一种预防和治疗废用性骨质疏松的药物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种预防和治疗废用性骨质疏松的药物及其制备方法，所述药物包括以下原料药制成：熟地、续断、桑寄生、当归、桃仁、红花、牛膝、骨碎补和甘草，为补肾活血方。还可以包括黄芪和太子参，为益气补肾活血方。本发明的药物可改善废用性骨质疏松大鼠的骨代谢；可以降低ALP、BAP的含量，明显增加血Ca、BGP、BMP-2、HOP、HOP/Cr和TRAP的含量；可以降低TNF-α、IL-4、IL-6的含量，还可促进骨髓间充质干细胞增殖，有效增加BALP的活性，可增加骨形成，有助于治疗废用性骨质疏松；可明显促进破骨细胞增殖，可提高骨形成，降低骨吸收，促进骨量的增加，对废用性骨质疏松有一定得预防作用。
【专利说明】一种预防和治疗废用性骨质疏松的药物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种预防和治疗废用性骨质疏松的药物及其制备方法。
【背景技术】
[0002]废用性骨质疏松(Disuse Osteoporosis D0P),是由于机械应力对骨的作用减少从而导致机体局部或全身的骨量丢失和骨质量降低而出现的一种局部或全身的骨质疏松现象。临床中因各种疾病原因而必须长期卧床、运动能力受限和外科制动的患者以及宇航员都有可发生D0P。当制动导致骨的正常负荷减弱或者消失时，与外力负荷相对应的骨重建随之发生，引起机械强度下降，骨质萎缩。有研究表明，当病人卧床4周时，髂骨松质骨骨量开始下降，至卧床25周时骨量下降约为33%虽然在主动活动后可以慢慢恢复，但往往时间较长，已经成为骨关节疾病、外伤、骨关节手术后必须接受长期制动的患者术后恢复的重要障碍，甚至发生废用性骨质疏松骨折，进而影响原发病的治疗和康复。如何在卧床期间预防和减少骨量丢失，有效降低再次骨折的几率，缓解骨质疏松并发的疼痛，是医学界一直在探索的问题。
[0003]中医药独特的整体观念、辨证论治的思想和确定的临床效果，被广泛的运用到治疗骨质疏松的过程中，古代医籍中虽无废用性骨质疏松之病名，但根据其症状表现，可将其归于中医“骨痿”的范畴。在辨证论治的基础上，根据“肾主骨生髓”的理论，其临床治疗中多以补肾为主进行古方加减或自拟方进行治疗。如周志昆等用黄芪三仙汤治疗绝经后骨质疏松症，结果显示治疗组骨碱性磷酸酶(AKP)、4小时尿钙/肌酐及经脯氨酸/肌酐(HyP/cr)均显著性降低，而骨密度和 血清雌二醇均显著升高，检测BMD和血雌二醇水平均显著性升高，提示黄芪三仙汤可提高雌激素水平，从而改善骨代谢，防止骨丢失，这可能是通过提高患者垂体-性腺轴功能来实现的。邹小娟等用补肾壮骨通痹汤为基础方，治疗肾虚络痹所致的原发性骨质疏松；康毅用淫羊藿、白术、黄芪等组成补骨胶囊，用补肾健脾法治疗原发性骨质疏松症；何小琦等从补肾养血入手，用淫羊藿、巴戟天、金樱子、当归、白芍、大枣、何首乌等药治疗绝经后骨质疏松症，均取得较好的疗效。中医药治疗骨质疏松的不断发展有效提闻了临床效果。
[0004]目前，现有中医药治疗骨质疏松起到一定的疗效，但并不理想。因废用性骨质疏松起病隐匿，未得到足够的认识，因此治疗废用性骨质疏松的方剂较少。
【发明内容】
[0005]为解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的是提供一种预防和治疗废用性骨质疏松的药物，即益气补肾活血方，并通过建立废用性骨质疏松大鼠模型，模拟临床上废用性骨质疏松的生理病理过程，从多方面研究了益气补肾活血方对废用性骨质疏松的预防治疗作用。
[0006]为了实现上述目的，本发明提出如下技术方案:
[0007]—种预防和治疗废用性骨质疏松的药物，所述药物包括以下原料药制成:[0008]熟地、续断、桑寄生、当归、桃仁、红花、牛膝、骨碎补和甘草。
