专利名称：疏清颗粒在制备抗手足口病病原体的药物中的应用的制作方法
疏清颗粒在制备抗手足口病病原体的药物中的应用技术领域
本发明属于中药领域，尤其是指疏清颗粒新的药物用途。
背景技术：
疏清颗粒是目前正在使用的中药药物，它的处方是石膏950g，大青叶570g，桑叶 570g，芦根570g，甘草190g;制备方法是以上五味，取大青叶、芦根、桑叶、甘草，照流浸膏剂项下渗漉法(中国药典2010年版一部附录10)，加65%药材量的75%乙醇浸溃72小时，以IOOml/分钟流速渗漉，收集10倍药材量渗漉液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度I.35^1. 38 (75°C)的清膏，再取石膏，加7倍药材量的水先煎煮20分钟后，加入浸渣，继续煎煮45分钟，共煎煮2次，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度I. 35 I. 38 (75°C)的清膏，合并两清膏，搅匀，取清膏I份、糊精I份，混匀，制粒，干燥，制成1000个，即得。功能与主治清热解毒，宣泄肺胃。用于小儿急性上呼吸道感染属风热证，证见发热，鼻塞、咽痛、 流涕、口渴、咳嗽、汗出、舌红或苔薄黄。用法与用量口服，I岁以下，一次3g ;1 3岁，一次6g ;4 6 —次9g ;7岁以上，一次12g ;—日3次。注意宜饭后服用，禁与茶及含鞣酸类药合用，肝功严重损害者禁用；体弱者慎用。个别患者发生恶心、呕吐、腹泻。规格每袋装 6g。
手足口病是一种儿童传染病，又名发疹性水疱性口腔炎。多发生于5岁以下儿童， 可引起手、足、口腔等部位的疱疹，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。该病以手、足和口腔粘膜疱疹或破溃后形成溃疡为主要临床症状。手足口病是由肠道病毒引起的传染病，引发手足口病的肠道病毒有20多种(型)，其中以柯萨奇病毒A16型(Cox A16)和肠道病毒71型(EV71)为主。近年来手足口病的流行严重威胁了我国婴幼儿健康， 鉴于手足口病重症病例的病死率逐渐上升，中华人民共和国卫生部已将其列入丙类管理的传染病。
Cox A16属小RNA病毒科肠道病毒属A组肠道病毒成员，适合在湿、热的环境下生存与传播，对乙醚、去氯胆酸盐等不敏感，75%酒精和5%来苏亦不能将其灭活，但对紫外线及干燥敏感。各种氧化剂(高锰酸钾、漂白粉等)、甲醛、碘酒都能灭活病毒。Cox A16 感染引起的手足口病由于症状轻微，合并症发生率低和自限性等特点而未得到足够的重视。近年有报道指出Cox A16感染可能与心肌炎、心包炎及其它严重疾病有关，甚至还可引起成人致死性肺炎。所以选择有效的抗Cox A16的药物及治疗迫在眉睫。相对于价格高昂、缺乏理想抗病毒活性的传统西药，选择价格低廉、药源广泛和不易产生抗药性的中药尤为需要。发明内容
本发明提供一种疏清颗粒在制备抗手足口病病原体的药物中的应用，以解决目前传统西药价格高昂、抗病毒活性不理想的问题。
本发明采取的技术方案是疏清颗粒在制备抗手足口病病原体的药物中的应用。
疏清颗粒在制备抗肠道病毒71型的药物中的应用。
疏清颗粒在制备抗柯萨奇病毒A16型的药物中的应用。
本发明所述疏清颗粒的处方是石膏90(Tl000g,大青叶54(T600g,桑叶54(T600g, 芦根54(T600g，甘草17(T210g ;制备方法是以上五味，取大青叶、芦根、桑叶、甘草，照流浸膏剂项下渗漉法(中国药典2010年版一部附录10)，加65%药材量的75%乙醇浸溃72小时，以IOOml/分钟流速渗漉，收集10倍药材量渗漉液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度I.35^1. 38 (75°C)的清膏，再取石膏，加7倍药材量的水先煎煮20分钟后，加入浸渣，继续煎煮45分钟，共煎煮2次，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度I. 35^1. 38(75°C)的清膏， 合并两清膏，搅匀，取清膏I份、糊精I份，混匀，制粒，干燥，制成1000个，即得。
本发明所述疏清颗粒的处方是石膏950g，大青叶570g，桑叶570g，芦根570g，甘草 190go
