氢分子固态载体在制备抑制肥胖的保健品和药物中的应用的制作方法
【专利摘要】氢分子固态载体在制备抑制肥胖的保健品和药物中的应用，其特征在于，氢分子固态载体对膳食结构失衡所致的肥胖发生有抑制作用，所述的氢分子固态载体是以钙、镁的碳酸盐为主占固态物质含量的50％以上，形态为粉末状、颗粒状、无定形状类型的固态形式，该物质溶解或混悬于液体后，可在溶液中释放出氢分子的物质，溶液中氢的含量为0.1ppm以上且饱和浓度以下，该物质包括但不仅仅是氢化珊瑚钙；本发明提供了氢分子固态载体在制备抑制肥胖的保健品和药物中的应用，在正常饮食的情况下摄入氢分子固态载体，通过氢分子固态载体在体内遇水释放氢分子而靶向不同部位扩散，清除活性氧自由基，缓解氧化损伤而达到的疾病防治目的。
【专利说明】氢分子固态载体在制备抑制肥胖的保健品和药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物学和医药学【技术领域】，特别涉及氢分子固态载体在制备抑制肥胖的保健品和药物中的应用。
【背景技术】
[0002]肥胖是体内脂肪堆积过多并多伴有血糖，血脂，血压异常，胰岛素抵抗，慢性炎症的慢性疾病，是动脉粥样硬化、原发性高血压、2型糖尿病及脂肪肝病等高发疾病的危险因素。近30年来，肥胖呈全球化流行趋势，几乎所有国家居民的平均体重指数都在不断增加，2008年全球超重和肥胖成人分别高达14.6亿和5亿，已成为影响全人类健康的重要因素。
[0003]随着近年人们生活水平的提高和生活习惯的改变，高脂肪高热量的食物在饮食结构中不断加大，同时更多的多坐少动，导致肥胖问题不断凸显。由于目前对于该问题的致病机理尚未完全明确，缺乏完善有效的治疗方法，同时在诸多因素使高脂饮食难以避免的情况下，积极探索有效缓解膳食结构失衡所致的肥胖、脂肪肝病等问题的防治方法具有重要意义。已有大量研究表明当长期高脂饮食导致肥胖，并使肝脏脂肪过载、出现糖脂代谢障碍时，肝脏以及其它器官处于氧化应激、能量代谢障碍状态而产生的大量活性氧是造成组织细胞的进一步损伤的重要原因。
[0004]氢气的生物学研究认为氢是一种弱还原剂，可在生物体系内选择性抑制以羟自由基、过氧化亚硝酸阴离子为代表的破坏性较强的自由基。同时，氢是小分子物质，易于在体内自由扩散，可越过许多药物无法越过的人体屏障，到达病灶的优点。目前已有的研究表明，以特定的氢分子摄入方式，如富氢水或富氢生理盐水等，可显著缓解以氧化损伤为共性的疾病模型的病程进展。
[0005]氢分子固态载体在水中能够缓慢、稳定释放氢气，与普通的氢摄入方法如富氢水、富氢生理盐水等相比，氢分子固态载体的氢气缓释效应优势明显。基于富氢液体的氢耗散问题，摄入氢分子固态载体更有利于氢分子到达病灶发挥生理效应。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供氢分子固态载体在制备抑制肥胖的保健品和药物中的应用，在正常饮食的情况下摄入氢分子固态载体，通过氢分子固态载体在体内遇水释放氢分子而靶向不同部位扩散，清除活性氧自由基，缓解氧化损伤而达到的疾病防治目的。
[0007]为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是:
[0008]氢分子固态载体在制备抑制肥胖的保健品和药物中的应用，其特征在于，氢分子固态载体对膳食结构失衡所致的肥胖发生有抑制作用，所述的氢分子固态载体是以钙、镁的碳酸盐为主占固态物质含量的50%以上，形态为粉末状、颗粒状、无定形状类型的固态形式，该物质溶解或混悬于液体后，可在溶液中释放出氢分子的物质，溶液中氢的含量为
0.1ppm以上且饱和浓度以下，该物质包括但不仅仅是氢化珊瑚钙。
[0009] 氢分子固态载体对肥胖发生的抑制作用的有效摄入浓度范围为每天每公斤体重10-50毫克。
[0010]氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的体重增加。
[0011 ] 氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的脂肪积累。
[0012]氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的脂代谢紊乱的产生。
[0013]氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的肝脏脂肪变的产生。
[0014]氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的脂肪性肝炎的产生。
[0015]氢分子固态载体能够有效降低血液中甘油三酯含量。
[0016]氢分子固态载体能够有效降低肝脏中的甘油三酯和自由脂肪酸的含量。
[0017]氢分子固态载体能够有效降低肝脏中的炎性因子，如肿瘤坏死因子，白介素-6和单核细胞趋化蛋白-1的含量。
[0018]本发明的主要优点在于:1、首次研究出氢分子固态载体在防治肥胖发生的保健食品和药物中应用。2、氢为小分子物质，相比其它抗氧化物质或药物，更易于透过细胞膜结构、清除自由基而缓解病理进展。
【专利附图】
【附图说明】 [0019]图1是氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的体重增加的抑制作用。其中:横坐标为氢化珊瑚钙的摄入浓度，纵坐标为大鼠的体重。
