.99 (1H, t, J = 7.8Hz, H_3)，2.94 (1H, m, H_4a)，2.86 (1H, dd, J = 15.6,9.6Hz, H_5 β )，2.59 (1H, dd, J = 16.2,5.4Hz, H_5 a )，2.24 (1H，dt, J = 12.6,7.8Hz, H_4 β )，1.63 (1H，ddd, J = 12.6,7.8,5.4Hz，H_4a)。13CAPT-NMR (150MHz，CD3OD)谱给出了 15 个碳原子信号，包括2个甲基，2个亚甲基，6个次甲基和5个季碳原子，其中有三个连氧碳原子δ。88.2、74.3,72.10 1H-1H COSY 谱通过 7.29 (Η-8)与 7.41 (Η-7)，，7.11 (Η-9)的相关，2.94 (H_4a)与 2.24 (Η-4 β )，1.63 (Η_4 α )，2.86 (Η_5 β )，2.59 (Η_5 α ) ,5.14 (H-1Ob)的相关，以及2.24 (Η-4 β ),1.63 (Η-4 α )与3.99 (Η_3)的相关，给出I个邻位三取代苯和I个异戊烯基片段。在 HMBC 谱中，δΗ1.17 (2-CH3) ,1.09(2 ' -CH3)与 δ c72.1 (C_2)，88.2 (C—3)远程相关，5.14 (H-1Ob)与 158.8 (C-10)，128.1 (C-1Oa)，134.4 (C_6a)远程相关，2.86 (H-5 β )，
2.59 (H-5 a ),7.41 (H-7)与 200.6 (C-6)远程相关，7.11 (H-9)与 158.8 (C-10)远程相关。由此确定了 2个片段的链接位置及羟基的链接位置。所有1H-NMR和13C-NMR信号通过HMBC，HSQC 都得以归属(见表 I)，故化合物 I 鉴定为 2，2-dimethyl-3，10-dihydroxy-3，4，4a，10b-tetrahydro-5H_naphtho [I, 2_b]-pyran-6-one。该化合物为新化合物。
[0010]图1化合物结构
[0011]
【权利要求】
1.从风轮菜活血化瘀有效部位得到I个新的异戊烯基萘醌，其特征在于其是由唇形科风轮菜属植物风轮菜的干燥地上部分提取分离的到的，化学结构式为:
2.权利要求1所述的新化合物，其特征在于:
化合物 I 为:2, 2-dimethyl_3,10-dihydroxy-3,4,4a, 10b-tetrahydro-5H-naphto [I,2-b]-pyran-6-0ne。白色针状结晶，其分子式为C15H18O4,分子量为262.1205 (计算值)；[a]i5 -75.0 (c 0.12, MeOH); UV (MeOH) λ 隱(log ε ) 205nm (2.412) , 220nm (2.070),256nm(0.705)，315nm(0.342) ； IR (KBr) vmax3446cm_1,1680cm-1,1602cm-1,1588cm-1,1370cm-1 ；CD (0.076mmol/L, Me OH) Δ ε 343, +1.3, Δ ε 257, +6.6, Δ ε 200, -86.5。化合物 I 为新化合物。
3.权利要求1所述的风轮菜有效部位经体外活血化瘀药效学试验研究证明，在活血化瘀，治疗和/或预防心血管疾病方面具有显著的作用。
4.权利要求1-2所述的新的异戊烯基萘醌(化合物I)的制备方法，包括以下步骤: 风轮菜属植物风轮菜的干燥地上部分，净选、切段，用水进行提取。提取液经浓缩干燥后得提取物，经大孔树脂层析，以乙醇-水(0%-95%)为洗脱剂，得到50-95%洗脱物，经碱提酸沉法富集，精制后得到风轮菜活血化瘀有效部位。有效部位经硅胶柱色谱层析，ODS柱色谱层析和S印hadex LH-20凝胶柱色谱层析后，以甲醇和水作为流动相，利用高效液相制备色谱纯化制备得到化合物2, 2-dimethy 1-3,10-dihydroxy-3,4,4a,10b-tetrahydro-5H-naphto[I,2_b]-pyran-6-one(I)。
5.权利要求1 所述的新化合物 2, 2-dimethyl_3,10-dihydroxy-3,4,4a,10b-tetrahydro-5H_naphto [I, 2-b]-pyran-6_one (I)在制备心血管治疗药物方面的应用。
【文档编号】A61K31/352GK103664859SQ201210323483
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月5日 优先权日:2012年9月5日
【发明者】许旭东, 孙桂波, 钟明亮, 余世春, 孙广利, 张小坡, 吴海峰, 郑庆霞, 吴丽真, 马国需, 孙照翠 申请人:中国医学科学院药用植物研究所