本发明抗病毒中药“疏清颗粒”具有清热解毒，宣泄肺胃之功效，用于小儿急性上呼吸道感染属风热证，证见发热，鼻塞、咽痛、流涕、口渴、咳嗽、汗出、舌红或苔薄黄。价格低廉、药源广泛和不易产生抗药性等优点。本专利证明其还具有治疗手足口病的功效，将为传统抗病毒中药的推广、以及有效地预防、治疗手足口病提供科学依据。用法与用量口服， I岁以下，一次3g ;1 3岁，一次6g ;4 6 —次9g ；7岁以上,一次12g ;—日3次。注意 宜饭后服用，禁与茶及含鞣酸类药合用，肝功严重损害者禁用；体弱者慎用。个别患者发生恶心、呕吐、腹泻。规格每袋装6g。
具体实施方式
本发明所述疏清颗粒的处方是石膏90(Tl000g,大青叶54(T600g,桑叶54(T600g, 芦根 54(T600g，甘草 17(T210g ；本实施例优选的疏清颗粒处方是石膏950g，大青叶570g，桑叶570g，芦根570g，甘草190g ;制备方法是以上五味，取大青叶、芦根、桑叶、甘草，照流浸膏剂项下渗漉法(中国药典2010年版一部附录10)，加65%药材量的75%乙醇浸溃72小时，以IOOml/分钟流速渗漉，收集10倍药材量渗漉液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度I. 35 I. 38 (75°C)的清膏，再取石膏，加7 倍药材量的水先煎煮20分钟后，加入浸渣，继续煎煮45分钟，共煎煮2次，滤过，合并滤液， 减压浓缩至相对密度I. 35^1. 38 (75°C)的清膏，合并两清膏，搅匀，取清膏I份、糊精I份， 混勻，制粒，干燥，制成1000个，即得。用法与用量口服，I岁以下，一次3g ;1 3岁，一次 6g ;4 6 —次9g ;7岁以上，一次12g ;—日3次。
疏清颗粒在制备抗手足口病病原体的药物中的应用。
疏清颗粒在制备抗肠道病毒71型的药物中的应用。
疏清颗粒在制备抗柯萨奇病毒A16型的药物中的应用。
下面通过试验来进一步验证本发明的药效。
试验例I疏清颗粒对抗肠道病毒71型(EV71)的体外抗病毒研究 I材料I.I细胞横纹肌肉瘤(RD)细胞，吉林大学白求恩医学院分子病毒学实验室保存。细胞培养液分别为含2%、10%胎牛血清(GIBCO)的DMEM培养基(HyClone，批号NXD0607)和无血清的DMEM液。
I. 2病毒及检测试剂盒EV71病毒为临床分离株，经本实验室分离和qPCR鉴定，使用前经RD细胞扩增，所有毒株均置一 80°C保存备用。qPCR检测试剂盒肠道病毒71型病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)，YZB/国5939-2011。
1.3药物疏清颗粒(吉林华康药业股份有限公司，批号120602)，板蓝根颗粒 (南宁市维威制药有限公司，批号120405)。两种药物均用无血清的DMEM培养液配制成质量浓度为100mg/ml，过滤除菌后做为储备液，4°C保存。
2 方法2.I EV71半数组织培养感染量(TCID5tl)的测定超净台内将培养不超过7天，形态良好，生长旺盛的RD细胞，制成I X 105/ml细胞悬液， 每孔100 μ I接种于96孔板中，37°C，5% CO2培养24 h至细胞长成单层。生物安全柜内用无血清DMEM液进行10倍倍比稀释制备ICT1 -IO-10共10个稀释度的病毒液接种于上述已准备好的细胞中，每个稀释度设3个复孔，每孔100 μ 1，置于37°C，5% CO2饱和湿度孵箱中继续培养。第3天开始每天在倒置显微镜下观察细胞病变情况，记录细胞病变程度(CPE)。 CPE判定标准:无CPE，记录为(-)；0- 25% CPE，记录为(+ ) ；25%-50% CPE，记录为(+ + ) ；50%-75% CPE，记录为(+ + + ) ；75% -100% CPE，记录为(+ + + + )。第 7-8 天判定结果，按Reed-Muench法计算TCID5tl,判定公式为距离比例=(高于50%病变百分数-50%)/ (高于50%病变率的百分数-低于50%病变百分数)TCID5tl的对数=高于50%病变的病毒最高稀释度对数十距离比例X稀释系数的对数2.2疏清颗粒和板蓝根颗粒的抗病毒作用及半数有效浓度(IC5tl)的测定设细胞空白对照、病毒对照、板蓝根颗粒阳性对照和疏清颗粒药物组，共4个组。