[0009]优选的，各原料药的重量份数为:熟地20 - 30份，续断10 - 20份，桑寄生10 —20份，当归10 - 15份，桃仁8 — 10份，红花10 — 15份，牛膝20 — 40份，骨碎补10 — 15份，甘草5 — 8份。
[0010]优选的，各原料药的重量份数为:熟地22 - 25份，续断14 一 17份，桑寄生12 —16份，当归11 - 13份，桃仁8 — 10份，红花10 — 13份，牛膝28 — 33份，骨碎补10 — 13份，甘草5 — 7份。
[0011]优选的，各原料药的重量份数为:熟地24份，续断15份，桑寄生15份，当归12份，桃仁9份，红花12份，牛膝30份，骨碎补12份，甘草6份。
[0012]优选的,还包括以下重量份的原料药:黄苗50 — 70份，太子参10 — 20份。
[0013]优选的，各原料药的重量份数为:黄芪55 - 65份，太子参13 — 16份，熟地22 —25份，续断14 - 17份，桑寄生12 - 16份，当归11 一 13份，桃仁8 — 10份，红花10 — 13份，牛膝28 - 33份，骨碎补10 - 13份，甘草5 — 7份。
[0014]优选的，各原料药的重量份数为:黄芪60份，太子参15份，熟地24份，续断15份，桑寄生15份，当归12份，桃仁9份，红花12份，牛膝30份，骨碎补12份，甘草6份。
[0015]本发明还提供上述的药物的制备方法，其特征在于，步骤是:称取配方量的原料药加药材体积5倍水，浸泡2h，第一次煎煮45min，倒出水煎液，加适量水，再次煎煮40min，合并两次水煎液，浓缩成 一定浓度(剂量为480mg生药/ml)，即得。
[0016]本发明的药物可显著改善废用性骨质疏松大鼠的骨代谢，明显增加大鼠骨密度(BMD)和骨矿含量(BMC)，有效增加骨湿重和骨干重，显著改善大鼠股骨的结构和功能，促进生物力学指标的优化；益气补肾活血方可以明显的降低血清碱性磷酸酶(ALP)、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)，明显增加血Ca、骨钙素(BGP)、骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)、尿羟脯氨酸HOP、HOP/Cr和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的含量；益气补肾活血方可以比较明显的降低肿瘤坏死因子-α (TNF-α )、白细胞介素-4 (IL_4)、白细胞介素_6 (IL_6)的含量,还可明显促进骨髓间充质干细胞增殖，有效增加骨源性碱性磷酸酶(BALP)的活性，通过显微镜下观察可发现交过骨髓间充质干细胞转化为了成骨细胞，一定程度上说明了益气补肾活血方可促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化，影响骨代谢，增加骨形成，有助于治疗废用性骨质疏松；可明显促进破骨细胞增殖，有效降低骨吸收陷窝的数量，说明了益气补肾活血方可在一定程度上提高骨形成，降低骨吸收，促进骨量的增加，对废用性骨质疏松有一定得预防作用。
[0017]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0018]下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但不能理解为对本发明的限制。
[0019]实施例:益气补肾活血方和补肾活血方及其制备方法
[0020]称取黄芪60g，太子参15g，熟地24g，续断15g，桑寄生15g，当归12g，桃仁9g，红花12g,牛膝30g,骨碎补12g,甘草6g ;加药材体积5倍水,浸泡2h,第一次煎煮45min,倒出水煎液，加适量水，再次煎煮40min，合并两次水煎液，浓缩成一定浓度(剂量为480mg生药/ml)，即得，称为益气补肾活血方剂。