[0020]图2是氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的附睾脂肪和肾周脂肪组织增加的抑制作用，图2A是对附睾脂肪的抑制作用，图2B是对肾周脂肪的抑制作用。其中:横坐标为氢化珊瑚钙的摄入浓度，纵坐标为大鼠脂肪组织的重量。
[0021]图3是氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的血清中甘油三酯含量上升的抑制作用。其中:横坐标为氢化珊瑚钙的摄入浓度，纵坐标为血清中甘油三酯的含量。
[0022]图4是氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的肝脏中甘油三酯含量上升的抑制作用。其中:横坐标为氢化珊瑚钙的摄入浓度，纵坐标为肝脏中甘油三酯的含量。
[0023]图5是氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的肝脏中自由脂肪酸含量上升的抑制作用。其中:横坐标为氢化珊瑚钙的摄入浓度，纵坐标为肝脏中自由脂肪酸的含量。
[0024]图6是氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的肝脏中炎症因子的抑制作用。图6A是对肿瘤坏死因子的抑制作用，图6B是对白介素-6的抑制作用，图6C是对单核细胞趋化蛋白-1的抑制作用。其中:横坐标为氢化珊瑚钙的摄入浓度，纵坐标为肝脏中炎症因子的含量。
【具体实施方式】
[0025]下面结合附图及【具体实施方式】对本发明做详细阐述。
[0026]1.实验材料
[0027]氢化珊瑚钙(coral calcium hydride, CCH)从上海全人生物科技有限公司购买；肿瘤坏死因子，白介素-6酶联免疫吸附测定试剂盒，甘油三酯，自由脂肪酸测定试剂盒从南京建成生物工程研究所购买；TRIzol试剂从Invitrogen公司购买；RNA逆转录试剂盒，SYBR荧光染料从大连宝生物公司购买。RNA引物序列从北京奥科鼎盛生物科技有限公司订购合成。
[0028]2.实验动物饲养及模型建立[0029]SD雄性大鼠是从上海斯莱克动物有限责任公司购买。大鼠饲养在可控温度(22度到28度)和湿度(60%)的房间内，房间的灯光维持在12小时白天、12小时黑夜的循环中，在实验进行中大鼠能够自由进食和进水。实验大鼠一共分为四组，每组12只。四组分别为:(1)正常饮食组；(2)高脂饮食组(3)高脂饮食组同时每天灌胃10mg/kg的氢化珊瑚钙；(4)高脂饮食组同时每天灌胃50mg/kg的氢化珊瑚钙。实验周期为3个月。
[0030]3.实验方法
[0031]甘油三酯检测
[0032]血清和肝脏的甘油三酯水平均采用商业甘油三酯检测试剂盒并按检测说明书进行测定。
[0033]自由脂肪酸检测
[0034]采用商业自由脂肪酸检测试剂盒并按检测说明书进行测定。
[0035]炎症因子检测
[0036]采用逆转录RNA-实时荧光定量PCR的方法进行检测。具体方法如下:
[0037]RNA 提取
[0038]取50mg组织加入ImL of TRIzol试剂，用组织采用超声破碎，将破碎好的物质放入离心管中，12，OOOg, 40C，离心10分钟。留上清，弃去沉淀。加入200ul氯仿(1/5总体积)抽提蛋白，剧烈混匀15秒，室温放置15分钟后，12，000g，4°C，离心10分钟。将上层水相转移至另一 Ep管中，加入等体积异丙醇，混匀后_20°C放置Ih后，12，OOOg, 4°C，离心10分钟,弃上清。加入ImL预冷的75%乙醇,颠倒混匀，7500rpm, 4°C,离心5分钟。弃上清，超净工作台放置30min，使乙醇挥发完全挥发掉，溶于50ul DEPC水中。用紫外分光光度计检测测定其浓度，用于反转录。
[0039]RNA反转录
[0040]转录体积为25ul，取出2ug RNA，加入随机引物0.5ug，置于70°C，5分钟，破坏其二级结构。之后立即置于冰上，避免二级结构恢复。加入3ul dNTPlOmM，5ul反转录缓冲液(M-MLV5X React1n Buffer)，200 单位反转录酶(M-MLVRT)，用 DEPC 水补充至 25ul 体积，37°C孵育60分钟。置于_20°C备用。
[0041 ]实时荧光定量 PCR (Real-time PCR)
[0042]用SYBR Green法进行，反应体系包括Iul cDNA，
5ul 2X SYBR_? Premix ExTaqra 11,0.5ul上下游引物混合液(1uM),加灭菌水至
1ul0反应条件依照说明书，95°C解链lOmin，进行40个循环PCR(每个循环包括95°C 30s，55°C 30s, 72°C 20s)，最后观测融解曲线(95°C 15s，60°C 15s，95°C 15s)。a-tubulin 作为内参，实验所用的引物序列为:肿瘤坏死因子，forward:5’ -TCGTAGCAAACCACCAAGCA-3’
[0043]reverse:5’ -CCCTTGAAGAGAACCTGGGAGTA-3，；白介素 _6，forward:5’ -TCCTACCCCAACTTCCAATGCTC-3’ reverse:5’ -TTGGATGGTCTTGGTCCTTAGCC-3’ ；单核细胞趋化蛋白-1，forward:5’ -ATGCAGGTCTCTGTCACGCT-3’ reverse:5’ -GGTGCTGAAGTCCTTAGGGT-3’ ；
