猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂，各成分的重量百分数为：明胶1.0-1.4%、蔗糖9-11%、海藻糖9-11%、聚乙烯吡咯酮0.15-0.35%、山梨醇0.3-0.8%、甘露醇0.3-0.8%、PEG-60000.1-0.2%、吐温-800.01-0.02%，pH值7.5，加水溶解后高温灭菌制得。将冻干保护剂与猪乙型脑炎活疫苗病毒液混合，冷冻干燥后即得冻干疫苗。本发明的耐热冻干保护剂配方简单，制备容易，适于大规模生产，对疫苗具有良好的保护功效，能确保疫苗在常温甚至37℃有效保存10天，在2-8℃保存24个月。
【专利说明】猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及兽用生物制品领域，具体地说，涉及一种猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用。
【背景技术】
[0002]乙型脑炎病毒又称日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus, JEV),简称乙脑病毒，属于黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属，所引起的疾病简称乙脑，最常见的是以三带喙库蚊为主要传播媒介的病毒性脑炎，它是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。猪是乙脑病毒的重要储存宿主和扩增宿主，是乙型脑炎的主要传染源，是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一，弱毒活疫苗是预防该传染病的主要疫苗之一，但猪乙型脑炎病毒在环境中极不稳定，在_20°C条件下仅可保存一年，而且毒价下降较多，因此研制猪乙型脑炎病毒耐热冻干保护剂对预防乙型脑炎病毒的流行和传染具有重要的作用和意义。
[0003]预防和控制猪乙型脑炎的最有效方法是接种疫苗,而疫苗在保存、运输和使用均需要使用到耐热冻干保护剂。常规的疫苗保护剂主要为脱脂牛奶、蔗糖、明胶等，组方简单、配制简便、易溶性良好，但热稳定性和保护功能差，产品的保存条件较为苛刻，大多需要在-15°C以下保存。在疫苗生产、运输以及使用过程中，如果冷链系统控制不当，疫苗保存环境温度升高，常常导致疫苗效力下降或失效，造成免疫失败。耐热冻干保护剂比常规的保护剂更周到地考虑了具有生物活性的制品在较高温度和较长时间保存的情况下，冻干物质可能产生的物理和化学变化对活疫苗存活的影响，通过填充、防冻、抗氧化、酸碱调整、羟基中和等一系列机制，确保病 毒在2_8°C条件下，保存期可达24个月，效价无明显下降，即使是较高的常温甚至37°C也可以保存十天以上，因而其保护性能要比传统保护剂更为优良，从而使活苗的储存、运输和使用更方便、经济。
[0004]目前，目前尚未见有关猪乙型脑炎耐热冻干保护剂的研究报导。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种配制方法简单、成本低、具有良好保护性能的猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂。
[0006]本发明的另一个目的是提供所述猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法。
[0007]本发明的再一个目的是提供所述猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂的应用。
[0008]为了实现本发明目的，本发明的一种猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂，各成分的重量百分数为:明胶1.0-1.4%、蔗糖9-11%、海藻糖9-11%、聚乙烯吡咯酮0.15-0.35%、山梨醇 0.3-0.8%、甘露醇 0.3-0.8%,PEG-60000.1-0.2%、吐温-800.01-0.02%, pH 值 7.5，以水配制。其中，所述水为纯净水、蒸馏水或注射用水。
[0009]优选地，各成分的重量百分数为:明胶1.2%、蔗糖10%、海藻糖10%、聚乙烯吡咯酮
0.25%、山梨醇 0.5%、甘露醇 0.5%、PEG-60000.1%、吐温-800.01%, pH 值 7.5，以水配制。
[0010]其中，明胶、山梨醇、甘露醇、PEG-6000可防止有效成分随水蒸气一起升华逸散，并对微生物有保护作用，可促进升华形成耐热骨架，阻断热传导和热辐射；海藻糖是一种稳定的非还原性二糖，具有较高的玻璃化转变温度，水化能力虽与蔗糖基本相同，但保护作用却远高于蔗糖，常与聚乙烯吡咯酮(PVP)联合使用，可起到良好的低温、干燥保护剂作用；吐温-80在冻结和脱水过程中既能降低冰、水界面张力所引起的冻结和脱水变形，又能在复水过程中对活性组分起到润湿剂和重皱褶剂的作用。同时，蔗糖、PVP可作为冻干剂，能防止和减少冷冻过程结晶水的形成。
[0011]本发明还提供所述猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法:按比例称取各成分，溶于水中，用盐酸(例如lmol/L盐酸溶液)调pH值7.5，高温灭菌后即得。其中，高温灭菌的条件为:110°C灭菌30分钟。
[0012]本发明还提供所述猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂在制备猪乙型脑炎活疫苗中的应用。
[0013]前述的应用，其是将猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂与病毒液等体积混合，然后进行冷冻干燥处理，即得猪乙型脑炎活疫苗产品。