[0021 ] 按上法称取熟地24g，续断15g，桑寄生15g，当归12g，桃仁9g，红花12g，牛膝30g，骨碎补12g，甘草6g。加药材体积5倍水，浸泡2h，第一次煎煮45min，倒出水煎液，加适量水，再次煎煮40min，合并两次水煎液，浓缩成一定浓度(剂量为480mg生药/ml )，即得，称为补肾活血方剂。
[0022]下面通过实验例I 一 4对本实施例制备的益气补肾活血方和补肾活血方治疗废用性骨质疏松的疗效进行评价。其中:
[0023]实验材料:药品为本实施例制备的益气补肾活血方和补肾活血方，购自济南市建联中药店(批号:20120501 ;生产许可证号:鲁20100043);戊巴比妥钠(PentobarbitalSodium),规格:25g/瓶,美国 Sigma(货号:P3761 );|丐尔奇碳酸钙 D3 片(Calcium Carbonateand Vitamin D3Tablets),规格:复方，惠氏制药有限公司(批号:20100735)。[0024]动物:老年雄性SD大鼠，体重(350±20) g，SPF级，购于济宁市任城区鲁原动物饲料经营部，动物许可证号=SCXK鲁20080002。
[0025]大鼠废用性骨质疏松模型的建立:
[0026]实验用大鼠分组:见具体实验例。
[0027]麻醉各实验组大鼠:将定量戊巴比妥钠加适量蒸馏水配制成1%质量百分浓度，实验组大鼠按照40mg/kg的浓度腹腔注射进行麻醉，待动物失去知觉时方可进行实验；空白对照组不做任何措施。
[0028]建立模型:用75%酒精将大鼠的右后肢和尾部近段进行消毒，同时对直径为1.2mm的医用钢丝进行消毒，然后将医用钢丝穿过大鼠的右后肢踝部和肛门开口远侧约1.5cm处的尾部，适当调整松紧程度进行打节固定，建模过程中若有出血的话即刻利用脱脂棉进行压迫止血，然后用石膏进行固定，使用聚氨酯石膏绷带缠绕至髋关节处2至3层，保持膝关节和踝关节于伸直位。整个过程完成后放入大鼠专用饲养笼中，每笼5只，在清洁级动物房中进行饲养，调整室温(20 ± 2 )°C，空气湿度为40~60%，每日按照自然昼夜12h间隔照明，为了避免石膏松动和肢体压疮，每2周更换一次石膏。
[0029]给药方案:制备大鼠废用性骨质疏松模型I周后，对各实验组大鼠分别进行灌胃给药，益气补肾活血方组:将益气补肾活血方剂按照4800mg/kg的浓度对大鼠进行灌胃，I次/天；补肾活血方组:将补肾活血方剂按照4800mg/kg的浓度对大鼠进行灌胃，I次/天；模型组和空白对照组:每只大鼠按照10ml/kg给予生理盐水进行灌胃，I次/天；钙尔奇组:将钙尔奇碳酸钙D3片用研钵研成细微粉末，然后用无菌蒸馏水配制成混悬液(Iml混悬液含有0.36mg钙尔奇碳酸钙D3)，然后按照3.6mg/kg的浓度对该组大鼠进行灌胃，I次/天；每组均连续给药I个月。
[0030]实验例1:益气补肾活血方和补肾活血方对废用性骨质疏松大鼠骨密度的影响
[0031]I骨密度(BMD)和骨矿含量(BMC)的测定
[0032]用1%戊巴比妥钠按照40mg/kg的浓度对各实验组大鼠腹腔注射进行麻醉，然后用注射器在每只大鼠的颈动脉处进行穿刺放血处死，铺一次性中单，将大鼠放置在骨密度仪检查床上，骨密度仪探头下，选用动物全身骨密度测定软件对被测大鼠进行全身扫描。
[0033]选择慢速扫描模式，76Kv电压，150 μ Α。在双能X射线骨密度分析仪的测量方式选项中选择系统默认标准测量对各实验组大鼠的全身、股骨和脊柱进行骨密度分析，并准确记录数据，测定各实验组大鼠的骨密度(BMD)和骨矿含量(BMC)，分别精确至0.01g和0.01g/cm2。
[0034]2骨湿重的测定:通过上述实验将各实验组大鼠麻醉处死并测定全身、股骨和脊柱的骨密度(BMD)和骨矿含量(BMC)后，切下每只大鼠的右后肢，用镊子小心剔除干净软组织，去除附着的肌肉组织和结缔组织，收取股骨进行骨湿重的实验测定，同时剥离胫骨，放入70%乙醇中固定，以备研究骨组织形态计量学的研究。用电子分析天平准确称取各实验组大鼠的新鲜股骨湿重，实验数据精确至0.01mg,并及时作好记录。