[0044]a -tubulin, forward:5' - TGCTGCCATTGCCACCATCA-3’ reverse:5’ -CTCACCCTCACCCTCCACCG-3，。
[0045]统计分析
[0046]结果以Mean土S.E.M形式表示，统计结果代表9只大鼠的统计结果；数据分析使用One Way-ANOVA 分析方法，显著统计学意义为 *ρ〈0.05, **ρ〈0.01, ***ρ〈0.001。
[0047]实施例一
[0048]氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的体重增加的抑制作用。
[0049]分别在实验开始前和结束后测量大鼠的体重，使用实验结束后的大鼠体重减掉实验开始时的体重，得出三个月大鼠增加的体重。图1显示高脂饮食诱导了体重的显著增加，摄入氢化珊瑚钙能够有效抑制大鼠体重的增加。
[0050]实施例二
[0051]氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的附睾脂肪和肾周脂肪组织增加的抑制作用。
[0052]实验结束后，处死大鼠，取出附睾脂肪及肾周脂肪并称重，图2Α和图2Β分别显示附睾脂肪和肾周脂肪大量的积累，而氢化珊瑚钙的摄入能够有效降低脂肪的积累。
[0053]实施例三
[0054]氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的脂代谢紊乱的抑制作用。
[0055]图3显示高脂饮食诱导血液中甘油三酯含量明显上升，而氢化珊瑚钙的摄入能够有效降低甘油三酯的含量。
[0056]实施例四
[0057]氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的肝脏脂肪变的抑制作用。
[0058]图4显示高脂饮食诱导肝脏中甘油三酯含量明显上升，而氢化珊瑚钙的摄入能够有效降低甘油三酯的含量。图5显示高脂饮食诱导肝脏中自由脂肪酸含量明显上升，而氢化珊瑚钙的摄入能够有效降低自由脂肪酸的含量。
[0059]实施例六
[0060]氢化珊瑚钙对高脂饮食诱导的脂肪性肝炎的抑制作用。
[0061]脂肪性肝炎是非酒精性脂肪肝病理发生过程中的显著特征，同时也是病理诊断的良好依据。图6Α，图6Β和图6C分别显示高脂饮食诱导肝脏中肿瘤坏死因子，白介素-6及单核细胞趋化蛋白-1水平明显上升，这些指标都揭示了高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病病理发展过程中伴随炎症反应，而氢化珊瑚钙的摄入能够有效降低炎症因子的水平，揭示氢化珊瑚钙的抗炎症反应作用。
[0062]通过以上实验结果证明氢化珊瑚钙能够有效的抑制高脂饮食诱导的肥胖发生，同时可有效控制伴随肥胖产生的代谢紊乱，肝脏脂肪变及脂肪性肝炎。同理可证，与氢化珊瑚钙具有同类特性的氢分子固态载体具有同样的疾病防治作用。另外，氢分子结构简单，中和自由基反应生成水，潜在副作用较小，体内耗散的氢由肺部呼出，对生理稳态影响较小，机体耐受性好，具有广泛应用的市场前景，为防治膳食结构失衡所致的肥胖等系列问题开辟新的医药途径。
【权利要求】
1.氢分子固态载体在制备抑制肥胖的保健品和药物中的应用，其特征在于，氢分子固态载体对膳食结构失衡所致的肥胖发生有抑制作用，所述的氢分子固态载体是以钙、镁的碳酸盐为主占固态物质含量的50%以上，形态为粉末状、颗粒状、无定形状类型的固态形式，该物质溶解或混悬于液体后，可在溶液中释放出氢分子的物质，溶液中氢的含量为0.1ppm以上且饱和浓度以下，该物质包括但不仅仅是氢化珊瑚钙。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体对肥胖发生的抑制作用的有效摄入浓度范围为每天每公斤体重10-50毫克。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的体重增加。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的脂肪积累。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的脂代谢紊乱的产生。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的肝脏脂肪变的产生。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体能够有效改善肥胖发生过程中的脂肪性肝炎的产生。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体能够有效降低血液中甘油三酯含量。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体能够有效抑制肝脏中的甘油三酯和自由脂肪酸的含量。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述氢分子固态载体能够有效抑制肝脏中的炎性因子，如肿瘤坏死因子，白介素-6和单核细胞趋化蛋白-1的含量。
【文档编号】A61K33/00GK104027350SQ201410239813
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年5月30日 优先权日:2014年5月30日
【发明者】刘健康, 龙建纲, 侯晨, 唐颖, 赵琳 申请人:西安交通大学