[0014]其中，冷冻干燥的条件为:预冻阶段最低温度_40°C，达到最低温度后维持2小时；升华干燥阶段最终温度_20°C，达到最终温度的时间为17小时，真空压力控制在0.1Smbar ；解吸干燥阶段最终温度28°C，真空压力控制在0.005mbar，运行8小时。
[0015]优选地，所述病毒液为猪乙型脑炎病毒SA14-14-2株的培养液。冻干后疫苗每头份JEV病毒含量应≥105PFU。
[0016]本发明还提供一种猪乙型脑炎活疫苗产品，向病毒液中加入所述猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂，并将得到的混合液进行冷冻干燥处理，即得猪乙型脑炎活疫苗产品。
[0017]优选地，前述猪乙型脑炎活疫苗产品中，病毒液与猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂按等体积混合。
[0018]本发明的优点在于:
[0019](一)本发明的耐热冻干保护剂能够减少制品在冷冻干燥过程中各种理化因素可能对病毒活性的损伤，使冻干前后病毒的损失率较低，不超过I个滴度；
[0020](二)本发明的耐热冻干保护剂活疫苗耐老化程度高，在37°C条件下保存10天，病毒损失率均不超过1.5个滴度，在2-8°C保存24个月，病毒含量仍不发生明显改变，有效解决了常规保护剂活疫苗需冷冻运输、储存不便等问题；
[0021](三)本发明的耐热冻干保护剂在保证耐热性能好、能有效保护活疫苗的前提下，还具有配方成分及配制方法简单、成本低、可实现大量生产等优点，有效克服了现有耐热冻干保护剂存在的成分复杂和成本高等缺陷。
【具体实施方式】
[0022]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
[0023]本发明中涉及到的百分号“％”，若未特别说明，是指重量百分比；但溶液的百分t匕，除另有规定外，是指IOOmL溶液中含有溶质的克数。
[0024]实施例1-3猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂及其制备
[0025](I)冻干保护剂的配方[0026]冻干保护剂的配方见表1，pH值7.5，以水配制。
[0027]表1本发明猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂的配方
[0028]
【权利要求】
1.猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂，其特征在于，各成分的重量百分数为:明胶1.0-1.4%、蔗糖9-11%、海藻糖9-11%、聚乙烯吡咯酮0.15-0.35%、山梨醇0.3-0.8%、甘露醇0.3-0.8%、PEG-60000.1-0.2%、吐温-800.01-0.02%, pH 值 7.5，以水配制。
2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，各成分的重量百分数为:明胶1.2%、蔗糖10%、海藻糖10%、聚乙烯吡咯酮0.25%、山梨醇0.5%、甘露醇0.5%,PEG-60000.1%、吐温-800.01%, pH值7.5，以水配制。
3.权利要求1或2所述猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:将明胶、蔗糖、海藻糖、聚乙烯吡咯酮、山梨醇、甘露醇、PEG-6000、吐温-80，溶于水中，用盐酸调节pH值7.5，高温灭菌即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，高温灭菌的条件为:110°C灭菌30分钟。
5.权利要求1或2所述猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂在制备猪乙型脑炎活疫苗中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，将猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂与病毒液等体积混合，然后进行冷冻干燥处理，即得猪乙型脑炎活疫苗产品。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述病毒液为猪乙型脑炎病毒SA14-14-2株的培养液。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，冷冻干燥的条件为:预冻阶段最低温度-40°C，达到最低温度后维持2小时；升华干燥`阶段最终温度-20°C，达到最终温度的时间为17小时，真空压力控制在0.1Smbar ;解吸干燥阶段最终温度28°C，真空压力控制在0.005mbar,运行8小时。
9.一种猪乙型脑炎活疫苗冻干产品，其特征在于，向病毒液中加入权利要求1或2所述的猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂，并将得到的混合液进行冷冻干燥处理，即得猪乙型脑炎活疫苗冻干产品。
10.根据权利要求9所述的猪乙型脑炎活疫苗冻干产品，其特征在于，病毒液与猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂按等体积混合。
【文档编号】A61K47/32GK103656661SQ201310594427
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年11月21日 优先权日:2013年11月21日
【发明者】潘春刚, 姜国华, 郝霖雨, 段伟, 韩伟, 张岐蜀, 周建民, 胡小元, 尹立明 申请人:中牧实业股份有限公司