[0035]全部大鼠的股骨骨湿重测量完毕后，用浸透生理盐水的纱布将每组的右侧股骨包好，置于一20°C低温保存，以备下面的生物力学检测。
[0036]3股骨干重、灰重测量:进行完大鼠股骨生物力学的测定后，将各组大鼠的股骨标本收集好，全部置于高温炉(105±2) °C中烘烤I小时后称量股骨干重；精确记录各组大鼠股骨干重后，将各组标本置于800°C的马福炉中5.5小时，待其充分灰化后用1/10万电子分析天平测各组灰重。
[0037]4数据处理:全部数据采用SPSS18.0统计软件进行处理，数据结果以“均数土标准差”表示，各实验组结果之间采用单因素方差方法进行统计分析，P < 0.05为差异具有统计学意义，采用盲法评估。
[0038]5实验结果
[0039]5.1骨密度(BMD)和骨矿含量(BMC)结果
[0040]各实验组大鼠全身骨密度(BMD)和骨矿含量(BMC)的结果见表1_1。
[0041]表1-1益气补肾活血方对废用性骨质疏松大鼠全身BMD和BMC的影响U ±s)
[0042]
【权利要求】
1.一种预防和治疗废用性骨质疏松的药物，其特征在于，所述药物包括以下原料药制成: 熟地、续断、桑寄生、当归、桃仁、红花、牛膝、骨碎补和甘草。
2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，各原料药的重量份数为: 熟地20 - 30份，续断10 - 20份，桑寄生10 - 20份，当归10 — 15份，桃仁8 — 10份，红花10 - 15份，牛膝20 - 40份，骨碎补10 - 15份，甘草5 — 8份。
3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于，各原料药的重量份数为: 熟地22 - 25份，续断14 - 17份，桑寄生12 — 16份，当归11 — 13份，桃仁8 — 10份，红花10 - 13份，牛膝28 - 33份，骨碎补10 — 13份，甘草5 — 7份。
4.根据权利要求2所述的药物，其特征在于，各原料药的重量份数为: 熟地24份，续断15份，桑寄生15份，当归12份，桃仁9份，红花12份，牛膝30份，骨碎补12份，甘草6份。
5.根据权利要求2所述的药物，其特征在于，还包括以下重量份的原料药:黄芪50-70份，太子参10 - 20份。
6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，各原料药的重量份数为: 黄芪55 - 65份，太子参13 - 16份，熟地22 — 25份，续断14 一 17份，桑寄生12 —16份，当归11 - 13份，桃仁8 — 10份，红花10 — 13份，牛膝28 — 33份，骨碎补10 — 13份，甘草5 — 7份。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，各原料药的重量份数为: 黄芪60份，太子参15份，熟地24份，续断15份，桑寄生15份，当归12份，桃仁9份，红花12份，牛膝30份，骨碎补12份，甘草6份。
8.权利要求1一 7任一项所述的药物的制备方法，其特征在于，步骤是:称取配方量的原料药加药材体积5倍水，浸泡2h，第一次煎煮45min，倒出水煎液，加适量水，再次煎煮40min，合并两次水煎液，浓缩成一定浓度(剂量为480mg生药/ml)，即得。
【文档编号】A61K36/804GK103919908SQ201410153048
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月16日 优先权日:2014年4月16日
【发明者】于学美, 崔西泉, 孙建翠, 王荣梅, 吴雅迪, 董军 申请人:泰山医学院