在超净台中，将浓度为2 X 105/ml的RD细胞悬液按每孔100 μ I接种于96孔板，37°C，5%C02培养 24 h，待细胞长成单层后弃去培养液，加入20 μ IIOOTCID5ci的EV71病毒液感染细胞，吸附一小时后，洗去病毒液。板蓝根颗粒及疏清颗粒储备液经10倍倍比稀释为10-0. 001 g · Γ1 的5个浓度梯度，各孔加入不同浓度的中药100 μ 1，孵育48小时，倒置显微镜观察药物对细胞病变的抑制作用后，弃去药液。每孔加5mg/mlMTT 10 μ 1，继续培养4h后，弃去培养液，加 DMSO每孔100 μ I溶解，用酶标仪测定各孔在波长492nm处吸光度值A492。按下列公式计算药物对病毒的抑制率，并用Probit回归法计算药物抑制病毒的IC5Q。
病毒抑制率=(A492药物-A492病毒)/ (A492正常-A492病毒)X 100%2.3统计学方法以上各实验重复3次，统计数据采用均数土标准差(X土 s)表示，所得数据构成计量资料，采用t检验进行统计分析，P < O. 05为差异有显著性。
3.结果3.I EV71病毒经qPCR试剂盒检测，结果为阳性。
3. 2 EV71 TCID50 的测定 EV71 的 TCID5ci=KT6.323.3疏清颗粒的抗病毒作用及半数有效浓度IC5tl的测定本研究采用MTT法检测药物的体外抗病毒效应，并计算疏清颗粒及对照药物不同浓度下的病毒抑制率及半数有效浓度IC5tl，结果如表I所示。
表I疏清颗粒体外抗EV71病毒作用
权利要求
1.疏清颗粒在制备抗手足口病病原体的药物中的应用。
2.疏清颗粒在制备抗肠道病毒71型的药物中的应用。
3.疏清颗粒在制备抗柯萨奇病毒A16型的药物中的应用。
4.如权利要求I或2或3所述的疏清颗粒是由如下质量份数的原料制成的石膏 90(Tl000g，大青叶 54(T600g，桑叶 54(T600g，芦根 54(T600g，甘草 17(T210g。
5.如权利要求4所述的疏清颗粒是由如下质量份数的原料制成的石膏950g，大青叶 570g,桑叶 570g，芦根 570g，甘草 190g。
6.如权利要求I或2或3所述的疏清颗粒的制备方法是取大青叶、芦根、桑叶、甘草， 照中国药典2010年版一部附录10流浸膏剂项下渗漉法，加65%药材量的75%乙醇浸溃72 小时，以IOOml/分钟流速渗漉，收集10倍药材量渗漉液，减压回收乙醇，并浓缩至75°C时测相对密度I. 35^1. 38的清膏，再取石膏，加7倍药材量的水先煎煮20分钟后，加入浸渣，继续煎煮45分钟，共煎煮2次，滤过，合并滤液，减压浓缩至75°C时测相对密度I. 35^1. 38的清膏，合并两清膏，搅匀，取清膏I份、糊精I份，混匀，制粒，干燥，制成1000个。
7.如权利要求5所述的疏清颗粒的制备方法是取大青叶、芦根、桑叶、甘草，照中国药典2010年版一部附录10流浸膏剂项下渗漉法，加65%药材量的75%乙醇浸溃72小时，以 IOOml/分钟流速渗漉，收集10倍药材量渗漉液，减压回收乙醇，并浓缩至75°C时测相对密度I. 35^1. 38的清膏，再取石膏，加7倍药材量的水先煎煮20分钟后，加入浸渣，继续煎煮 45分钟，共煎煮2次，滤过，合并滤液，减压浓缩至75°C时测相对密度I. 35^1. 38的清膏，合并两清膏，搅匀，取清膏I份、糊精I份，混匀，制粒，干燥，制成1000个。
全文摘要
本发明涉及一种疏清颗粒在制备抗手足口病病原体的药物中的应用，属于中药领域。疏清颗粒在制备抗手足口病病原体的药物中的应用；疏清颗粒在制备抗肠道病毒71型的药物中的应用；疏清颗粒在制备抗柯萨奇病毒A16型的药物中的应用。本发明证明其还具有治疗手足口病的功效，将为传统抗病毒中药的推广、以及有效地预防、治疗手足口病提供科学依据。
文档编号A61K36/899GK102920944SQ201210478230
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月22日 优先权日2012年11月22日
发明者王放, 王鑫磊, 呼洁, 刘传贵, 刘建伟, 张宇, 李平亚, 李凡 申请人:吉林华康药业股份有限公司